Достоверность пцр мокроты на туберкулез: Туберкулез ПЦР методом

Содержание

ПЦР: современные методики диагностики туберкулеза — Новости

С помощью ПЦР-диагностики можно своевременно не только обнаружить инфекцию, но и изолировать человека, назначив ему соответствующее лечение. Кроме того, данный анализ способен исследовать устойчивость микобактерий к известным во фтизиатрии медицинским препаратам, тем самым, позволяя подобрать правильную схему лечения, исключив из неё те лекарства, к которым есть устойчивость возбудителя.

Cправочно:


Полимера́зная цепна́я реа́кция (ПЦР) — метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нуклеиновыми кислотами (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных).
Метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка нуклеиновой кислоты ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro).

Метод ПЦР имеет очень высокую информативность и позволяет легко и эффективно определять наличие микобактерии в организме, но, только если проводить анализ мокроты (если это туберкулез органов дыхания) или мочи (при туберкулезе орагнов мочевыделительной системы), а не крови. ПЦР анализ крови на туберкулез нельзя считать информативным, так как ДНК микобактерии туберкулеза в крови бывает только у больных туберкулезным сепсисом, что на практике встречается весьма редко.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет всего в течение нескольких часов обнаружить возбудителя инфекции, причем выявить можно даже 1-2 молекулы среди огромного количества.

Данный тест имеет массу достоинств, которые проявляются в следующем:


• 100%-ное выявление, так как в биологической пробе определяется от 10 до 100 клеток;


• специфичность теста очень высока: выявляется особенный фрагмент, который имеется только в конкретном возбудителе;


• скорость получения результата анализа – от 4 до 4,5 часа.

С помощью этой диагностики можно своевременно не только обнаружить инфекцию, но и изолировать человека, назначив ему соответствующее лечение. Кроме того, данный анализ способен исследовать устойчивость микобактерий к известным во фтизиатрии медицинским препаратам, тем самым, позволяя подобрать правильную схему лечения, исключив из неё те лекарства, к которым есть устойчивость возбудителя. Чтобы провести полимеразную цепную реакцию на устойчивость, используют гены, запоминающие невосприимчивость к некоторым лекарствам, после чего через двое суток можно получить результат.

Андрей Чередниченко, заведующий ПЦР-лабораторией: «На сегодняшний день во фтизиатрической службе СФО работают пять ПЦР-лабораторий. Лаборатория ННИИТ является одной из самых современных, здесь используется формат Real-Time ПЦР (или ПЦР в реальном времени). Эта методика позволяет не только выявить ДНК возбудителя туберкулеза, но и те его мутации, которые указывают на устойчивость к препаратам противотуберкулезного ряда. Одним из передовых методов ПЦР является метод гибридизации на стрипах, который позволяет провести определение микобактерий и их устойчивость к противотуберкулезным препаратам».

Актуальность проведения ПЦР-исследования на туберкулез прежде всего в том, что данная методика позволяет выявлять микобактерии у пациентов без бактериовыделения. Благодаря данной методике диагностировать туберкулез и назначать правильные схемы лечения (учитывая устойчивость к определенным препаратам) стало значительно легче.

Микобактерии туберкулеза, определение ДНК (Mycobacterium tuberculosis, DNA) в сыворотке крови

Метод определения
ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».

Исследуемый материал
Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация

Определение ДНК возбудителей туберкулеза, комплекса микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода Мycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет.

Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения. В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

Аналитические показатели:

  • определяемый фрагмент — специфичные участки ДНК микобактерий;

  • специфичность определения — 100%;

  • чувствительность определения- 100 копий ДНК микобактерий в образце.

Литература

  1. Макаревич А.Э. Заболевания органов дыхания – М. Высшая школа, 2000. – 368 с.

  2. Jacobs D. et al. Laboratory test handbook/ Lexi-Comp./2002 — pр. 828 — 829.

Микобактерии туберкулеза, определение ДНК (Mycobacterium tuberculosis, DNA) в мокроте, смывах, лаважной жидкости

Метод определения
ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».

Исследуемый материал
Мокрота, смывы, лаважная жидкость

Доступен выезд на дом

Определение ДНК возбудителей туберкулеза: комплекса микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в мокроте, смывах с бронхов, лаважной жидкости методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени.

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода mycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет. Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения.

В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

Аналитические показатели:

  • определяемый фрагмент — специфические участки ДНК микобактерий;

  • специфичность определения — 100%;

  • чувствительность определения — 100 копий ДНК микобактерий в образце.

Литература

  1. Макаревич А.Э. Заболевания органов дыхания – М. Высшая школа, 2000. – 368 с.

  2. Jacobs D. et al. Laboratory test handbook/ Lexi-Comp./2002 — pр. 828 — 829.

Лабораторная диагностика туберкулеза — сдать анализы в СЗЦДМ

Туберкулез — инфекционная болезнь, возбудителем которой является микобактерия. Чаще всего поражает дыхательную системы, однако может распространяться и в другие ткани и органы. Наиболее распространенный путь передачи — воздушно-капельный. Для того чтобы развилась активная форма болезни, необходимы благоприятные условия, например, сниженный иммунитет. 


Патология проявляется длительным кашлем, субфебрильной температурой, которая может удерживаться в течении нескольких месяцев, ночным потоотделением, лимфаденопатией. Современные схемы лечения позволяют избавиться от болезни. Однако, для этого необходима своевременная постановка диагноза. Первое время туберкулез может не вызывать клиническую симптоматику, поэтому диагностика должна быть профилактической и регулярной. Ранняя терапия позволяет избавиться от осложнений, среди которых выраженные структурные нарушения дыхательной системы и вторичное распространение инфекции.

Современные методы диагностики туберкулеза


Различают следующие методы диагностики патологии:


  • бактериологический анализ мочи;


  • общий анализ мочи;


  • биохимическое исследование крови;


  • T-SPOT.TB;


  • микробиологические методы диагностики;


  • исследование свертывающей системы;


  • микроскопический анализ мокроты;


  • лучевые методы диагностики.



Перейти к анализам

Рассмотрим эти методы подробнее.


Бактериологический анализ мочи


Показан при внелегочной форме туберкулеза. Этот метод диагностики крайне важен, ведь туберкулез мочеполовой системы часто вызывает осложнения и долгое время не вызывает симптомов. Именно туберкулез может долго маскироваться под воспалительный процесс или мочекаменную болезнь. Поэтому, длительная патология данных органов, которая сложно поддается лечению, является показанием к диагностике. Также, анализ мочи показан при туберкулезе для исключения вовлечения в процесс мочеполовой системы.


Для того, чтобы определить наличие возбудителя в моче, проводится бактериоскопия или посев на среду.


Для обнаружения микобактерии проводится специальное окрашивание, при котором возбудитель приобретает другой оттенок, отличный от здоровых клеток.


Другой метод заключается в посеве образца мочи на питательную среду. Если наблюдается рост культуры микобактерий, это говорит о наличии в организме возбудителя.


Общий анализ мочи


В общем анализе мочи наблюдаются характерные изменения при туберкулезе. Это появление капель гноя, наличие или следы белка и более кислая реакция. Также появляются видоизмененные лейкоциты, бактерии, эритроциты.


Биохимический анализ крови


На некоторых стадиях болезни выявляются изменения в биохимическом исследовании крови. При неактивной форме никаких изменений в данных анализах нет, хотя они могут появляться при сопутствующей патологии.


Острая форма туберкулеза приводит к снижению альбумино-глобулинового коэффициента. Если патология привела к осложнениям в виде поражения печени, повышается уровень трансаминаз, разных фракций билирубина. Эти показатели входят в обязательное обследование пациента с туберкулезом. Пациент сдает этот анализ в динамике, для оценки состояния.


Ухудшение работы почек может отражаться в повышении креатинина, изменениях скорости клубочковой фильтрации.


Биохимический анализ крови не имеет специфической диагностической ценности, однако является важным компонентом оценки качества лечения и состояния пациента.



К иммунологическим методам диагностики относится методика T-SPOT.TB.  Основа способа заключается в изучении реакции Т-лимфоцитов. Процедура имеет высокую чувствительность и довольно информативен. Ложные результаты исключены даже тогда, когда остальные методики нечувствительны к результату. Метод применяется в сомнительных случаях, например после прививок, у пациентов с аутоиммунной патологией, у медработников. Данный способ позволяет оценить наличие возбудителя количественно, но не дает информации о фазе процесса.


Особое место данная диагностика занимает у носителей ВИЧ. Дело в том, что вирус поражает именно лимфоциты. Несмотря на это диагностика по методу T-SPOT.TB дает точные результаты.


Высокая точность теста объясняется также тем, что тест-система чувствительна к компонентам возбудителя, но именно к тем, которых нет ни в вакцине БЦЖ, ни в других микроорганизмах, которые имеют сходные компоненты. Суть метода заключается в количественном определении в крови эффекторных Т-клеток (CD4 и CD8), вырабатывающих ИФН-ɣ (гамма-интерферон), который продуцируется в ответ на стимуляцию специально подобранными антигенами ESAT-6 и CFP10. Речь идет об одном из фрагментов генома микобактерии. Примечательно, что высокая специфичность наблюдается и в латентную, и в активную фазу.


Особенной подготовки к сдаче анализов не требуется — достаточно ограничить прием пищи за два часа до процедуры. Проводится забор венозной крови. Это необходимо проводить в соответствующих условиях, с соблюдением правил асептики и антисептики.


Положительный результат теста говорит о том, что в организме присутствует микобактерия, а отрицательный — об обратном.


Микробиологические методы диагностики


Применяются для прямого обнаружения возбудителя туберкулеза в биологических тканях организма. Применяются различные методики.


Окраска по Цилю-Нельсену заключается в том, что мазок с препаратом обрабатывается специфическим красителем. Микобактерии приобретают характерный оттенок, что говорит о том, что реакция произошла. Так можно подтвердить или исключить наличие возбудителя в материале. Метод экономичный и сравнительно быстрый. Однако, он чувствителен только при высокой концентрации микроорганизмов в образце.


Люминесцентная микроскопия дает более высокое разрешение и улучшает методику окраски. Требуется применение флуорохромов — специфических веществ, которые “подсвечивают” микобактерии и делают их более видимыми под микроскопом.


Полимеразно-цепная реакция позволяет осуществить воспроизведение ДНК бактерии из её фрагментов, которые содержатся в тканях. Это быстрый и информативный метод диагностики, который имеет высокую специфичность и чувствительность.


Культуральный метод заключается в выращивании культуры из микобактерий. Для этого берется фрагмент биоматериала и сеется на питательную среду. Потом оценивается штамм, который вырос на среде и подтверждается или исключается диагноз. Используется специфическая среда, на которой с большей вероятностью вырастет необходимая среда. Выращенные колонии можно использовать для определения чувствительности к антибиотикам.


ВАСТЕС460 — это современный метод диагностики, в ходе которого используется радиометрическая система и меченый СО2. Бактерия поглощает элемент-индикатор и её можно обнаружить в исследуемом материале.


Исследование свертывающей системы крови


Коагулограмма часто используется в фтизиатрии, так как у пациентов с туберкулезом постепенно возникает кровохаркание или легочные кровотечения. Это приводит к изменению показателей гемостаза. Анализ может меняться и после хирургического лечения болезни.


Контроль коагулограммы основан на анализе таких показателей, как АЧТВ, фибриноген, время кровотечения, время свертывания. Эти показатели могут колебаться в разные стороны, в зависимости от объема кровопотери. Если она незначительна — коагуляционная система стимулируется и показатели повышаются. Потеря большого объема крови приводит к снижению в организме факторов свертывания и соответствующим изменениям коагулограммы.


Микроскопический анализ мокроты


Анализ мокроты — обязательное исследование при туберкулезе. При этой патологии мокроты выделяется в небольшом количестве, имеет вкрапления крови, гноя, слизи. На ранних стадиях, кровь может не появляться. Кавернозная форма болезни приводит к появлению в материале так называемых рисовых телец. Также, наблюдаются вкрапления кристаллов, эластичных волокон, холестерина. Повышается белок в общем составе мокроты. Если произошел распад — мокрота содержит кальций, волокна различного происхождения, холестерин и, собственно, туберкулезные микобактерии.


Проводится также бактериология мокроты. Применяется специфический метод окраски, который позволяет определить наличие микобактерии. Посевы на питательные среды также имеют диагностическую ценность.


Бактериоскопия мокроты подразумевает её изучение под необходимым увеличением микроскопа. При высокой концентрации микроорганизмов методика довольно специфична и чувствительна. Мокрота изучается 3 раза для того, чтобы получить наиболее точный результат.


Лучевые методы диагностики


Лучевые методы позволяют визуализировать изменения в организме, к которым привела микобактерия. Это и скрининговый метод диагностики, и способ оценки тяжести и степени патологии. Также, лучевая диагностика — метод динамической оценки пациента. Различают такие лучевые методики в диагностике туберкулеза:

  • флюорография;
  • рентгенография;
  • томография;
  • рентгеноконтрастные исследования.


Флюорография используется для скрининговой диагностики, которая требует подтверждения при подозрительных результатах. Неспецифический метод, который используется для профилактического осмотра. Цифровая методика позволяет оценивать изображение на экране с использованием увеличения и приближения картинки. Метод прост, быстрый и экономичный.


Рентгенография является более точной методикой и позволяет полноценно обследовать структуры грудной клетки. на снимке можно обнаружить признаки функциональной недостаточности различных органов, проследить топография новообразования, диагностировать каверну, ателектаз, абсцесс или нарушение целостности плевральной полости. Выполняется в двух проекциях для более точных результатов. Иногда используется прицельное проведение диагностики.


Томография является наиболее точной методикой визуализации структур грудной клетки. Это формирование послойных изображений органов и структур. Можно определить распространение и локализацию очага болезни, увидеть, какие ткани он поразил и насколько глубоко проник.


Методики с использованием контраста применяются для получения изображения бронхиального дерева (бронхография). Можно обнаружить полостные изменения, нарушения дренажной функции, структурные изменения и наличие фистул. также применяется ангиопульмонография. контраст вводится в сосудистое русло и позволяет оценить легочной кровоток. особенно это важно при кровохарканьи и кровотечениях.


Применяются радионуклидные методы, сцинтиграфия. Они применяются для оценки функциональной активности или нарушений.


Ультразвуковая методика применяется для оценки деятельности сердца, диагностики состояния плевральных синусов, лимфатических узлов.

Сбор материала и подготовка к исследованиям


Для анализа мочи на туберкулез применяется утренняя порция. необходимо провести туалет наружных половых органов и не касаться ими резервуара для сбора материала. Контейнер должен быть стерильным и сухим. Собранный биоматериал необходимо как можно скорее доставить в лабораторию, не допускать его высыхания и нагревания. За сутки до сдачи анализа необходимо отказаться от таких продуктов, как черника, морковь, свекла и других ярких овощей и фруктов. Также следует ограничить прием диуретиков, витаминов, ацетилсалициловой кислоты. Женщинам следует помнить, что анализы мочи не сдают во время менструаций. Сдается средняя, промежуточная порция мочи.


Сдача крови происходит натощак, так как прием пищи может исказить результаты исследования. Стоит проконсультироваться с лечащим врачом на предмет отмены некоторых препаратов. Накануне не следует употреьоять кофе, алкоголь, табак. Сбор крови происходит в стерильных условиях, с соблюдением правил забора материала. Для некоторых исследований необходима капиллярная, а для некоторых — венозная кровь.


Мокрота собирается натощак, с соблюдением основных правил. Материал необходимо откашлять, чтобы в посуду не попала слизь изо рта или носоглотки. Используется специальная плевательница из темного стекла, с плотной крышкой. Мокрота не должна обветриваться или высыхать.


К инструментальным методам исследования не требуется особая подготовка. Исключение — применение контрастного вещества. Перед его использованием необходимо оценить функцию почек. Большинство рентгеноконтрастных веществ выводится именно эти органом и врач должен быть уверен в том, что выделительная система выдержит эту нагрузку.

Нормы и выявляемые отклонения


В норме, в организме не должно быть микобактерий. Их наличие расценивается как положительный результат диагностики туберкулеза. Негативный результат говорит о том, что у пациента нет данной патологии. Некоторые методы неспецифичны и не обладают высокой диагностической ценностью. Они используются для оценки общего состояния. Бактериологические методики более специфичны и их положительные результаты можно считать подтверждением диагноза. Отрицательный результат является поводом для повторных анализов, если есть клинические признаки болезни.

Сроки готовности результатов диагностики туберкулеза



Общий и биохимический анализ крови, мокроты и мочи может быть готов в течении нескольких часов. Как правило, результаты сообщаются на следующий день.


Бактериологический метод с окраской занимает около 24 часов.


Посевы занимают больше времени — до нескольких недель.

Результат лучевых методов диагностики зависит от скорости описания снимка. Чаще всего, это занимает около суток.

ДНК микобактерии туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis)

10.07.001 — ДНК микобактерии туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis)

Описание:
Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок, англ. tuberculosis) — инфекционное заболевание человека и животных (чаще крупного рогатого скота), вызываемое несколькими разновидностями кислотоустойчивых микобактерий (род Mycobacterium) (устаревшее название — палочка Коха). У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет. Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, а в крови – анемия и лейкопения. Передача инфекции происходит воздушно-капельным путем. В связи с тем, что микроб медленно размножается, больные туберкулезом выделяют очень незначительное число бактерий, а значит, для заражения здорового человека требуется длительный контакт с больным. Заразными являются только те больные туберкулезом, у которых эта инфекция обнаруживается в активной стадии. ПЦР современный и очень точный метод диагностики. Высокая чувствительность метода позволяет выявить заболевание на самой ранней стадии. Специфичность определения — 100%. Чувствительность определения- 100 копий ДНК Mycobacterium tuberculosis.

Рекомендации по времени и условиям сдачи биоматериала:
Не рекомендуется проводить исследование во время приема антибактериальных препаратов. Накануне не применять местные лекарственные средства. При взятии биоматериала из урогенитального тракта необходимо исключить накануне половой акт, у женщин взятие не проводится во время менструации. Зев (ротоглотка) — сдавать биоматериал натощак или через 2-4 часа после приема пищи. Мокрота — сдавать биоматериал путем глубокого откашливания натощак, после чистки зубов и тщательного полоскания полости рта.

Биоматериал:
Соскоб из цервикального канала, соскоб из уретры, соскоб из влагалища, смешанный соскоб из урогенитального тракта, секрет простаты, соскоб с эрозивно-язвенных элементов, мазок с поверхности миндалины, мазок из носоглотки, мазок из ротоглотки, отделяемое конъюнктивы, биоптат легких, биоптат лимфоузлов, биоптат печени, биоптат ЖКТ, бронхо-альвеолярный лаваж, мокрота, моча, амниотическая жидкость, плевральная жидкость, синовиальная жидкость, слюна, спинномозговая жидкость, сперма, другое (указать)

Контейнер для ПП, расходные материалы:
эппендорф с транспортной средой и без среды, стерильный контейнер с завинчивающейся крышкой

Инструкция по взятию ПП:
Техника взятия биоматериала описана в соответствующих разделах «»Инструкции по получению и обработке первичной пробы»» Лаборатории «»Мобил Медикал Лаб»».

Транспортировка, температура и время хранения:
общее время хранения и транспортировки при температуре +2…+8°С — не более 24 часов с момента взятия биоматериала

Срок дозаказа (дни):
7 дней

какие сдавать, методы диагностики, где можно сдать

Микроскопия мазка подразумевает поиск возбудителя туберкулеза в отделяемой при кашле жидкости — мокроте.

Подробнее…

Метод ИФА подходит в качестве уточняющего шага, а также для диагностики скрыто протекающего и внелегочного туберкулеза.

Узнать цены…

Метод ПЦР позволяет обнаружить туберкулез даже тогда, когда все другие методики показывают отрицательный результат.

ПЦР: что это такое?

Эксперты констатируют: туберкулез в России — больше, чем просто болезнь. Это — неприятное социальное клеймо, которое, помимо физических страданий, становится для заболевшего человека источником серьезного психологического дискомфорта, а иногда и вынуждает на долгие месяцы и годы отказаться от привычного образа жизни, карьеры и планов на будущее.

Лечение туберкулеза — процесс сложный и длительный, а успех во многом определяется тем, насколько своевременно было выявлено заболевание. С учетом того, что никто из нас не застрахован от заражения, крайне важно регулярно проходить профилактическое скрининговое обследование, а при малейших подозрениях на недуг — обращаться к уточняющим анализам. Лишь такое ответственное поведение убережет вас от беды.

Когда сдать анализы на туберкулез и почему не стоит с этим медлить

По мнению обывателей, туберкулезом страдают лишь неблагополучные люди, проживающие на грани нищеты, а также выходцы из мест лишения свободы. Однако такой взгляд, как отмечают врачи, не имеет ничего общего с реальностью. Пациентами фтизиатров нередко становятся и учителя, и бизнесмены, и чиновники, и даже сами доктора. Ведь ключевой фактор, приводящий к развитию заболевания, — это отнюдь не финансовое благополучие, а состояние иммунитета. Если по каким-то причинам (стресс, сопутствующее заболевание, беременность, перенесенная операция, погрешности в питании) организм ослаблен — туберкулезная палочка не упустит шанса для атаки.

Важно знать
По статистике в России ежегодно туберкулез выявляют более чем у 80-ти тысяч человек. Каждый третий заболевший погибает от этой болезни. При этом важно понимать, что 90% жителей уже инфицированы — то есть в их легких живет возбудитель заболевания. Но сильный иммунитет не дает болезни развиться, поэтому лишь 1% инфицированных столкнется с какими-либо симптомами туберкулеза.

Болезнь развивается постепенно, начинаясь в лимфатических узлах, а затем распространяясь по органам и тканям организма. Чаще туберкулез поражает легкие, однако в некоторых случаях, а также при отсутствии лечения бактерии размножаются в пищеварительном тракте, органах мочеполовой системы, костях, коже, оболочках головного и спинного мозга и даже в глазах.

Коварная особенность возбудителя заболевания — микобактерии туберкулеза — умение быстро приобретать устойчивость к антибактериальным препаратам, без которых невозможно успешное лечение. Ученые вынуждены разрабатывать все новые и новые лекарства, что в конечном итоге делает терапию дорогой, а также приводит к неизбежным побочным эффектам, таким как поражение печени. Поэтому важным этапом диагностики туберкулеза является определение чувствительности выявленного возбудителя к различным антибиотикам, это помогает врачам подобрать эффективное лечение.

В силу широкого распространения туберкулеза в нашей стране (70% от общего числа российских больных инфекционными и паразитарными заболеваниями умирают именно из-за такого диагноза) выявление зараженных микобактериями среди детей и взрослых организовано достаточно хорошо.

Так, детям и подросткам до 18-ти лет время от времени проводят туберкулиновые пробы, знакомые нам всем как реакция Манту. После достижения совершеннолетия основным методом диагностики становится флюорография, которую каждый гражданин РФ обязан проходить раз в два года, а определенные категории людей — каждый год. Без такого рентгеновского снимка вас, скорее всего, не допустят к работе: результаты флюорографии необходимо предъявлять при трудоустройстве, а в дальнейшем — повторять процедуру в ходе регулярных медосмотров. Таким образом медики стараются минимизировать количество больных туберкулезом, которые не получают лечение и заражают окружающих.

Помимо этих правил, провериться на туберкулез нужно в случаях, если у вас появились симптомы, указывающие на вероятность развития заболевания (слабость, ночное потоотделение, необъяснимая потеря веса, небольшое повышение температуры по вечерам, увеличение лимфоузлов, хронический кашель). Иногда догадка о возможной причине такого недомогания возникает у врача, но вы и сами можете пройти обследование и сдать анализы, чтобы исключить вероятность инфекции.

Какие анализы сдают на выявление микобактерии туберкулеза

Выявить туберкулез можно несколькими путями. Основной задачей диагностики в детском возрасте является определение самого факта инфицирования, ведь в этот период вероятность, что бактерия, попавшая в организм, сразу вызовет патологический процесс, значительно выше, чем у взрослых. По этой причине ведущей методикой первичного скрининга остается туберкулиновая проба.

Оценить признаки поражения легких — наиболее типичное клиническое свидетельство начала заболевания — позволяет флюорография. В случае сомнений для уточняющей диагностики врач назначит рентген — развернутую визуализацию легочной ткани.

Лабораторные анализы крови и мочи помогают «поймать» возбудителя туберкулеза или зафиксировать следы его присутствия в организме. Их назначают для окончательного установления диагноза, а также в целях уточнения степени тяжести заболевания и чувствительности микобактерии к антибиотикам.

Туберкулиновая проба-тест

Туберкулин — это смесь белков, выделенных из погибших возбудителей туберкулеза. Введение небольшого количества такого препарата под кожу вызывает реакцию иммунитета у всех людей, однако в зависимости от состояния их здоровья она проявится по-разному. Так, у пациентов, в организме которых отсутствует микобактерия туберкулеза, через двое суток после пробы останется лишь незначительный след от укола (или его не будет вовсе). Если же размер красной отметины в месте введения туберкулина больше сантиметра или в этой области на коже появился гнойник — высока вероятность, что человек заражен.

Напомним, реакция Манту — метод первичной диагностики, он не может со 100%-ной вероятностью ответить на вопрос, болен ли человек туберкулезом, но позволяет выделить группу риска, которой предстоит пройти дополнительные обследования.

Аппаратные методы диагностики

Поскольку степень инфицирования населения в России микобактериями туберкулеза очень высока, у лиц старше 18-ти лет врачи по умолчанию допускают контакт с инфекцией. Задачей становится поиск больных со скрыто протекающей инфекцией, которые не знают о своем состоянии.

  • Флюорография
    Оптимальным методом массовой диагностики в этом случае была и остается флюорография. Это — фотоснимок экрана рентгеновского аппарата, который можно получить очень быстро, не подвергая при этом человека значительной лучевой нагрузке. Поэтому кабинеты флюорографии есть практически во всех населенных пунктах нашей страны, а пройти процедуру можно за считанные минуты.
  • Рентген и КТ
    В случае если человек не предъявляет никаких жалоб на самочувствие, а флюорография не выявила признаков изменения легочной ткани, врачи делают заключение, что туберкулеза у пациента нет. Но для более тщательной проверки легких может быть назначено развернутое рентгенографическое исследование (когда снимки делаются не только в прямой, но и в боковой проекции, а специалист лучевой диагностики тщательно изучает каждый сантиметр изображения), а также компьютерная томография (КТ), позволяющая с наибольшей степенью достоверности выявить визуальные признаки туберкулеза и оценить степень распространения патологического процесса.

Типы лабораторных анализов на туберкулез

Некоторые из лабораторных анализов, назначаемых при подозрении на туберкулез, являются специфическими — они проводятся только при этом заболевании. Другие же вы можете пройти в рамках общего медицинского осмотра: это ценный источник информации о вашем состоянии здоровья, который способен указать на наличие инфекционного процесса.

  • Общий анализ крови/мочи является диагностическим стандартом при самых разных патологиях. В случае с туберкулезом исследование крови покажет повышение уровня лейкоцитов (сдвиг лейкоцитарной формулы влево) и ускоренную скорость оседания эритроцитов (СОЭ). Изменения в анализе мочи будут наблюдаться при поражении микобактериями почек и мочевыводящих путей — в этом случае в образце обнаружатся признаки амилоидоза.
  • Микроскопия мазка подразумевает поиск возбудителя туберкулеза в отделяемой при кашле жидкости — мокроте. Пациенты с подозрением на заболевание особым образом собирают мокроту в стерильную банку, после чего доставляют анализ в лабораторию. Там частицы мокроты переносят на предметное стекло и окрашивают методом по Цилю-Нильсену (при этом микобактерии туберкулеза приобретают хорошо различимый под микроскопом красный цвет, а большинство остальных микроорганизмов — синий).
  • Классический культуральный метод. Если в ходе микроскопии лаборант выявил в мокроте микобактерии в достаточном количестве (более 5-ти в поле зрения), то следующим этапом лабораторной диагностики туберкулеза становится бактериологический посев образца в питательную среду. Будучи помещенными в оптимальные температурные условия, микроорганизмы быстро растут, что позволяет уточнить их вид и провести оценку чувствительности к различным типам антибиотиков.
  • ИФА (метод иммуноферментного анализа) обнаруживает в крови у пациента антитела к туберкулезу, что указывает на инфицированность (но не обязательно на заболевание). Данный метод подходит в качестве уточняющего шага, а также для диагностики скрыто протекающего и внелегочного туберкулеза.
  • ПЦР (метод полимеразной цепной реакции) выявляет ДНК микобактерий в различных средах — в сыворотке крови, моче, мокроте, спинномозговой жидкости и так далее. Это крайне точный метод, который с достоверностью в 100% может дать ответ на вопрос о том, присутствует ли возбудитель в конкретном органе человека. Чувствительность ПЦР так высока, что в некоторых случаях этот анализ позволяет обнаружить туберкулез даже тогда, когда все другие методики показывают отрицательный результат.
  • Гистологические анализы (биопсия) подразумевают изъятие маленького фрагмента ткани из тела пациента с целью его обстоятельного микроскопического изучения. Биопсия является важным методом диагностики, особенно в ситуациях, когда исследовать биологические жидкости при помощи других анализов не представляется возможным (например, в случае вялотекущего туберкулеза костей).

Диагностика туберкулеза — сложная и крайне ответственная задача, но благодаря развитию современных медицинских технологий получить точную информацию о состоянии здоровья и ответ на вопрос «болею ли я туберкулезом?» — стало доступно каждому. При наличии малейших подозрений на инфекцию — не откладывайте визит к врачу, ведь от вашей сознательности зависит не только прогноз заболевания — но и благополучие окружающих.

Научно-популярные статьи – полезная информация на сайте ЛИТЕХ

Анализ крови на антитела к туберкулезуназначают с целью диагностики при подозрении на инфицирование. Исследование методом ИФА позволяет выявить антитела к возбудителю заболевания — микобактериям (палочке Коха).

Туберкулез передается воздушно-капельным путем и нередко протекает скрыто, активизируясь только в 10% случаев. Чаще всего он поражает легкие, в результате чего возникают характерные симптомы:

  • долгий кашель с отхождением мокроты (иногда — крови),
  • подъем температуры тела,
  • слабость и повышенная утомляемость,
  • снижение веса,
  • повышенная потливость в ночные часы.

Различают две формы туберкулеза — открытую и закрытую. В первом случае больной при несоблюдении правил безопасности может стать источником заражения окружающих, во втором — нет.

Подготовка и проведение

Специфической подготовки к процедуре не требуется. Однако анализы крови на антитела к туберкулезу лучше проводить натощак, накануне отказавшись от употребления жирных и жареных блюд.

Для забора биологического материала используют вакуумную систему с активатором свертывания или без антикоагулянта. В лабораторных условиях из цельной крови выделяют сыворотку, которая затем подлежит дальнейшему исследованию.

В норме антитела классов G и M должны отсутствовать. Их обнаружение свидетельствует о наличии текущей инфекции в легких, а также внелегочном туберкулезе (костно-суставном, мочеполовом и др.).

В редких случаях возможны ошибочные реакции.

  • Ложноположительные — при тяжелых ифекционных и соматических болезнях, для которых характерны обширные деструктивные изменения в пораженных органах (например, цирроз печени, онкологические патологии), а также антифосфолипидном синдроме и во время беременности.
  • Ложноотрицательные — после иммуносупрессивной терапии, при некоторых индивидуальных особенностях организма человека и низкой иммуногенности возбудителя.

Анализ крови на антитела используют в комплексной диагностике туберкулеза наряду с рентгенографией, ПЦР, микроскопией мазков мокроты. Специфичность метода достигает 90%. Однократного обнаружения иммуноглобулинов IgG недостаточно для постановки точного диагноза, поэтому после врач назначит дополнительные процедуры.

Где сдать анализ на туберкулез?

Сдать анализ крови на антитела к туберкулезу методом ИФА Вы можете в «Литех». Высокоточное лабораторное оборудование и опыт наших специалистов позволяют получить достоверный результат в максимально короткие сроки. Записаться на анализ крови на туберкулез можно любым удобным способом — по телефону или через интернет-регистратуру.

Все статьи

Эффективность анализа ПЦР в реальном времени по сравнению с микробиологическими результатами для диагностики туберкулеза легких

Tuberc Respir Dis (Сеул). 2015 Янв; 78 (1): 1–7.

, MD, 1 , MD, 1 , MD, 1 , MD, 1 , MD, 1 , MD, 2 , MD, 2 , MD, 3 и , Д.м.н. 1

Сео Ву Ким

1 Отделение легочной медицины и реанимации, Отделение внутренней медицины, Медицинская школа Университета Ихва, Сеул, Корея.

Sae In Kim

1 Отделение легочной медицины и реанимации, Отделение внутренней медицины, Медицинская школа Университета Ихва, Сеул, Корея.

Сеок Чжон Ли

1 Отделение легочной медицины и реанимации, Отделение внутренней медицины, Медицинский факультет Университета Ихва, Сеул, Корея.

Джин Хва Ли

1 Отделение легочной медицины и реанимации, Отделение внутренней медицины, Медицинская школа Университета Ихва, Сеул, Корея.

Юн Чжу Рю

1 Отделение легочной медицины и реанимации, Отделение внутренней медицины, Медицинская школа Университета Ихва, Сеул, Корея.

Sung Shine Shim

2 Кафедра радиологии, Медицинский факультет Университета Ихва, Сеул, Корея.

Юкён Ким

2 Кафедра радиологии, Медицинский факультет женского университета Ихва, Сеул, Корея.

Mi Ae Lee

3 Кафедра лабораторной медицины, Медицинский факультет Университета Ихва, Сеул, Корея.

Jung Hyun Chang

1 Отделение легочной медицины и реанимации, Отделение внутренней медицины, Медицинский факультет Университета Ихва, Сеул, Корея.

1 Отделение легочной медицины и реанимации, Отделение внутренней медицины, Медицинский факультет Университета Ихва, Сеул, Корея.

2 Кафедра радиологии, Медицинский факультет женского университета Ихва, Сеул, Корея.

3 Кафедра лабораторной медицины, Медицинский факультет Университета Ихва, Сеул, Корея.

Автор, ответственный за переписку: Jung Hyun Chang, M.D., Ph.D. Отделение легочной медицины и реанимации, Отделение внутренней медицины, Медицинский факультет Женского университета Ихва, 1071 Аньянчхон-ро, Янчхон-гу, Сеул 158-710, Корея. Телефон: 82-2-2650-5686, факс: 82-2-2655-2076, rk.ca.a[email protected]

Получено 13 августа 2014 г .; Пересмотрено 10 ноября 2014 г .; Принято 11 декабря 2014 г.

Copyright © 2015. Корейская академия туберкулеза и респираторных заболеваний. Все права защищены.Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Общие сведения

Заболеваемость туберкулезом (ТБ) в Корее относительно высока по сравнению с другими странами Организации экономического сотрудничества и развития (ОЭСР), с распространенностью 71 на 100 000 в 2012 году, хотя заболеваемость составляет снижается. Для быстрой диагностики туберкулеза внедрена полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени. В последнее время его преимущество заключается в более высокой чувствительности и специфичности для диагностики туберкулеза.В этом исследовании оценивалась клиническая точность ПЦР в реальном времени с использованием респираторных образцов в клинических условиях.

Методы

ПЦР-анализы в реальном времени с использованием образцов мокроты и / или бронхоскопических аспиратов от 2877 субъектов были рассмотрены ретроспективно; Было зарегистрировано 2859 субъектов. Диагноз ТБ был установлен на основании положительного микробиологического исследования, патологических данных о ТБ в легких и плевре или клинического подозрения на активный ТБ после лечения противотуберкулезными препаратами в течение более 6 месяцев с положительным ответом.

Результаты

Чувствительность, специфичность и точность составили 44%, 99% и 86% по мокроте и 65%, 97% и 87% по бронхоскопическим аспиратам соответственно. Для общих респираторных образцов чувствительность составила 59%, специфичность — 98%, а точность увеличилась до 89%.

Заключение

Положительные результаты ПЦР в реальном времени с использованием любых респираторных образцов предполагают возможность активного ТБ в клинически подозреваемых случаях, что позволяет начать прием противотуберкулезных препаратов. ПЦР в реальном времени от селективных бронхоскопических аспиратов значительно увеличивает диагностическую ценность при добавлении к исследованию мокроты.

Ключевые слова: Диагностика, мокрота, бронхоскопия, полимеразная цепная реакция в реальном времени, туберкулез, легочные

Введение

Распространенность туберкулеза (ТБ) в Корее снижается, но все еще остается высокой среди стран Организации экономического сотрудничества. страны эксплуатации и развития (ОЭСР). В 2012 году в Корее распространенность туберкулеза составляла 71 на 100 000 человек. ТБ является важным инфекционным заболеванием, и корейское правительство прилагает усилия для обеспечения быстрой диагностики и лечения посредством национальной поддержки и выполнения проектов2.

Традиционно диагноз туберкулеза легких ставится на основе бактериологического исследования образцов из дыхательных путей. Мазок на кислотоустойчивые бациллы (КУБ) является золотым стандартом диагностики и предлагает быстрые результаты, но имеет недостаток, заключающийся в низкой чувствительности, и он не позволяет отличить ТБ от микобактериальных инфекций, не связанных с ТБ3,4. Посев КУБ — полезный метод подтверждения диагноза, но он может занять до 6 недель5.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) широко используется для ранней диагностики TB6,7,8.ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР) использовалась недавно, поскольку она более быстрая, чем обычная ПЦР, и имеет отличную воспроизводимость9,10. Однако большинство предыдущих исследований ПЦР были сосредоточены на ее точности и ограничивались доказанными случаями с положительными результатами мазка или посева на КУБ11,12,13. Наши результаты подчеркнули клиническую точность анализа ОТ-ПЦР с использованием мокроты или бронхоскопической аспирации при наличии клинического подозрения на активный ТБ.

Материалы и методы

1. Субъекты

В исследование были включены субъекты, которым в период с января 2008 года по сентябрь 2011 года была проведена ОТ-ПЦР мокроты и / или бронхоскопического аспирата в больнице Мокдонг женского университета Ихва, Сеул, Республика Корея.Это исследование было одобрено Наблюдательным советом медицинского центра Ихва, Сеул, Республика Корея (№ 12-11-04). Из 2877 пациентов, принимавших ОТ-ПЦР в течение указанного выше периода, 2859 пациентов были оценены в качестве последней исследуемой популяции, за исключением 18 пациентов с положительной ОТ-ПЦР: 6 пациентов из-за неполных медицинских карт и 12 пациентов даже с противотуберкулезными препаратами, потому что недостаточности 6-месячного курса лечения. В этой группе у 888 пациентов была оценена инфекция вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).Среди них ВИЧ-тест был положительным у шести пациентов, и у всех были отрицательные результаты ОТ-ПЦР. В этот период два пациента лечились от активного туберкулеза легких.

Мазок и посев на КУБ были запрошены у всех субъектов с подозрением на активный туберкулез дыхательной системы. Их медицинские карты, рентгенологические данные и патологическая информация были проанализированы ретроспективно. Активный ТБ был подтвержден, если соблюдался один или несколько из следующих критериев:

  • (1) Микробиологический диагноз на основании положительного результата мазка на КУБ без признаков нетуберкулезных микобактерий (НТМ) или положительности культуры КУБ.

  • (2) Гистологическая диагностика туберкулеза.

  • (3) Биохимические доказательства туберкулеза в плевральной жидкости на основе аденозиндезаминазы, превышающей 50 Ед / л, с преобладанием лимфоцитов и исключением любых других заболеваний.

  • (4) Клинический диагноз, подтвержденный пациентом, принимающим противотуберкулезные препараты более 6 месяцев, с благоприятным ответом на основании лабораторных и рентгенологических данных, несмотря на то, что он не соответствует категориям (1) — (3).

Мы исключили пациентов, у которых были положительные результаты НТМ в ОТ-ПЦР, независимо от положительного результата мазка на КУБ, и которые были идентифицированы для НТМ в культуре КУБ.

2. Мазок и посев на КУБ

Образцы из дыхательных путей были сжижены и обеззаражены с помощью метода N-ацетил-L-цистеина с 2% гидроксидом натрия14. После концентрирования часть осадка из каждого образца использовали для окрашивания AFB. После окрашивания аурамином-родамином положительный образец окрашивания подтверждали окрашиванием по Цилю-Нильсену (ZN). Мазок на КУБ был исследован в соответствии с рекомендациями Центров по контролю и профилактике заболеваний5. Респираторный образец инокулировали в 3% среду Огавы (Eiken Co., Токио, Япония). С июля 2008 года его одновременно инокулировали в пробирку с индикатором роста микобактерий BD BBL MGIT 960 (Beckton Dickinson, Sparks, MD, USA). Культивирование с использованием MGIT 960 проводили в соответствии с инструкциями производителя. Бутылки MGIT инкубировали и контролировали в течение 6 недель. Положительный образец в системе MGIT собирали 0,1 мл для подтверждения AFB окрашиванием ZN и выполняли для идентификации. Среду Огавы с тремя процентами также инкубировали при 37 ℃ и проверяли на рост каждую неделю в течение 8 недель, до тех пор, пока не был сообщен окончательный результат.Образцы с положительной культурой идентифицировали с помощью MoleculTech MTB-ID v3 (Youngdong Int., Yongin, Корея), который заключался в различении Mycobacterium tuberculosis (MTB) и комплекса MTB с помощью вложенной / мультиплексной ПЦР в пробирке. Инфекция NTM была идентифицирована Myco-ID (M&D Inc., Вонджу, Корея) с использованием полиморфизма длин рестрикционных фрагментов ПЦР с 2006 г. После апреля 2011 г. для идентификации использовался набор GenoType Mycobacterium CM & AS (Hain Lifescience GmbH, Нерен, Германия). Подгруппа НТМ. Все методы выявления инфекции выполнялись согласно инструкциям производителя.Перед началом лечения туберкулеза было взято как минимум два образца мокроты путем самоотхаркивания или индукции 3% физиологическим раствором. Бронхоскопический аспират собирали с помощью орошения физиологическим раствором из пораженной части с помощью обычной бронхоскопии.

3. ОТ-ПЦР

У 654 субъектов анализы ОТ-ПЦР были проведены с использованием образцов мокроты и бронхоскопического аспирата. ОТ-ПЦР выполняли с использованием набора AdvanSure TB / NTM RT-PCR (LG Life Science, Сеул, Корея) в соответствии с инструкциями производителя13,15.В реакции ОТ-ПЦР использовали три канала (комплекс M. tuberculosis, , микобактерии, внутренний контроль). Сигналы для FAM, HEX и Cy5 (флуоресцентный материал, закрепленный на зонде TaqMan) измеряли в каждом канале. Порог цикла (Ct) при 35 циклах ПЦР для rpoB был специфическим для кислотоустойчивых бактерий. M. tuberculosis считали присутствующим, если Ct rpoB был меньше 35 для каждого сигнала и больше или эквивалентен таковому для IS6110. Если Ct rpoB был меньше 35 для каждого сигнала, но меньше, чем у IS6110, результаты интерпретировались как показательные для M.tuberculosis с небольшим количеством копий IS6110 или вероятная коинфекция между M. tuberculosis и микобактерией, не связанной с туберкулезом16. Ct rpoB менее 35 и Ct IS6110 более 35 были интерпретированы как микобактериальная инфекция, не связанная с туберкулезом13.

4. Статистический анализ

Чувствительность, специфичность, положительные и отрицательные прогностические значения и точность были рассчитаны на основе данных диагностики ТБ с использованием заранее выбранных критериев. Программное обеспечение SPSS версии 20.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США).

Результаты

Демографические данные по 2859 субъектам перечислены в. Средний возраст составлял 59 лет (межквартильный размах, 44-73 года), и 55% испытуемых составляли мужчины. Согласно вышеуказанным критериям, у 680 человек (24%) был диагностирован туберкулез. Диагноз активного туберкулеза у 680 субъектов был основан на микробиологической положительности у 537 субъектов (79%), клиническом диагнозе у 114 субъектов (17%) и патологических или биохимических данных плеврального выпота у 29 субъектов (4%).ОТ-ПЦР дала положительный результат в 22% бронхоскопических аспиратов, что вдвое больше, чем в образцах мокроты (11%). Диагностическая ценность активного ТБ составила 24% от образцов мокроты и 31% от бронхоскопических аспиратов. Результаты компьютерной томографии были доступны 81% от общего числа испытуемых.

Таблица 1

Демографические данные всех субъектов

1. ОТ-ПЦР образцов мокроты

Среди 2353 субъектов, чья мокрота была исследована, у 556 был диагностирован активный ТБ, но только 259 субъектов имели положительные результаты ОТ-ПЦР ( ).Анализ ОТ-ПЦР предоставил противоречивый диагноз из-за следующего: инфекция пневмонии (28%), активный туберкулез (24%), рентгенологически неактивный туберкулезный рубец (14%), рентгенологическая масса легких (11%), бронхоэктазы (7%) , идиопатический хронический кашель (6%), комбинированный плевральный выпот (5%) и другие заболевания (5%). Чувствительность ОТ-ПЦР для прогнозирования инфекции ТБ по образцам мокроты составила 44%, а специфичность — 99% с прогностической ценностью положительного результата 95%, прогностическим значением отрицательного результата 85% и точностью 86% ().

Таблица 2

Результаты ОТ-ПЦР респираторных образцов

По мере того, как период наблюдения продолжался более 6 месяцев, 12 субъектов были признаны ложноположительными, несмотря на положительные результаты ОТ-ПЦР: девять субъектов имели отрицательные результаты в культурах КУБ для всех респираторных образцов и не имел признаков активного туберкулеза; и у троих был установлен диагноз неактивного ТБ на основании клинических и радиологических данных.

Среди 441 субъекта с ОТ-ПЦР-тестом мокроты и микробиологическими доказательствами, анализ подгрупп был проведен у 423 человек, у которых был положительный мазок или посев мокроты на КУБ, за исключением 18 случаев, у которых бронхоскопический аспират был положительным либо на мазке на КУ, либо на культуре.Частота положительных результатов ОТ-ПЦР в этой подгруппе составила 55% (232/423). У 123 субъектов, у которых мазок мокроты и посев на КУБ были положительными, показатель положительности ОТ-ПЦР был увеличен до 87% (107/123) ().

Таблица 3

ОТ-ПЦР мокроты или бронхоскопического аспирата в случаях микробиологического диагноза

2. ОТ-ПЦР бронхоскопических аспиратов

Среди 1160 субъектов, чьи бронхоскопические аспираты были подвергнуты ОТ-ПЦР, у 359 была диагностирована активная TB, а у 256 были положительные результаты ОТ-ПЦР.Причины для проведения анализа RT-PCR были следующими: подозрение на активный ТБ (28%), дифференциальный диагноз пневмонии (27%), рентгенологическое образование легких (19%), бронхоэктатическая болезнь (9%), радиологическое неактивное рубцевание ТБ ( 6%), комбинированный плевральный выпот (5%) и другие заболевания (6%). Чувствительность ОТ-ПЦР для прогнозирования инфекции ТБ на основании бронхоскопических аспиратов составила 65%, а специфичность — 97% при положительной прогностической ценности 91%, отрицательной прогностической ценности 86% и точности 87% ().В течение более чем 6 месяцев наблюдения у 23 субъектов были определены ложноположительные результаты, несмотря на положительные результаты ОТ-ПЦР: 13 субъектов имели отрицательные результаты в культурах КУБ из всех респираторных образцов и не имели признаков активного ТБ; на основании клинических и радиологических данных у восьми был признан неактивный туберкулез; и у двоих был диагностирован рак легких, и результаты посева были отрицательными.

Среди 283 субъектов с ОТ-ПЦР-тестированием бронхоскопических аспиратов и микробиологическими доказательствами, анализ подгрупп был проведен для 207, у которых бронхоскопические аспираты были положительными либо на мазок на КУ, либо на культуру, за исключением 76 случаев, которые были положительными либо на мазок КУБ мокроты, либо на культуру. .Доля положительных результатов ОТ-ПЦР в этой подгруппе составила 90% (187/207), что значительно выше, чем 55% в мокроте. У 69 субъектов, у которых мазок на КУБ и посев бронхоскопических аспиратов были положительными, показатель положительности ОТ-ПЦР составил 93% (64/69), что немного выше, чем у мокроты ().

3. ОТ-ПЦР всех респираторных образцов

Из 2 859 субъектов 654 образца мокроты и бронхоскопии были подвергнуты ОТ-ПЦР. Если один из этих образцов был положительным, субъект классифицировался как положительный при ОТ-ПЦР.Если оба результата были отрицательными, субъект классифицировался как отрицательный при ОТ-ПЦР. Чувствительность ОТ-ПЦР для прогнозирования туберкулезной инфекции в любом респираторном образце составила 59%, а специфичность — 98%, для положительной прогностической ценности 92%, отрицательной прогностической ценности 88% и точности 89%. (). Из 654 субъектов, два образца которых были подвергнуты ОТ-ПЦР, 82 были положительными при ОТ-ПЦР в обоих образцах, а у 99% был диагностирован активный ТБ. В общей сложности 73 пациента дали отрицательный результат ОТ-ПЦР для обоих образцов, и только у 15% был диагностирован активный туберкулез.

4. Сравнение точности образцов

Точность ОТ-ПЦР сравнивалась среди образцов: мокроты, бронхоскопического аспирата или того и другого. При использовании обоих данных точность обнаружения туберкулеза составила 89% при использовании обоих образцов, что выше, чем точность любого отдельного образца ().

Чувствительность, специфичность и точность полимеразной цепной реакции в реальном времени с мокротой или бронхоскопическим аспиратом для обнаружения Mycobacterium tuberculosis .

Обсуждение

ОТ-ПЦР рекомендуется для любых респираторных образцов при клиническом подозрении на ТБ, так как это дает дополнительные преимущества при выявлении ТБ.В случае положительного результата ПЦР можно начать прием противотуберкулезных препаратов, не дожидаясь результатов посева.

Распространенность туберкулеза ежегодно снижается, но он остается важной проблемой здравоохранения во всем мире из-за своей высокой заразности1. Наряду с развитием молекулярной биологии для быстрой диагностики, с 1990 г. было разработано несколько тестов ПЦР для раннего обнаружения M. tuberculosis 8. Результаты ПЦР доступны в короткие сроки, а тесты обладают относительно высокой чувствительностью и специфичностью по сравнению с стандартный мазок на КУБ или посев на КУБ.Анализ гена X-pert (Cepheid, Саннивейл, Калифорния, США) был введен недавно. Его преимущество заключается в более высокой чувствительности и специфичности диагностики туберкулеза, а также в выявлении лекарственной устойчивости17. Относительные затраты на ген X-pert и RT-PCR различаются в зависимости от страны. ОТ-ПЦР имеет преимущество в обнаружении нетуберкулезных микобактерий, а также M. tuberculosis .

В большинстве отчетов оценивается ПЦР с использованием известных AFB-положительных образцов17,18,19. В образцах с положительным мазком чувствительность и специфичность ПЦР находятся в диапазоне 90% -100% с прогностической ценностью положительного результата> 95%, тогда как в образцах с отрицательным мазком чувствительность ПЦР снижается до <50% 17 .В этом исследовании чувствительность ОТ-ПЦР в образцах с положительным мазком AFB составила 89%. Наше исследование отличалось от предыдущих работ дизайном. При повторных запросах на мазок AFB респираторного образца тест ОТ-ПЦР был отправлен за один раз при неизвестном статусе результатов мазка, который встречается в клинической практике. Показатели положительной ОТ-ПЦР у КУБ-положительных субъектов как в мокроте, так и в бронхоскопическом аспирате были увеличены до 55% и 90%, соответственно, с 11% и 22% для всех субъектов, что сопоставимо с предыдущими сообщениями18,20.Факторы, влияющие на чувствительность ОТ-ПЦР, включают индивидуальные усилия, затраченные на сбор мокроты, и предвзятость врача в отношении диагностических подходов13.

В этом исследовании образцы ОТ-ПЦР представляли собой респираторные образцы, включая бронхоскопические аспираты. Бронхоскопия является важным инструментом для оценки легочных заболеваний и особенно полезна для дифференциальной диагностики туберкулеза и других состояний21,22. Селективный аспират, полученный с использованием бронхоскопического подхода, полезен в случаях, когда можно получить небольшое количество мокроты или у субъекта с отрицательным мазком AFB21.Текущие результаты показывают, что ОТ-ПЦР более чувствительна для обнаружения M. tuberculosis в бронхоскопических аспиратах, чем в мокроте. Однако, если какой-либо респираторный образец дает положительный результат ОТ-ПЦР, рекомендуется начать прием противотуберкулезных препаратов при клиническом подозрении на ТБ. Если два образца положительны при ОТ-ПЦР, настоятельно рекомендуется принимать противотуберкулезные препараты независимо от результатов мазка и посева. И наоборот, в случаях, когда оба образца отрицательны, следует учитывать другие легочные заболевания.

В нашем исследовании частота ложноположительных результатов составила 0,5% в мокроте и 2,0% в бронхоскопическом аспирате. Сообщается, что ложноположительный результат ПЦР связан с переносимым загрязнением между образцами, перекрестными реакциями с изолированным NTM или остатками мертвых тканей от предыдущего туберкулезного рубцевания в высокоэндемичных районах13,23,24.

Это исследование имело несколько ограничений. Он был ретроспективным по дизайну и включал только одно заведение. Кроме того, смещение согласно показаниям, рассмотренным клиницистом при запросе ОТ-ПЦР, могло повлиять на результаты, как упоминалось ранее.

Тесты ОТ-ПЦР для всех имеющихся респираторных образцов могут еще больше повысить эффективность диагностики ТБ, а ОТ-ПЦР для бронхоскопических аспиратов более полезна, чем для мокроты. Поскольку используются различные методы ПЦР для диагностики туберкулеза, необходимы их проверка и сравнение. Кроме того, необходимы крупномасштабные исследования, чтобы подтвердить наши выводы.

Благодарности

Авторы благодарят Kyung Ae Kong, M.D. за ее вклад в анализ данных.

Сноски

О потенциальном конфликте интересов, относящемся к этой статье, не сообщалось.

Ссылки

2. Краситель C, Watt CJ, Bleed DM, Hosseini SM, Raviglione MC. Эволюция борьбы с туберкулезом и перспективы сокращения заболеваемости, распространенности и смертности от туберкулеза во всем мире. ДЖАМА. 2005; 293: 2767–2775. [PubMed] [Google Scholar] 3. Леви Х., Фельдман С., Сачо Х., ван дер Меулен Х., Калленбах Дж., Коорнхоф Х. Переоценка микроскопии и посева мокроты в диагностике туберкулеза легких. Грудь. 1989; 95: 1193–1197. [PubMed] [Google Scholar] 4. Ричи С.Р., Харрисон А.С., Воан Р.Х., Колдер Л., Моррис А.Дж..Новые рекомендации по продолжительности респираторной изоляции, основанные на времени для обнаружения Mycobacterium tuberculosis в жидкой культуре. Eur Respir J. 2007; 30: 501–507. [PubMed] [Google Scholar] 5. Стандарты диагностики и классификация туберкулеза у взрослых и детей. Это официальное заявление Американского торакального общества и Центров по контролю и профилактике заболеваний было принято Советом директоров ATS в июле 1999 года. Это заявление было одобрено Советом Общества инфекционных болезней Америки в сентябре 1999 года.Am J Respir Crit Care Med. 2000; 161 (4 Pt 1): 1376–1395. [PubMed] [Google Scholar] 6. Дростен С., Паннинг М., Крамме С. Обнаружение Mycobacterium tuberculosis с помощью ПЦР в реальном времени с использованием пан-микобактериальных праймеров и пары зондов резонансного переноса энергии флуоресценции, специфичных для комплекса M. tuberculosis . Clin Chem. 2003. 49: 1659–1661. [PubMed] [Google Scholar] 7. Greco S, Rulli M, Girardi E, Piersimoni C, Saltini C. Диагностическая точность внутренней ПЦР для туберкулеза легких у пациентов с положительным мазком мокроты: метаанализ и метарегрессия.J Clin Microbiol. 2009. 47: 569–576. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8. Бартлетт Дж. М., Стирлинг Д. Краткая история полимеразной цепной реакции. Методы Мол биол. 2003. 226: 3–6. [PubMed] [Google Scholar] 9. Эспи MJ, Uhl JR, Sloan LM, Buckwalter SP, Jones MF, Vetter EA и др. ПЦР в реальном времени в клинической микробиологии: приложения для рутинных лабораторных исследований. Clin Microbiol Rev.2006; 19: 165–256. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Мдивани Н., Ли Х., Ахалая М., Гегия М., Гогинашвили Л., Кернодле Д.С. и др.Мониторинг терапевтической эффективности путем обнаружения мРНК Mycobacterium tuberculosis в мокроте в режиме реального времени. Clin Chem. 2009; 55: 1694–1700. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Россо Ф., Мишелон СТ, Сперхаке Р.Д., Верза М., Оливал Л., Конде МБ и др. Оценка плеврального выпота пациента с помощью ПЦР в реальном времени для диагностики туберкулеза. BMC Res Notes. 2011; 4: 279. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Мин Джу, Юн Хай, Пак Ку, Сон Джи, Ли Си, Ли Джи. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени в бронхиальном аспирате для быстрого выявления туберкулеза с отрицательным мазком мокроты.Int J Tuberc Lung Dis. 2010. 14: 852–858. [PubMed] [Google Scholar] 13. Hwang S, Oh KJ, Jang IH, Uh Y, Yoon KJ, Kim HY и др. Оценка диагностической эффективности набора AdvanSure TB / NTM для ПЦР в реальном времени для обнаружения микобактерий. Корейский J Clin Microbiol. 2011; 14: 55–59. [Google Scholar] 14. Мастер РН. Процедуры пищеварения и обеззараживания, часть 3.4. В: Изенберг Х.О., редактор. Справочник по клиническим микробиологическим процедурам. Vol. 1. Вашингтон, округ Колумбия: Американское общество микробиологии; 1992. С. 341–344.[Google Scholar] 15. Ли Х, Пак КГ, Ли Джи, Пак Джей, Пак Ю.Г., Пак Ю.Дж. Оценка количественной способности AdvanSure TB / NTM ПЦР в реальном времени в респираторных образцах по сравнению с фенотипическими методами. Ann Lab Med. 2014; 34: 51–55. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Hwang SM, Lim MS, Hong YJ, Kim TS, Park KU, Song J и др. Одновременное обнаружение комплекса Mycobacterium tuberculosis и нетуберкулезных микобактерий в респираторных образцах. Tuberculosis (Edinb) 2013; 93: 642–646.[PubMed] [Google Scholar] 17. Экспресс-тесты на туберкулез: в чем целесообразность? Семинар Американского торакального общества. Am J Respir Crit Care Med. 1997; 155: 1804–1814. [PubMed] [Google Scholar] 18. Коэн Р.А., Музаффар С., Шварц Д., Башир С., Люк С., Макгартланд Л.П. и др. Диагностика туберкулеза легких с помощью ПЦР-анализа мокроты, собранной в течение 24 часов после поступления в больницу. Am J Respir Crit Care Med. 1998. 157: 156–161. [PubMed] [Google Scholar] 19. Kivihya-Ndugga L, van Cleeff M, Juma E, Kimwomi J, Githui W., Oskam L, et al.Сравнение ПЦР с рутинной процедурой диагностики туберкулеза в популяции с высокой распространенностью туберкулеза и вируса иммунодефицита человека. J Clin Microbiol. 2004. 42: 1012–1015. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 20. Тамура А., Шимада М., Мацуи Ю., Кавасима М., Судзуки Дж., Арига Х. и др. Значение волоконно-оптической бронхоскопии у пациентов с туберкулезом легких с положительными посевами, чьи предбронхоскопические образцы мокроты были отрицательными как по мазку, так и по результатам ПЦР. Intern Med.2010. 49: 95–102. [PubMed] [Google Scholar] 21. Tueller C, Chhajed PN, Buitrago-Tellez C, Frei R, Frey M, Tamm M. Значение мазка и ПЦР в жидкости бронхоальвеолярного лаважа при положительном посеве туберкулеза легких. Eur Respir J. 2005; 26: 767–772. [PubMed] [Google Scholar] 22. Чен X, Ян К., Конг Х., Чен Ю. ПЦР в реальном времени и усиленный MTD (R) для быстрого обнаружения Mycobacterium tuberculosis в образцах легких. Int J Tuberc Lung Dis. 2012; 16: 235–239. [PubMed] [Google Scholar] 23. Арадж Г.Ф., Талхук Р.С., Итани Л.Й., Джабер В., Джамаледдин Г.В.Сравнительная характеристика анализа на основе ПЦР с микроскопией и посевом для прямого обнаружения Mycobacterium tuberculosis в клинических образцах респираторных органов в Ливане. Int J Tuberc Lung Dis. 2000; 4: 877–881. [PubMed] [Google Scholar] 24. Беме С.К., Набета П., Хиллеманн Д., Николь М.П., ​​Шенай С., Крапп Ф. и др. Быстрое молекулярное определение туберкулеза и устойчивости к рифампину. N Engl J Med. 2010; 363: 1005–1015. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Более надежная ПЦР для обнаружения Mycobacterium tuberculosis в клинических образцах

Диагностические методы, основанные на ПЦР, имеют две основные проблемы: ложноположительные реакции из-за контаминации фрагментами ДНК из предыдущих ПЦР (ампликоны) и ложноотрицательные реакции, вызванные ингибиторами, мешающими ПЦР.Мы улучшили нашу ранее описанную ПЦР на основе амплификации фрагмента вставочного элемента IS6110, специфичного для комплекса Mycobacterium tuberculosis, в отношении обеих проблем. Ложноположительные реакции, вызванные загрязнением ампликона, предотвращались использованием урацил-N-гликозилазы и dUTP вместо dTTP. Мы выбрали новый набор праймеров за пределами области, охватываемой ранее использовавшимися праймерами, чтобы избежать ложноположительных реакций, вызванных dTTP-содержащими ампликонами, все еще присутствующими в лаборатории.С помощью этого нового набора праймеров 16 копий вставочного элемента IS6110, эквивалент двух бактерий, можно амплифицировать 10 (10) раз за 40 циклов, что дает средняя эффективность 77% за цикл. Чтобы обнаружить присутствие ингибиторов полимеразы Taq, которые могут вызывать ложноотрицательные реакции, часть каждого образца была дополнена ДНК M. tuberculosis. Метод очистки ДНК с использованием тиоцианата гуанидиния и диатомовых водорослей эффективно удалил большинство или все ингибиторы ПЦР. Однако это не подходило для образцов крови, для которых мы разработали обработку протеиназой К с последующей экстракцией фенол-хлороформом.Этот метод позволил выявить 20 бактерий M. tuberculosis в 1 мл цельной крови. Были введены различные лабораторные процедуры для уменьшения сбоев или ингибирования ПЦР и предотвращения перекрестного загрязнения ДНК. Мы протестировали 218 различных клинических образцов, полученных от пациентов с подозрением на туберкулез. Образцы включали мокроту (n = 145), образцы биопсии ткани (n = 25), спинномозговую жидкость (n = 15), кровь (n = 14), плевральную жидкость (n = 9), кал (n = 7), жидкость из свищей (n = 2) и гной из раны (n = 1).Результаты, полученные с помощью ПЦР, соответствовали результатам, полученным с культурой, которая является «золотым стандартом». Мы демонстрируем, что ПЦР — полезный метод для быстрой диагностики туберкулеза в различных местах.

Диагностическая точность собственного ПЦР-анализа в реальном времени на Mycobacterium tuberculosis: систематический обзор и метаанализ | BMC Infectious Diseases

  • 1.

    Организация WH: Global tuberculosis report 2016.pdf. 2016.

    Google Scholar

  • 2.

    Tiwari RP, Hattikudur NS, Bharmal RN, Kartikeyan S, Deshmukh NM, Bisen PS. Современные подходы к быстрой диагностике туберкулеза: перспективы и вызовы впереди. Туберкулез (Edinb). 2007. 87 (3): 193–201.

    Артикул

    Google Scholar

  • 3.

    Chagas M, Silva RM, Bazzo ML, Santos JI. Использование полимеразной цепной реакции для ранней диагностики туберкулеза в культуре микобактерий туберкулеза. Braz J Med Biol Res. 2010. 43 (6): 543–8.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 4.

    Шину П., Наир А., Сингх В., Кумар С., Бареджа Р. Оценка быстрых методов обнаружения микобактерий в мокроте со скудными бациллами или клинически очевидных, отрицательных по мазку случаев туберкулеза легких и внелегочного туберкулеза. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2011; 106 (5): 620–4.

    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 5.

    Хелб Д., Джонс М., История Е, Беме С., Уоллес Е., Хо К., Коп Дж., Оуэнс М.Р., Роджерс Р., Банада П. и др. Быстрое обнаружение микобактерий туберкулеза и устойчивости к рифампицину с использованием технологии по требованию, близкой к пациенту. J Clin Microbiol. 2010. 48 (1): 229–37.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 6.

    Стандарты диагностики и классификация туберкулеза у взрослых и детей. Это официальное заявление Американского торакального общества и Центров по контролю и профилактике заболеваний было принято Советом директоров ATS в июле 1999 года.Это заявление было одобрено Советом Общества инфекционистов Америки, сентябрь 1999 г. Am J Respir Crit Care Med. 2000. 161 (4 Pt 1): 1376–95. https://doi.org/10.1164/ajrccm.161.4.16141.

  • 7.

    Хорита Н., Ямамото М., Сато Т., Цукахара Т., Нагакура Х., Таширо К., Шибата И., Ватанабе Х., Нагаи К., Накашима К. и др. Чувствительность и специфичность полимеразной цепной реакции в реальном времени Cobas TaqMan MTB для микобактерий туберкулеза, подтвержденных культурой: метаанализ 26999 образцов из 17 исследований.Научный доклад 2015; 5: 18113.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 8.

    Morales-Lopez SE, Yepes JA, Anzola I, Aponte H, Llerena-Polo CR. Парадоксальные результаты двух автоматических ПЦР в реальном времени в диагностике туберкулеза плевры. Int J Infect Dis. 2017; 54: 36–8.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 9.

    Park KS, Kim JY, Lee JW, Hwang YY, Jeon K, Koh WJ, Ki CS, Lee NY.Сравнение анализов Xpert MTB / RIF и Cobas TaqMan MTB для выявления микобактерий туберкулеза в образцах из дыхательных путей. J Clin Microbiol. 2013. 51 (10): 3225–7.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 10.

    Барлетта Ф., Ванделаннуте К., Коллантес Дж., Эванс К.А., Аревало Дж., Ригоутс Л. Стандартизация ПЦР в реальном времени на основе TaqMan для обнаружения комплекса микобактерий туберкулеза в мокроте человека.Am J Trop Med Hyg. 2014. 91 (4): 709–14.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 11.

    Kox LF, van Leeuwen J, Knijper S, Jansen HM, Kolk AH. ПЦР-анализ на основе ДНК, кодирующей 16S рРНК, для обнаружения и идентификации микобактерий в клинических образцах. J Clin Microbiol. 1995. 33 (12): 3225–33.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 12.

    Ли Б.В., Тан Дж. А., Вонг СК, Тан СВ, Яп Гонконг, Низкий ПС, Чиа Дж. Н., Тай Дж. С.. Амплификация ДНК с помощью полимеразной цепной реакции для быстрой диагностики туберкулезного менингита. Сравнение протоколов, включающих три последовательности ДНК микобактерий, IS6110, антиген 65 кДа и MPB64. J Neurol Sci. 1994. 123 (1–2): 173–9.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 13.

    Thierry D, Brisson-Noel A, Vincent-Levy-Frebault V, Nguyen S, Guesdon JL, Gicquel B.Характеристика инсерционной последовательности микобактерий туберкулеза, IS6110, и ее применение в диагностике. J Clin Microbiol. 1990. 28 (12): 2668–73.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 14.

    Пай М., Флорес Л.Л., Хаббард А., Райли Л.В., Колфорд Дж. М. мл. Тесты амплификации нуклеиновых кислот в диагностике туберкулезного плеврита: систематический обзор и метаанализ. BMC Infect Dis. 2004; 4: 6.

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 15.

    Sarmiento OL, Weigle KA, Alexander J, Weber DJ, Miller WC. Оценка с помощью метаанализа ПЦР для диагностики туберкулеза легких с отрицательным мазком мокроты. J Clin Microbiol. 2003. 41 (7): 3233–40.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 16.

    Пай М., Флорес Л.Л., Пай Н., Хаббард А., Райли Л.В., Колфорд Дж. М. мл. Диагностическая точность тестов амплификации нуклеиновых кислот при туберкулезном менингите: систематический обзор и метаанализ.Lancet Infect Dis. 2003. 3 (10): 633–43.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 17.

    Миллер Н., Клири Т., Краус Дж., Янг А.К., Спруилл Дж., Гнатышин Х.Дж. Быстрое и специфическое обнаружение микобактерий туберкулеза в респираторных образцах с положительным мазком на кислые бактерии и флаконах с культурами BacT / ALERT MP с использованием флуорогенных зондов и ПЦР в реальном времени. J Clin Microbiol. 2002. 40 (11): 4143–7.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 18.

    Эспи М.Дж., Уль Дж. Р., Слоан Л. М., Баквалтер С. П., Джонс М. Ф., Веттер Э. А., Яо Д. Д., Венгенак Н. Л., Розенблатт Д. Е., Кокерилл Ф. Р. 3-й и др. ПЦР в реальном времени в клинической микробиологии: приложения для рутинных лабораторных исследований. Clin Microbiol Rev.2006; 19 (1): 165–256.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 19.

    Palomino JC. Нетрадиционные и новые методы диагностики туберкулеза: возможность и применимость в данной области.Eur Respir J. 2005; 26 (2): 339–50.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 20.

    Аггарвал М., Аггарвал К.С., Наир Д. Продвинулись ли мы в диагностике нейротуберкулеза? Место проведения ПЦР в реальном времени. J Pediatr Infect Dis. 2012; 07 (04): 139–43.

    Артикул

    Google Scholar

  • 21.

    Альбукерке Ю.М., Лима А.Л., Линс А.К., Магалхаес М., Магалхаес В. Количественная ПЦР в реальном времени (q-ПЦР) для диагностики туберкулеза легких по мазку мокроты у людей с ВИЧ / СПИДом.Rev Inst Med Trop Сан-Паулу. 2014. 56 (2): 139–42.

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 22.

    Chaidir L, Ganiem AR, Vander Zanden A, Muhsinin S, Kusumaningrum T., Kusumadewi I, van der Ven A, Alisjahbana B, Parwati I., van Crevel R. Сравнение IS6110-PCR в реальном времени, микроскопия, и посев для диагностики туберкулезного менингита в когорте взрослых пациентов в Индонезии. PLoS One. 2012; 7 (12): e52001.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 23.

    Дарбан-Сарохалил Д., Имани Фулади А.А., Малекнежад П., Бамери З., Афлаки М., Номанпур Б., Яслианифард С., Модарреси М. Х., Фейзабади М. М.. Сравнение микроскопии мазка, посева и ПЦР в реальном времени для количественного выявления микобактерий туберкулеза в клинических респираторных образцах. Scand J Infect Dis. 2013. 45 (4): 250–5.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 24.

    Галло Дж. Ф., Пинхата Дж. М., Чимара Е., Гонсалвес М. Г., Фукасава Л. О., Оливейра Р.С.Проведение собственной полимеразной цепной реакции в реальном времени для идентификации изолятов микобактерий туберкулеза при рутинной лабораторной диагностике в условиях высокой нагрузки. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2016; 111 (9): 545–50.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 25.

    Inoue M, Tang WY, Wee SY, Barkham T. Проверяйте и улучшайте! Оценка анализа ПЦР на основе зондов в реальном времени с внутренним контролем для прямого обнаружения комплекса микобактерий туберкулеза.Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2011; 30 (1): 131–5.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 26.

    Lee HS, Park KU, Park JO, Chang HE, Song J, Choe G. Быстрое, чувствительное и специфическое обнаружение комплекса микобактерий туберкулеза с помощью ПЦР в реальном времени на парафиновых тканях человека. J Mol Diagn. 2011; 13 (4): 390–4.

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 27.

    Lira LA, Santos FC, Carvalho MS, Montenegro RA, Lima JF, Schindler HC, Черногория LM. Оценка анализа IS6110-Taqman ПЦР в реальном времени для обнаружения микобактерий туберкулеза в образцах мокроты пациентов с легочным туберкулезом. J Appl Microbiol. 2013. 114 (4): 1103–8.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 28.

    Lyra JM, Maruza M, Verza M, Carneiro MM, Albuquerque Mde F, Rossetti ML, Ximenes R, Braga MC, Lucena-Silva N.Оценка четырех молекулярных методов диагностики туберкулеза в образцах легких и крови пациентов с ослабленным иммунитетом. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2014. 109 (6): 805–13.

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 29.

    Миллер М.Б., Попович Э.Б., Баклунд М.Г., Агер Э.П. Проведение анализа Xpert MTB / RIF RUO и ПЦР в реальном времени IS6110 для обнаружения микобактерий туберкулеза в клинических образцах. J Clin Microbiol.2011. 49 (10): 3458–62.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 30.

    Рао П., Чавла К., Шеной В.П., Мухопадхьяй С. Роль ПЦР в реальном времени для выявления туберкулеза и лекарственной устойчивости непосредственно из клинических образцов. Индийский J Tuberc. 2016; 63 (3): 149–53.

    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 31.

    Rozales FP, Machado AB, De Paris F, Zavascki AP, Barth AL.ПЦР для выявления микобактерий туберкулеза в образцах дыхательных путей: оценка клинических данных. Epidemiol Infect. 2014. 142 (7): 1517–23.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 32.

    Санджуан-Хименес Р., Торо-Пейнадо И., Бермудес П., Колменеро Дж. Д., Мората П. Сравнительное исследование анализа ПЦР в реальном времени, нацеленного на senX3-regX3, по сравнению с другими молекулярными стратегиями, обычно используемыми в диагностике туберкулеза. PLoS One. 2015; 10 (11): e0143025.

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 33.

    Мохер Д., Либерати А., Тецлафф Дж., Альтман Д.Г. Предпочтительные элементы отчетности для систематических обзоров и метаанализов: заявление PRISMA. Int J Surg. 2010. 8 (5): 336–41.

    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 34.

    Whiting PF, Rutjes AW, Westwood ME, Mallett S, Deeks JJ, Reitsma JB, Leeflang MM, Sterne JA, Bossuyt PM.QUADAS-2: обновленный инструмент для оценки качества исследований диагностической точности. Ann Intern Med. 2011. 155 (8): 529–36.

    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 35.

    Zamora J, Abraira V, Muriel A, Khan K, Coomarasamy A. Meta-DiSc: программное обеспечение для мета-анализа данных о точности испытаний. BMC Med Res Methodol. 2006; 6:31.

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 36.

    Литтенберг Б., Моисей Л.Е. Оценка точности диагностики из нескольких противоречивых отчетов: новый метааналитический метод. Принятие решений в медицине. 1993. 13 (4): 313–21.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 37.

    Дикс Дж. Дж. Систематические обзоры в здравоохранении: систематические обзоры оценок диагностических и скрининговых тестов. BMJ. 2001. 323 (7305): 157–62.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 38.

    Ирвиг Л., Макаскилл П., Гласзиу П., Фэйи М. Метааналитические методы для проверки точности диагностических тестов. J Clin Epidemiol. 1995; 48 (1): 119–30 обсуждение 131–112.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 39.

    Lijmer JG, Bossuyt PM, Heisterkamp SH. Изучение источников неоднородности в систематических обзорах диагностических тестов. Stat Med. 2002. 21 (11): 1525–37.

    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 40.

    Сонг Ф, Хан К.С., Диннес Дж., Саттон А.Дж. Асимметричные графики воронки и систематическая ошибка публикации в метаанализе диагностической точности. Int J Epidemiol. 2002. 31 (1): 88–95.

    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 41.

    Флорес Л.Л., Пай М., Колфорд Дж. М. мл., Райли Л. В.. Внутренние тесты амплификации нуклеиновых кислот для обнаружения микобактерий туберкулеза в образцах мокроты: мета-анализ и мета-регрессия. BMC Microbiol. 2005; 5: 55.

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 42.

    Penz E, Boffa J, Roberts DJ, Fisher D, Cooper R, Ronksley PE, James MT. Диагностическая точность теста Xpert (R) MTB / RIF для внелегочного туберкулеза: метаанализ. Int J Tuberc Lung Dis. 2015; 19 (3): 278–84 i-iii.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 43.

    Коджагоз Т., Йилмаз Э., Озкара С., Коджагоз С., Хайран М., Сачедева М., Чемберс Х.Ф.Обнаружение микобактерий туберкулеза в образцах мокроты методом полимеразной цепной реакции с использованием упрощенной процедуры. J Clin Microbiol. 1993. 31 (6): 1435–8.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 44.

    Nolte FS, Metchock B, McGowan JE Jr, Edwards A, Okwumabua O, Thurmond C, Mitchell PS, Plikaytis B, Shinnick T. Прямое обнаружение микобактерий туберкулеза в мокроте с помощью полимеразной цепной реакции и гибридизации ДНК.J Clin Microbiol. 1993. 31 (7): 1777–82.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 45.

    Noordhoek GT, Kaan JA, Mulder S, Wilke H, Kolk AH. Регулярное применение полимеразной цепной реакции для обнаружения микобактерий туберкулеза в клинических образцах. J Clin Pathol. 1995. 48 (9): 810–4.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 46.

    Knottnerus JA, van Weel C, Muris JW. Оценка диагностических процедур. BMJ. 2002. 324 (7335): 477–80.

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 47.

    Negi SS, Anand R, Pasha ST, Gupta S, Basir SF, Khare S, Lal S. Диагностический потенциал полимеразной цепной реакции на основе последовательностей IS6110, 38 кДа, 65 кДа и 85B в диагностике микобактерий туберкулеза в клинические образцы. Индийский J Med Microbiol. 2007; 25 (1): 43.

    CAS
    PubMed
    Статья

    Google Scholar

  • 48.

    van Embden JD, Cave MD, Crawford JT, Dale JW, Eisenach KD, Gicquel B, Hermans P, Martin C, McAdam R, Shinnick TM, et al. Идентификация штаммов микобактерий туберкулеза по отпечаткам ДНК: рекомендации по стандартизированной методологии. J Clin Microbiol. 1993. 31 (2): 406–9.

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 49.

    Cockerill FR 3-й. Применение быстрой полимеразной цепной реакции в реальном времени для диагностических исследований в лаборатории клинической микробиологии. Arch Pathol Lab Med. 2003. 127 (9): 1112–20.

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 50.

    Линг Д.И., Флорес Л.Л., Райли Л.В., Пай М. Коммерческие тесты амплификации нуклеиновых кислот для диагностики туберкулеза легких в респираторных образцах: метаанализ и мета-регрессия. PLoS One.2008; 3 (2): e1536.

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 51.

    Организация ВОЗ. Диагностический тест на туберкулез Xpert MTB / RIF. Женева: ВОЗ; 2014.

  • 52.

    Детжен А.К., ДиНардо А.Р., Лейден Дж., Стейнгарт К.Р., Мензис Д., Шиллер И., Дендукури Н., Мандалакас А.М. Анализ Xpert MTB / RIF для диагностики туберкулеза легких у детей: систематический обзор и метаанализ. Ланцет Респир Мед.2015; 3 (6): 451–61.

    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • 53.

    Yu L, Xu Y, Wang F, Yang C, Liu G, Song X. Функциональные роли рецепторов распознавания образов, которые распознают вирусные нуклеиновые кислоты в мезенхимальных стволовых клетках человека, полученных из жировой ткани. Biomed Res Int. 2016; 2016: 9872138.

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 54.

    Нагаи К., Хорита Н., Ямамото М., Цукахара Т., Нагакура Х., Таширо К., Шибата И., Ватанабе Х., Накашима К., Ушио Р. и др.Точность диагностического теста петлевой изотермической амплификации для микобактерий туберкулеза: систематический обзор и метаанализ. Научный доклад 2016; 6: 39090.

    CAS
    PubMed
    PubMed Central
    Статья

    Google Scholar

  • Информационные бюллетени | Тестирование и диагностика | Информационные бюллетени — Диагностика туберкулеза | ТБ

    (значок PDFpdf — 35 КБ)

    Диагностика туберкулеза

    Когда следует подозревать туберкулез (ТБ)?

    ТБ — болезнь, вызываемая Mycobacterium tuberculosis .Заболевание туберкулезом следует подозревать у лиц, имеющих следующие симптомы:

    • Необъяснимая потеря веса
    • Потеря аппетита
    • Ночные поты
    • Лихорадка
    • Усталость

    Если ТБ поражает легкие (легочные), симптомы могут включать:

    • Кашель более 3 недель
    • Кровохарканье (кровохарканье)
    • Боль в груди

    Если туберкулез поражает другие части тела (внелегочный), симптомы будут зависеть от пораженной области.

    Как вы оцениваете лиц с подозрением на туберкулез?

    Полное медицинское обследование на туберкулез включает следующее:

    1. История болезни

    Клиницисты должны спросить об истории контакта пациента с туберкулезом, инфекцией или заболеванием. Также важно учитывать демографические факторы (например, страну происхождения, возраст, этническую или расовую группу, род занятий), которые могут повысить риск заражения пациента туберкулезом или лекарственно-устойчивым туберкулезом.Кроме того, врачи должны определить, есть ли у пациента заболевания, особенно ВИЧ-инфекция, которые увеличивают риск развития латентной инфекции ТБ в заболевание ТБ.

    2. Физический осмотр

    Медицинский осмотр может предоставить ценную информацию об общем состоянии пациента и других факторах, которые могут повлиять на лечение туберкулеза, таких как ВИЧ-инфекция или другие заболевания.

    3. Тест на туберкулез

    Туберкулиновая кожная проба Манту (ТКП) или анализ крови на ТБ могут использоваться для определения M.tuberculosis инфекция. Для подтверждения заболевания туберкулезом требуются дополнительные тесты. Кожная туберкулиновая проба Манту проводится путем введения небольшого количества жидкости, называемой туберкулином, в кожу в нижней части руки. Тест считывается в течение 48-72 часов обученным медицинским работником, который ищет реакцию (уплотнение) на руке.

    Анализ крови на туберкулез определяет реакцию иммунной системы пациента на M. tuberculosis .

    4. Рентгенограмма грудной клетки

    Для выявления аномалий грудной клетки используется задне-передняя рентгенограмма грудной клетки.Поражения могут появиться в любом месте легких и могут отличаться по размеру, форме, плотности и кавитации. Эти отклонения могут указывать на туберкулез, но не могут использоваться для окончательной диагностики туберкулеза. Однако рентгенограмма грудной клетки может использоваться, чтобы исключить возможность легочного туберкулеза у человека, у которого была положительная реакция на ТКП или анализ крови на туберкулез и не было симптомов заболевания.

    5. Диагностическая микробиология

    Наличие кислотоустойчивых бацилл (КУБ) в мазке мокроты или другом образце часто указывает на туберкулез.Кислотно-быстрая микроскопия — это просто и быстро, но она не подтверждает диагноз ТБ, потому что некоторые кислотоустойчивые бациллы не являются M. tuberculosis . Поэтому для подтверждения диагноза проводится посев на всех исходных образцах. (Однако положительный посев не всегда необходим для начала или продолжения лечения туберкулеза.) Положительный посев на M. tuberculosis подтверждает диагноз туберкулеза. Посевы должны проводиться на всех образцах, независимо от результатов мазка на КУБ.Лаборатории должны сообщать о положительных результатах мазков и посевов в течение 24 часов по телефону или факсу поставщику первичной медико-санитарной помощи и в государственную или местную программу по борьбе с туберкулезом, как требуется по закону.

    6. Устойчивость к лекарствам

    Для всех пациентов исходный изолят M. tuberculosis должен быть протестирован на лекарственную устойчивость. Крайне важно как можно раньше выявить лекарственную устойчивость, чтобы обеспечить эффективное лечение. Паттерны лекарственной чувствительности следует повторить для пациентов, которые не реагируют должным образом на лечение или у которых есть положительные результаты посева, несмотря на 3 месяца терапии.Результаты лабораторных исследований на чувствительность следует незамедлительно сообщать поставщику первичной медико-санитарной помощи и в государственную или местную программу борьбы с ТБ.

    Дополнительная информация

    границ | Параллельные тесты с использованием посева, Xpert MTB / RIF и SAT-TB в мокроте плюс жидкость для бронхиального альвеолярного лаважа значительно повышают диагностическую эффективность туберкулеза легких с отрицательным мазком мазка

    Введение

    Туберкулез (ТБ) остается одним из ведущих инфекционных заболеваний в мире и наносит серьезный ущерб общественному здоровью.Согласно обновленному глобальному отчету о ТБ, выпущенному Всемирной организацией здравоохранения [ВОЗ] (2017), было оценено 10,4 миллиона новых случаев ТБ и около 1,3 миллиона смертей от ТБ среди ВИЧ-отрицательных людей (по сравнению с 1,7 миллиона в 2000) в 2016 году, а также еще 374 000 смертей среди ВИЧ-инфицированных в этом году (Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ], 2017).

    Сложность диагностики ТБ — один из важных факторов, способствующих борьбе с ТБ.Традиционный метод мазка мокроты и посева для выявления туберкулеза широко используется в клинической лабораторной диагностике туберкулеза, но его чувствительность невысока. Два молекулярных метода, Xpert MTB / RIF и SAT-TB (метод одновременной амплификации и тестирования на ТБ), имеют несколько преимуществ, но они по-прежнему не позволяют диагностировать некоторые случаи из-за типичного использования только одного образца.

    Xpert MTB / RIF — это молекулярный метод обнаружения Mycobacterium tuberculosis (MTB), который обладает превосходной диагностической эффективностью с точки зрения времени анализа и частоты положительных результатов и был одобрен ВОЗ (Steingart et al., 2013, 2014). Xpert MTB / RIF также показал высокую диагностическую специфичность при туберкулезе легких (ЛТБ) (Penz et al., 2015; Kaur et al., 2016; Sehgal et al., 2016; Hasan et al., 2017; Li et al., 2017). ; Lombardi et al., 2017; Rufai et al., 2017). Кроме того, Xpert MTB / RIF обеспечивает высокоэффективное обнаружение MTB в жидкости бронхиального альвеолярного лаважа (BALF) и не респираторных образцах, таких как биологические жидкости, тонкоигольная аспирация и различные ткани, и представляет полезную диагностическую ценность для внелегочного ТБ (Barnard et al. al., 2012; Penz et al., 2015; Сегал и др., 2016; Rufai et al., 2017).

    Метод одновременной амплификации и тестирования на ТБ — еще один быстрый молекулярный инструмент для обнаружения MTB (Fan et al., 2014; Yan et al., 2017). Предыдущие исследования показали, что специфичность SAT-TB составляет почти 100% при обнаружении PTB (Yan et al., 2016a, b), что позволяет предположить, что SAT-TB имеет потенциальную клиническую ценность при диагностике PTB как новый метод анализа. Еще одно преимущество тестов SAT-TB заключается в том, что, поскольку их целью обнаружения является РНК, а не ДНК, они обнаруживают живые бактерии.

    Хотя и Xpert MTB / RIF, и SAT-TB являются высокоспецифичными тестами, когда они используются изолированно и обычно только с одним образцом, по-прежнему наблюдается значительный дефицит их чувствительности, что приводит к тому, что некоторые случаи ТБ пропущенный. Мы предположили, что использование этих тестов с высокой специфичностью в сочетании для одновременного обнаружения MTB в мокроте и образцах BALF может повысить диагностическую чувствительность PTB. В этом исследовании мы применили параллельные тесты с использованием посева, Xpert MTB / RIF и SAT-TB для совместного выявления MTB в мокроте и образцах BALF от пациентов с PTB, чтобы оценить ценность параллельного обнаружения.

    Материалы и методы

    Субъекты

    С 2 мая 2015 г. по 31 декабря 2016 г. в исследование были включены 258 пациентов с ПТБ из Шанхайской легочной больницы, Медицинской школы Университета Тунцзи, Шанхай, Китай. В этой группе пациентов средний возраст составлял 32,5 года (диапазон: 11–89 лет), 140 случаев — мужчины и 118 — женщины.

    Критериями включения были: пациент PTB, возраст> 18 лет, ВИЧ-отрицательный, положительный анамнез вакцинации БЦЖ, отрицательные результаты минимум двух мазков мокроты в начале лечения, желающие пройти бронхоскопию и иметь как мокроту, так и BALF. собраны образцы.Все пациенты, включенные в это исследование, подписали формы информированного согласия, и исследование было одобрено институциональным наблюдательным советом Шанхайской легочной больницы, Медицинской школы Университета Тунцзи, Шанхай, Китай (номер разрешения K15-191). Применяемые диагностические критерии PTB соответствовали рекомендациям ВОЗ по лечению туберкулеза и основывались на сочетании клинических симптомов, рентгенологических данных грудной клетки, совместимых с активным туберкулезом, гистологических наблюдений, отсутствия улучшения в ответ на курс антибиотиков широкого спектра действия (за исключением противотуберкулезные препараты, фторхинолоны и аминогликозиды), а также решение лечащего врача об удовлетворительном ответе пациента на все курсы противотуберкулезной терапии (Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ], 2010).

    Критериями исключения были: положительный результат мазка из последовательных образцов мокроты, положительный результат на ВИЧ, нечеткий или неоднозначный окончательный диагноз, нежелание проходить бронхоскопию или невозможность собрать образцы мокроты и лоханки.

    Коллекция образцов

    После регистрации пациентов с подозрением на ЛТБ с отрицательным результатом мазка мазок мокроты и образцы BALF были взяты сразу после того, как пациенты закончили обследование с помощью электронной бронхоскопии. Образцы БАЛ отбирали следующим образом: объем 40–60 мл стерильного физиологического раствора (0.9%) вводили в дыхательные пути пораженного сегмента легкого и собирали 30 мл BALF. Затем эти образцы были протестированы на MTB с помощью культуры BACTEC MGIT 960, анализа SAT-TB и Xpert MTB / RIF. Персонал лаборатории был не осведомлен о последней диагностической категории (на основе диагностических критериев PTB, описанных выше), а клиницисты были не осведомлены о результатах двух молекулярных тестов.

    Бактериальная культура, анализы Xpert MTB / RIF и SAT-TB

    Бактериальное культивирование

    проводили в системе культивирования микобактерий BD BACTEC TM MGIT TM 960 (Becton Dickinson and Company, Allschwil, Швейцария) в соответствии с инструкциями производителя.

    Анализ Xpert ® MTB / RIF проводили в соответствии с протоколом производителя (Cepheid, Саннивейл, Калифорния, США). Вкратце, 500 мкл очищенного и концентрированного образца предварительно обрабатывали раствором образца (содержащим NaOH и изопропанол) в соотношении 1: 3 в течение 15 минут при комнатной температуре, а затем выливали в одноразовый картридж, который помещали в модуль GeneXpert TM Dx. Этот анализ дал результаты менее чем за 2 часа. Каждый запуск ПЦР включал внутренние контроли для обработки образцов (выделение ДНК) и валидности ПЦР (наличие ингибиторов), и эти положительные и отрицательные контроли тестировались каждый день.Система автоматически интерпретировала все результаты измеренных флуоресцентных сигналов, используя встроенные алгоритмы вычислений, в следующие категории: недействительные (если ингибиторы ПЦР были обнаружены с ошибкой амплификации), отрицательные или положительные. В случае положительной классификации результаты были дополнительно разделены на четыре дополнительные категории (очень низкие, низкие, средние и высокие) в зависимости от обнаруженной бактериальной нагрузки [2, 4].

    Анализ SAT-TB выполняли, как описано ранее (Fan et al., 2014). Вкратце, MTB 16S рРНК выделяли из каждого образца и подвергали обратной транскрипции с получением фрагмента ДНК длиной 170 п.н. Специфическим смысловым праймером MTB 16S рРНК, содержащим последовательность промотора Т7, был 5′-AATTTAATACGACTCA CTATAGGGAGAGTAGGCCGTCACCCCACCAACAAGCTG-3 ‘, а антисмысловым праймером был 5′-CTGGGAAACTGGGTCTAATAC-3’. Последовательность зонда представляла собой 5′-CCAGCCACGGGAUGCAUGCUGG-3 ‘и была помечена фосфорамидитом 6-карбоксифлуоресцеина (FAM) на 5’-конце и 4- [4- (диметиламино) фенилазо] бензойной кислотой N -сукцинимидиловый эфир) (D-сукцинимидиловый эфир) (D-сукцинимидиловый эфир). конец 3 ′.ПЦР в реальном времени проводили в системе 7500 ПЦР в реальном времени (Applied Biosystems, Inc., Фостер-Сити, Калифорния, США).

    Наблюдение за пациентом

    Все пациенты, включенные в это исследование, находились под наблюдением амбулатории не менее 6 месяцев. Новые результаты КТ грудной клетки проверялись каждые 2 месяца для оценки эффективности проводимой химиотерапии.

    Статистический анализ

    В соответствии с принципом параллельного представления результатов испытаний чувствительность совместных испытаний регистрировалась и анализировалась отдельно.Собранные данные были проанализированы с помощью SPSS 21.0. Доля чувствительности представлена ​​с доверительным интервалом 95%. Чувствительность рассчитывалась как доля от числа положительных результатов теста в группе пациентов, у которых был клинический диагноз ПТБ. Специфичность следует рассчитывать с учетом количества отрицательных результатов у пациентов, не страдающих туберкулезом. Значение Каппа использовалось для оценки согласованности двух методов. Разница в соотношении компонентов была проверена с помощью критериев хи-квадрат, и p — значения меньше 0.05 считались статистически значимыми.

    Результаты

    Сравнение чувствительности культур, Xpert MTB / RIF и SAT-TB

    Три метода были применены для тестирования образцов мокроты и BALF от 258 включенных пациентов с подтвержденным PTB. Положительные показатели посева, Xpert MTB / RIF и SAT-TB в мокроте составили 0,3527 (0,2970–0,4128), 0,3217 (0,2677–0,3810) и 0,2403 (0,1922–0,2960) соответственно; а в BALF — 0,3915 (0,3339–0,4522), 0,4186 (0.3600–0,4796) и 0,4186 (0,3600–0,4796) соответственно (дополнительный материал 1). В целом, частота положительных результатов обнаружения MTB в BALF была значительно выше, чем в образцах мокроты, а обнаружение MTB на основе совместных образцов имело более высокую частоту положительных результатов, чем на основе одного образца ( p <0,05, Рисунок 1 и Таблица 1 ). Количественные результаты Xpert MTB / RIF показывают, что у большинства пациентов уровни MTB были от очень низких до средних (рис. 2).

    РИСУНОК 1. Положительные показатели посева, Xpert MB / RIF и SAT-TB в разных типах образцов. BALF, жидкость бронхоальвеолярного лаважа.

    ТАБЛИЦА 1. Сравнение чувствительности и 95% доверительных интервалов каждого отдельного теста обнаружения MTB с разными типами образцов.

    РИСУНОК 2. нагрузки MTB согласно результатам Xpert MTB / RIF. BALF, жидкость бронхоальвеолярного лаважа.

    Согласование результатов посева, Xpert MTB / RIF и SAT-TB для образцов мокроты и ЖБАЛ

    На основании образцов мокроты и ЖБАЛ значения каппа результатов теста на культуру, Xpert MTB / RIF и SAT-TB были равны 0.5, 0,22 и 0,252 соответственно (табл. 2–4). Эти относительно низкие значения согласия предполагают, что были различия в результатах обнаружения между двумя образцами ( p <0,05).

    ТАБЛИЦА 2. Согласование результатов культурального теста между образцами мокроты и BALF.

    ТАБЛИЦА 3. Согласование результатов Xpert MTB / RIF между образцами мокроты и ЖБАЛ.

    ТАБЛИЦА 4. Согласование результатов SAT-TB между образцами мокроты и BALF.

    Что касается выявления устойчивости к противотуберкулезному препарату рифампицину, все результаты тестов на культуре и Xpert MTB / RIF полностью согласуются друг с другом. Значение каппа для результатов посева по сравнению с результатами теста Xpert MTB / RIF составляет 1,0 (таблица 5), что свидетельствует о том, что Xpert MTB / RIF является надежным методом выявления устойчивости к противомикробным препаратам при ТБ.

    ТАБЛИЦА 5. Согласование результатов теста на устойчивость к рифампицину между Xpert MTB / RIF и методами культивирования.

    Сравнение чувствительности параллельных тестов

    В группах, состоящих только из мокроты и только образцов ЖБАЛ, модель параллельных тестов с использованием всех трех тестов (посев, Xpert MTB / RIF и SAT-TB) имела самую высокую чувствительность (мокрота: 0,5039 и ЖБАЛ: 0,6124). При использовании только двух тестов, посев плюс Xpert MTB / RIF и посев плюс SAT-TB имели более высокую чувствительность (рисунок 3 и таблица 6).

    РИСУНОК 3. Положительные результаты параллельных тестов с использованием культуры, Xpert MB / RIF и SAT-TB в разных типах образцов.BALF, жидкость бронхоальвеолярного лаважа.

    ТАБЛИЦА 6. Сравнение чувствительности и 95% доверительных интервалов параллельных тестов с разными типами образцов.

    Сравнение чувствительности выявления суставов с использованием образцов мокроты и BALF

    При совместном обнаружении образцов с использованием образцов мокроты и ЖБАЛ комбинация всех трех методов (посев, Xpert MTB / RIF и SAT-TB) имела наивысшую чувствительность (0,8566). Чувствительность в моделях, использующих только два теста, находилась в диапазоне от 0.7364 и 0,7907. В целом, чувствительность моделей обнаружения с использованием совместных образцов была значительно выше, чем у моделей с использованием одного образца ( p <0,05, таблица 6). Относительные данные из дополнительной таблицы S1 показаны в дополнительном листе данных 2.

    Результаты наблюдения за пациентами

    В общей сложности 258 случаев были диагностированы как активные ЛТБ на основании примененных диагностических критериев, и все они получали противотуберкулезное лечение. Из них 221 случай PTB (85,65%) был подтвержден на основании параллельных тестов с использованием образцов мокроты и BALF.Последующее наблюдение пациентов показало, что все пациенты достигли удовлетворительного ответа на противотуберкулезную химиотерапию.

    Обсуждение

    Результаты лабораторных исследований являются важной и окончательной основой для диагностики туберкулеза (Hu, 2008; Salina, Morozova, 2008; Melinte, 2009; Amaral and van Soolingen, 2015; Purohit and Mustafa, 2015; Purohit et al., 2015; Sharma et al., 2015). al., 2015; Shiferaw et al., 2015; Afsar, Afsar, 2016; Dunn et al., 2016; Procop, 2016; Shi et al., 2016; Bhirud et al., 2017). В настоящее время основными клиническими методами диагностики ПТБ являются мазок, посев, биофаг, а также молекулярные и иммунологические методы (Brent et al., 2011; Barnard et al., 2012; Ли и др., 2015; Wang et al., 2015; Хо и Пэн, 2016; Penata et al., 2016; Shi et al., 2016; Gelalcha et al., 2017; Махарджан и др., 2017; Ядав и др., 2017). Однако с точки зрения чувствительности все отдельные тесты имеют дефекты различной степени в клинической практике.

    Ранее опубликованная литература по метаанализу доказала, что некоторые методы, такие как культивирование и тесты амплификации нуклеиновых кислот, являются относительно надежными инструментами для диагностики PTB (Chang et al., 2012; Юань и др., 2014; Каур и др., 2016; Нагай и др., 2016; Ли и др., 2017). На основании систематического обзора ВОЗ теперь рекомендует тесты амплификации нуклеиновых кислот, такие как Xpert-MTB / RIF, вместо обычных тестов для диагностики ТБ в лимфатических узлах и других тканях и в качестве предпочтительного начального теста для диагностики туберкулезного менингита (Denkinger и др., 2014). Однако из-за отсутствия систематического обзора и метаанализа этого конкретного использования диагностическая ценность Xpert-MTB / RIF неясна для латентного ТБ.

    Согласно метаанализу девяти исследований с участием в общей сложности 1214 субъектов, тесты амплификации нуклеиновых кислот на образцах ЖБАЛ имеют важное диагностическое значение для отрицательных по мазку ПТБ, а совокупная чувствительность и специфичность составили 0,54 [95% доверительный интервал (ДИ) : 0,48–0,59] и 0,97 (95% ДИ: 0,95–0,98) соответственно (Tian et al., 2015). Основываясь на этих выводах, в настоящем исследовании были выбраны культуры, Xpert MTB / RIF и SAT-TB для использования при параллельном выявлении ТБ с целью потенциального улучшения диагностических характеристик ТБ.

    Согласно количественным результатам Xpert MTB / RIF, уровни MTB были от очень низких до средних у большинства пациентов в этом исследовании. Относительно низкие уровни MTB могли быть причиной отрицательных результатов мазка у этих пациентов. Применяя модели параллельных тестов с использованием совместных выборок, мы подтвердили в общей сложности 221 (85,65%) из 258 зарегистрированных случаев PTB. Согласно отчетам о 6-месячном наблюдении, у всех 258 пациентов был хороший терапевтический ответ, что позволяет предположить, что диагнозы были надежными.

    В целом, чувствительность моделей с одним тестом с использованием культуры, Xpert MTB / RIF или SAT-TB была ниже, чем у моделей с параллельным тестом, независимо от того, использовались ли образцы мокроты или образцы BALF. Тем не менее, мы обнаружили, что существует относительно низкое согласие между результатами обнаружения образцов мокроты и результатами анализа образцов BALF, а чувствительность образцов BALF была выше, чем чувствительность образцов мокроты для всех трех тестов. Модели параллельных тестов с использованием посева плюс Xpert MTB / RIF плюс SAT-TB, посев плюс Xpert или посев плюс SAT-TB позволили достичь более высокой чувствительности для обнаружения MTB в PTB.Кроме того, совместное обнаружение с использованием образцов мокроты и BALF может дополнительно повысить диагностическую чувствительность для отрицательных по мазку PTB.

    Приведенные выше результаты показывают, что одиночные тестовые модели имеют низкую чувствительность; Таким образом, мы рекомендуем использовать в клинической практике модель параллельных тестов для диагностики ПТБ. Некоторые методы, такие как посев, занимают слишком много времени (4 недели), поэтому применение тестовой модели с использованием Xpert MTB / RIF в сочетании с SAT-TB (2 часа) в качестве альтернативы значительно сэкономит время.Наши результаты также подтверждают, что Xpert MTB / RIF надежен для определения устойчивости к рифампицину. С точки зрения затрат, тесты с использованием посевов, Xpert MTB / RIF и SAT-TB стоят 16, 64 и 16 долларов соответственно, посев занимает 2 недели, в то время как Xpert MTB / RIF и SAT-TB занимают всего 2 часа. Хотя Xpert MTB / RIF относительно дорого, чем SAT-TB и посев, Xpert MTB / RIF также может обеспечить результат устойчивости к рифампину, эти цены, как правило, доступны для большинства семей. городские больницы в Китае, посевы MTB и молекулярная диагностика с использованием образца BALF возможны и подходят для диагностики PTB.

    Учитывая наши результаты, мы рекомендуем проводить культуральную и молекулярно-биологическую диагностику с использованием образцов мокроты при подозрении на ЛТБ. Положительный результат двух молекулярных тестов указывает на то, что врач может поставить точный диагноз; однако, если результаты молекулярных тестов с использованием образцов мокроты отрицательны, образцы BALF следует собирать с помощью бронхоскопии и использовать для молекулярной диагностики и посева. В случаях, когда пациентам трудно поставить диагноз из-за отсутствия электронной бронхоскопии или лабораторных условий в первичном медицинском учреждении, пациенты должны быть переведены в квалифицированное учреждение для дальнейшей диагностики.

    Заключение

    Наши данные предполагают, что применение параллельных тестов с использованием посева, Xpert MTB / RIF и SAT-TB как в образцах мокроты, так и в BALF значительно повысит диагностическую эффективность PTB с отрицательным мазком мокроты. Следовательно, эту модель следует применять в клинических условиях, где это необходимо.

    Авторские взносы

    Дизайн исследования составляли

    LF, CZ и ZZ. Рукопись написали LF и CZ. DL и JN провели статистический анализ. JG, HL, SZ, LY и XH выполнили бронхоскопию и собрали образцы.LF и ZZ оказали поддержку фонда.

    Финансирование

    Этот проект финансировался Шанхайским комитетом науки и технологий Китая (грант № 14411966500).

    Заявление о конфликте интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Дополнительные материалы

    Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2018.01107/full#supplementary-material

    Список литературы

    Амарал, Л., и ван Соолинген, Д. (2015). Новая передовая лабораторная диагностика для лечения туберкулеза. Последний Пат. Антиинфект. Drug Discov. 10, 71–73. DOI: 10.2174 / 1574891X10666150803153138

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Барнард, М., Уоррен, Р., Гей Ван Питтиус, Н., ван Хелден, П., Босман, М., Штрейхер, Э., и другие. (2012). Анализ генотипа линии MTBDRsl сокращает время диагностики туберкулеза с широкой лекарственной устойчивостью в высокопроизводительной диагностической лаборатории. Am. J. Respir. Крит. Care Med. 186, 1298–1305. DOI: 10.1164 / rccm.201205-0960OC

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Брент, А.Дж., Муго, Д., Мусиими, Р., Мутисо, А., Морпет, С., Левин, М., и др. (2011). Проведение идентификационного теста MGIT TBc и мета-анализа анализов MPT64 для идентификации комплекса Mycobacterium tuberculosis в жидкой культуре. J. Clin. Microbiol. 49, 4343–4346. DOI: 10.1128 / JCM.05995-11

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Чанг, К., Лу, В., Ван, Дж., Чжан, К., Цзя, С., Ли, Ф. и др. (2012). Быстрая и эффективная диагностика туберкулеза и устойчивости к рифампицину с помощью теста Xpert MTB / RIF: метаанализ. J. Infect. 64, 580–588. DOI: 10.1016 / j.jinf.2012.02.012

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Денкингер, К.М., Шумахер, С. Г., Беме, К. К., Дендукури, Н., Пай, М., и Стейнгарт, К. Р. (2014). Анализ Xpert MTB / RIF для диагностики внелегочного туберкулеза: систематический обзор и метаанализ. Eur. Респир. J. 44, 435–446. DOI: 10.1183 / 0

    36.00007814

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Данн, Дж. Дж., Старк, Дж. Р., Ревелл, П. А. (2016). Лабораторная диагностика инфекции и болезни Mycobacterium tuberculosis у детей. J. Clin. Microbiol. 54, 1434–1441. DOI: 10.1128 / JCM.03043-15

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Fan, L., Zhang, Q., Cheng, L., Liu, Z., Ji, X., Cui, Z., et al. (2014). Клинические диагностические характеристики методов одновременной амплификации и тестирования для обнаружения комплекса Mycobacterium tuberculosis для туберкулеза легких с отрицательным мазком или дефицитом мокроты в Китае. Подбородок. Med. J. 127, 1863–1867.

    Google Scholar

    Гелалча, А.Г., Кебеде А., Мамо Х. (2017). Светодиодная флуоресцентная микроскопия и анализ Xpert MTB / RIF (R) для диагностики туберкулеза легких у пациентов, посещающих больницу Амбо, западно-центральная Эфиопия. BMC Infect. Дис. 17: 613. DOI: 10.1186 / s12879-017-2701-5

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Хасан, З., Шакур, С., Ариф, Ф., Мехназ, А., Акбер, А., Хайдер, М., и др. (2017). Оценка тестирования Xpert MTB / RIF для быстрой диагностики детского туберкулеза легких с помощью тестирования образцов стула Xpert MTB / RIF в условиях ограниченных ресурсов. BMC Res. Примечания 10: 473. DOI: 10.1186 / s13104-017-2806-3

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ху, З. Ю. (2008). Расширение исследований и применения новых методов лабораторной диагностики и лекарственной чувствительности туберкулеза. Чжунхуа Юй Фанг И Сюэ За Чжи 42, 75–76.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    Хо, З. Ю., и Пэн, Л. (2016). Точность анализа высвобождения гамма-интерферона для диагностики активного туберкулеза среди ВИЧ-серопозитивных людей: систематический обзор и метаанализ. BMC Infect. Дис. 16: 350. DOI: 10.1186 / s12879-016-1687-8

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Каур, Р., Качру, К., Шарма, Дж. К., Ваттури, С. М., и Данг, А. (2016). Диагностическая точность теста Xpert в выявлении туберкулеза: систематический обзор и метаанализ. J. Glob. Заразить. Дис. 8, 32–40. DOI: 10.4103 / 0974-777X.176143

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ли С., Лю Б., Peng, M., Chen, M., Yin, W., Tang, H., et al. (2017). Диагностическая точность Xpert MTB / RIF для выявления туберкулеза в разных регионах с различным эндемическим бременем: систематический обзор и метаанализ. PLoS One 12: e180725. DOI: 10.1371 / journal.pone.0180725

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ли, З., Цинь, В., Ли, Л., Ву, К., и Чен, X. (2015). Точность бронхоальвеолярного лаважа с ферментным иммунным пробы для диагностики туберкулеза с отрицательным мазком мокроты: метаанализ. Внутр. J. Clin. Exp. Med. 8, 12637–12643.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    Ломбарди, Г., Ди Грегори, В., Гирометти, Н., Тадолини, М., Бизоньин, Ф., и Даль Монте, П. (2017). Xpert MTB / RIF значительно улучшает диагностику туберкулеза с отрицательным мазком мокроты. PLoS One 12: e176186. DOI: 10.1371 / journal.pone.0176186

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Махарджан, Э., Пант, Н. Д., Неупане, С., Аматия, Дж., И Шреста, Б.(2017). Использование анализа генотипа MTBDRplus для диагностики туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью в Непале. Внутр. Sch. Res. Уведомления 2017: 1635780. DOI: 10.1155 / 2017/1635780

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Мелинте, В. (2009). Лабораторная диагностика туберкулеза. 2. Иммунологическая диагностика. Бактериол. Virusol. Паразитол. Эпидемиол. 54, 5–10.

    Google Scholar

    Нагай, К., Хорита, Н., Ямамото, М., Цукахара, Т., Нагакура, Х., Таширо, К. и др. (2016). Точность диагностического теста петлевой изотермической амплификации для Mycobacterium tuberculosis : систематический обзор и метаанализ. Sci. Отчет 6: 39090. DOI: 10.1038 / srep39090

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Пената, А., Салазар, Р., Кастано, Т., Бустаманте, Дж., И Оспина, С. (2016). Молекулярная диагностика внелегочного туберкулеза и чувствительности к рифампицину автоматизированным методом в реальном времени. Biomedica 36, 78–89. DOI: 10.7705 / biomedica.v36i3.3088

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Penz, E., Boffa, J., Roberts, D. J., Fisher, D., Cooper, R., Ronksley, P.E., et al. (2015). Диагностическая точность теста Xpert (R) MTB / RIF для внелегочного туберкулеза: метаанализ. Внутр. J. Tuberc. Lung Dis. 19, 278–284. DOI: 10.5588 / ijtld.14.0262

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Прокоп, Г.W. (2016). Лабораторная диагностика и определение чувствительности к Mycobacterium tuberculosis . Microbiol. Спектр. 4: TNMI7-0022-2016. DOI: 10.1128 / microbiolspec.TNMI7-0022-2016

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Пурохит, М., Мустафа, Т. (2015). Лабораторная диагностика внелегочного туберкулеза (ВЛТБ) в условиях ограниченных ресурсов: современное состояние, проблемы и потребности. J. Clin. Диаг. Res. 9, E1 – E6.DOI: 10.7860 / JCDR / 2015 / 12422.5792

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Пурохит М. Р., Шарма М., Розалес-Клинц С. и Лундборг К. С. (2015). Подход «множественных тестов» к лабораторной диагностике туберкулеза — восприятие врачей из Удджайна, Индия. BMC Infect. Дис. 15: 322. DOI: 10.1186 / s12879-015-1037-2

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Руфаи, С. Б., Сингх, А., Сингх, Дж., Кумар П., Санкар М. М. и Сингх С. (2017). Диагностическая ценность теста Xpert MTB / RIF для выявления туберкулезного менингита с использованием спинномозговой жидкости. J. Infect. 75, 125–131. DOI: 10.1016 / j.jinf.2017.04.010

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Салина Т., Морозова Т.И. (2008). Современные технологии лабораторной диагностики туберкулеза (эффективность их использования в клинической практике). Пробл. Tuberk. Болезн. Легк. 11, 42–44.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    Сегал, И.С., Дхориа, С., Аггарвал, А.Н., Бехера, Д., и Агарвал, Р. (2016). Диагностическая эффективность Xpert MTB / RIF при туберкулезном плевральном выпоте: систематический обзор и метаанализ. J. Clin. Microbiol. 54, 1133–1136. DOI: 10.1128 / JCM.03205-15

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Шарма, А., Мусау, С., Хейлиг, К. М., Окуму, А. О., Опийо, Э. О., Басие, Ф.L., et al. (2015). Оценка эффекта децентрализации лабораторной диагностики лекарственно-устойчивого туберкулеза в Кении. Внутр. J. Tuberc. Lung Dis. 19, 1348–1353. DOI: 10.5588 / ijtld.15.0328

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ши, X. C., Zhang, L.F., Zhang, Y.Q., Liu, X.Q., и Fei, G.J. (2016). Клинико-лабораторная диагностика туберкулеза кишечника. Подбородок. Med. J. 129, 1330–1333. DOI: 10.4103 / 0366-6999.182840

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Шайферау, М.Б., Хайлу, Х. А., Фола, А. А., Деребе, М. М., Кебеде, А. Т., Кебеде, А. А. и др. (2015). Обеспечение качества лабораторной диагностики туберкулеза в государственных медицинских учреждениях в регионе Западная Амхара, Эфиопия. PLoS One 10: e138488. DOI: 10.1371 / journal.pone.0138488

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Стейнгарт К. Р., Шиллер И., Хорн Д. Дж., Пай М., Беме К. К. и Дендукури Н. (2014). Анализ Xpert (R) MTB / RIF на туберкулез легких и устойчивость к рифампицину у взрослых. Кокрановская база данных Syst. Ред. 1: CD009593. DOI: 10.1002 / 14651858.CD009593.pub3

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Steingart, K. R., Sohn, H., Schiller, I., Kloda, L.A., Boehme, C.C., Pai, M., et al. (2013). Анализ Xpert (R) MTB / RIF на туберкулез легких и устойчивость к рифампицину у взрослых. Кокрановская база данных Syst. Ред. 1: CD009593. DOI: 10.1002 / 14651858.CD009593.pub2

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Тиан, П., Шен, Ю., Ван, Ю., Ван, К., Фэн, М., Чжу, Дж., И др. (2015). Диагностическая ценность тестов амплификации нуклеиновых кислот в жидкости бронхоальвеолярного лаважа при туберкулезе легких с отрицательным мазком: метаанализ. Biosci. Реп. 35: e00232. DOI: 10.1042 / BSR20140186

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Wang, L., Mohammad, S.H., Chaiyasirinroje, B., Li, Q., Rienthong, S., Rienthong, D., et al. (2015). Оценка теста Auto-MODS, нового инструмента для диагностики туберкулеза для использования в условиях ограниченных ресурсов. J. Clin. Microbiol. 53, 172–178. DOI: 10.1128 / JCM.01946-14

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ] (2010 г.). Global Tuberculosis Report 2010. Geneva: WHO.

    Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ] (2017 г.). Global Tuberculosis Report 2017. Geneva: WHO.

    Ядав Р., Шарма Н., Ханеджа Р., Агарвал П., Канга А., Бехера Д. и др. (2017). Оценка теста TB-LAMP для быстрой диагностики туберкулеза легких в Северной Индии. Внутр. J. Tuberc. Lung Dis. 21, 1150–1153. DOI: 10.5588 / ijtld.17.0035

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ян, Л., Тан, С., Ян, Ю., Ши, X., Ге, Ю., Сан, В., и др. (2016a). Большое когортное исследование клинической ценности одновременного усиления и тестирования для диагностики туберкулеза легких. Медицина 95: e2597. DOI: 10.1097 / MD.0000000000002597

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ян, Л., Сяо, Х., и Чжан, К. (2016b). Систематический обзор: сравнение методов Xpert MTB / RIF, LAMP и SAT для диагностики туберкулеза легких. Туберкулез 96, 75–86. DOI: 10.1016 / j.tube.2015.11.005

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Янь Л., Чжан К. и Сяо Х. (2017). Клинико-диагностическое значение одновременного усиления и тестирования для диагностики туберкулеза легких с дефицитом мокроты. BMC Infect. Дис. 17: 545.DOI: 10.1186 / s12879-017-2647-7

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Юань, Л. Ю., Ли, Ю., Ван, М., Кэ, З. К., и Сюй, В. З. (2014). Быстрая и эффективная диагностика туберкулеза легких с помощью нового и чувствительного метода петлевой изотермической амплификации (LAMP) в клинических образцах: метаанализ. J. Infect. Chemother. 20, 86–92. DOI: 10.1016 / j.jiac.2013.07.003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Рекомендации по подходу, мазок мокроты, тесты на амплификацию нуклеиновых кислот

    Автор

    Thomas E Herchline, MD Профессор медицины, Государственный университет Райта, Медицинская школа Буншофт; Медицинский консультант, Общественное здравоохранение, Туберкулезная клиника округа Дейтон и Монтгомери (Огайо)

    Томас Э. Херклайн, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американского общества инфекционных болезней, Общества инфекционных болезней Огайо

    Раскрытие информации: Выступать (г) в качестве докладчика или члена бюро докладчиков для: Med Learning Group
    Получил исследовательский грант от: Regeneron.

    Соавтор (ы)

    Джудит К. Амороса, доктор медицины, FACR Клинический профессор радиологии и заместитель председателя по развитию преподавательского состава и медицинского образования, Медицинская школа Рутгерса Роберта Вуда Джонсона

    Джудит К. Амороса, доктор медицины, FACR является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж радиологии, Американское общество рентгеновских лучей, Ассоциация университетских радиологов, Радиологическое общество Северной Америки, Общество торакальной радиологии

    Раскрытие: Ничего не разглашать.

    Главный редактор

    Майкл Стюарт Бронз, доктор медицины Дэвид Росс Бойд Профессор и председатель медицинского факультета, кафедра внутренней медицины, кафедра медицины, Научный центр здравоохранения Университета Оклахомы; Магистр Американского колледжа врачей; Член Американского общества инфекционных болезней; Член Королевского колледжа врачей, Лондон

    Майкл Стюарт Бронз, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американский колледж врачей, Американская медицинская ассоциация, Ассоциация профессоров медицины, Общество инфекционных болезней Америки, Медицинская ассоциация штата Оклахома, Южное общество клинических исследований

    Раскрытие информации: Ничего не раскрывать.

    Благодарности

    Эрика Банг Медицинский центр Медицинского центра Университета штата Нью-Йорк (штат Нью-Йорк)

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Дайана Брейнард, MD Консультант, Отделение инфекционных заболеваний, Массачусетская больница общего профиля

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Памела С. Чавис, доктор медицины Профессор кафедры офтальмологии и неврологии Медицинского университета Южной Каролины, Медицинский колледж

    Памела С. Чавис, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американской академии офтальмологии и Североамериканского общества нейроофтальмологов

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Дирк М. Элстон, доктор медицины Директор, Академия дерматопатологии Акермана, Нью-Йорк,

    Дирк М. Элстон, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия дерматологии

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Теодор Дж. Гаэта, DO, MPH, FACEP Доцент кафедры неотложной медицины Медицинского колледжа Вейл Корнелл; Заместитель председателя и программный директор резидентуры по неотложной медицине, Департамент неотложной медицины, Методистская больница Нью-Йорка; Научный руководитель, адъюнкт-профессор кафедры неотложной медицины, медицинский факультет Университета Святого Георгия

    Теодор Дж. Гаэта, DO, MPH, FACEP является членом следующих медицинских обществ: Альянса клинического образования, Американского колледжа врачей неотложной помощи, клерков по неотложной медицине, Совета директоров резидентур по неотложной медицине, Нью-Йоркской медицинской академии и Общество академической неотложной медицины

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Аарон Глатт, доктор медицины Профессор клинической медицины Нью-Йоркского медицинского колледжа; Президент и генеральный директор, бывший главный врач отделения медицины и инфекционных заболеваний больницы Святого Иосифа (ранее — больница Нью-Айленд)

    Аарон Глатт, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа грудных врачей, Американского колледжа врачей, Американского колледжа врачей, Американского колледжа врачей — Американского общества внутренней медицины, Американской медицинской ассоциации, Американского общества микробиологов. , Американское торакальное общество, Американская ассоциация венерических заболеваний, Американское общество инфекционных заболеваний, Международное общество по СПИДу и Общество здравоохранения и эпидемиологии Америки

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Саймон К. Лоу, доктор медицинских наук, фармацевт Клинический профессор медицинских наук, кафедра офтальмологии, Глазной институт Жюля Стейна, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, медицинская школа Дэвида Геффена

    Саймон К. Лоу, доктор медицинских наук, фармацевт является членом следующих медицинских обществ: Американской академии офтальмологии, Американского общества глаукомы и Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Джон М. Лидом, доктор медицины Заслуженный профессор медицины Медицинской школы им. Кека Университета Южной Калифорнии

    Джон М. Лидом, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американский колледж врачей — Американское общество внутренней медицины, Американское общество микробиологии, Американское общество инфекционных болезней, Международное общество по СПИДу и Phi Beta Kappa

    .

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Джеймс Ли, доктор медицины Бывший доцент отделения неотложной медицины Гарвардской медицинской школы; Совет директоров Remote Medicine

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Джеффри Мефферт, доктор медицины Ассистент клинического профессора дерматологии, Школа медицины Техасского университета в Сан-Антонио

    Джеффри Мефферт, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии дерматологии, Американской медицинской ассоциации, Ассоциации военных дерматологов и Техасского дерматологического общества

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Монте С. Мельцер, доктор медицины Руководитель дерматологической службы, госпиталь Юнион Мемориал

    Монте С. Мельцер, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha и Американской академии дерматологии

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Susannah K Mistr, MD Врач-резидент, отделение офтальмологии, Медицинский центр Университета Мэриленда

    Сюзанна К. Мистр, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии офтальмологии, Американского колледжа хирургов, Американской медицинской ассоциации, Американской ассоциации студентов-медиков / фонда, Американского общества катарактальной и рефракционной хирургии и Медицинской ассоциации Южной Каролины

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Кэрол Э. Нейси, доктор философии Адъюнкт-профессор, факультет биологии, Католический университет Америки; Адъюнкт-профессор кафедры тропической медицины и микробиологии, Университет Джорджа Вашингтона

    Кэрол Нейси, доктор философии, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии микробиологии и Американского общества микробиологии

    Раскрытие информации: Sequella, Inc. Доля собственности Занятость; Sequella, Inc. Инвестор долевого участия

    J James Rowsey, MD Бывший директор службы роговицы, Институт катаракты и лазера Святого Луки

    Джеймс Роузи, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии офтальмологии, Американской ассоциации развития науки, Американской медицинской ассоциации, Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии, Флоридской медицинской ассоциации, Панамериканской ассоциации офтальмологов. , Sigma Xi и Южная медицинская ассоциация

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Hampton Roy Sr, MD Доцент кафедры офтальмологии Медицинского университета Арканзаса

    Хэмптон Рой-старший, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии офтальмологии, Американского колледжа хирургов и Панамериканской ассоциации офтальмологов

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Джон Д. Шеппард-младший, доктор медицины, MMSc Профессор офтальмологии, микробиологии и молекулярной биологии, клинический директор Центра глазной фармакологии Томаса Р. Ли, директор исследовательской программы резидентуры по офтальмологии Медицинской школы Восточной Вирджинии; Президент, Virginia Eye Consultants

    Джон Д. Шеппард-младший, доктор медицинских наук, MMSc является членом следующих медицинских обществ: Американской академии офтальмологии, Американского общества микробиологов, Американского общества катарактальной и рефракционной хирургии, Американского общества увеитов и Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Ричард Х. Синерт, DO Профессор неотложной медицины, клинический доцент медицины, директор по исследованиям Медицинского колледжа Государственного университета Нью-Йорка; Консультанты, отделение неотложной медицины, госпиталь округа Кингс

    Ричард Х. Синерт, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей и Общества академической неотложной медицины

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Франсиско Талавера, фармацевт, доктор философии Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

    Раскрытие информации: Medscape Salary Employment

    Кейт Цанг, доктор медицины Врач-резидент, ассистент клинического инструктора, отделение неотложной медицины, Государственный университет Нью-Йорка, нижний штат Нью-Йорк, больница округа Кингс

    Кейт Цанг, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей неотложной помощи, Ассоциации резидентов неотложной медицинской помощи и Общества академической неотложной медицины

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Шьям Верма, MBBS, DVD, FAAD Доцент кафедры дерматологии Университета Вирджинии; Адъюнкт-профессор кафедры дерматологии Государственного университета Нью-Йорка в Стоунибруке, адъюнкт-профессор кафедры дерматологии Пенсильванского университета

    Шьям Верма, MBBS, DVD, FAAD является членом следующих медицинских обществ: Американская академия дерматологии

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Ричард П. Винсон, доктор медицины Ассистент клинического профессора, кафедра дерматологии, Центр медицинских наук Техасского технического университета, Медицинская школа Пола Л. Фостера; Консультант, Дерматология Маунтин-Вью, PA

    Ричард П. Винсон, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии дерматологии, Ассоциации военных дерматологов, Техасского дерматологического общества и Техасской медицинской ассоциации

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    Эрик Л. Вайс, доктор медицинских наук, DTM и H Медицинский директор, Управление непрерывности обслуживания и планирования действий в случае бедствий, директор по стипендии, Стипендия по медицине катастроф Медицинского центра Стэнфордского университета, председатель ЦГБМ по биотерроризму и готовности к чрезвычайным ситуациям SUMC и LPCH, младший клинический исследователь, Департамент Хирургия (неотложная медицина), Медицинский центр Стэнфордского университета

    Eric L Weiss, MD, DTM & H является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей скорой помощи, Американский колледж медицины труда и окружающей среды, Американская медицинская ассоциация, Американское общество тропической медицины и гигиены, Врачи за социальную ответственность, Southeastern Surgical Конгресс, Южная ассоциация онкологии, Южное клиническое неврологическое общество и Общество дикой медицины

    Раскрытие информации: нечего раскрывать.

    TB Online — Диагностические тесты на активный туберкулез

    В этой статье описаны тесты, которые используются для диагностики активного туберкулеза.

    Стрелкой показана туберкулезная полость в верхней части правого легкого.

    Люди могут заболеть туберкулезом, даже если результаты посева мокроты окажутся отрицательными.

    Активный туберкулез — это инфекция, вызываемая Mycobacterium tuberculosis , которая может передаваться другим людям.Обычно это инфекция легких (туберкулез легких), она может передаваться воздушно-капельным путем при кашле и чихании.

    Диагностические тесты на ТБ, как и на все другие заболевания, должны соответствовать двум важным критериям качества: чувствительности и специфичности.

    Чувствительность означает, что тест должен выявлять всех людей с заболеванием. Например, если проходят тестирование 100 человек, и 50 из них больны туберкулезом, то хороший тест должен выявить всех 50 человек. В этом случае медицинские работники будут говорить о тесте с «высокой чувствительностью».

    Специфичность означает, что тест выявляет только людей с заболеванием и не обнаруживает болезнь у кого-то неправильно. Если из 100 человек, прошедших тестирование на туберкулез, 50 человек являются здоровыми, то тест с хорошей специфичностью правильно определит 50 здоровых людей и даст 50 отрицательных результатов.

    Ни один диагностический тест никогда не является полностью надежным — если тестируются тысячи и тысячи людей, ошибки случаются. Хороший диагностический тест — это тест с высокой чувствительностью (выявляет людей с туберкулезом), а также с высокой специфичностью (правильно выявляет здоровых людей без туберкулеза).Чувствительность и специфичность выражаются в процентах. Хорошие тесты должны иметь чувствительность и специфичность не менее 90%. Например, диагностика туберкулеза с чувствительностью 95% и специфичностью 99% будет правильно идентифицировать 95 из 100 человек, больных туберкулезом, но также неверно идентифицировать одного из 100 человек, не болеющих туберкулезом.

    Первый шаг к выявлению туберкулезной инфекции после сбора истории болезни и физического осмотра — это сделать рентген грудной клетки.Это позволяет медицинскому работнику исследовать легкие человека с подозрением на туберкулез. На рентгеновском снимке грудной клетки больного туберкулезом часто можно увидеть кавитацию, которую бактерии туберкулеза образуют в легочной ткани. На снимке показан рентген грудной клетки, а стрелка указывает на полость туберкулеза в правой верхней части легкого (на рентгеновском снимке правая и левая стороны поменяны местами).

    ТБ полости часто находятся в этих верхних частях легкого, также известных как верхушка ( верхушка на латыни означает «наивысшая точка»).Рентген грудной клетки имеет низкую специфичность. Если медицинский работник видит что-то в легком, это также может быть много чего другого, и это не обязательно туберкулез. Поэтому рентген грудной клетки обычно является показателем того, есть ли у человека туберкулез, но не может подтвердить диагноз. Они используются для подтверждения подозрения и всегда сопровождаются тестами, направленными на обнаружение бактерии туберкулеза. Диагноз туберкулеза нельзя поставить только с помощью рентгена грудной клетки. Также не может быть исключен рентген грудной клетки.

    Вместо этого диагноз активного туберкулеза означает обнаружение бактерии в образце физиологической жидкости пациента.Где обнаружена бактерия, зависит от того, где происходит инфекция. В большинстве случаев Mycobacterium tuberculosis поражает легкие (см. «Туберкулез легких»). Если это так, бактерия может быть обнаружена в мокроте. Мокрота — это очень густая жидкость организма (также называемая слизью), которая поступает из нижних дыхательных путей. Она гуще слюны и обычно отхаркивается.

    Образец мокроты. Источник NHS.

    Если у человека возникают проблемы с отхаркиванием мокроты, это можно вызвать путем вдыхания солевого воздуха через маску., называется небулайзер. Часто это делают, чтобы помочь детям отхаркивать мокроту.

    Есть два способа проверить мокроту на Mycobacterium tuberculosis : мазок мокроты и посев мокроты. Цель обоих тестов — найти Mycobacterium tuberculosis путем окрашивания в мокроте.

    Обычно бактерии идентифицируются путем добавления красителей на поверхность лаборатории, на которой они растут. Этот процесс называется «окрашивание».Разные бактерии по-разному реагируют на окрашивающие вещества, и это позволяет ученым различать их. Из-за своей толстой клеточной стенки, состоящей из миколиновых кислот, микобактерии Mycobacterium tuberculosis не очень хорошо реагируют на большинство окрашивающих агентов. На самом деле окрасить какие-либо микобактерии очень сложно.

    Микроскопия мокроты

    В мазках мокроты бактерии ТБ окрашивают агентом, который связывается с кислотами на клеточной стенке. Обычно это делается с использованием метода Циля-Нельсона, названного в честь двух ученых, описавших его в конце 1800-х годов.Его еще называют кислотостойким пятном. Однако мазки мокроты часто не выявляют туберкулез, особенно у людей с запущенным заболеванием ВИЧ. Следовательно, микроскопия мазка мокроты имеет низкую чувствительность; он не учитывает многих людей с активным туберкулезом.

    В одном большом исследовании чувствительность составила всего 53%. Другими словами, туберкулез не выявлялся примерно у половины пациентов, которые действительно болели туберкулезом. Это очень плохо. К тому же этот метод требует большого мастерства. Но микроскопия мокроты широко используется, потому что это один из самых дешевых и быстрых способов диагностики туберкулеза.Новые люминесцентные микроскопы улучшили чувствительность микроскопии мокроты, но не настолько.

    Посев мокроты: медленный, дорогой и не очень хороший золотой стандарт диагностики туберкулеза

    Для посева мокроты мокрота помещается на специальную поверхность в лаборатории в условиях, которые стимулируют рост бактерии ТБ. Затем лаборанты проверяют, растет ли бактерия. Поскольку бактерии ТБ растут очень медленно, это часто занимает 3-4 недели, а иногда и больше.Если в мокроте есть бактерии ТБ, они начнут расти круглыми кластерами, и культура считается положительной . Положительный посев является доказательством заражения микобактериями Mycobacterium tuberculosis , поэтому это доказательство того, что кто-то болен активным туберкулезом.

    По сравнению с мазками мокроты, посев мокроты имеет гораздо более высокую чувствительность, но все же недостаточно высокую (всего 82% в большом исследовании). Это означает, что, к сожалению, посев мокроты часто не позволяет выявить всех больных туберкулезом, и люди могут заболеть туберкулезом, даже если результаты посева мокроты окажутся отрицательными.

    Если пациент с предполагаемым туберкулезом легких не может откашливать мокроту, есть другие способы получить жидкости организма, содержащие Mycobacterium tuberculosis. Медицинские работники могут промыть желудок, сделать так называемую замену гортани или получить образец при бронхоскопии. Для промывания желудка человек с подозрением на туберкулез должен проглотить трубку, через которую медицинские работники всасывают немного того, что находится в желудке человека. Затем этот образец исследуют либо как мазок, либо помещают в культуру.Промывание желудка обычно необходимо проводить как минимум дважды, чтобы набрать достаточно для образца. В ЮАР их делают дважды в разные дни. Детям часто требуется промывание желудка для диагностики туберкулеза.

    Недавно был разработан новый тест для диагностики активного туберкулеза. Он называется GeneXpert и также использует образцы мокроты. Если образец содержит бактерию ТБ, она размножает свою ДНК («гены» бактерии, сокращенно ДНК дезоксирубинуклеиновая кислота ) с помощью метода, называемого ПЦР (полимеразная цепная реакция).

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.