Антиген с положительный: Антигены С (rhf), с (hrf) и их варианты

Содержание

что показывает, расшифровка результатов, нормы

Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.

Где можно сдать анализ?

ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.

Узнать больше…

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.

Как подготовиться?

Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.

Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).

Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.

Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.

Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.

Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).

Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.

Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.

Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.

ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.

Это интересно
Предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались меченые антитела и антигены. Поскольку проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников лаборатории, ученые озаботились поиском безопасной альтернативы по «окраске» образцов. Так в 1971 году был изобретен ИФА.

Преимущества метода

Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

Недостатки метода

К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.

ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Показания к назначению и выявляемые заболевания

Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:

Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:

IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;

IgG к ВИЧ;

Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;

Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;

Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;

Ig M и IgG к токсоплазмозу;

Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;

IgG к паразитарным заболеваниям;

Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;

IgG к хеликобактерной инфекции.

Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний.

Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других).

Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

Анализируемый биоматериал и особенности его забора

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.

Сроки готовности результатов ИФА

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

Расшифровка иммуноферментного анализа

Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).

Анализируемые показатели

IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.

IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.

IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.

IgG говорит либо о хронизации заболевания, либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.

Возможные результаты ИФА

В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.

Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).

Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

что это значит в анализе

Когда у человека случайно выявляют HBsAg положительный, то это значит, что ему необходимо обратиться в специализированную клинику или ближайшую больницу, где врач-инфекционист назначит дополнительные исследования и повторный HBsAg-анализ, которые точно подтвердят наличие или отсутствие антигеновгепатита В. HBsAg является поверхностным антигеном возбудителя гепатита В, который располагается на клеточной оболочке вируса. Именно по этому антигену организм человека распознаёт патоген и начинает активировать защитные функции. После попадания в организм вируса начинают вырабатываться антитела к HBsAg, которые связываются с чужеродными частицами и пытаются их ликвидировать. Чтобы помочь организму справится, врач назначает приём специальных препаратов и сывороток, которые систематически вводятся в организм человека.

HBsAg что это такое

Многие пациенты могут увидеть в своих лабораторных анализах не совсем понятные буквы и цифры. Поэтому когда в бланке указывается, что HBsAg обнаружен или HBsAg положительный, их начинает интересовать, что же это значит.

Положительный результат означает то, что в организме человека находятся патогенные вирусы, которые вызывают гепатит B. Это может быть начало заражения, острая или хроническая форма патологии, поэтому не стоит медлить с походом к врачу и курсом лечения. Также положительные результаты анализов могут говорить о неправильной терапии. Препараты, которые назначает лечащий врач, стоит пересмотреть и определить их эффективность. Если они не оказывают надлежащего результата, то их нужнозаменить на другие.

После попадания в организм человека вирусы поступают с кровотоком в печень, где проникают внутрь гепатоцитов. Они встраивают свой генетический материал в геном печёночных клеток. Иммунная система реагирует на это, разрушая поражённые вирусом клетки, как чужеродные. Активное воспроизведение возбудителей приводит к некрозу гепатоцитов и развитию функциональной недостаточности печени.

Если пациент вовремя не обращается в медицинские учреждения и не начинает лечение, то в дальнейшем хронический гепатит вызывает цирроз или рак печени. Лечение данных патологий довольно затруднительное, а в некоторых случаях невозможно.

Есть группы людей, у которых риск заражения болезнью гораздо выше.

Это:

Пациенты, которые регулярно переливают кровь. В медицинских заведениях необходимо внимательно следить за тем, какие инструменты использует медицинский персонал. Они должна быть стерильными и хорошо продезинфицированными. В некоторых странах, где потребность в крови высокая, могут пренебречь лабораторными анализами, которые подтверждают наличие опасных патологий.
Люди, употребляющие наркотики путём инъекций. В основном это группы наркоманов, которые используют одноразовые шприцы по нескольку раз. В таких случаях инфицирование происходит сразу у нескольких особ. Чтобы избежать заражения, нужно вовремя делать прививки и избегать совместного использования одного шприца.
Люди, ведущие беспорядочную половую жизнь. Половые контакты без использования барьерных контрацептивов могут привести к заражению гепатитом вирусной этиологии. Особенно опасны анальный и оральный секс, когда слизистые людей могут повредиться при непосредственном контакте.
Дети, которые родились от заражённой матери. При беременности женщина не может заразить плод. Инфицирование происходит только во время естественных родов через биологическую жидкость роженицы. Как правило, риск заболевания гепатитом В у таких детей гораздо выше.
Медицинские сотрудники. Работая с больными пациентами, врачи и медсестры не могут знать о наличии патогенных вирусов, поэтому во время инъекций, операций и других процедур, связанных с биологическими жидкостями больного, может произойти заражение. Как правило, инфицированию более подвержены хирурги, стоматологи, медсестры и травматологи.

Гепатит – распространённое вирусное заболевание, которое с каждым годом поражает всё больше населения. Он встречается как у новорожденных, так и у людей пожилого возраста. Вирусы имеют характерные белковые вещества на поверхности, которые вызывают ответную реакцию организма. Именно эти белковые частицы и называют HBsAg. Их появление требует лабораторного подтверждения.

Значение HBs — антигена или «австралийского» антигена — достаточно большое, так как именно из этих белков учёные и специалисты разрабатывают активно-пассивные препараты, которые в дальнейшем способствую выработке устойчивого иммунитета к гепатиту В.

Методы определения HBsAg

Чтобы определить присутствие HBsAg в крови и выяснить наличие патологии, проводят несколько видов тестов. Исследование крови может быть разных видов. Это необходимо для того, чтобы точно подтвердить диагноз.

В медицинских учреждениях применяют такие методики:

Радиоиммунный анализ. Это метод количественного определения соответствующих веществ, в случае патологии – определение HBsAg антигенов. Определяют вещества из биологической жидкости, используя радиоактивные материалы и гамма-счётчики. Это сверхчувствительный и специфичный метод, который позволяет выявить HBsAg в минимальных концентрациях (до 0, 1 нг/мл). Всё оборудование стандартизировано, а результаты получаются в цифровом выражении. Единственным недостатком методики считается его дороговизна и быстрый распад радиоактивных элементов. Необходимо держать радиоактивный материал в специальных контейнерах и следить за его сроком годности, так как со временем он распадается.
Иммуноферментный анализ. Лабораторный метод диагностики, который позволяет выявить все вещества белковой природы в плазме крови. Метод предполагает качественное и количественное выявление патогенов. Для чего используются специальные антитела, которые связываются с антигеном гепатита. В первом случае тест просто определяет наличие или отсутствие вирусов. Если же проводится количественный анализ, то определяется концентрация HBsAg в исследовательской крови. Такой метод довольно специфичен и чувствителен, поэтому результаты будут точными, пациент сможет узнать о патологии сразу после анализа. Вся методика технологична, поэтому человек не может вмешаться в обработку данных и вычисление антител, что снижает влияние человеческого фактора. Среди недостатков специалисты выделяют необходимость точно знать природу возбудителя.
Флуоресцентная методика. С недавнего времени стало возможным использовать такое явление, как флуоресценцию в качестве диагностического метода анализа. Благодаря флуоресцентной микроскопии и специальных флуоресцентных меток специалисты и микробиологи могут получать контрастную окраску внутриклеточных белковых структур. А флуоресцентные зонды помогают выявить белки вирусов гепатита, когда к ним присоединяется определённая молекула. Высокая чувствительность методики позволяет безошибочно выявлять HBsAg антигены и их концентрацию в плазме крови человека. По результативности флуоресцентный анализ превосходит радиоиммунный и иммуноферментный анализ.

Во время анализа у пациента берут для исследования 5 мл крови. Для этого специальным шприцем забирают материал из вены.

Данные методики позволяют выяснить наличие HBsAg спустя месяц-полтора после заражения. Если определение необходимо раньше, то проводят специальный экспресс-тест.

От пациента необходимо лишь свободное время и небольшая подготовка, которая включает в себя отказ от жирной пищи, спиртных напитков и избегание стрессовых ситуаций. Процедуру лучше проводить в диагностических центрах или больницах. В домашних условиях тесты, купленные в аптеке, могут показать неверные результаты.

Для определения вирусных антигенов используется кровь из пальца. Её наносят на специальную полоску, которая показывает результат. После необходимо следить за появлением полос. Их количество будет свидетельствовать об отсутствии или наличии патологии. Если тест покажет положительный результат, то человеку следует обратиться в больницу для подтверждения диагноза и назначения курса лечения.

Терапевтический курс будет состоять из комплексного приёма различных препаратов,к ним относят:

Иммуностимулирующие средства на основе интерферона. Онспособствует стимуляции выработки гуморальных антител, которые противостоят патогенным возбудителям. Длительный приём препарата необходим, чтобы выработать устойчивый иммунитет от патологии.
Противовирусные препараты. Существует множество видов противовирусных средств с разным действующим веществом. Какое из них выбрать, определяет только лечащий врач на основе индивидуальных данных о пациенте. Противовирусные препараты необходимо употреблять длительный период времени, совмещая с иммуностимулирующими средствами.
Гепатопротекторы. Данная категория препаратов обеспечивает защиту и регенерацию повреждённых клеток печени. Эффект от таблеток проявляется благодаря наличию в составе гепатопротекторов эссенциальных фосфолипидов и дополнительных компонентов, которые поддерживают нормальную работу органа.

Врач может назначить приём витаминов для поддержания общего самочувствия и улучшения защитных свойств организма.

Тест на антиген при беременности

В период вынашивания плода женщине необходимо сдавать анализ крови на выявление HBsAg антигенов два раза. Первый раз он назначается тогда, когда девушка узнаёт, что беременна и становится на учёт. Тогда сдаются анализы на проверку работы разных систем организма. Лечащий врач получает полную картину о здоровье будущей мамы.

Второй раз лабораторные анализы проводятся на последнем триместре беременности. Выполняется тест, который точно укажет на наличие патологии. Такая мера предосторожности проводится для того, чтобы вовремя выявить гепатит В и предотвратить заражение им малыша. Потому как во время родов через биологическую жидкость вирусы проникают в организм младенца.

Врачи объясняют каждой женщине, почему необходимо проводить такую диагностику дважды. Это связано с особенностью заболевания – длительным инкубационным периодом. В некоторых случаях он может приближаться к отметке 6 месяцев и больше.

У беременных женщин инкубационный период немного меньше, так как иммунная система ослабевает из-за развития плода.

Опасность заражения беременных гепатитом очень высока, потому как болезнь влияет на общее состояние женщины, на функционирование печени и здоровье малыша.

После передачи вирусов малышу, гепатит может перетекать в хроническую форму, из-за чего у новорожденного наблюдаются такие симптомы:

общая слабость;
чрезмерная капризность;
постоянный плач;
пожелтение кожи и слизистых тела;
диспепсические расстройства.

Малышам от больных матерей врач должен немедленно назначить вакцинирование и поддерживающую терапию, которая улучшит состояние ребёнка.

При тяжёлых случаях, когда у беременной начинают проявляться первые симптомы патологии, врач назначает препараты, которые не повлияют на ребёнка или имеют минимальные последствия. Очень важно не навредить плоду и не повлиять на его развитие, поэтому врачи откладывают лечение серьёзными препаратами до того момента, как возможно будет сделать кесарево сечение.

Если признаки заболевания выявлены на ранней стадии или в начале беременности, когда женщина ещё может сделать аборт, то врачи могут рекомендовать данную процедуру. Это связано с тем, что последствия болезни порой необратимы и здоровью женщины грозит опасность. Прерывание беременности и приём сильных препаратов является единственным выходом, чтобы уберечь здоровье матери.

Выявление патологии на поздних сроках беременности означает, что женщина будет придерживаться рекомендаций врач и проводить безопасную терапию, после чего ей сделают кесарево сечение. Эта процедура снизит риск возможного инфицирования ребёнка через кровь матери. После чего женщине необходимо отказаться от грудного кормления младенца, так как вирусные белки могут присутствовать и в молоке матери.

HBsAg отрицательный что это значит

Когда пациент слышит HBsAg не обнаружен или HBsAg отрицательный, то это может означать следующее:

Пациент получил ложноотрицательный результат. Это связано с минимальным количеством времени, которое прошло после заражения. В основном ложноположительные результаты получают при сдаче анализов до месяца после дня инфицирования.
Нарушения иммунной системы. В некоторых случаях в организме человека нарушается выработка соответствующих антител, из-за чего различные тесты на определение патологии показывают неверный результат.
Длительный инкубационный период. После попадания в организм вирус постепенно начинает обживаться в теле человека. Активное размножение может протекать без видимых клинических симптомов и изменений анализов крови, поэтому тесты могут показать ложноотрицательные результаты.

Чтобы у пациента не возникало сомнений по поводу заражения, он должен пройти диагностирование ещё раз в сроки по назначению специалиста.

HBsAg у ребёнка

Выявить патогенный антиген возможно даже у младенцев, школьников и подростков. Чтобы вовремя предотвратить инфицирование вирусным гепатитом В, педиатры и акушеры-гинекологи направляют малыша на вакцинирование, которое происходит в течение 12 часов после родов.

У детей заражение гепатитом В происходит нечасто, но тому способствуют такие факторы:

Роды. Лечащий врач или акушер-гинеколог должен постоянно наблюдать за ходом беременности и здоровьем матери. Такие меры предосторожности необходимы для того, чтобы вовремя выявить заражение вирусными или бактериальными заболеваниями, в том числе и гепатитом. При установлении факта инфицирования матери, врачу следует назначить кесарево сечение, чтобы обезопасить ребёнка от заражения. Иначе во время родов через биологическую жидкость матери вирусы передадутся ребёнку.
Контактно-бытовые пути заражения. Через вещи для личной гигиены или предметы совместного пользования в организм ребёнка может попасть заражённая кровь больного. Чтобы предотвратить инфицирование, необходимо избегать контакта с больным и вовремя проводить вакцинацию. Такие случаи могут наблюдаться в кругу близких родственников или в публичных местах: детском саду, школе или специальных кружках.
Переливание крови в нелицензированных клиниках или больницах. В местах, у которых нет лицензии на проведение медицинских процедур, категорически запрещается проводить переливание крови или пересадку органов.

После рождения от заражённой матери ребёнку должны провести HBsAg анализ, подтверждающий наличие антител или их отсутствие. Если не вакцинировать ребёнкапосле родов, то в течение 5 лет риск заразиться гепатитом В значительно повышается.

Если же заражение произошло, дополнительные исследования на наличие гепатита В показали положительный результат, то педиатр или врач-инфекционист назначает терапевтический курс, исходя из возраста. Современные медикаментозные средства могут лишь убирать симптомы патологии, но не уничтожать полностью вирусы.

Врачи объяснили, как расшифровать результаты теста на антитела к коронавирусу

Тест на определение антител в крови, используемый при многих вирусных инфекциях, включая коронавирусную, — не самый простой анализ, и трактовать его гораздо сложнее, чем обычные анализы крови или мочи. Как правильно расшифровать и трактовать результаты, Департамент здравоохранения составил памятку для тех людей, кто бесплатно в районных поликлиниках или в частном порядке сдаёт тест на антитела к CoViD-19. Информация доступна на официальном сайте Мосгорздрава.

Тест на антитела имеет официальное название ИФА, или иммуноферментный анализ. Это обследование является более сложным и точным, чем ПЦР-тест с мазком из носа и горла. Главная цель исследования — определить так называемый коллективный иммунитет, то есть у какого процента людей есть антитела к коронавирусу. Данный тест покажет, переболел ли уже человек, а также есть ли у него антитела и сколько их.

Применительно к CoViD-19 определяют два типа специфических антител — IgM и IgG.

IgM — это так называемые антитела острой фазы, и они являются самыми ранними. Обычно они начинают определяться в крови заболевшего примерно на пятый день от начала болезни и держатся от одной до четырёх недель. Анализ считается положительным при концентрации антител 1 Ед/мл и выше.

IgG — данные антитела обеспечивают длительную защиту от повторного заражения и обычно сохраняются достаточно долго. Вырабатываться они начинают обычно через 15–20 дней, то есть позже, чем IgM. Если их обнаруживают в концентрации 10 Ед/мл и более, тест считается положительным.

Так, показатели IgM меньше 1 и IgG меньше 10 означают, что человек еще не сталкивался с вирусом, но заразиться может в любой момент, поэтому ему следует строго соблюдать правила по ковиду. IgM от 1 до 2 и IgG меньше 10 — cомнительный результат, при котором у пациента нет антител к вирусу, он может находиться в организме, и при этом человек может переносить инфекцию бессимптомно. Такого пациента могут попросить не общаться с другими людьми в течение ближайших семи дней, а спустя неделю повторно сдать кровь.

Результат, при котором IgM равен или больше 2 и IgG меньше 10, означает, что пациент сейчас болеет коронавирусом и опасен для окружающих. С таким анализом отправляют в самоизоляцию на 14 дней как самого больного, так и тех, с кем он живёт и общается.

IgM равен или больше 2 и IgG равен или больше 10 — сомнительные цифры. Антитела к вирусу есть, но наличие в крови IgM говорит о том, что инфекция всё ещё может находиться в организме, то есть человек может переносить инфекцию бессимптомно. Для профилактики подобного пациента могут попросить поменьше общаться с другими людьми в течение ближайших семи дней, после чего он должен ещё раз сдать кровь.

Если IgM меньше 2 и IgG равен или больше 10, то это значит, что пациент уже переболел коронавирусом, у него имеются антитела к нему. Однако, несмотря на иммунитет, медики просят таких людей всё равно соблюдать ковидные правила безопасности.

Известно, что на антитела к CoViD-19 в Москве могут провериться все желающие взрослые люди в 30 поликлиниках ежедневно с 8:00 до 20:00. Адреса пунктов сдачи тестов размещены на сайте Департамента здравоохранения Москвы. При этом назначить нужную дату анализа можно одним из нескольких способов: через порталы «Моя Москва» в разделе «Медицина», ЕМИАС. ИНФО с помощью полиса ОМС, «Госуслуги Москвы» в разделе «Запись к врачу», mos.ru во вкладке «Здоровье» в личном кабинете. Также записаться на анализ можно по телефону или посредством информационных киосков в поликлиниках.

Отмечается, что для сдачи теста необходимо принести с собой паспорт РФ и полис ОМС. На месте у пациентов измеряется температура, им выдаются бахилы, маска и перчатки. Результаты проведённого исследования будут готовы в течение трёх дней после сдачи биоматериала. Их можно будет увидеть в электронной медицинской карте на mos.ru или в приложении ЕМИАС.ИНФО.

Недавно власти Москвы рассказали, когда прививки от коронавируса начнут делать всем желающим.

Австралийский антиген в крови: что это такое, лечение

:Австралийский антиген является совокупностью частиц, составляющих основу капсулы возбудителя гепатита В. Иными словами, активная составляющая вируса заключена в защитную плёнку. Её-то и слагает антиген. Он встречается в анализах крови больных и носителей вируса. Обозначается антиген как НBsAg, открыт в середине прошлого столетия. Сначала соединение считали целым вирусом, а не частью защитной плёнки. Медики в вопросе разобрались, а вот пациентам некоторые термины непонятны. В частности, многие спрашивают, что такое австралийский антиген. Поверхностные тезисы требуют раскрытия.

Особенности инфекции и её распространения

Австралийский гепатит является сложным формированием частиц различного происхождения. Учёные выделяют восемь агентов, образующих оболочку вируса. Из них редко встречаются пять субтипов. Именно наличие тех или иных агентов, их количественное соотношение, формируют определённый подвид заболевания.

Для каждого характерна территориальность:

Первый участок захватывает территорию Ближнего Востока, южную Европу, страны Африки. Входят в список и наша страна, Украина, Молдова, Латвия, Литва, Эстония. В России у 90% инфицированных обнаруживают именно эту разновидность австралийского гепатита. Зашифровывается она как НBsAg/ay, а называется территорией Y.
Второй фрагмент оболочки вируса обозначается буквой D, распространён в северной и центральной частях Европы, Таиланде, Индонезии, на севере Африки.
Третий участок распространения австралийского антигена простирается на Дальний Восток и юг Азиатской части Евразии. Типичного для вируса агента оболочки обозначают буквой R.
Смешение разных генотипов вируса типично для островов Тихого океана.

Генетики отмечают, что различия в генотипах разных видов гепатита В минимальны. Впервые вопрос изучили в Австралии. Отсюда название антигена.

Зачастую австралийский антиген присутствует у больных гемофилией. Они переносят переливания. Поэтому учёные предположили, что распространяется НBsAg именно через донорскую кровь. Позже генетики получили Нобелевскую премию за своё открытие.

Как происходит заражение

Гепатит В поражает печень. Характер патологии воспалительный. Источник заражения — больной человек.

Вирусоносительство без проявлений недуга тоже опасно. Не зная что заразен, носитель распространяет болезнь.

Когда инфекция достигает печени, протеиновая оболочка адсорбируется, и ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) вируса поражает клетки органа. Начинается активное размножение патогенна. В ответ на антиген появляются антитела.

Возбудитель устойчив к воздействию факторов внешней среды, выдерживает:

многократное замораживание,
нагрев до 60 градусов,
обработку различными химическими средствами.

Соответственно, нужно тщательно обрабатывать хирургические инструменты не только дезинфицирующими растворами.

Очистка должна быть трёхступенчатой:

Дезинфекция специализированными химическими средствами.
Предстерилизационная очистка моющими растворами.
Стерилизация в сухожаровом шкафу либо в автоклаве.

Состав вакцин против гепатита В и показания к их применению

Проникновение возбудителя происходит только парентеральным путём, когда биологическая жидкость больного попадает в кровь здорового человека.

«Подхватить заразу» бытовым способом нельзя. Поэтому не стоит избегать общения со своим знакомым или родственником, если он носитель австралийского антигена.

Как и где человек заражается:

Во время проведения инъекций загрязнёнными иглами либо случайный порез таким остриём. Бывают случаи, когда медицинские работники заражались инфицированным шприцем, проколов палец.
При переливании крови и её компонентов, пересадке заражённых органов. Донорский материал должен пройти карантин, то есть заморозку. Через полгода проводят повторный анализ на НBsAg. Делается это из-за длительного инкубационного периода вируса. Впрочем, появляются новые методы, благодаря которым плазма очищается без проведения карантина.
Из-за нарушения правил личной гигиены. Нельзя пользоваться чужими бритвенными станками, зубными щётками, носовыми платками.
Через грязные инструменты в стоматологическом кабинете.
Женщины иногда инфицируются во время маникюра, так как недобросовестные мастера пренебрегают тщательной очисткой инструмента.
В салонах, где делают татуировки и процедуры, при которых прокалывают кожный покров.
Во время полового контакта.
Возможна передача инфекции внутриутробно и во время родов.

Ни в момент заражения, ни длительное время после него, человек не ощущает болезненности. Проявиться недуг может, лишь после инкубационного периода.

Стадии заболевания

После проникновения возбудителя в кровеносное русло начинается постепенное развитие патологического состояния.

Происходит это в несколько стадий:

После внедрения инфекции начинается инкубационный период. При острой форме патологии он длится около 2 недель. У некоторых пациентов инкубация растягивается до нескольких месяцев. По завершении внедрения вируса появляются изменения в анализах, происходит увеличение размеров селезёнки и печени.
Далее, НBsAg встраивается в печёночные клетки гепатоциты и начинает активно размножаться, распространяясь по кровеносному руслу. При этом отмечаются специфические признаки воспаления печени и общей интоксикации.
Иммунная система начинает выработку защитных антител, направленных на уничтожение инфекции. Иногда происходит выздоровление, иммунитет в состоянии сам побороть болезнь. Однако зачастую патология переходит в хроническую форму.

Хроническая форма гепатита В имеет нечёткую клиническую картину. Недомогания могут быть незначительными, однако, разрушающее действие болезни остаётся серьёзным.

Симптоматика

Во время острой формы гепатита характерные признаки появляются через 2—3 недели после заражения. В инкубационный период симптомы не проявляются. Иногда начало заболевания схоже с ОРВИ (острой респираторной вирусной инфекцией).

Симптомы австралийского недуга сходны с другими гепатитами и заболеваниями печени. Для постановки диагноза необходимо тщательное обследование.

Признаки австралийского гепатита:

озноб, повышение температуры тела,
ломота в суставах, мышечная боль,
потемнение урины и осветление каловых масс,
ощущение распирающей, давящей боли в правом подреберье,
желтушность кожных покровов и склер,
зуд и высыпания на теле,
нарушение сна,
упадок сил, слабость, быстрая утомляемость,
снижение аппетита,
диспепсические расстройства,
ощущение горького привкуса.

Болезнь может протекать:

в острой форме,
в хронической форме.

Острая фаза проходит с проявлением всех симптомов, при правильной терапии излечивается в 90% случаев. У остальных пациентов патология переходит в хроническую стадию. Периоды ремиссии сменяются обострениями. При этом происходит постепенное разрушение паренхимы, что грозит развитием цирроза и печёночной недостаточности.

У людей с диагнозом австралийский антиген носительство, как правило, не проявляется никаких симптомов.

Возможна ли передача гепатита С от мужа к жене и какова вероятность заразиться

Австралийский антиген у беременных

Во время беременности женщины проходят тщательное обследование. У некоторых будущих мам обнаруживают НBsAg. Одни женщины знают о диагнозе и подготавливаются к беременности. Для других вердикт врачей неожидан. Поэтому медики рекомендуют проходить диагностику организма до момента зачатия. Это позволит избежать негативных последствий беременности и родов как для женщины, так и для плода.

Если у будущей мамы находят НBsAg, говорят о хронической стадии болезни либо носительстве вируса. Женщину ставят на учёт не только к гинекологу, но и инфекционисту. Он ведёт беременность до момента родов.

Вероятность самопроизвольного аборта:

При лёгкой степени поражения самопроизвольный аборт происходит в 8% случаев.
Если поражение печени носит среднюю тяжесть, выкидыши случаются у трети беременных.
При тяжёлой степени гепатита выкидышами заканчивается половина беременностей.
При хронической стадии самопроизвольный аборт происходит у 10% беременных.

На формирование плода болезнь не оказывает влияния, дети рождаются в срок и с нормальным весом. Во время вынашивания ребёнок может заразиться от матери. Если это происходит в начале беременности, вероятен выкидыш. Бывает и инфицирование на 2 и 3 триместрах. Тогда большинство детей выживают, но рождаются больными. Заражение возможно также при родах. Дети заглатывают кровь матери или околоплодную жидкость.

С гепатитом на свет появляются около 10% младенцев.

Снижая риски заражения детей, инфицированным женщинам обычно делают кесарево сечение. После рождения малыши обязательно вакцинируются.

Диагностика

Для выявления инфекции необходимо сдать анализы.

Существуют 2 основных вида исследований на гепатит В:

Использование экспресс-теста. Проводить анализ можно в домашних условиях. Необходимо проколоть палец стерильным инструментом и выдавить каплю крови на тест. Оценить результат можно через 10—15 минут. Наличие 1 полоски говорит об отсутствие антигена, а 2 линии считаются положительным результатом. Получив его, необходимо обратиться к врачу и пройти тщательное обследование.
Серологический метод. Проводится только в лаборатории. Используется венозная кровь. Метод максимально информативен, определяет не только присутствие антигена, но и его количество.

С помощью серологических реакций определяют присутствие антигенов и антител.

Расшифровка результатов:

отрицательный результат будет при отсутствии НBsAg,
положительный означает, что пациент болеет гепатитом В либо является вирусоносителем,
выявление в анализах антител говорит о том, что организм включил иммунную защиту или была проведена вакцинация от гепатита.

В диагностике бывают ошибки, дающие неправильный результат. Поэтому рекомендуется пересдавать анализы с интервалом в 1—2 месяца.

Контингент, подлежащий обязательной проверке на НBsAg:

женщины, вставшие на учёт по беременности,
люди, которым предстоит хирургическое вмешательство,
молодые пары при планировании беременности,
весь медицинский персонал,
работники полиции,
больные с хроническим гепатитом и носители австралийского вируса,
доноры крови и её компонентов,
пациенты с патологическими процессами печени,
наркоманы.

Человек, вылечившийся от гепатита, может всю оставшуюся жизнь быть носителем вируса. Поэтому необходимо систематически сдавать анализы.

Принципы терапии

Во время острой стадии болезни применение специальной противовирусной терапии не требуется. Иммунная система начинает активную выработку антител для уничтожения чужеродных агентов. В большинстве случаев организму самостоятельно удаётся справиться с задачей.

В хроническую патология переходит у 10% инфицированных. Как правило, это люди с ослабленным иммунитетом.

Составляющие лечения австралийского гепатита в острой фазе:

Правильное питание. Необходимо отказаться от спиртных напитков, жирного мяса и рыбы, исключить жареное, острое, газировку, сладости. Нельзя употреблять в пищу маринованные и консервированные продукты. Диета соблюдается для снижения нагрузки на печень. На столе больного должны быть супы, каши, овощи и фрукты. Порции необходимы небольшие. Дабы не голодать и получать необходимый набор полезных веществ, трапезничают 4—5 раз в день.
Нормализовать режим сна и отдыха. Избегать стрессовых ситуаций, не переутомляться.
Медикаментозная терапия. Она восстанавливает функции печени, ведь во время воспалительного процесса происходит повреждение органа и нарушается его функционирование. Как итог, в организме начинают скапливаться токсические вещества. Для нормализации ситуации выписываются гепатопротекторы, назначается дезинтоксикационная терапия.
Витаминные комплексы. Они способствуют общему укреплению.

Если на протяжении нескольких месяцев концентрация НBsAg не снижается, можно говорить о переходе болезни в хроническую форму. Тогда назначается противовирусное лечение.

Медикаменты имеют множество побочных эффектов. Зачастую больные плохо переносят препараты. Реакция на них особенно яркая, поскольку лечение гепатита длится месяцами. Иногда терапия занимает год и больше.

Гепатит В — опасная патология, которая приводит к циррозу и печёночной недостаточности. Современная медицина позволяет успешно бороться с болезнью. Главное, вовремя диагностировать её и начать терапию

Вирусоносительство не подлежит лечению медикаментозными средствами. Носителем человека считают, если чужеродные агенты остаются в крови на протяжении полугода.

Профилактические мероприятия

В средствах массовой информации встречаются статьи программы, посвящённые проблемам распространения австралийского гепатита. Достаточно данных даёт интернет. Дополнительно просветительская работа ведётся медицинскими работниками, учителями. Они читают лекции о мерах профилактики. Поскольку заболевание распространено среди молодёжи, семинары часто проводят в колледжах и высших учебных заведениях.

Есть основные меры профилактики для предупреждения заражения:

пользоваться только одноразовыми стерильными шприцами,
посещать проверенные студии красоты, маникюрные кабинеты, тату-салоны,
ходить в те стоматологические клиники, где проводится тщательная стерилизация инструмента,
вести половую жизнь с одним партнёром, пользоваться презервативами.

Особую осторожность необходимо соблюдать медицинским работникам при взаимодействии с кровью и использованным инструментарием.

Самым надёжным способом защиты является вакцинация. Прививка против австралийского гепатита вошла в календарный план. В соответствии с его прошлой версией обязательной вакцинации подлежали только медицинские работники и пациенты по показаниям. Сейчас ставят прививки уже новорождённым детям в первый день жизни.

Вакцина от гепатита В безопасна и практически не имеет побочных реакций.

При производстве вакцины у вируса оставляют только оболочку, то есть антиген. Попадая в организм, он заставляет иммунную систему вырабатывать специфические антитела. Так формируется защита от НBsAg.

Прививку австралийским антигеном четыре раза:

в первые часы после рождения,
через 30 дней,
в 6 месяцев,
в год.

В некоторых семьях один из членов является носителем австралийского гепатита. Тогда все домочадцы должны соблюдать профилактические меры и обязательно пройти вакцинацию.

Соблюдая профилактические мероприятия, проводя вакцинацию можно избежать заражения, по крайней мере, свести его риск к минимуму.

Загрузка…

Возможность получения ложноположительных результатов тестов на антигены для быстрого обнаружения SARS-CoV-2 — Письмо персоналу клинической лаборатории и поставщикам медицинских услуг

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) предупреждает сотрудников клинических лабораторий и поставщиков медицинских услуг о том, что тесты на антигены могут давать ложноположительные результаты, в том числе когда пользователи не соблюдают инструкции по использованию тестов на антигены для быстрого обнаружения SARS-CoV. -2.Как правило, тесты на антигены показаны для качественного обнаружения антигенов SARS-CoV-2 в утвержденных типах образцов, собранных у лиц, подозреваемых в COVID-19 их лечащим врачом, в течение определенного количества дней с момента появления симптомов. FDA осведомлено о сообщениях о ложноположительных результатах, связанных с тестами на антигены, используемыми в домах престарелых и других местах, и продолжает отслеживать и оценивать эти отчеты и другую доступную информацию о безопасности и производительности устройства.

FDA напоминает персоналу клинических лабораторий и поставщикам медицинских услуг о риске получения ложноположительных результатов всех лабораторных тестов. Лабораториям следует ожидать ложноположительных результатов даже при использовании очень точных тестов для скрининга больших популяций с низкой распространенностью инфекции. Поставщики медицинских услуг и сотрудники клинических лабораторий могут помочь обеспечить точную отчетность о результатах тестов, следуя утвержденным инструкциям по использованию теста и ключевым этапам процесса тестирования, рекомендованным Центрами по контролю и профилактике заболеваний (CDC), включая рутинные последующие: до тестирования (рефлекторного тестирования) с помощью молекулярного анализа, когда это необходимо, и с учетом ожидаемого появления ложноположительных результатов при интерпретации результатов тестов в популяциях своих пациентов.

Фон

FDA выдало первое разрешение на использование в чрезвычайных ситуациях (EUA) для теста на антиген COVID-19 в мае 2020 года. Эти диагностические тесты быстро обнаруживают фрагменты белков, обнаруженных внутри вируса или внутри него, путем тестирования образцов, взятых из носовой полости, с помощью мазков. Список разрешенных FDA тестов на антигены доступен на странице FDA In Vitro Diagnostics EUA.

Тесты на антиген

являются важным инструментом в общем ответе на COVID-19 и приносят пользу общественному здравоохранению.Одним из основных преимуществ теста на антиген является скорость теста, которая позволяет получить результаты за считанные минуты. Доступность этих типов тестов может дать возможность быстро проверить миллионы американцев.

В общем, тесты на антигены не так чувствительны, как молекулярные. Из-за возможности снижения чувствительности по сравнению с молекулярными анализами, может потребоваться подтверждение отрицательных результатов теста на антиген с помощью молекулярного теста до принятия решения о лечении. Отрицательные результаты теста на антиген следует рассматривать в контексте клинических наблюдений, истории болезни и эпидемиологической информации.

Как и молекулярные тесты, тесты на антигены обычно очень специфичны для вируса SARS-CoV-2. Однако все диагностические тесты могут давать ложноположительные результаты, особенно в условиях низкой распространенности. Поставщики медицинских услуг всегда должны внимательно рассматривать результаты диагностических тестов в контексте всей доступной клинической, диагностической и эпидемиологической информации. Помехи теста со стороны специфичных для пациента факторов, таких как присутствие человеческих антител (например, ревматоидного фактора или других неспецифических антител) или образцов с высокой вязкостью, также могут привести к ложноположительным результатам.

Действия FDA

FDA продолжает работать с другими агентствами, такими как Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) и Центры услуг Medicare и Medicaid (CMS), для защиты использования тестов на COVID в домах престарелых и других местах.

FDA также работает с производителями тестов, чтобы гарантировать, что их инструкции по применению максимально ясны, чтобы свести к минимуму возникновение ложных результатов.

FDA продолжит информировать персонал клинических лабораторий, поставщиков медицинских услуг, производителей и общественность о новой или дополнительной информации.

Дополнительные ресурсы

Сообщение о проблемах в FDA

FDA призывает заинтересованные стороны сообщать о любых нежелательных явлениях или предполагаемых нежелательных явлениях, возникающих при тестировании на антигены для быстрого выявления SARS-CoV-2.

Своевременное сообщение о побочных эффектах может помочь FDA выявить и лучше понять риски, связанные с медицинскими устройствами.

Контактная информация

Если у вас есть вопросы по этому письму, свяжитесь с COVID19DX @ fda.hhs.gov.

Текущее содержание с:
11.03.2020
Регулируемые продукты
Тема (и) здравоохранения

Основы тестирования на коронавирусную болезнь 2019

Español 简体中文 한국어 Tagalog Việt

Возможно, вы в последнее время много слышали о тестировании на коронавирус (COVID-19).Если вы считаете, что заболели COVID-19 и нуждаетесь в тесте, немедленно обратитесь к своему врачу или в местный отдел здравоохранения. Вы также можете найти в своем штате общественный сайт тестирования. FDA круглосуточно работает над увеличением доступности критически важных медицинских продуктов, в том числе тестов на SARS-CoV-2, вирус, вызывающий COVID-19, для борьбы с пандемией COVID-19. Узнайте больше о различных типах тестов и их этапах.

Типы тестов

Существует два разных типа тестов — диагностических тестов и тестов на антитела .

Диагностический тест может показать, есть ли у вас активная коронавирусная инфекция, и вам следует принять меры для карантина или изоляции от других. В настоящее время существует два типа диагностических тестов — молекулярных тестов , таких как тесты RT-PCR, которые обнаруживают генетический материал вируса, и тесты антигена , которые обнаруживают специфические белки вируса. Специалистам в области общественного здравоохранения может быть интересна статья Более подробный анализ диагностического тестирования COVID-19 .
Тест на антитела ищет антитела, которые вырабатываются вашей иммунной системой в ответ на угрозу, например, на определенный вирус. Антитела могут помочь бороться с инфекциями. Для выработки антител может потребоваться несколько дней или недель после заражения, и они могут оставаться в крови в течение нескольких недель или более после выздоровления. Из-за этого не следует использовать тесты на антитела для диагностики COVID-19. В настоящее время исследователи не знают, означает ли наличие антител, что вы будете невосприимчивы к COVID-19 в будущем.

Различные типы тестов на коронавирус

	Молекулярный тест	Тест на антиген	Тест на антитела
Также известен как …	Диагностический тест, вирусный тест, молекулярный тест, тест амплификации нуклеиновых кислот (NAAT), тест RT-PCR, тест LAMP	Диагностический тест	Серологический тест, серология, анализ крови, серологический тест
Как берется проба…	Носоглотка (часть глотки за носом), мазок из носа или зева (большинство тестов) Слюна (несколько тестов)	Мазок из носа или носоглотки (большинство тестов)	Палец или кровь
Сколько времени нужно, чтобы получить результаты …	В тот же день (в некоторых местах) или до недели (дольше в некоторых местах с большим количеством тестов)	Некоторые могут быть очень быстрыми (15-30 минут), в зависимости от теста	В тот же день (во многих местах) или 1-3 дня
Нужен еще один тест…	Этот тест обычно очень точный и не требует повторения.	Положительные результаты обычно очень точны, но могут быть и ложные срабатывания, особенно в регионах, где очень мало людей заражены вирусом. Отрицательные результаты могут потребовать подтверждения с помощью молекулярного теста.	Иногда для получения точных результатов требуется второй тест на антитела.
Что это показывает …	Выявляет активную коронавирусную инфекцию	Выявляет активную коронавирусную инфекцию	Показывает, были ли вы инфицированы коронавирусом в прошлом
Чего он не может…	Покажите, были ли вы когда-либо заражены COVID-19 или были инфицированы вирусом, вызывающим COVID-19, в прошлом	Тесты на антиген с большей вероятностью пропустят активную инфекцию COVID-19, чем молекулярные тесты. Ваш лечащий врач может назначить молекулярный тест, если ваш тест на антиген показывает отрицательный результат, но у вас есть симптомы COVID-19.	Поставьте диагноз COVID-19 во время теста или покажите, что у вас нет COVID-19

Диагностические тесты с альтернативными опциями

Диагностические тесты теперь доступны с альтернативными методами и преимуществами.

Быстрые диагностические тесты по месту оказания медицинской помощи используют образец слизи из носа или горла, но их можно проанализировать в кабинете врача или клинике, где образец будет взят, и результаты могут быть получены в считанные минуты. Это могут быть молекулярные или антигенные тесты.
Комбинированные тесты могут одновременно проверять на грипп и коронавирус. Некоторые могут тестировать на множество различных типов респираторных вирусов, в том числе на тот, который вызывает COVID-19.
Сбор на дому тестов, которые можно получить только по рецепту врача, позволяют пациенту собрать образец дома и отправить его прямо в лабораторию для анализа.Некоторые тесты для сбора образцов на дому требуют, чтобы поставщик медицинских услуг наблюдал за сбором образцов с помощью видео с пациентом.
Тесты слюны позволяют пациенту плюнуть в трубку вместо мазка из носа или горла. Тесты слюны могут быть более удобными для некоторых людей и могут быть более безопасными для медицинских работников, которые могут находиться на большем расстоянии во время сбора образцов.

Тесты молекулярной диагностики

Многие компании и лаборатории разработали тесты для диагностики COVID-19 на основе обнаружения генетического материала вируса в образце из носа или горла пациента.Эти шаги могут измениться по мере появления новых технологий, но в настоящее время типичными шагами молекулярного тестирования являются:

Врач, фармацевт или другой медицинский работник заказывает тест на COVID-19. Все тесты на COVID-19, включая те, которые используются с набором для сбора в домашних условиях, требуют рецепта или заказа от медицинского работника.
Вы или медицинский работник используете специальный тампон для сбора слизи из носа или горла.
Вы или медицинский работник кладете тампон в стерильный контейнер и закрываете его для транспортировки в лабораторию.
Во время транспортировки большинство молекулярных мазков для анализа необходимо хранить в определенном температурном диапазоне, чтобы тест был точным. Образец должен прибыть в лабораторию в течение 72 часов.
Лаборант смешивает жидкости с тампоном, чтобы извлечь генетический материал любого вируса, который может быть на мазке.
Лаборант использует специальные реагенты, называемые праймерами и зондами, и высокотехнологичное оборудование для проведения нескольких контролируемых циклов нагрева и охлаждения для преобразования РНК вируса в ДНК, а затем создания миллионов копий ДНК.Некоторые тесты используют только один цикл нагревания для создания копий ДНК.
Когда определенные зонды связываются с ДНК, излучается свет особого типа, который может видеть машина, и тест показывает «положительный» результат на заражение SARS-CoV-2, вирусом, вызывающим COVID-19.

Расширение доступа к тестированию

FDA продолжает работать с разработчиками тестов, чтобы сделать больше тестов на коронавирус доступными для большего числа людей. Один из способов проверить больше людей — объединить генетический материал из мазков нескольких человек в один тест.Если тест «отрицательный» или не показывает коронавирус, то ни у кого из людей, чьи мазки были включены в эту серию, скорее всего, нет активной коронавирусной инфекции. Если тест является «положительным», показывая наличие вируса, вызывающего COVID-19, каждый мазок проверяется повторно, чтобы найти положительные. Это экономит время и материалы для тестирования, позволяя лаборантам проверять больше образцов. Этот процесс называется объединением или тестированием объединенных образцов, и он наиболее полезен в тех областях, где ожидается, что большинство образцов будут отрицательными.

Ни один тест не является всегда точным на 100%. Вот некоторые вещи, которые могут повлиять на точность теста:

Возможно, у вас есть вирус, но мазок может не собрать его из носа или горла.
Образец мазка или слизи может быть случайно заражен вирусом во время сбора или анализа.
Мазок из носа или зева не может храниться при правильной температуре до его анализа.
Химические вещества, используемые для извлечения генетического материала вируса и создания копий вирусной ДНК, могут работать некорректно.

Тесты на антигены

Тесты на антигены обычно дают результаты, позволяющие диагностировать активную коронавирусную инфекцию, быстрее, чем молекулярные тесты, но тесты на антигены имеют более высокий шанс пропустить активную инфекцию. Если тест на антиген показывает отрицательный результат, указывающий на то, что у вас нет активной коронавирусной инфекции, ваш лечащий врач может заказать молекулярный тест, чтобы подтвердить результат.

Тесты на антитела (серологические)

Тесты на антитела могут дать быстрые результаты, но не должны использоваться для диагностики активной инфекции.Тесты на антитела выявляют только антитела, которые иммунная система вырабатывает в ответ на вирус, но не сам вирус. На выработку достаточного количества антител для обнаружения в ходе теста может потребоваться от нескольких дней до нескольких недель.

Мы не знаем, как долго антитела остаются в организме после заражения вирусом, вызывающим COVID-19. Мы не знаем, дают ли антитела вам защитный иммунитет против вируса, поэтому результаты серологического теста не следует использовать для определения того, есть ли у вас иммунитет от вируса.FDA предостерегает пациентов от использования результатов любого серологического теста в качестве указания на то, что они могут прекратить принимать меры для защиты себя и других, такие как прекращение социального дистанцирования или прекращение ношения масок.

Тестирование на COVID-19 в вашем сообществе

Лучший способ пройти тест на COVID-19 — обратиться к своему врачу. Вы также можете посетить веб-сайт департамента здравоохранения штата или округа, чтобы найти самую свежую информацию о тестировании. Некоторые сообщества также тестируют бессимптомных людей (людей, у которых нет симптомов COVID-19).Часто эти люди являются медицинскими работниками или другими важными работниками, имеющими много контактов с общественностью.

Сообщить о нежелательных явлениях

FDA поощряет медицинских работников и пациентов сообщать о нежелательных явлениях или побочных эффектах, связанных с использованием тестов на COVID-19 или других медицинских продуктов, в Программу информации о безопасности и сообщении о нежелательных явлениях FDA MedWatch:

Заполните и отправьте отчет онлайн через сайт MedWatch FDA.
Загрузите форму или позвоните по телефону 1-800-332-1088, чтобы запросить форму, затем заполните и верните по адресу, указанному в форме, или отправьте по факсу на 1-800-FDA-0178.

Антиген — свойства, типы и детерминанты антигенности

Антиген — это вещество, обычно по своей природе белковое, а иногда и полисахарид, которое вызывает специфический иммунный ответ и индуцирует образование специфического антитела или специально сенсибилизированных Т-клеток или того и другого.

Хотя все антигены распознаются специфическими лимфоцитами или антителами, только некоторые антигены способны активировать лимфоциты. Молекулы, стимулирующие иммунный ответ, называются I ммуногенами.

Эпитоп представляет собой иммунологически активные области иммуногена (или антигена), который связывается с антиген-специфическими мембранными рецепторами на лимфоцитах или с секретируемыми антителами. Его также называют антигенными детерминантами .

Аутоантигены , например, являются собственными аутоантигенами человека. Примеры: тиреоглобулин, ДНК, ткань роговицы и т. Д.

Аллоантигены — это антигены, обнаруженные у разных представителей одного и того же вида (примеры антигенов эритроцитов A и B).

Гетерофильные антигены — это идентичные антигены, обнаруженные в клетках разных видов. Примеры: антиген Форссмана, перекрестно реагирующие микробные антигены и т. Д.

Адъюванты — это вещества, которые сами по себе не иммуногенны, но усиливают иммуногенность любого добавленного иммуногена.

Химическая природа антигенов (иммуногенов)

A. Белки
Подавляющее большинство иммуногенов являются белками. Это могут быть чистые белки, гликопротеины или липопротеины.В общем, белки обычно являются очень хорошими иммуногенами.

B. Полисахариды
Чистые полисахариды и липополисахариды являются хорошими иммуногенами.

C. Нуклеиновые кислоты
Нуклеиновые кислоты обычно слабо иммуногенны. Однако они могут стать иммуногенными, если являются одноцепочечными или в комплексе с белками.

D. Липиды
В целом липиды неиммуногенны, хотя могут быть гаптенами.

Типы антигена На основании порядка их класса (происхождения)

1.Экзогенные антигены

Эти антигены проникают в организм или систему и начинают циркулировать в жидкостях организма и захватываются APC (клетками, обрабатывающими антиген, такими как макрофаги, дендритные клетки и т. Д.)
Поглощение этих экзогенных антигенов APC в основном опосредовано фагоцитозом
Примеры: бактерии, вирусы, грибы и т. д.
Некоторые антигены начинаются как экзогенонтигены, а затем становятся эндогенными (например, внутриклеточные вирусы)

2.Эндогенные антигены

Это собственные клетки или субфрагменты организма, или соединения, или производимые антигенные продукты.
Эндогенные антигены процессируются макрофагами, которые позже принимаются цитотоксическими Т — клетками.
Эндогенные антигены включают ксеногенные (гетерологичные), аутологичные и идиотипические или аллогенные (гомологичные) антигены.
Примеры: антигены группы крови, HLA (лейкоцитарные антигены гистосовместимости) и т. Д.

3.Аутоантигены

Аутоантиген обычно представляет собой нормальный белок или комплекс белков (а иногда и ДНК или РНК), который распознается иммунной системой пациентов, страдающих определенным аутоиммунным заболеванием
Эти антигены в нормальных условиях не должны быть мишенью иммунной системы, но, в основном из-за генетических факторов и факторов окружающей среды, у этих пациентов утрачена нормальная иммунологическая толерантность к такому антигену.
Примеры: нуклеопротеины, нуклеиновые кислоты и т. Д.

На основе иммунного ответа

1. Полный антиген или иммуноген

Обладает антигенными свойствами denovo, т.е. способны сами генерировать иммунный ответ.
Высокая молекулярная масса (более 10 000)
Могут быть белки или полисахариды

2. Неполный антиген или Hap

Frontiers | Экстракция антигена и активация В-клеток позволяют идентифицировать редкие мембранные антиген-специфические В-клетки человека

Введение

Кардинальная характеристика гуморального иммунного ответа состоит в том, что только малая часть общего пула В-клеток распознает данный антиген.Таким образом, понимание этих клеток затруднено из-за практических трудностей их идентификации. Иммуноглобулин ELIspot (1) позволяет количественно определять В-клетки с заданной специфичностью, но для анализов живых клеток, клонирования гена иммуноглобулина и технологий отдельных клеток, таких как секвенирование РНК, ключевым является выделение интактных клеток.

Методы проточной цитометрии

— очевидное решение, позволяющее немедленно провести фенотипирование ex vivo и сортировать живые клетки для дальнейшего анализа или клонирования. Для некоторых антигенов мечение клеток растворимым антигеном, конъюгированным с флуорохромом, является мощным подходом (2–4).Однако многие важные антигены нелегко получить в нативной конформации в растворимой форме. Конформация может быть критическим фактором эпитопов как антивирусных (5), так и аутоиммунных (6) антител. Кроме того, многочисленные определяющие антигенность особенности мембранных антигенов, такие как гликозилирование, взаимодействие с другими компонентами мембраны и сборка в многосубъединичные комплексы, такие как ионные каналы, зависят от экспрессии в мембране подходящей клетки. Аутоантитела, например, при миастении и энцефалите рецепторов NMDA, связываются со сложными ионными каналами, структура которых зависит от их ориентации в плазматической мембране (7).Патология болезни Грейвса вызывается аутоантителами, которые стимулируют рецептор тиреотропина, но исследования с моноклональными антителами показывают, что эти агонистические антитела распознают прерывистые, зависимые от конформации эпитопы, в то время как антитела, распознающие линейные эпитопы, обычно не влияют на передачу сигналов рецептора (6). Считается, что это явление является причиной того, что клеточные анализы предлагают более высокую чувствительность для обнаружения клинически значимых аутоантител по сравнению с методами на основе рекомбинантных белков, такими как ELISA или иммунопреципитация (8).

Наши предыдущие исследования захвата мембранных белков антигенспецифическими В-клетками (9) предложили подход, который решит несколько проблем, присущих оценке специфичности В-клеток в отношении мембранных антигенов. Когда В-клетка встречает свой родственный антиген, экспрессируемый в мембране другой клетки, она сначала связывается с антигеном, а затем извлекает его. Впервые этот процесс был описан Batista et al. (10) и с тех пор детально изучен на молекулярном уровне (11). Во время взаимодействия В-клетка усваивает большое количество антигена и быстро становится высокоактивной.Если антиген становится флуоресцентным, это дает возможность высокоспецифичной сортировки антиген-специфических В-клеток. Первое преимущество этой системы состоит в том, что она позволяет использовать антигены в их естественной конформации и естественной клеточной среде. Второе преимущество заключается в том, что, поскольку захват антигена приводит к активации В-клетки, маркеры, такие как CD69, можно использовать для различения В-клетки, которая интернализовала антиген, и В-клетки, которая связывается с антигеном по какой-либо другой причине. Третье преимущество состоит в том, что адгезивные клетки можно использовать в качестве доноров антигена, и после того, как антигенспецифические В-клетки связались со своим антигеном-мишенью и связались с донорскими клетками с высокой авидностью, большинство неспецифических клеток можно вымыть.

Мы разработали этот подход, используя трансгенные В-клетки мыши с известной специфичностью, а затем использовали его для идентификации, фенотипа и клонирования В-клеток периферической крови человека, специфичных к белку гриппа гемагглютинин (НА) и аутоантигенному рецептору ацетилхолина (AChR). Гемагглютинин был выбран в качестве клинически значимого вирусного мембранного антигена, специфические для которого В-клетки относительно многочисленны в крови вакцинированных доноров. Гемагглютинин-связывающие В-клетки могут быть помечены флуоресцентным растворимым антигеном, что позволяет нам сравнить эффективность нового метода с известным методом.Сложный мембранный белок AChR был выбран в качестве клинически важного аутоантигена, В-клетки, специфичные для которых присутствуют в крови пациентов, страдающих миастенией, но редки и их трудно изолировать доступными методами.

Материалы и методы

Мыши и первичные иммунные клетки

мышей C57Bl / 6 разводили в Базельском университете для мышей. Мышей FluBI были выведены от основателей, предоставленных Хидде Плоег и Стефани Дуган (Институт Уайтхеда, Кембридж, Массачусетс).Мыши IgH MOG (12) были выведены из членов-основателей, предоставленных Гуру Кришнамурти и Хартмутом Векерле, Max-Planck-Institut für Neurobiologie, Мартинсрид, Германия. Первичные иммунные клетки были получены из селезенки путем механического разрушения с последующим кратковременным оседанием под действием силы тяжести для удаления ткани. фрагменты. В-клетки получали путем отрицательной селекции с использованием набора для выделения В-клеток II (Miltenyi, кат. 130-104-443). Все процедуры с участием животных были одобрены Кантональной комиссией по исследованиям животных.

Образцы человека

Здоровые доноры в возрасте от 25 до 65 лет дали письменное информированное согласие в соответствии с процедурами, рассмотренными институциональным комитетом по этике (49/06). Некоторые были вакцинированы сезонной вакциной против гриппа 2013, 2014, 2015 или 2016 Agrippal ^{^®}, содержащей инактивированные поверхностные антигены вируса гриппа (гемагглютинин и нейраминидаза) типа A / h2N1 (A / California / 07/2009). Кровь забирали в пробирки S-Monovette (Sarstedt, 7.5 мл K3E, REF 01.1605.100, 1,6 мг ЭДТА / мл крови) до вакцинации и через 7–14 дней после вакцинации, как указано в подписях к рисункам. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) разделяли над Ficoll-Paque (Axon Lab, Швейцария) в соответствии с инструкциями производителя и замораживали в 1 мл FCS-10% DMSO (FCS от Gibco, DMSO от Sigma Aldrich). Кровь для сыворотки отбирали в пробирки S-Monovette, содержащие активатор свертывания (Sarstedt, 7,5 мл Z, REF 01.1601.100), и оставляли при комнатной температуре на 30–60 минут перед центрифугированием при 2000 g в течение 10 минут при комнатной температуре.Сыворотку отбирали и замораживали при -80 ° C. В-клетки выделяли из замороженных РВМС путем быстрого размораживания в 10 мл предварительно нагретой полной среды RPMI, инкубации в течение 1 ч при 37 ° C, центрифугирования и ресуспендирования в ледяном буфере для разделения с последующим отрицательным выделением с помощью магнитных шариков из Miltenyi (человека Набор для изоляции В-клеток II, номер по каталогу 130-091-151). Этот набор включает анти-CD43 среди антител отрицательной селекции и, следовательно, истощает плазмобласты. Выход В-клеток варьировал от 2 до 8% от общего количества PBMC в зависимости от донора.

Плазмиды и клеточные линии

Фрагмент, кодирующий аминокислоты 1–529 (Genbank ACP41105.1), был амплифицирован из VG11055-C, кодирующего гемагглютинин гриппа A / California / 04/2009 (Sino Biological, Пекин, Китай), и слит с олигонуклеотидом (Microsynth, Швейцария). кодирует аминокислоты 530–566. Мутация тирозина в фенилаланин (Y98F) в сайте связывания сиаловой кислоты гемагглютинина (HA) была включена с помощью ПЦР с переключением матрицы и клонирована в вектор экспрессии PigLIC, который придает устойчивость к пуромицину (Gibco).Чтобы создать плазмиду, кодирующую слитый белок HA-Y98F-GFP, мы амплифицировали GFP из pcDNA6.2C-EmGFP-DEST (Invitrogen) и слили его с мутантной конструкцией HA, описанной выше, между аминокислотой 566 и кодоном STOP. Клетки, экспрессирующие MOG-mCherry, получали путем стабильной трансфекции клеток TE671 плазмидой, полученной путем вставки N-концевых 204 аминокислот гликопротеина олигодендроцитов миелина крысы в сайт клонирования вектора клонирования pcDNA3 mCherry LIC (подарок Скотта Градиа, плазмида Addgene # 30125).

Клетки рабдомиосаркомы TE671 (в тексте называемые «TE-клетки» и «TE 0», если они не трансфицированы дополнительными антигенами) были получены из ATCC (LGC, Везель, Германия). TE-клетки культивировали в полной среде RPMI (10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки (FCS), 100 единиц / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина; все от Gibco) при 37 мкС в 5% диоксиде углерода. Клетки TE671 были выбраны потому, что они растут адгезивно в монослое, легко трансфицируются и, будучи клетками мышечного типа, поддерживают экспрессию многосубъектного ацетилхолинового рецептора (AChR).ТЕ-клетки трансфицировали конструкцией HA-Y98F-GFP и отбирали пуромицином. Положительные трансфектанты были идентифицированы с помощью флуоресценции GFP и внеклеточного иммунного мечения против гемагглютинина A / California / 07/2009 и отсортированы для получения линии клеток TE CA09HA-GFP. Предсказанное внутриклеточное расположение группы GFP и внеклеточное расположение HA было подтверждено с помощью анализа чувствительности к протеазам следующим образом: клетки TE0 и клетки TE-HA-GFP трипсинизировали, трижды промывали PBS, ресуспендировали в HBSS с 5 мМ CaCl и инкубировали. с проназой или без нее (Sigma Aldrich, 2 мг / мл) в течение 4 ч при 37 ° C.Затем клетки промывали и инкубировали с первичным антителом человека против HA IgG, затем с PE-конъюгированным козьим антителом против человеческого IgG (Jackson ImmunoResearch, 109-116-098) в течение 30 мин на льду и ресуспендировали в PBS. Флуоресценцию в каналах GFP и PE измеряли на проточном цитометре CytoFLEX (Beckman Coulter), и результаты показаны на дополнительном рисунке 1. Клетки тестировали на инфекцию микоплазмой (LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit, Sigma Aldrich). Фибробласты мыши, трансфицированные лигандом CD40 человека (Edgar Meinl, Ludwig-Maximilians-Universität, Мюнхен, Германия), используемые в качестве питающих клеток для трансформации EBV, культивировали в полной среде DMEM с добавлением 0.5 мг / мл сульфата G418 (каталожный номер 10131-035, Gibco). Для облучения клетки промывали PBS, трипсинизировали, ресуспендировали в ледяной FCS и держали на льду во время облучения (75 Гр).

Визуализация живых клеток

Клетки TE671, стабильно трансфицированные GFP-слитым гемагглютинином (из вируса гриппа A / WSN / 1933), помещали в закрытые 8-луночные покровные стекла (каталожный номер Ibidi 80826) и оставляли на ночь в инкубаторе при 37 ° C в 5% углерода. диоксид. На следующий день В-клетки, выделенные из мыши FluBI, метили Lysotracker Deep Red (Thermo Fisher) в соответствии с инструкциями производителя, промывали и хранили в полной RPMI на льду.Покровное стекло с камерой помещали в камеру с контролируемой температурой, CO ₂ и влажностью (контроллер INU-TIZ-F1, Tokai Hit) в конфокальный микроскоп Nikon A1R с масляным иммерсионным объективом 60x, 1,40 NA. Отверстие было открыто до 5,0 единиц Эйри, а мощность лазера, напряжения ФЭУ и размеры вокселей были оптимизированы для минимизации воздействия лазерного света. Один стек конфокальных секций в минуту был захвачен, и стопки были собраны в кадры с помощью программного обеспечения Nikon Elements.

Выделение антиген-специфичных В-клеток с помощью FACS

В-клеток выделяли из PBMC после вакцинации против гриппа, совместно культивировали в течение 3 ч с CTV-меченными клетками TE CA09HA-GFP, извлекали и инкубировали с PerCP-Cy5.5-конъюгированные антитела против CD19 человека (для экспериментов с IgG ELISpot), разведенные 1:20 в холодном буфере для разделения (PBS 2% FCS, 1 мМ ЭДТА) или с APC-конъюгированными антителами против CD45 человека (для экспериментов по трансформации EBV и высокопроизводительного B активация клеток) разводили 1:50 в холодном буфере для разделения и сортировали в пробирки Эппендорфа (FACSAria III Cell Sorter, BD Biosciences). Клетки были обработаны методом разброса для отбора живых одиночных клеток; затем двумя способами исключить TE-клетки, являющиеся донорами антигена: отрицательные по CTV и положительные по CD19 или CD45.Из этих предполагаемых единичных жизнеспособных В-клеток подэлементы использовали для сортировки «GFP-захватывающих», то есть GFP-положительных, и «GFP-не захватывающих», то есть GFP-отрицательных. Неспецифическая поверхностная мембранная мечение прикрепленных клеток с помощью биоортогональной клик-химии была достигнута путем инкубации клеток в течение ночи с 50 мкМ L-азидогомоаланина в среде без метионина, затем промывки и инкубации в течение 1 ч с 5 мкМ A647-меченого производного DIBO в HBSS 37 ° С. Процедура выделения AChR-связывающих В-клеток была аналогичной, но стабильная трансфекция антигеном HA-GFP была заменена временной трансфекцией мульти-субъединичным AChR, включая GFP-вариант альфа-субъединицы, описанный Leite et al.(13). Временная трансфекция приводила к экспрессии AChR примерно в половине клеток, и для последующего скрининга связывания антител с AChR мы всегда сравнивали связывание с трансфицированными и нетрансфицированными клетками, чтобы нормализовать антиген-независимое связывание. Кроме того, для сортировки AChR-специфичных B-клеток, антиген-независимая мечение с помощью A647 была опущена, и вместо этого была добавлена вторая положительная (т.е. специфическая антиген-зависимая) метка с альфа-бунгаротоксином, конъюгированным с A647.

ELISpot для обнаружения НА-специфических, IgG-секретирующих В-клеток человека

96-луночные планшеты (набор ELISpot для В-клеток человеческого IgG (Mabtech, Швеция, код: 3850-2A) покрывали в течение ночи при 4 ° C гемагглютинином (Sino Biological, Influenza A h2N1 (A / California / 04/2009), гемагглютинином ( HA) Protein (His Tag), кат.11055-V08B) при 5 мкг / мл, или захватывающее антитело против IgG при 15 мкг / мл для подсчета общего количества продуцирующих IgG клеток, или бычий сывороточный альбумин при 5 мкг / мл для оценки специфичности, промытый стерильным PBS и заблокирован полной средой RPMI. В-клетки выделяли, совместно культивировали с TE mHA-GFP, метили анти-человеческим CD19, и GFP-захватывающие и не захватывающие CD19-положительные В-клетки сортировали, как описано выше, в планшеты с покрытием, содержащие 200 мкл / лунку полной среды RPMI. с добавлением 1 мкг / мл R848 и 10 нг / мл рекомбинантного человеческого IL-2.После культивирования в течение 3 дней клетки отбрасывали, планшеты пять раз промывали PBS и проявляли инкубацией с биотинилированным античеловеческим IgG, а затем с раствором стрептавидина-AP и субстрата BCIP / NBT для визуализации пятен IgG. Антитела, IL-2, R848 и растворы были предоставлены с набором, и все этапы следовали протоколу Mabtech. Планшеты были визуализированы и считаны считывателем AID ELISpot (версия программного обеспечения 7.0, сборка 14790, AID GmbH, Strassberg, Германия). Результаты отображаются в виде количества подсчитанных точек.

Трансформация вирусом EBV выделенных FACS гемагглютинин-специфичных В-клеток

GFP-захватывающих и не захватывающих B-клеток были отсортированы в 1,5 мл пробирки Эппендорфа, содержащие 200 мкл полной среды RPMI, осторожно смешанные с 500 мкл предварительно нагретого супернатанта EBV (ATCC-VR-1492 вирус Эпштейна-Барра, штамм B95-8 , использовали в чистом виде) и инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C. Готовили 96WP с плоским дном, содержащие 30 000 облученных фибробластов мыши CD40L на лунку в среде RPMI, содержащей 20% не инактивированной нагреванием FCS, 100 единиц / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 1 мкг / мл R848 (Mabtech, Швеция, REF 3611-5X), именуемая в тексте «RPMI-20».В-клетки добавляли в планшеты из расчета 30 клеток на лунку и культивировали в течение не менее 2 недель. Белки, антитела и жизненно важные красители

Бычий сывороточный альбумин (каталожный номер A4503) был получен от Sigma Aldrich. Грипп Белок гемагглютинина h2N1 (A / California / 04/2009) (каталожный номер 11055-V08B) и кроличьи моноклональные антитела против НА RM10 (каталожный номер 11055-RM10) были получены от Sino Biological. PerCP-Cy5.5 против CD19 человека (клон HIB19, BD Biosciences, номер по каталогу 561295), BV510 против CD20 человека (клон 2H7, BD Biosciences, номер по каталогу.563067), APC против CD45 человека (клон HI30, BD Pharmingen, номер по каталогу 555485), PerCP-Cy5.5 против CD69 мыши (клон h2.2F3, Biolegend, номер по каталогу 104521), против APC-Cy7 против мыши B220 (клон RA3-6B2, BD Biosciences, номер в каталоге 552094), PE против IgG человека (Jackson Immunoresearch, номер по каталогу 109-116-098), Alexa Fluor 488 против IgM человека (Jackson Immunoresearch, номер по каталогу 109) -545-129), PE против кроличьих IgG (Jackson Immunoresearch, номер по каталогу 111-116-144). Оба антитела против человеческого IgG / HRP (каталожный номер P0214) и против человеческого IgM / HRP (каталожный номер P0215) получены от Dako.Cell Trace Violet был получен от Thermo Fisher Scientific (номер по каталогу C34557) и DAPI от Sigma Aldrich. BV421 против CD27 человека (клон M-T271, BD Horizon, кат. 562513), BV510 против CD20 человека (клон 2H7, BD Horizon, кат. 563067), BV605 против IgM человека (клон G20-127, BD Horizon, кат. 562977), BV711 против CD21 человека (клон B-ly4, BD Horizon, кат. 563163), PE против CD69 человека (клон FN50, Biolegend, кат. 310906), PE CF594 против CD138 человека (клон MI15, BD Horizon, кат. 564606), PE-Cy7 против IgD человека (клон IA6-2, BD Pharmingen, кат.561314), PerCP-Cy5.5 против CD19 человека (клон h2B19, BD Pharmingen, кат. 561295), Alexa Fluor 700 против IgG человека (клон G18-145, BD Pharmingen, кат. 561296), APC-eFluor 780 против — CD38 человека (клон HIT2, eBioscience, кат. 47-0389-42), APC-Cy7 против CD11c человека (клон Bu15, Biolegend, кат. 337217), BUV395 против CD71 человека (клон M-A712, BD Biosciences, кат.743308).

Фенотипирование В-клеток периферической крови человека

образцов PBMC, собранных до и через 7 дней после вакцинации против гриппа от каждого из 9 доноров, размораживали, и В-клетки выделяли отрицательной магнитной изоляцией.Клетки TE CA09HA-GFP инкубировали в течение ночи с 50 мкМ L-азидогомоаланина в среде, свободной от метионина, затем промывали и инкубировали в течение 1 ч с 5 мкМ A647-меченым производным DIBO в HBSS при 37 ° C. В-клетки совместно культивировали с этими клетками в течение 3 часов, извлекали и инкубировали либо с панелью антител, содержащей антитела против CD138 человека (доноры 1–5), либо с панелью антител, не содержащей антител против CD138 человека и содержащей антитела против CD11c человека и анти-человеческий CD71 (доноры 6–9) в течение 20 мин на льду. Затем В-клетки промывали и собирали на цитометре LSRFortessa (BD Biosciences), сконфигурированном с пятью лазерами возбуждения (355, 405, 488, 561, 640 нм) и 20 детектируемыми параметрами.Данные в формате .fcs были экспортированы из операционного программного обеспечения цитометра FACSDIVA и либо обработаны напрямую с помощью FlowJo (версия 10.1, FlowJo, LLC), либо повторно экспортированы и считаны в R с помощью пакета flowCore (14) и сгруппированы с помощью k — означает алгоритм. Тепловые карты были созданы с помощью алгоритма тепловых карт базового R. Стратегии гейтинга для экспериментов по проточной цитометрии показаны на дополнительном рисунке 3.

Проточный цитометрический анализ антител

Сто микролитров проточного буфера, содержащего по 50000 немеченых TE mHA и CTV-меченных TE 0 клеток, смешивали и инкубировали с 25 мкл супернатанта от трансформированных EBV клонов B-клеток в течение 30 минут на льду, трижды промывали холодным буфером. меченные PE-конъюгированными антителами против человеческого IgG и Alexa Fluor 488 против человеческого IgM в течение 20 мин на льду, дважды промывали холодным буфером и измеряли проточной цитометрией.Аналогичный метод был использован для измерения антител против AChR в сыворотке и супернатантах культур, но с использованием ТЕ-клеток, временно трансфицированных AChR-GFP. A647-конъюгированный α-бунгаротоксин (1 мкг / мл Thermo Fisher cat. B35450) использовали в качестве положительного контроля.

ELISA

Бычий сывороточный альбумин и твин были от Sigma Aldrich, PBS от Gibco, TMB для хромогенного развития от KPL (SureBlue RESERVE, TMB Microwell Peroxidase, 53-00-00). 96-луночные планшеты (Corning Costar 3590 96-луночный планшет EIA / RIA с плоским дном без крышки) покрывали гемагглютинином и BSA, каждый в концентрации 5 мкг / мл, в течение ночи при 4 ° C при встряхивании, затем трижды промывали PBS-0.05% твин и блокируется PBS-2% BSA при комнатной температуре в течение 2 ч при встряхивании. Супернатанты от выделенных FACS, трансформированных EBV, предположительно гемагглютинин-специфичных клонов В-клеток и от GFP-не захватывающих, предположительно негемагглютинин-специфичных, отрицательных контрольных клонов В-клеток разбавляли 1: 3 в PBS-0,5% БСА. . Планшеты инкубировали с разведенными супернатантами в течение 2 ч при комнатной температуре при встряхивании, трижды промывали PBS-0,05% твином и инкубировали с кроличьими антителами к человеческому IgG HRP (1: 6000) или кроличьими антителами против человеческого IgM HRP (1: 1000). в PBS-0.5% BSA в течение 1 ч при комнатной температуре при встряхивании. Планшеты трижды промывали 250 мкл / лунку PBS-0,05% твином и проявляли TMB до появления синего цвета. Реакцию останавливали 1 н. HCl, и планшеты считывали при 450 нм сразу после остановки.

Анализы ингибирования гемагглютинации и нейтрализации вирусов

Титр антитела против гриппа A / California / 04/09 (h2N1) в образцах супернатанта культуры В-клеток измеряли с помощью анализа HI в соответствии с протоколом Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) по диагностике и надзору за гриппом животных (ВОЗ / CDS / CSR / NCS / 2002.5 Rev.1), следуя нашей ранее описанной процедуре (15). Пробы чистых супернатантов предварительно обрабатывали 3-кратным фильтратом холеры (каталожный номер C8772-1VL, Sigma-Aldrich) в течение ночи при 37 ° C для удаления неспецифических ингибиторов. Образцы серийно в 2 раза разбавляли в V-образном 96-луночном микротитровальном планшете (каталожный номер 3897, Corning Costar) с помощью PBS. В каждую лунку добавляли двадцать пять микролитров соответствующего антигена гриппа A / калифорнийского (h2N1) антигена (4 единицы НА) (каталожный номер 14/134, NIBSC). После 30 мин инкубации 50 мкл 1% куриных эритроцитов (кат.CLC8800, Cedarlane) добавляли в каждую лунку на 30 мин. Титр антител измеряли наклоном планшета на основании реакций агглютинации и неагглютинации эритроцитов. Положительные контроли сыворотки и обратного титрования были включены в аналитический планшет.

Для анализов нейтрализации супернатанты инкубировали с живым вирусом гриппа A / California / 2009 в различных разведениях, а затем предварительно инкубированный вирус добавляли к чувствительным клеткам MDCK. Через 16 часов при 37 ° C клетки фиксировали, и продуктивную инфекцию выявляли с помощью первичного антитела против нуклеопротеина гриппа, вторичного антитела, конъюгированного с ферментом, и колоригенного субстрата, и оптическую плотность при 450 нм измеряли спектрометрическим методом.Считалось, что значения <0,15 указывают на подавление вируса.

Высокопроизводительная В-ячейка in vitro Размножение и ELISA

Высокопроизводительная активация В-клеток и скрининг супернатанта с помощью ELISA (16) с использованием метода, опубликованного Huang et al. (17). Выделенные FACS, GFP-захватывающие и не захватывающие B-клетки высевали из расчета примерно 1,6 клеток на лунку в 384-луночные планшеты, содержащие IL-2, IL-21 и облученные мышиные CD40L клетки, чтобы вызвать активацию и размножение B-клеток.Через 12 дней супернатанты этих клонов B-клеток анализировали, как описано выше (см. Раздел ELISA), с добавлением лунок, покрытых антителами против столбняка, анти-IgM и анти-IgG. кДНК, кодирующая тяжелую и легкую цепи, клонировали из 35 GFP-захватывающих культур В-клеток, продуцирующих анти-НА-антитела, и рекомбинантно экспрессировали с использованием стандартных методов. В более поздних экспериментах мы заменили облученные PBMC на облученные клетки TE671, стабильно экспрессирующие CD40L, и исключили IL-2.

Оценка специфичности и чувствительности захвата GFP-антигена трансгенными В-клетками

В-клетки мыши дикого типа и FluBI выделяли с использованием микрогранул CD19 мыши от Miltenyi (кат.130-052-201). В-клетки FluBI метили клеточным следом фиолетового цвета, разбавляли немечеными В-клетками дикого типа в соотношении 1: 100, 1: 1000 и 1: 10 000 и совместно культивировали в течение 2,5 ч с ТЕ-клетками, экспрессирующими HA-GFP. В-клетки были извлечены, помечены антителами против B220 и CD69 и подвергнуты проточной цитометрии. Затем популяцию предположительно антиген-специфичных, то есть клеток с высоким содержанием CD69 и GFP с высоким содержанием белка, исследовали на предмет мечения CTV, чтобы определить количество истинных и ложноположительных и отрицательных результатов и, таким образом, чувствительность и специфичность метода.Эффект гашения внеклеточного антигена использовался в аналогичном эксперименте, но со временем совместного культивирования 1 час, без мечения CD69 и с проточно-цитометрическими измерениями приобретения GFP в присутствии или в отсутствие 0,1% трипанового синего. Влияние жесткости мембраны оценивали с помощью аналогичного эксперимента с добавлением этапа предварительной обработки, на котором экспрессирующие антиген клетки подвергались воздействию 0, 1, 3 или 10 мкМ микалолида B (AG Scientific, Сан-Диего, Калифорния) с последующей промывкой. со средой перед добавлением В-клеток.Долю интернализованного антигена изучали путем сравнения иммунной метки после фиксации и пермеабилизации В-клеток или фиксации без пермеабилизации. После извлечения из совместной культуры В-клетки фиксировали в 4% параформальдегиде в течение 15 минут при комнатной температуре, затем повышали проницаемость в 0,1% сапонине в PBS. HA был обнаружен с помощью кроличьих поликлональных антител (Sino Biological, Пекин, Китай; 11692-T54) и конъюгированного с A657 козьего вторичного поликлонального антитела (Jackson 111-605-003).

Статистика

Статистические обработки указаны в легенде каждого рисунка.Мы использовали GraphPad PRISM 6 и различные алгоритмы в R / Bioconductor для построения графиков и анализа данных. Численные результаты, прошедшие соответствующие тесты на нормальность, были проанализированы с помощью дисперсионного анализа, а в противном случае — с помощью соответствующих непараметрических тестов.

Результаты

Захват мембранного антигена позволяет идентифицировать гемагглютинин-специфические В-клетки мыши и человека

Феномен захвата мембранного антигена B-клетками проиллюстрирован последовательностью визуализации живых клеток на рисунке 1A.При контакте с родственным антигеном, экспрессируемым в мембране другой клетки, В-клетки быстро извлекают и усваивают большие количества антигена. В показанном эксперименте В-клетки мышей FluBI (18), которые специфичны для гемагглютинина (HA) гриппа, подвергались воздействию адгезивных клеток, экспрессирующих гемагглютинин, слитый с GFP (клетки TE HA-GFP).

Рисунок 1 . Идентификация гемагглютинин-специфичных трансгенных В-клеток мыши путем захвата мембранно-экспрессируемого HA-GFP. (A) Живые клетки. Визуализация захвата мембранного антигена.Гемагглютинин-специфичные В-клетки FluBI (белые стрелки), помеченные Lysotracker Deep Red (LTR, пурпурный), добавляются к клеткам (белые звездочки), экспрессирующим слитый белок, содержащий трансмембранный и антигенный внеклеточные домены гемагглютинина, с цитоплазматической частью GFP (HA- GFP, зеленый). Внеклеточное расположение эпитопа НА и внутриклеточное расположение GFP было подтверждено путем исследования чувствительности к внеклеточной протеазе (дополнительный рисунок 1). На изображениях показан начальный контакт между В-клеткой и антигенной клеткой-мишенью, затем то же место через 6 и 9 минут.На трех верхних микрофотографиях показаны оба флуоресцентных канала, объединенные с каналом проходящего света, чтобы показать морфологию клеток (отдельные конфокальные плоскости). На нижних панелях показан только канал GFP (проекции максимальной интенсивности), чтобы показать захват антигена (шкала = 10 мкм). (B) Экстракция экспрессируемого мембраной HA-GFP антиген-специфическими или антиген-нерелевантными B-клетками. HA-специфические B-клетки FluBI были помечены Cell Trace Violet (CTV), смешаны с немечеными, антиген-нерелевантными, мышиными B-клетками C57 в соотношении 1:10 и добавлены к адгезивному слою клеток TE671, стабильно трансфицированных мембраной. экспрессируется HA-GFP.В указанные моменты времени В-клетки были извлечены, иммуномечены антителом против B220 и исследованы с помощью проточной цитометрии. Клетки FluBI были отделены от В-клеток C57 меткой CTV, и уровни GFP сравнивались между двумя типами клеток. Точки и столбцы показывают среднее значение и стандартное отклонение средней геометрической флуоресценции GFP. (C) Динамика активации CD69. HA-специфические мышиные B-клетки FluBI подвергали воздействию HA-экспрессирующих TE HA или HA-неэкспрессирующих TE-клеток (TE 0) в течение указанного времени, а затем извлекали, иммуномаркировали на B220 и CD69 и измеряли с помощью проточной цитометрии.Вертикальная ось показывает среднюю геометрическую интенсивность иммунофлуоресценции и SEM сигнала анти-CD69 на В-клетках, подвергнутых воздействию ТЕ НА (черные линии и квадраты) или ТЕ 0 (красные линии и кружки). Звездочки показывают значительную разницу между условиями TE 0 и TE HA в каждый момент времени (двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом множественного сравнения Сидака, (нс = несущественно, ** p <0,01, *** p <0,001 , **** p <0,0001). (D) Сравнение методов мечения антиген-специфичных В-клеток.CTV-меченные поликлональные B-клетки мыши C57 были дополнены 1% немеченых HA-специфичных B-клеток FluBI, и смесь подвергалась либо метке растворимым гемагглютинином, меченным Alexa-633 (слева), либо совместному культивированию с прилипшим TE HA -GFP клетки (справа). Точечные диаграммы показывают измерения CTV проточной цитометрией на горизонтальной оси (CTV-отрицательные, HA-специфические клетки FluBI появляются слева от клеток C57), а метки антигенов — на вертикальной оси. Частота B-клеток, распознающих этот гемагглютинин, составляет более 90% у мышей FluBI, но <1 на 100000 среди поликлональных B-клеток от наивных мышей C57 дикого типа (18), что означает, что большинство B-клеток C57 дикого типа связывающие антиген в данном контексте можно рассматривать как ложноположительные, чье связывание не зависит от BCR. (E) Кривые рабочих характеристик приемника (ROC), сравнивающие два метода, показанные в (D) . Для трех экспериментов, таких как (D) , была рассчитана частота истинных и ложных срабатываний для каждого метода при различных порогах. Красная кривая показывает результирующую кривую ROC для метки растворимого гемагглютинина, а синяя кривая — для экспрессируемого мембраной слитого белка гемагглютинин-GFP. Площади под кривыми вычисляли для каждого метода для трех экспериментов и сравнивали с помощью двустороннего парного теста t .На схеме справа показаны четыре популяции: истинно положительные (TP, красный), ложноположительные (FP, пурпурный), ложноотрицательные (FN, черный) и истинно отрицательные (TN, синий) при заданном пороге (показан пример порогового значения. здесь пунктирной черной линией). (F) Дискриминация антиген-специфических клеток с использованием мембранного захвата на разных частотах клеток-мишеней. 10 ⁶ немеченых B-клеток мыши C57 были дополнены 1, 0,1 или 0,01% CTV-меченных HA-специфичных B-клеток FluBI [обратите внимание, что CTV маркирует спайк в этой парадигме, противоположной парадигме, показанной в (D ) ], и смесь культивировали совместно с прикрепленными клетками TE HA-GFP.Порог был установлен на уровне приблизительно 0,1% ложных срабатываний, клетки FluBI и C57 были выделены с помощью метки CTV. Затем мы рассчитали чувствительность [истинные положительные результаты / (истинные положительные результаты + ложные отрицательные результаты)] и специфичность [истинные отрицательные результаты / (истинные отрицательные результаты + ложные положительные результаты)]. (G) Эффективность мечения с захватом антигена при различных частотах клеток-мишеней. Данные трех экспериментов, таких как (E) , нанесены на две вертикальные оси с частотами целевых ячеек, показанными на горизонтальной оси.Специфичность нанесена открытыми синими кружками на синей линии на правой оси (0,97–1,0), а чувствительность нанесена красными крестиками на красной линии на левой оси (0,0–1,0). (H) Влияние гашения внеклеточного флуорфора на кажущийся сигнал антигена. После совместного культивирования с клетками TE HA-GFP, В-клетки FluBI (график разброса в левом столбце) или В-клетки C57 дикого типа (график разброса в правом столбце) измеряли проточной цитометрией в присутствии или в отсутствие 0,1% трипанового синего. Вертикальная ось показывает отношение клеток GFP + к отрицательным клеткам GFP.Звездочка показывает значительную разницу между условиями обработки трипановым синим (* p <0,05, непарный, двусторонний t -тест). Объединенные данные двух независимых экспериментов. (I) Влияние пермеабилизации на иммунологическое определение антигена. После совместного культивирования с клетками TE HA-GFP, В-клетки FluBI (1-й и 3-й столбцы) или В-клетки C57 дикого типа (2-й и 4-й столбцы) были зафиксированы и либо пермеабилизированы сапонином, либо нет, перед иммуномечением кроличьими антибиотиками. -HA-антитело и A647-конъюгированное вторичное антитело против кролика.Вертикальная ось показывает среднюю геометрическую интенсивность флуоресценции вторичного антитела по данным проточной цитометрии. Звездочка показывает значительную разницу между условиями повышения проницаемости в пределах условия FluBI (* p <0,05, непарный, двусторонний t -тест). Объединенные данные трех независимых экспериментов.

Мы измерили динамику захвата HA-GFP антиген-специфическими В-клетками FluBI и антиген-нерелевантными В-клетками C57Bl / 6. Гемагглютинин-специфические В-клетки жадно экстрагировали слитый белок HA-GFP, при этом захват GFP достигал максимума между 45 и 90 мин, в то время как антиген-нерелевантные В-клетки почти не захватывали GFP (Рисунок 1B).Мы также ожидали, что экспрессия CD69 после воздействия родственных антиген-экспрессирующих адгезивных клеток будет зависеть от времени (9). Мы подтвердили это на В-клетках мыши FluBI, а также показали, что индукция CD69 зависит от экспрессии антигена. Общая продолжительность совместного культивирования также важна; Экспрессия CD69 увеличивается при более длительном воздействии (рис. 1C).

Чтобы изучить возможность использования этого феномена для идентификации антиген-специфичных B-клеток из поликлональной популяции, мы добавили поликлональные мышиные B-клетки от мышей C57Bl / 6 дикого типа с различным количеством В-клеток FluBI.Два типа В-клеток были предварительно помечены перед смешиванием, чтобы их можно было разделить позже. Чтобы сравнить эффективность метода захвата антигена с методом мечения растворимым флуоресцентным антигеном, один образец культивировали совместно с адгезивным слоем клеток TE HA-GFP, а второй образец метили рекомбинантным HA, конъюгированным с флуорохромом. Оба метода привели к чувствительному обнаружению гемагглютинин-специфичных В-клеток FluBI (рис. 1D). Чтобы провести более количественное сравнение, мы извлекли кривую рабочих характеристик приемника (ROC) из результатов трех таких экспериментов и сравнили кривые, полученные путем мечения флуоресцентным растворимым антигеном или экстракцией антигена (рис. 1E).Метод экстракции антигена работает значительно лучше, чем метод растворимого флуоресцентного антигена, с сопоставимой чувствительностью, но с лучшей специфичностью. Чтобы оценить эффективность метода захвата антигена при физиологически реалистичных частотах антиген-специфических B-клеток, мы повторили эксперимент с серийными разведениями B-клеток FluBI в C57Bl / 6 B-клетках дикого типа (рис. 1F) и обнаружили HA-специфические B-клетки. ячеек до частоты 1/10 000. Это диапазон встречающихся в природе В-клеток гриппа у человека (19).Специфичность всегда была выше 99%, а чувствительность варьировалась от 55 до 80% (рис. 1G).

Мы наблюдали небольшое количество HA-GFP-положительных В-клеток дикого типа, например, на фиг. 1D, F. Мы предположили, что это ложные срабатывания, вызванные поверхностной ассоциацией обломков донорских клеток с поверхностью мембраны В-клеток. Чтобы проверить это, мы сравнили сигнал в присутствии и в отсутствие трипанового синего, который, как сообщается, тушит флуорофоры, со спектральными характеристиками GFP (20).Мы предположили, что антиген, интернализованный BCR-зависимым путем, будет физически отделен от тушителя и, следовательно, защищен от тушащего эффекта. Как показано на рисунке 1H, сигнал GFP на B-клетках дикого типа был примерно вдвое уменьшен за счет гашения, в то время как сигнал от клеток FluBI не пострадал.

Подтвердить, что увеличение флуоресценции GFP в клетках FluBI B было вызвано интернализованным антигеном, а не поверхностно.

Антиген против антитела — в чем разница?

Антигены — это молекулы, способные стимулировать иммунный ответ.Каждый антиген имеет различные поверхностные особенности или эпитопы, что приводит к специфическим ответам.

Антитела (иммуноглобины) представляют собой Y-образные белки, продуцируемые В-клетками иммунной системы в ответ на воздействие антигенов. Каждое антитело содержит паратоп, который распознает определенный эпитоп на антигене, действуя как механизм связывания «замок-ключ». Это связывание помогает удалить антигены из организма либо путем прямой нейтрализации, либо путем «пометки» для других звеньев иммунной системы.

Сравнительная таблица различий между антигеном и антителом

	Антиген 98577	905	9850003	905 905 9850003	905 905 Вещество, которое может вызывать иммунный ответ	Белки, которые распознают и связываются с антигенами
Тип молекулы	Обычно белками могут быть также полисахариды, липиды или нуклеиновые кислоты
Происхождение	Внутри тела или снаружи	Внутри тела
Специфический сайт связывания	47 901	47 577 Изображение

Использование антител и антигенов в диагностике

При заражении патогеном, таким как SARS-CoV-2, организм вырабатывает антитела, которые специфически связываются с антителами. чтобы помочь устранить возбудителя.Это связывание можно использовать для разработки диагностических тестов на основе антител и антигенов.

Тест на антитела позволяет определить, был ли человек уже подвергнут воздействию инфекции, путем обнаружения антител в его крови или сыворотке. Это может быть сделано с помощью лабораторного теста, такого как ELISA (иммуноферментный анализ) или CIA (хемилюминесцентный иммуноанализ), или теста в месте оказания медицинской помощи, основанного на технологии бокового потока.

Тесты на антитела обычно не используются для диагностики текущей инфекции, так как организму требуется некоторое время для выработки антител.В период до того, как сработает адаптивная иммунная система, быстродействующий и неспецифический врожденный иммунный ответ борется с инфекцией. Отрицательный результат теста может быть получен, если тест был проведен слишком рано после заражения до того, как организм произвел выработку антител. Ложноположительные результаты теста также могут возникать из-за перекрестной реактивности.

Тесты на антитела полезны для отслеживания распространения болезни, выявления тех, кому следует уделять первоочередное внимание вакцинации, и выявления потенциальных доноров для лечения плазмой выздоравливающих.

Тест на антиген показывает, инфицирован ли человек патогеном. Как только инфекция прошла, антиген исчезает.

В отличие от тестов на основе нуклеиновых кислот, таких как ПЦР, которые обнаруживают присутствие генетического материала, тесты на антигены выявляют белки, например те, которые обнаруживаются на поверхности вируса. Точность может быть проблемой, поскольку тесты на антигены обычно имеют гораздо более низкую чувствительность, чем ПЦР.

Тем не менее, они обычно предоставляют результаты тестов быстро, относительно дешевы и могут быть более удобными для использования на месте, что может сделать их более подходящими для тестирования в сообществе и в отдаленных регионах.

Роль антигенов и антител в вакцинации
Вакцины содержат антигены, которые стимулируют В-лимфоциты иммунной системы реагировать путем производства плазматических клеток, которые секретируют специфические антитела к заболеванию (первичный ответ). Некоторые из В-клеток становятся В-клетками памяти, которые распознают будущий контакт с болезнью. Это приводит к более быстрой и интенсивной выработке антител, которые эффективно устраняют болезнь путем связывания с антигенами (вторичный ответ).

Антитела как терапевтические средства

Терапевтические антитела работают за счет связывания с высокой специфичностью с антигеном-мишенью и стимулирования иммунного ответа, который может включать ингибирование связывания лиганда или пометку клетки для связывания цитотоксическими Т-клетками. Типы терапевтических антител включают:

— Иммуноглобулины

— Фрагменты антител

— Би-специфические антитела

— Радиоиммуноконъюгаты

Антитела могут быть получены с использованием различных методов, включая гибридомные технологии, трансгенных мышей и дисплеев in vitro. технологии.Эволюция инженерии антител привела к развитию все более гуманизированных антител с преимуществом низкой иммуногенности.

Тест на антиген

для обнаружения вируса короны SARS-CoV-2: наше медицинское превосходство для вас — ваш доступ к самым инновационным лабораторным услугам

сентябрь 2020 г. | Последние медицинские релизы

Тесты на SARS-COV-2

С начала пандемии COVID-19 были разработаны и использованы три основных типа лабораторных тестов.

Тесты амплификации нуклеиновых кислот (NAAT, включая ОТ-ПЦР, ТМА и LAMP) оценивают присутствие или отсутствие генома CoV-2, как правило, в образцах из дыхательных путей (мазки из носоглотки и ротоглотки). ПЦР и тесты на эквивалентные нуклеиновые кислоты в настоящее время считаются наиболее точным способом определения наличия у человека CoV-2. Положительный результат указывает на наличие вирусного генома, но не позволяет окончательно установить, заразен человек или нет.

Серологические тесты обнаруживают присутствие антител (специфический иммунный ответ) против антигенных белков CoV-2 в образце крови.Положительный результат показывает, что человек подвергался воздействию CoV-2 в прошлом, но дает мало или не дает никакой информации об их текущем статусе инфекции. Есть надежда, что в будущем серологический тест предоставит информацию об иммунитете к инфекции CoV-2, но в настоящее время это не так.

Тесты на антигены измеряют наличие или отсутствие самих вирусных белков (антигенов), чаще всего белка нуклеокапсида в большом количестве. Предпочтительным типом образца снова являются мазки из носоглотки или ротоглотки.Как и в случае тестов на нуклеиновые кислоты, есть надежда, что слюна или жидкость для полоскания рта станут жизнеспособной альтернативой, но в настоящее время это кажется менее точным.

Быстрые диагностические тесты на антигены

В последние недели было много дискуссий о быстрых тестах на антигены на SARS-CoV-2.

Быстрые тесты имеют то преимущество, что время получения результата составляет минуты, а не часы, и их можно проводить практически в любом месте, например, у постели больного, в комнате ожидания или в деловой обстановке.Им по-прежнему требуются мазки в качестве образцов, поэтому их должны собирать медицинские работники.

Для чего нужны экспресс-тесты на антигены?

Ожидается, что последнее поколение этих тестов, доступных от нескольких различных поставщиков, будет хорошо работать у пациентов с высокой вирусной нагрузкой. Обычно это происходит примерно через 3-10 дней после заражения вирусом, когда человек заразен и может протекать бессимптомно или в первые дни появления симптомов.

Поэтому есть надежда, что экспресс-тесты на антигены могут подтвердить диагноз COVID-19 у людей с первыми симптомами.В США некоторые тесты получили разрешение на проведение диагностических тестов у лиц с симптомами в течение 5-7 дней с момента появления симптомов ⁱ.

Когда они ненадежны?

Экспресс-тесты на антигены имеют более низкую чувствительность *, чем NAAT (84–97,6%), и, в частности, гораздо чаще дают ложноотрицательные результаты у лиц с меньшим количеством вируса. Это делает их ненадежными у людей в первые дни заражения, позже, чем через 5-7 дней после появления симптомов, и прежде всего у бессимптомных инфицированных людей.К отрицательным результатам следует относиться с осторожностью и рассматривать возможность подтверждения вторым тестом, в идеале NAAT.

В некоторых ситуациях тестирование только лиц с симптомами не обеспечивает наивысшего уровня безопасности. Это особенно актуально, когда целью тестирования является обеспечение безопасности на рабочем месте (или безопасности труда) или проверка людей, попадающих в опасные ситуации (например, на спортивных мероприятиях или во время путешествий). Недавние исследования показывают, что скорость передачи вируса может быть высокой до появления симптомов и что одной лишь изоляции пациентов с симптомами недостаточно для сдерживания распространения вируса ^{ii iii}.

Предположение о том, что экспресс-тесты на антигены могут пропустить только более слабые положительные результаты, которые вряд ли могут быть заразными, не основано на доказательствах, поскольку точная корреляция между вирусной нагрузкой и заразностью еще не установлена. Напротив, передача инфекции бессимптомным носителем была четко установлена ^iv. Более того, тесты на антигены могут пропускать людей в первые несколько дней после заражения, как раз перед самым заразным периодом.

Следовательно, существует риск неспособности контролировать новые цепочки заражения при использовании экспресс-тестов на антигены, выходящих за рамки их конкретного предназначения.Следовательно, эти тесты не следует использовать для скрининга больших групп для исключения инфекций (например, на мероприятиях, в офисах, в аэропортах и т. Д.). В этих случаях, когда также необходимо выявить наличие бессимптомных носителей, важно более чувствительное тестирование с помощью NAAT (RT-PCR или аналог).

Последние недели показали рост интереса к экспресс-тестам и их характеристикам. Компания Roche объявила, что в сентябре запустит экспресс-тест на антигены для рынков, принимающих знак CE.Как они заявляют, тест просто предназначен для помощи при первоначальном обследовании пациентов с клиническими симптомами: https://www.roche.com/media/releases/med-cor-2020-09-01b.htm.

Abbott представила на рынке устройство для быстрого тестирования Panbio ™ COVID-19 Ag, чтобы предоставить возможности для предварительного скрининга: https://www.globalpointofcare.abbott

Аналогичным образом, LumiraDx также представила Ag-тест SARS-CoV-2 рынок, который обнаруживает белки нуклеокапсида в образцах мазков из носа от пациентов с подозрением на COVID-19.На вкладыше к продукту также указано, что «Отрицательные результаты не исключают заражение SARS-CoV-2 и не должны использоваться в качестве единственной основы для принятия решений о лечении или лечении пациентов, включая решения о контроле за инфекцией». https://www.lumiradx.com/assets/images/new/pdf/sars-cov-2-ag-test-strip-product-insert-eua.pdf.

11 сентября 2020 года Всемирная организация здравоохранения опубликовала Временное руководство по обнаружению антигенов ^v.

Они рекомендуют использовать быстрые тесты на антигены , , для диагностики инфекции CoV-2, если NAAT недоступен или когда клинически необходимо сокращение времени обработки.Они также предполагают, что тесты могут быть использованы для отслеживания контрактов и тестирования бессимптомных случаев, но предупреждают о пониженной чувствительности. По возможности следует проводить повторное тестирование или, желательно, подтверждающее тестирование (NAAT) отрицательных результатов. В равной степени они отмечают, что отрицательный результат Ag-RDT не должен удалять контакт из карантинных требований.

Согласно Временному руководству, тесты на антигены не рекомендуются в условиях или группах населения с низкой ожидаемой распространенностью заболевания.В них перечислены следующие конкретные сценарии, при которых следует использовать экспресс-тесты на антигены , а не :

людей без симптомов (если человек не является контактным лицом с подтвержденным случаем)
Когда распространенность очень низкая
для проверки в аэропорту или на границе
на скрининге перед сдачей крови.

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) также сообщает, что поставщики медицинских услуг могут заказать NAAT для подтверждения отрицательного результата теста на антиген ^vi.

Почему мы тестируем людей до и без симптомов?

График ниже объясняет, почему ОТ-ПЦР или эквивалентный метод по-прежнему является наиболее надежным способом тестирования и выявления заразных людей до появления симптомов:

SYNLAB обеспечивает тестирование для обеспечения безопасности на работе, на спортивных мероприятиях и в университетах, а также при поездках или пересечении границ. Цель состоит в том, чтобы идентифицировать потенциально заразных людей как можно раньше, что означает также обнаружение вируса у предсимптоматических или бессимптомных носителей, для которых важна ОТ-ПЦР или эквивалентный NAAT.

^{i CDC 4.9.2020, Временное руководство по быстрому тестированию на антиген на SARS-CoV-2. www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/resources/antigen-tests-guidelines.html
ii Arons et al. (2020) Пресимптомные инфекции SARS-CoV-2 и передача в учреждении квалифицированного сестринского ухода. Медицинский журнал Новой Англии. 382 (22).
iii Chang et al. (2020) Оценка отслеживания динамики передачи COVID-19 на Тайване и рисков в различные периоды воздействия до и после появления симптомов.JAMA Intern Med.
iv Zhao et al (2020) COVID-19: бессимптомная передача носителя — это недооцененная проблема. Эпидемиология и инфекция 148, e116, 1–3.
против ВОЗ, 09.11.2020. Выявление антигена в диагностике инфекции SARS-CoV-2 с использованием быстрых иммуноанализов: временное руководство. WHO / 2019-nCoV / Antigen_Detection / 2020.1.
vi FDA, 16.07.2020. Основы тестирования на коронавирус: www.fda.gov/consumers/consumer-updates/coronavirus-testing-basics}