Антитела к вирусу гепатита с анти hcv суммарные: Anti-HCV-total, анализ на антитела к антигенам вируса гепатита C

Anti-HCV-total (антитела к антигенам вируса гепатита C)

Исследуемый материал
Сыворотка крови

Метод определения
Иммуноферментный анализ (ИФА).

Показатель, характеризующий наличие антител (независимо от класса М и G) к вирусу гепатита C.

Антитела класса М начинают вырабатываться через 4 — 6 недель после инфицирования, их концентрация быстро достигает максимума. По прошествии 5 — 6 месяцев уровень IgM падает и повышается вновь во время следующей реактивации инфекции. Антитела класса G появляются с 11 — 12 недели после инфицирования, достигают пика концентрации к 5 — 6 месяцу и сохраняются в крови на более-менее постоянном уровне в течение всего периода болезни и реконвалесценции. Таким образом, суммарный уровень антител (total) определяется с 4 — 5 недели после инфицирования и далее.

Особенности инфекции. Гепатит С — вирусное заболевание, характеризующееся поражением печени и аутоиммунными нарушениями, часто имеющее первично-хроническое и латентное течение. Протекает в желтушной (5%) или безжелтушной (95%) формах. Вирус гепатита С (ВГC) относится к флавивирусам, достаточно устойчив во внешней среде. Три структурных белка вируса имеют сходные антигенные свойства, обусловливая выработку anti-HCV-core. В настоящее время выделено 6 генотипов вируса. Высокая степень генетической изменчивости HCV способствует «ускользанию» вируса из-под иммунного ответа. С этим связаны трудности в создании вакцины и лабораторной диагностике (серонегативный гепатит С), а также частое первично-хроническое течение заболевания.

Гепатит С передается с кровью и биологическими жидкостями парентеральным, половым и трансплацентарным путями. Группу повышенного риска составляют лица, практикующие внутривенную наркоманию, беспорядочные половые связи, а также медицинские работники, пациенты, нуждающиеся в гемодиализе или переливаниях крови, заключенные. Проникая в организм, HCV попадает в макрофаги крови и гепатоциты печени, где происходит его репликация. Повреждение печени происходит в основном за счет иммунного лизиса, также вирус оказывает прямое цитопатическое действие. Сходство антигена вируса с антигенами системы гистосовместимости человека обусловливает возникновение аутоиммунных («системных») реакций. В программе системных проявлений HCV-инфекции могут возникать аутоиммунный тиреоидит, синдром Шегрена, идеопатическая тромбоцитопеническая пурпура, гломерулонефрит, ревматоидный артрит и др. По сравнению с другими вирусными гепатитами, гепатит С имеет менее яркую клиническую картину, чаще переходит в хронические формы. В 20 — 50% случаев хронический гепатит С приводит к развитию цирроза печени и в 1,25 — 2,50% — к развитию гепато-целлюлярной карциномы. С высокой частотой возникают аутоиммунные осложнения.

Инкубационный период — 5 — 20 дней. В конце инкубационного периода повышаются уровни печеночных трансаминаз, возможно увеличение печени и селезенки. Острый период протекает со слабостью, снижением аппетита. В трети случаев возникает лихорадка, артралгия, полиморфная сыпь. Возможны диспептические явления и полинейропатии. Холестаз возникает крайне редко (5% случаев). Лабораторные показатели отражают цитолиз. При высоком уровне трансаминаз (более 5 норм) и признаках печеночно-клеточной недостаточности следует заподозрить микст-инфекцию: HCV+HBV.

Оформление заявок для проведения исследований в ООО «ИНВИТРО» осуществляется по паспорту или документу, его заменяющему (миграционная карта, временная регистрация по месту жительства, удостоверение военнослужащего, справка из паспортного стола при утере паспорта, регистрационная карта учёта из гостиницы). Предъявленный документ в обязательном порядке должен содержать информацию о временной или постоянной регистрации на территории РФ и фотографию. При отсутствии паспорта (документа его заменяющего) пациент вправе оформить анонимную заявку для сдачи биоматериала. При анонимном обследовании, заявке и полученному от клиента образцу биоматериала присваивается номер, известный только пациенту, и медперсоналу, оформлявшему заказ.

! Результаты исследований, выполненных анонимно, не могут быть представлены для госпитализации, профессиональных осмотров и не подлежат регистрации в ОРУИБ.

Антитела к HCV (суммарные) — акушерство и гинекология, урология, терапия, ендокринология, ультразвуковая диагностика, лабораторная диагностика

Показатель, характеризующий наличие антител (независимо от класса М и G) к вирусу гепатита C.

Антитела класса М начинают вырабатываться через 4 — 6 недель после инфицирования, их концентрация быстро достигает максимума. По прошествии 5 — 6 месяцев уровень IgM падает и повышается вновь во время следующей реактивации инфекции. Антитела класса G появляются с 11 — 12 недели после инфицирования, достигают пика концентрации к 5 — 6 месяцу и сохраняются в крови на более-менее постоянном уровне в течение всего периода болезни и реконвалесценции. Таким образом, суммарный уровень антител (total) определяется с 4 — 5 недели после инфицирования и далее.

Особенности инфекции. Гепатит С — вирусное заболевание, характеризующееся поражением печени и аутоиммунными нарушениями, часто имеющее первично-хроническое и латентное течение. Протекает в желтушной (5%) или безжелтушной (95%) формах. Вирус гепатита С (ВГC) относится к флавивирусам, достаточно устойчив во внешней среде. Три структурных белка вируса имеют сходные антигенные свойства, обусловливая выработку anti-HCV-core. В настоящее время выделено 6 генотипов вируса. Высокая степень генетической изменчивости HCV способствует «ускользанию» вируса из-под иммунного ответа. С этим связаны трудности в создании вакцины и лабораторной диагностике (серонегативный гепатит С), а также частое первично-хроническое течение заболевания.

Гепатит С передается с кровью и биологическими жидкостями парентеральным, половым и трансплацентарным путями. Группу повышенного риска составляют лица, практикующие внутривенную наркоманию, беспорядочные половые связи, а также медицинские работники, пациенты, нуждающиеся в гемодиализе или переливаниях крови, заключенные. Проникая в организм, HCV попадает в макрофаги крови и гепатоциты печени, где происходит его репликация. Повреждение печени происходит в основном за счет иммунного лизиса, также вирус оказывает прямое цитопатическое действие. Сходство антигена вируса с антигенами системы гистосовместимости человека обусловливает возникновение аутоиммунных («системных») реакций. В программе системных проявлений HCV-инфекции могут возникать аутоиммунный тиреоидит, синдром Шегрена, идеопатическая тромбоцитопеническая пурпура, гломерулонефрит, ревматоидный артрит и др. По сравнению с другими вирусными гепатитами, гепатит С имеет менее яркую клиническую картину, чаще переходит в хронические формы. В 20 — 50% случаев хронический гепатит С приводит к развитию цирроза печени и в 1,25 — 2,50% — к развитию гепато-целлюлярной карциномы. С высокой частотой возникают аутоиммунные осложнения.

Инкубационный период — 5 — 20 дней. В конце инкубационного периода повышаются уровни печеночных трансаминаз, возможно увеличение печени и селезенки. Острый период протекает со слабостью, снижением аппетита. В трети случаев возникает лихорадка, артралгия, полиморфная сыпь. Возможны диспептические явления и полинейропатии. Холестаз возникает крайне редко (5% случаев). Лабораторные показатели отражают цитолиз. При высоком уровне трансаминаз (более 5 норм) и признаках печеночно-клеточной недостаточности следует заподозрить микст-инфекцию: HCV+HBV.
Подготовка:

Целесообразно выполнять исследование не ранее 6 недель от момента предполагаемого инфицирования.

Показания:

• Повышение уровня АлАТ и АсАТ.
• Подготовка к оперативному вмешательству.
• Парентеральные манипуляции.
• Подготовка к беременности.
• Клинические признаки вирусного гепатита.
• Незащищенные половые контакты, частая смена половых партнеров.
• Внутривенная наркомания.
• Холестаз.

Положительный результат:

1. гепатит С или реконвалесценция после гепатита С. Нельзя различить острый и хронический гепатит, а также гепатит и реконвалесценцию.

Отрицательный результат:

1. гепатит С не выявлен;
2. первые 4 — 6 недель инкубационного периода гепатита С;
3. гепатит С, серонегативный вариант.

Вирус гепатита С (маркеры анти-НCV-core, анти-HCV-NS3, анти-HCV-NS4, анти-HCV-NS5, анти-HCV-IgM)

Вирус гепатита С (ВГС) является одной из основных причин хронических заболеваний печени во

всем мире. В настоящее время абсолютно очевидны серьезные проблемы, связанные с данной инфекцией: высокая частота формирования хронических форм, бессимптомное течение, манифестация заболевания на поздних стадиях (цирроз печени), четкая ассоциация с развитием гепатоцеллюлярной карциномы. Ассамблея ВОЗ в 2016 г определила глобальную стратегию по борьбе с вирусными гепатитами, предполагающую элиминацию этих инфекций к 2030 г. Важнейшими целями этой программы, принятой 194 странами мира, являются сокращение числа новых случаев заражения вирусными гепатитами на 90% и числа случаев смерти от него на 65% по сравнению с уровнем 2016 г.

Актуальность проблемы объяснима еще и фактом выявления значительной частоты коинфекции ВГС и вирусом гепатита В (ВГВ). Маркеры вируса гепатита В (ВГВ) обнаруживаются у пациентов с ХГС в 22% случаев, что определяет важность вакцинации больных ХГС без коинфекции ВГВ против вирусного гепатита В. Установлена низкая частота перинатальной передачи ВГС от матерей с ХГС детям (3,5%), в то время как у женщин с сочетанием ХГС и ВИЧ-инфекции перинатальная передача ВГС составяет 14–16%.

Группы риска по заражению ВГС: медицинские работники; лица, использующие инъекционные наркотики; пациенты с ВИЧ; лица, которым были сделаны татуировки с помощью нестерильных инструментов; пациенты, получающие переливание крови или ее компонентов до 1992 г., пациенты отделений гемодиализа, дети, рождённые от матерей с ВГС.

Большинство пациентов с ОГС не демонстрируют каких-либо симптомов заболевания, у некоторых из них наступает спонтанная элиминация вируса, с которой ассоциируются следующие факторы: женский пол, молодой возраст, течение заболевания с клинической симптоматикой, клиренс РНК ВГС в течение 4 недель от начала клинической манифестации заболевания, генотип интерлейкина 28В (ИЛ 28В) СС. Однако ни один из этих параметров не может лечь в основу предсказания характера течения заболевания у каждого конкретного пациента.

Хронический гепатит С — хроническое заболевание печени, продолжающееся более 6 месяцев, в основе которого лежат инфицирование и поражение печени ВГС и манифестирующее морфологически некротическими,  воспалительными и фибротическими изменениями печеночной ткани различной степени тяжести.

Диапазон исходов инфекции, вызванной ВГС, широк и колеблется от минимального до тяжелого поражения печени, включая развитие ЦП и ГЦК. Через 20– 30 лет после инфицирования ВГС вероятность развития ЦП колеблется от 4 до 45%. Прогрессирование фиброза печени имеет нелинейный характер и длится, как правило, в течение 20–40 лет от момента инфицирования. У части больных этот процесс происходит чрезвычайно медленно.

Выделен ряд факторов, которые могут оказывать отрицательное влияние на естественное течение гепатита С: возраст старше 40 лет к моменту инфицирования, мужской пол, раса (неевропейская), злоупотребление алкоголем, ожирение, нарушение обмена железа, метаболический синдром и др.

Поскольку гепатит С в большинстве случаев протекает без выраженных симптомов, для его выявления среди населения необходимо применение скрининговых тестов. В Российской Федерации контингенты, подлежащие обязательному обследования на гепатит С, определены СП 3.1.3112-13 «Профилактика гепатита С». Как правило, с целью скрининга достаточно проведения обследования на наличие антител к ВГС (анти-ВГС), однако в ряде случаев при скрининге необходимо одновременное обследование на наличие антител и РНК ВГС. Это касается ситуаций, при которых важно выявить заболевание на раннем сроке, еще до появления антител (доноры крови и органов), или, когда антитела могут не выявляться вовсе (лица с иммунодефицитом). 

Верификация диагноза гепатита С основывается на обнаружении специфических маркеров гепатита С – определение суммарных антител к гепатиту С и маркерного спектра, состоящего из антител к структурным и неструктурным белкам вируса класса М и G.

Структурные белки (core- белок — ядерный, белки оболочки -Е1 и Е2, необходимы для формирования вирусного капсида. Основным структурным белком вируса гепатита С является core-протеин, который обладает РНК-связывающей активностью и образует нуклеокаспид вируса. Именно с этим структурным белком связывают прямое цитопатическое действие вируса С на печеночную клетку. Одновременно с этим показано, что данный белок обладает онкогенным эффектом. В эксперименте было установлено, что core-протеин вируса гепатита С подавляет процесс апоптоза и тем самым способствует развитию опухолевого процесса. Однако до настоящего времени все еще не выяснено, коррелирует ли наличие core-протеина с уровнем РНК и различных генотипов вируса.

Антитела класса М к core-антигену начинают выявляться в крови, начиная с 2 недели от начала заболевания, могут циркулировать как при остром, так и хроническом течении заболевания. Обнаружение антител класса М у новорожденного ребенка от матери, инфицированной гепатитом С, означает внутриутробное инфицирование плода. Антитела класса G начинают синтезироваться через 3-4 недели от начала заболевания, их циркуляция достаточно длительная. 

Неструктурные белки (p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B) выполняют различные регуляторные функции. Неструктурный белок NS2 является цинк-зависимой протеиназой, а NS3 — серин-протеиназой, участвующей в сборке вириона. Функция NS4 недостаточно известна, хотя предполагается, что этот белок участвует в качестве Ко-фактора для NS3 серин-протеазы [3]. Достаточно хорошо выяснена функция белка NS5. Изучено, что данный белок является РНК- зависимой РНК-полимеразой — ферментом, который крайне необходим для синтеза вирусной РНК, т.е. репликации вируса С. Установлено, что NS5A подавляет активность интерферона. G. Reyes (2002) показал, что NS5A ингибирует процесс апоптоза и тем самым становится фактором канцерогенеза.

При положительном результате на суммарные антитела в вирусу гепатита С (анти-HCV) обязательно необходимо проводить подтверждающее исследование, используя тест на выявление маркеров гепатита и определение РНК вируса с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени.  

Показания к назначению:

• 
  диагностика гепатита С;
• 
  подтверждение положительных и сомнительных результатов скрининговых исследований.

Необходимо воздержаться от приема пищи в течение 2-3 часов.

Вирусные гепатиты — Лечебно-оздоровительный центр «Энергетик»

Anti-HCV сумм.

(ИФА)

Определение суммарного уровня специфических антител — иммуноглобулинов классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С, свидетельствующих о возможной инфицированности или ранее перенесённой инфекции.

Гепатит С — вирусное заболевание, характеризующееся поражением печени и аутоиммунными нарушениями, часто имеющее первично-хроническое и латентное течение. Протекает в желтушной (5%) или безжелтушной (95%) формах. Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает клетки печени и вызывает гепатит. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и ассоциирован с развитием криоглобулинемии, болезни Шегрена и В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Среди всех возбудителей вирусных гепатитов у ВГС наибольшее количество вариаций, а благодаря высокой мутационной активности он способен избегать защитных механизмов иммунной системы человека.

В настоящее время выделено 6 генотипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза заболевания и эффективности противовирусной терапии. Высокая степень генетической изменчивости HCV способствует «ускользанию» вируса из-под иммунного ответа. С этим связаны трудности в создании вакцины и лабораторной диагностике (серонегативный гепатит С), а также частое первично-хроническое течение заболевания.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (при переливании элементов крови и плазмы, пересадке донорских органов, через нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятна передача вируса при половом контакте и от матери ребёнку во время родов, но это происходит реже.

Инкубационный период может продолжаться от 5 до 20 дней. В конце инкубационного периода повышаются уровни печеночных трансаминаз в крови, возможно увеличение печени и селезенки. Острый период протекает со слабостью, снижением аппетита. В трети случаев возникает лихорадка, артралгия, полиморфная сыпь. Возможны диспептические явления и полинейропатии. Холестаз возникает крайне редко (5% случаев). Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и остаётся невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро, с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса, редко оно сопровождается желтухой. У 60-85 % заражённых развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Для хронического вирусного гепатита С характерна «волнообразность» с повышением печёночных ферментов и слабовыраженными симптомами. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печёночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Специфические иммуноглобулины вырабатываются к ядру (нуклеокапсидному белку core), оболочке (нуклеопротеинам Е1-Е2) и фрагментам генома вируса (неструктурным белкам NS). Антитела класса М начинают вырабатываться через 4 — 6 недель после инфицирования, их концентрация быстро достигает максимума. По прошествии 5 — 6 месяцев уровень IgM падает и повышается вновь во время следующей реактивации инфекции. Антитела класса G появляются с 11 — 12 недели после инфицирования, достигают пика концентрации к 5 — 6 месяцу и сохраняются в крови на более-менее постоянном уровне в течение всего периода болезни и реконвалесценции. Таким образом, суммарный уровень антител определяется с 4 — 5 недели после инфицирования и далее.

В острый период болезни образуются антитела классов IgM и IgG к нуклеокапсидному белку core. В период латентного течения инфекции и при её реактивации в крови присутствуют антитела класса IgG к неструктурным белкам NS и нуклеокапсидному белку core.

После перенесённой инфекции специфические иммуноглобулины циркулируют в крови 8-10 лет с постепенным снижением концентрации или сохраняются пожизненно в очень низких титрах. Они не защищают от вирусной инфекции и не снижают риска повторного заражения и развития заболевания.

Кровь рекомендуется сдавать не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи (воду пить можно). Целесообразно выполнять исследование не ранее 6 недель от момента предполагаемого инфицирования.

Материал для исследования: сыворотка крови.

Интерпретация результатов содержит аналитическую информацию для лечащего врача. Лабораторные данные входят в комплекс всестороннего обследования пациента, проводимого врачом и не могут быть использованы для самодиагностики и самолечения.

Тест на антитела к HCV является качественным. При отсутствии анти HCV-антител выдается ответ — «отрицательно». В случае обнаружения антиHCV-антител выдается ответ «положительно».     При положительном результате выполняется подтверждающий тест с определением антител к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С (NS, Core). Ревматоидный фактор в крови может способствовать ложноположительному результату.

Отрицательный результат:

§  гепатит С не выявлен;

§  ранний период после инфицирования: первые 4 — 6 недель инкубационного периода гепатита С;

§  отсутствие антител при вирусном гепатите С (серонегативный вариант, около 5 % случаев).

Положительный результат:

§  острый или хронический вирусный гепатит С;

§  ранее перенесённый вирусный гепатит С.

Диагностика гепатитов

Сдать анализ Антитела к антигену ядра вируса гепатита B (Hepatitis В Virus, Anti-HBc) класса IgM (Anti-HBc IgM)

Вирусный гепатит В (HBV) – инфекционное заболевание печени, вызванное ДНК-содержащим вирусом гепатита В. Среди всех причин развития острого гепатита и хронической вирусной инфекции вирус гепатита В считается одной из самых распространенных в мире У вируса гепатита В сложная структура. Основными антигенами, имеющими значение в лабораторной практике, являются HBsAg (антиген оболочки вируса), HBcAg и HBeAg (антигены, находящиеся в ядре вируса). HBcAg обладает высокой иммуногенностью, антитела к нему вырабатываются раньше других иммуноглобулинов, связанных с вирусом гепатита В. Сам антиген не обнаруживается в крови, так как расположен внутри гепатоцитов – клеток паренхимы печени, но иммунная система инфицированного человека начинает вырабатывать anti-HBc еще до начала клинических проявлений, через 3-5 недель после попадания вируса в организм. Данный показатель при нормальном функционировании иммунной системы может становиться положительным в конце продромального периода заболевания. Сначала вырабатываются anti-HBc класса IgM, а с 4-6-го месяца болезни и антитела класса IgG. Anti-HBc IgM синтезируются в ответ на активную репликацию вируса и исчезают в период выздоровления

html:

При подозрении на вирусный гепатит, клинических проявлениях и отсутствии маркеров других гепатитов (даже при отрицательном результате теста на HBsAg)

.

При данных о перенесенном гепатите неуточненной этиологии

.

При динамическом наблюдении за больным гепатитом В (определение стадии процесса при совместном исследовании на другие специфические маркеры инфекции).

html:Специальная подготовка не требуется.

Забор крови для исследования производят не ранее чем через 2 часа после приема пищи.

Перед исследованием (за 1 час) желательно исключить факторы, влияющие на результаты лабораторного исследования: физическое и эмоциональное напряжение, курение.

Рекомендуется за 1-2 дня до предполагаемого исследования не употреблять жирную пищу и алкоголь.

При приеме лекарственных препаратов следует проконсультироваться с врачом по поводу целесообразности проведения исследования на фоне приема препаратов или возможности отмены приема препарата. Длительность отмены препарата определена периодом выведения препарата из крови (в среднем, рекомендуют выждать 4-5 периодов полувыведения препарата, указанного в аннотации).

Если отменить прием лекарств нельзя, необходимо проинформировать об этом лабораторию.

Детей до 5 лет перед забором крови обязательно поить кипяченой водой (порциями, до 150-200 ml, на протяжении 30 минут)

Внимание!

В соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах защиты здоровья граждан в
Российской Федерации» интерпретация результатов исследований, установление диагноза,
назначение лечения, должны производиться врачом соответствующей специализации.

Телефон отделения: +7 (495) 695-56-95

Результаты и чего ожидать

Тест на антитела к гепатиту С — единственный способ проверить, есть ли у человека вирус гепатита С. Результаты могут быть сложными, поскольку положительный результат теста не всегда означает, что у кого-то есть гепатит С. Прочтите, чтобы узнать больше о тесте и о том, что показывают результаты.

Гепатит С — это вирус, поражающий печень. Если его не лечить, это может привести к заболеванию печени и другим серьезным долгосрочным проблемам со здоровьем.

Многие люди не осознают, что у них гепатит С.Существуют определенные факторы риска заражения вирусом, такие как возраст и контакт с кровью или биологическими жидкостями.

Тест на антитела — это анализ крови для проверки на наличие вируса гепатита С.

Антитело — это белок, вырабатываемый организмом для защиты от бактерий и болезней. Антитела могут обнаруживать вещества, которые могут нанести вред здоровью.

Медицинский термин для обозначения этих вредных веществ — антиген. Когда антитело распознает антиген, оно уничтожает его или останавливает его дальнейшее проникновение в организм.

Антитела специфичны для определенных бактерий или болезней, и они остаются в организме после того, как кто-то заразился. Это означает, что в будущем антитела смогут бороться с той же болезнью.

Тест на антитела к гепатиту С проверяет наличие антител к вирусу гепатита С. Если в организме есть антитела, это означает, что человек в какой-то момент заразился вирусом. Однако это не всегда означает, что у них все еще есть вирус.

Медицинский работник возьмет небольшой образец крови для отправки на анализ.Результаты могут вернуться через несколько дней или недель.

Есть два результата теста на антитела к гепатиту С.

• Нереактивный или отрицательный результат теста означает, что у человека нет вируса. Исключение составляют случаи, когда кто-то недавно контактировал с вирусом, например, через зараженную кровь. В этом случае им нужно будет пройти еще один тест.
• Реактивный или положительный результат теста означает, что человек был заражен вирусом в какой-то момент, но не означает, что он все еще есть.Потребуются дальнейшие тесты, чтобы проверить, активен ли вирус в организме и потребуется ли лечение.

Поделиться в PinterestПосле постановки диагноза будут проведены дальнейшие тесты, чтобы определить влияние вируса гепатита С на организм.

После того, как человеку поставлен диагноз гепатита С, ему необходимо будет пройти ряд различных тестов, чтобы увидеть, как вирус повлиял на его организм.

Эти тесты позволят проверить наличие повреждений печени, определить, насколько хорошо печень работает, и помогут медицинскому работнику принять решение о лечении.

Гепатит С лечат лекарствами, известными как противовирусные. Он получил такое название, потому что он направлен на выведение вируса из организма.

Еще одна цель препарата — замедлить повреждение печени. Это также может снизить вероятность заболевания раком печени или серьезного рубцевания печени, известного как цирроз.

Человеку с гепатитом C необходимо регулярно сдавать анализы во время лечения, чтобы видеть, насколько хорошо работает лекарство. Сохранение здоровья, достаточный сон и отказ от наркотиков и алкоголя могут помочь лечению.

Определение диагноза гепатита С может быть сложным или запутанным. Американский фонд печени предлагает информацию, поддержку и советы людям, у которых есть вирус.

После того, как человек получил реактивный или положительный результат теста на антитела к гепатиту С, ему необходимо будет пройти два контрольных теста.

Первый тест проверяет, есть ли у человека вирус; другой измеряет количество вируса в крови.

Первый тест — это качественный тест РНК гепатита С, также известный как тест ПЦР.Положительный результат означает, что человек заражен вирусом гепатита С. Отрицательный результат означает, что организм избавился от вируса без лечения.

Второй тест — это количественный тест на РНК гепатита С. Результат этого теста выражается числом, а не положительным или отрицательным. Это связано с тем, что тест сравнивает количество вируса в организме до, во время и после лечения.

Число, полученное в результате этого теста, называется вирусной нагрузкой. Чем меньше количество вируса гепатита С в крови, тем выше шансы, что человек сможет вывести вирус из своего организма.

После диагностики вируса гепатита С могут потребоваться другие тесты:

• Тестирование на гепатиты A и B . Если человек ранее не подвергался воздействию этих форм вируса, он может пройти вакцинацию для защиты от него.
• Тестирование для определения штамма гепатита C . В Соединенных Штатах есть три распространенных штамма, и лечение каждого из них немного отличается. Это называется тестом на генотип гепатита С.
• Функциональные пробы печени . Они позволят проверить, насколько может быть воспалена или повреждена печень.
• Визуальные тесты . Фотографирование печени может показать, есть ли у человека рак печени.

Поделиться на PinterestДетям-бумерам рекомендуется пройти тестирование на гепатит С, поскольку они подвергаются особому риску заражения вирусом.

Определенное поведение, опыт и медицинские процедуры повышают риск заражения вирусом гепатита С, который передается при контакте с кровью.

Факторы риска заражения вирусом:

• ВИЧ-инфекция
• использование игл для инъекций
• наличие нескольких половых партнеров или половой партнер с хроническим гепатитом C
• , перенесший трансплантацию органов или получивший донорство крови до 1992 г.
• работало в сфере здравоохранения и контактировало с кровью или биологическими жидкостями
• проходило гемодиализ, процесс, который фильтрует кровь
• лечился от нарушения свертываемости крови белками крови до 1987 г.

Центры по контролю заболеваний и профилактика (CDC) советуют всем бэби-бумерам пройти тестирование на гепатит С.Бэби-бумеры — это люди, родившиеся между 1945 и 1965 годами. Вероятность заражения вирусом у них в пять раз выше, чем у других взрослых.

Непонятно, почему бэби-бумеры заболевают гепатитом С чаще, чем остальное население. В настоящее время исследователи считают, что это могло быть связано со стандартами медицинской практики в прошлом, до введения мер скрининга и инфекционного контроля.

Гепатит С — серьезный вирус, который может нанести значительный ущерб организму.Чем раньше будет обнаружен вирус, тем больше шансов вылечить его.

Люди, которые подвергались воздействию факторов риска или относятся к группе высокого риска, должны пройти тестирование.

Важно понимать, что означает положительный или отрицательный результат. Человек должен попросить медицинского работника дать четкое объяснение и совет, если он не уверен.

Результаты и чего ожидать

Тест на антитела к гепатиту С — единственный способ проверить, есть ли у человека вирус гепатита С.Результаты могут быть сложными, поскольку положительный результат теста не всегда означает, что у кого-то есть гепатит С. Прочтите, чтобы узнать больше о тесте и о том, что показывают результаты.

Гепатит С — это вирус, поражающий печень. Если его не лечить, это может привести к заболеванию печени и другим серьезным долгосрочным проблемам со здоровьем.

Многие люди не осознают, что у них гепатит С. Существуют определенные факторы риска заражения вирусом, такие как возраст и контакт с кровью или биологическими жидкостями.

Тест на антитела — это анализ крови для проверки на наличие вируса гепатита С.

Антитело — это белок, вырабатываемый организмом для защиты от бактерий и болезней. Антитела могут обнаруживать вещества, которые могут нанести вред здоровью.

Медицинский термин для обозначения этих вредных веществ — антиген. Когда антитело распознает антиген, оно уничтожает его или останавливает его дальнейшее проникновение в организм.

Антитела специфичны для определенных бактерий или болезней, и они остаются в организме после того, как кто-то заразился.Это означает, что в будущем антитела смогут бороться с той же болезнью.

Тест на антитела к гепатиту С проверяет наличие антител к вирусу гепатита С. Если в организме есть антитела, это означает, что человек в какой-то момент заразился вирусом. Однако это не всегда означает, что у них все еще есть вирус.

Медицинский работник возьмет небольшой образец крови для отправки на анализ. Результаты могут вернуться через несколько дней или недель.

Есть два результата теста на антитела к гепатиту С.

• Нереактивный или отрицательный результат теста означает, что у человека нет вируса. Исключение составляют случаи, когда кто-то недавно контактировал с вирусом, например, через зараженную кровь. В этом случае им нужно будет пройти еще один тест.
• Реактивный или положительный результат теста означает, что человек был заражен вирусом в какой-то момент, но не означает, что он все еще есть.Потребуются дальнейшие тесты, чтобы проверить, активен ли вирус в организме и потребуется ли лечение.

Поделиться в PinterestПосле постановки диагноза будут проведены дальнейшие тесты, чтобы определить влияние вируса гепатита С на организм.

После того, как человеку поставлен диагноз гепатита С, ему необходимо будет пройти ряд различных тестов, чтобы увидеть, как вирус повлиял на его организм.

Эти тесты позволят проверить наличие повреждений печени, определить, насколько хорошо печень работает, и помогут медицинскому работнику принять решение о лечении.

Гепатит С лечат лекарствами, известными как противовирусные. Он получил такое название, потому что он направлен на выведение вируса из организма.

Еще одна цель препарата — замедлить повреждение печени. Это также может снизить вероятность заболевания раком печени или серьезного рубцевания печени, известного как цирроз.

Человеку с гепатитом C необходимо регулярно сдавать анализы во время лечения, чтобы видеть, насколько хорошо работает лекарство. Сохранение здоровья, достаточный сон и отказ от наркотиков и алкоголя могут помочь лечению.

Определение диагноза гепатита С может быть сложным или запутанным. Американский фонд печени предлагает информацию, поддержку и советы людям, у которых есть вирус.

После того, как человек получил реактивный или положительный результат теста на антитела к гепатиту С, ему необходимо будет пройти два контрольных теста.

Первый тест проверяет, есть ли у человека вирус; другой измеряет количество вируса в крови.

Первый тест — это качественный тест РНК гепатита С, также известный как тест ПЦР.Положительный результат означает, что человек заражен вирусом гепатита С. Отрицательный результат означает, что организм избавился от вируса без лечения.

Второй тест — это количественный тест на РНК гепатита С. Результат этого теста выражается числом, а не положительным или отрицательным. Это связано с тем, что тест сравнивает количество вируса в организме до, во время и после лечения.

Число, полученное в результате этого теста, называется вирусной нагрузкой. Чем меньше количество вируса гепатита С в крови, тем выше шансы, что человек сможет вывести вирус из своего организма.

После диагностики вируса гепатита С могут потребоваться другие тесты:

• Тестирование на гепатиты A и B . Если человек ранее не подвергался воздействию этих форм вируса, он может пройти вакцинацию для защиты от него.
• Тестирование для определения штамма гепатита C . В Соединенных Штатах есть три распространенных штамма, и лечение каждого из них немного отличается. Это называется тестом на генотип гепатита С.
• Функциональные пробы печени . Они позволят проверить, насколько может быть воспалена или повреждена печень.
• Визуальные тесты . Фотографирование печени может показать, есть ли у человека рак печени.

Поделиться на PinterestДетям-бумерам рекомендуется пройти тестирование на гепатит С, поскольку они подвергаются особому риску заражения вирусом.

Определенное поведение, опыт и медицинские процедуры повышают риск заражения вирусом гепатита С, который передается при контакте с кровью.

Факторы риска заражения вирусом:

• ВИЧ-инфекция
• использование игл для инъекций
• наличие нескольких половых партнеров или половой партнер с хроническим гепатитом C
• , перенесший трансплантацию органов или получивший донорство крови до 1992 г.
• работало в сфере здравоохранения и контактировало с кровью или биологическими жидкостями
• проходило гемодиализ, процесс, который фильтрует кровь
• лечился от нарушения свертываемости крови белками крови до 1987 г.

Центры по контролю заболеваний и профилактика (CDC) советуют всем бэби-бумерам пройти тестирование на гепатит С.Бэби-бумеры — это люди, родившиеся между 1945 и 1965 годами. Вероятность заражения вирусом у них в пять раз выше, чем у других взрослых.

Непонятно, почему бэби-бумеры заболевают гепатитом С чаще, чем остальное население. В настоящее время исследователи считают, что это могло быть связано со стандартами медицинской практики в прошлом, до введения мер скрининга и инфекционного контроля.

Гепатит С — серьезный вирус, который может нанести значительный ущерб организму.Чем раньше будет обнаружен вирус, тем больше шансов вылечить его.

Люди, которые подвергались воздействию факторов риска или относятся к группе высокого риска, должны пройти тестирование.

Важно понимать, что означает положительный или отрицательный результат. Человек должен попросить медицинского работника дать четкое объяснение и совет, если он не уверен.

Обнаружение РНК вируса гепатита С (ВГС) в печени здоровых пациентов с нормальным уровнем аланинаминотрансферазы в сыворотке крови, положительных по антителам к ВГС и отрицательным по РНК ВГС | Журнал инфекционных болезней

Аннотация

Предпосылки Неизвестно, присутствует ли вирус гепатита С (ВГС) в печени пациентов с положительной реакцией на антитела к ВГС со стойко нормальным уровнем аланинаминотрансферазы (АЛТ) и неопределяемым уровнем РНК ВГС в сыворотке

Методы наличие геномных и антигеномных цепей РНК HCV в образцах биопсии печени и образцах мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC), полученных от 12 пациентов с положительными анти-HCV антителами, которые имели нормальный уровень АЛТ и были отрицательными в сыворотке на РНК HCV в течение не менее 12 месяцев, по результатам количественной, специфичной для цепей, полимеразной цепной реакции обратной транскрипции в реальном времени, а также гибридизации in situ клеток печени.Внутрипеченочная РНК ВГС была клонирована и секвенирована

Результаты Все пациенты оставались положительными по антителам к ВГС и отрицательными по РНК ВГС в сыворотке, и у всех были нормальные значения АЛТ в течение периода наблюдения (средняя продолжительность ± стандартное отклонение, 29,2 ± 19,8 месяцев). Геномная РНК ВГС была обнаружена в образцах биопсии печени, полученных у 10 (83%) из 12 пациентов, а антигеномная цепь была обнаружена в 10 (100%) из 10 образцов биопсии печени, в которых была обнаружена геномная РНК ВГС. Результаты были подтверждены гибридизацией in situ.Внутрипеченочный HCV имел генотип 1b, и секвенирование HCV не показало перекрестного заражения между образцами. Геномная РНК HCV была обнаружена в 6 (50%) из 12 образцов PBMC, а антигеномная РНК HCV также была обнаружена в 5 (83%) из этих 6 образцов PBMC

Заключение HCV может сохраняться и реплицироваться в печени и PBMC здоровые пациенты с положительными антителами к HCV и отрицательными по РНК HCV в сыворотке крови со стабильно нормальным уровнем АЛТ. Эти пациенты должны находиться под наблюдением, поскольку у них продолжается вирусная инфекция

Инфекция, вызванная вирусом гепатита С (ВГС), является основной причиной заболевания печени, которое характеризуется наличием антител против белков ВГС (т.д., анти-HCV-антитела) и РНК HCV в сыворотке [1]. Во время острой инфекции HCV около 15–20% людей избавляются от вируса с потерей сывороточной РНК HCV и нормализацией результатов функциональных тестов печени, но антитела к HCV остаются выявляемыми [2]. Исчезновение инфекции ВГС также происходит у лиц с хроническим гепатитом С после получения успешного противовирусного лечения [3]. Считается, что все эти люди полностью излечились от инфекции ВГС и были иммунизированы, по крайней мере, против соответствующего штамма ВГС [4].С другой стороны, есть здоровые люди с нормальным уровнем аланинаминотрансферазы (АЛТ), которые дают положительный результат теста на антитела против ВГС в отсутствие РНК ВГС в сыворотке и не имеют в анамнезе острых или хронических заболеваний печени [5]. Эта ситуация может отражать иммунологический ответ на неявное воздействие ВГС без клинических последствий, а не устранение инфекции ВГС

Недавно была описана новая форма инфекции ВГС, определяемая как «скрытая инфекция ВГС» [6] .Скрытая инфекция ВГС характеризуется отсутствием антител против ВГС и сывороточной РНК ВГС, а также присутствием РНК ВГС в мононуклеарных клетках периферической крови (МКПК) большинства пациентов (70%) и в печени всех пациентов. Кроме того, сообщалось об обнаружении РНК ВГС в PBMC пациентов с антителами против ВГС и нормальным уровнем АЛТ спустя годы после разрешения инфекции ВГС (спонтанной или вызванной противовирусным лечением) [7–9]. Также было продемонстрировано наличие внутрипеченочной РНК HCV после нормализации уровней ферментов печени и клиренса сывороточной РНК HCV у пациентов с хроническим гепатитом С, которые ответили на противовирусное лечение [9, 10].Однако до настоящего времени возможное присутствие РНК ВГС в ткани печени здоровых пациентов с положительными анти-ВГС антителами со стабильно нормальным уровнем АЛТ и отсутствием в анамнезе острых или хронических заболеваний печени не изучалось. В настоящем исследовании мы проанализировали, есть ли РНК вируса гепатита C (геномная РНК вируса гепатита C) в печени у пациентов с положительной реакцией на антитела к HCV и отрицательной по РНК вируса гепатита C в сыворотке крови со стабильно нормальным уровнем АЛТ, а также, реплицируется ли вирус гепатита C. РНК

Пациенты и методы

Из 95 человек с положительными антителами к ВГС и отрицательными по РНК ВГС в сыворотке крови с нормальным уровнем АЛТ (не менее 12 месяцев), которые посещали наш центр (Fundación para el Estudio de las Hepatitis Virales, Мадрид, Испания), 12 пациентам была выполнена программная интервенционная лапароскопия (желчного пузыря [10 пациентов] и пищеводной грыжи пищеводного отверстия диафрагмы [2 пациента]).Эти 12 человек были включены в настоящее исследование, поскольку они дали письменное информированное согласие на получение образца печени во время лапароскопии. Исследование проводилось в соответствии с принципами Хельсинкской декларации. Демографические и клинические характеристики 12 пациентов, в зависимости от дня получения образца биопсии печени, представлены в таблице 1

.

Таблица 1

Характеристики 12 здоровых субъектов, у которых были антитела к вирусу гепатита С (ВГС) и отрицательные сывороточные РНК ВГС в день получения образца биопсии печени

Таблица 1

Характеристики 12 здоровых субъектов у которых были антитела к вирусу гепатита С (ВГС) и отрицательные по РНК ВГС в сыворотке в день получения образца биопсии печени

Скрининг на антитела к вирусу гепатита С у этих пациентов проводился по нескольким причинам (таблица 1), и, после этого пациенты были направлены в наше учреждение, где у всех пациентов было подтверждено наличие антител к HCV с помощью коммерческого рекомбинантного иммуноблоттинга (Innolia HCV Ab III; Innogenetics). Кроме того, все пациенты имели отрицательную сыворотку на РНК ВГС, как было определено коммерческим тестом (Amplicor HCV, версия 2.0 [Roche Diagnostics]; чувствительность теста 50 МЕ / мл; специфичность теста 99%), и у всех был нормальный уровень трансаминаз. . Ни у одного из этих 12 пациентов в анамнезе не было острых или хронических заболеваний печени, и, за исключением 2 пациентов, которым переливали кровь более 25 лет назад, они не сообщили о факторах риска инфекции ВГС. Этот первый визит в наше учреждение считался первым днем ​​последующего наблюдения, средняя продолжительность которого (± стандартное отклонение) составляла 29.2 ± 19,8 мес. В течение всего периода наблюдения у 12 пациентов с положительной реакцией на антитела к вирусу гепатита С сохранялся стабильно нормальный уровень АЛТ и отрицательный уровень РНК вируса гепатита С в сыворотке, что определялось каждые 6 месяцев. Как упоминалось ранее, у всех этих пациентов был взят образец биопсии печени в среднем (± стандартное отклонение) 22,1 ± 13,6 месяцев после начала наблюдения. В таблице 2 представлены данные об уровнях трансаминаз в 3 временных точках наблюдения для каждого из 12 пациентов

Таблица 2

Значения трансаминаз и результаты скрининга сывороточной РНК вируса гепатита С (ВГС) в 3 различных временных точках во время наблюдения

Таблица 2

Значения трансаминаз и результаты скрининга на сывороточную РНК вируса гепатита С (ВГС) в 3 различных временных точках во время наблюдения

После получения фрагмента биопсии печени его разрезали на 2 части.Первую порцию использовали для гистологической диагностики [11], а вторую порцию погружали (не позднее, чем через 30 с после получения образца печени) в RNAlater (Ambion), а затем хранили при -20 ° C, пока не использовали для Обнаружение РНК HCV

Образцы сыворотки и PBMC были собраны у всех пациентов в тот же день, когда выполнялась лапароскопия. Уровни трансаминаз проверяли снова, и титры антител против HCV определяли посредством серийных разведений (от 1: 100 до 1: 100 000) образцов сыворотки с использованием коммерческого набора (Innotest-HCV Ab IV; Innogenetics). Наконец, аликвоту сыворотки хранили при -80 ° C, тогда как PBMC хранили в RNAlater (Ambion) при -20 ° C, пока их не использовали для обнаружения РНК HCV

Обнаружение геномных и антигеномных цепей РНК HCV количественным методом. , специфическая для цепи полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в реальном времени (RT-PCR) Общая РНК была выделена из 200 мкл сыворотки, из образцов печени и из образцов PBMC с использованием набора SV Total RNA Isolation (Промега). После осаждения осадок растворяли в дистиллированной воде, обработанной диэтилпирокарбонатом.Общую концентрацию РНК в образцах печени и PBMC определяли с помощью спектрофотометрии

Количественное определение 5′-некодирующей области геномной и антигеномной цепей РНК HCV проводили с помощью специфической для цепей ОТ-ПЦР в реальном времени с использованием термостабильного фермент Tth для синтеза кДНК при высокой температуре. Таким образом, для амплификации геномной цепи РНК HCV кДНК была получена в 20 мкл реакционной смеси, которая содержала общую РНК, экстрагированную из 200 мкл сыворотки или 0.5 мкг общей РНК из образцов печени или образцов PBMC, 50 пмоль / л антисмыслового праймера UTRLC2 (5′-CAAGCACCCTATCAGGCAGT-3 ‘), 1 ммоль / л MnCl ₂ , 200 мкмоль / л каждого дезоксинуклеотидтрифосфата, 1 × RT буфер (Прикладные биосистемы) и 5 ​​единиц Tth (Прикладные биосистемы). Через 20 минут при 65 ° C активность RT была инактивирована хелатированием Mn ²⁺ с 8 мкл 10-кратного хелатирующего буфера (Applied Biosystems) с последующим нагреванием при 95 ° C в течение 30 минут. Для амплификации антигеномной РНК HCV кДНК синтезировали в тех же условиях путем добавления 50 пмоль / л смыслового праймера UTRLC1 (5′-CTTCACGCAGAAAGCGTCTA-3 ‘).ПЦР в реальном времени выполняли в LightCycler (Roche Molecular Biochemicals) с 2 мкл кДНК в конечном объеме 20 мкл с использованием набора LightCycler FastStart DNA Master SYBR Green I (Roche Molecular Biochemicals). Реакционная смесь содержала 4 ммоль / л MgCl ₂ , 0,5 мкмоль / л праймеры UTRLC1 и UTRLC2 и 2 мкл смеси SYBR Green Master. Амплификацию проводили следующим образом: начальную денатурацию и активацию фермента проводили при 95 ° C в течение 10 мин; с последующими 60 циклами при 95 ° C в течение 1 с, при 60 ° C в течение 5 с и при 72 ° C в течение 10 с; и затем следует заключительный этап регистрации флуоресценции, выполняемый при 89 ° C в течение 5 с

Две стандартные кривые, построенные с 10-кратными разведениями синтетической геномной и антигеномной РНК HCV (от 3.2 × 10 ⁸ до 0,32 копий) использовали для количественной оценки обоих стендов РНК HCV. Специфичность анализа для обнаружения антигеномной цепи РНК HCV оценивалась путем проведения RT со смысловым праймером и серийных разведений синтетической геномной РНК HCV в качестве матрицы. Линейность количественного анализа варьировала от 3,2 до 3,2 × 10 ⁸ копий геномной или антигеномной цепи РНК HCV на реакцию (рисунок 1). Этот анализ позволил выявить 3,2 молекулы правильной цепи при неспецифическом обнаружении 10 ⁷ –10 ⁸ копий неправильной цепи.На чувствительность и динамику каждого анализа не повлияло добавление общей РНК, экстрагированной из клеток HepG2, к реакционной смеси

.

Рисунок 1

Количественное определение геномной (A) и антигеномной (B) цепей РНК вируса гепатита C (HCV) с помощью обратной транскриптазно-полимеразной цепной реакции в реальном времени. Стандартные кривые были построены с последовательными 10-кратными разведениями от 0,32 до 3,2 × 10 ⁸ копий синтетической геномной или антигеномной РНК HCV.Нижний предел обнаружения составил 3,2 копии как для геномной, так и для антигеномной цепей РНК HCV. Cp, точка пересечения

Рисунок 1

Количественное определение геномной (A) и антигеномной (B) цепей РНК вируса гепатита C (HCV) с помощью обратной транскриптазно-полимеразной цепной реакции в реальном времени. Стандартные кривые были построены с последовательными 10-кратными разведениями от 0,32 до 3,2 × 10 ⁸ копий синтетической геномной или антигеномной РНК HCV. Нижний предел обнаружения — 3.2 копии как для геномной, так и для антигеномной цепей РНК HCV. Cp, точка пересечения

Чтобы гарантировать специфичность результатов, определение РНК HCV проводилось слепым методом в разные дни и двумя разными операторами. Кроме того, образцы PBMC от 10 здоровых пациентов с отрицательными антителами к HCV (клетки которых неоднократно оказывались отрицательными по РНК HCV), общая РНК, выделенная из клеток HepG2, и пустые образцы (без РНК) использовались в качестве отрицательного контроля. Наконец, все процедуры были выполнены в соответствии с рекомендациями Квок и Хигучи [12]

Обнаружение геномных и антигеномных цепей РНК HCV в печени посредством гибридизации in situ Геномная цепь РНК HCV была обнаружена с помощью комплементарной РНК-зонд, полученный путем транскрипции in vitro плазмиды pC5’NCR, которая содержит полную 5’NC (некодирующую) область генома HCV.Обнаружение антигеномной цепи РНК вируса гепатита C осуществляли с помощью зонда комплементарной РНК, охватывающего 390 нуклеотидов кодирующей области ядра вируса гепатита C, и полученного путем транскрипции плазмиды pCcore

in vitro. Срезы печени, залитые парафином

(толщина 4 мкм), депарафинизировали в ксилол и регидратировали через серию этанола. Затем срезы расщепляли протеиназой K (1 мкг / мл) при 37 ° C в течение 20 мин, затем фиксировали в свежеприготовленном растворе 4% формальдегида и ацетилировали в 0.1 моль / л раствор триэтаноламина с уксусным ангидридом в течение 20 мин. Предметные стекла промывали 2 × стандартным цитратом физиологического раствора (SSC; 20 × SSC: 3 моль / л NaCl и 0,3 моль / л цитрата натрия) и быстро обезвоживали в этаноле. Гибридизацию проводили в растворе, состоящем из 50% деионизированного формамида, 0,1 моль / л фосфатного буфера, 2 × SSC, 250 мкг / мл дрожжевой тРНК и 100 мкг / мл сульфата декстрана, содержащего 5 нг соответствующего денатурированного теплом зонда на предметное стекло. . Предметные стекла инкубировали при 50 ° C в течение 16 часов.После гибридизации слайды промывали 3 × SSC при 50 ° C в течение 1 ч, расщепляли РНКазой A (20 мг / мл) и промывали в 1,5 × SSC и 0,75 × SSC при 50 ° C в течение 1 ч каждое. . Меченые дигоксигенином гибриды были обнаружены с помощью конъюгата дигоксигенин-антитело-щелочная фосфатаза и ферментного субстрата хромогена (нитросиний тетразолий / 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат) в соответствии с инструкциями производителя Dig Nucleic Acid. Набор для обнаружения (Roche Molecular Biochemicals). Слайды контрастировали 0.2% сафранина в 5% этаноле. Специфичность сигнала оценивалась (1) перевариванием срезов РНКазой A (0,2 мг / мл; Sigma) или ДНКазой I (20 Ед / мл; Sigma) при 37 ° C в течение 2 ч перед гибридизацией in situ, (2) гибридизацией. с неродственным зондом (фрагмент гена хлорамфениколацетилтрансферазы длиной 360 п.н.) и (3) исключение зонда из гибридизационной смеси

Визуализацию сигналов гибридизации in situ проводили с использованием светового микроскопа Nikon Eclipse E-400. Изображения были сняты с помощью монохромной камеры устройства с зарядовой связью высокого разрешения (DIC-N; Wared Precision Instruments), и процент инфицированных клеток был определен визуальным осмотром, по крайней мере 2000 клеток, подсчитанных на каждую секцию печени

Генотипирование и анализ секвенирования HCV Генотипирование РНК HCV, амплифицированной из образцов биопсии печени, было выполнено с использованием стандартной методологии (INNO-LiPA HCV II; Innogenetics).Чтобы доказать отсутствие перекрестной контаминации среди положительных образцов, центральную область HCV амплифицировали из общей РНК, выделенной из печени 5 случайно выбранных пациентов, с помощью ОТ-ПЦР, выполняемой с использованием праймеров и условий, описанных Castillo et al. [6]. Основные продукты ПЦР длиной 302 п.н. клонировали в вектор pCR II TOPO (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. Автоматически секвенировали четыре клона от каждого пациента.

Последовательности, соответствующие сердцевине HCV, выровняли с помощью программы ClustalX (версия 1.81) [13]. Филогенетический и молекулярно-эволюционный анализ проводили с использованием программы MEGA (версия 2.1) [14]. Генетические расстояния были рассчитаны с использованием 2-параметрического метода Кимуры, а SE расстояний были рассчитаны с использованием метода начальной загрузки (1000 повторов)

Статистический анализ Статистический анализ был выполнен с использованием программного обеспечения SPSS (версия 9.0; SPSS). Непрерывные переменные выражаются как средние значения (± SD). Средние значения сравнивали с помощью критерия Манна-Уитни U .Двустороннее значение P ≤,05 считалось статистической значимостью

Результаты

Для 12 пациентов с нормальным уровнем АЛТ, положительных по антителам к ВГС, которые были включены в настоящее исследование, РНК ВГС оставалась неопределяемой (по результатам тестирования с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени) в образце сыворотки, взятой одновременно с анализом печени. был получен образец биопсии. Нить геномной РНК HCV была обнаружена в образцах печени, полученных от 10 (83%) из 12 пациентов.Что касается репликации ВГС, антигеномная цепь РНК ВГС была обнаружена у 10 (100%) из 10 пациентов, у которых геномная РНК ВГС была обнаружена в образце биопсии печени (таблица 3). РНК HCV не была обнаружена ни в одном из отрицательных контролей, включенных в анализы, и результаты обнаружения РНК HCV, выполненные разными операторами в разные дни, были идентичны во всех случаях. Средняя нагрузка геномной цепи РНК HCV была значительно выше (P = 0,005), чем нагрузка антигеномной цепи (2,6 × 10 ⁵ ± 1.9 × 10 ⁵ против 1,1 × 10 ⁵ ± 1,0 × 10 ⁵ копий / мкг общей РНК соответственно). Присутствие геномных и антигеномных цепей HCV было подтверждено во всех случаях гибридизацией in situ (таблица 3). Наконец, не было обнаружено корреляции между титрами антител против HCV и количеством геномных или антигеномных цепей РНК HCV в печени

Таблица 3

Обнаружение геномных и антигеномных цепей РНК вируса гепатита С (HCV) в образцах печени и в образцах мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC)

Таблица 3

Обнаружение геномных и антигеномных цепей РНК вируса гепатита C (HCV) в образцах печени и в образцах мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC)

Генотипирование внутрипеченочной РНК HCV показало, что 10 пациентов с вирусной РНК, обнаруженной в образцах биопсии печени, имели HCV генотипа 1b.Анализ нуклеотидной последовательности коровой области HCV от 5 случайно выбранных пациентов подтвердил, что изоляты HCV принадлежат к генотипу 1b. Филогенетический анализ центральной области HCV показал, что генетические дистанции клонов внутри пациентов были ниже, чем среди пациентов (таблица 4). Филогенетическое дерево показало, что 4 клона разделились отдельно у 5 пациентов, что указывает на отсутствие перекрестного заражения между образцами (рис. 2)

Таблица 4

Средние генетические расстояния (± SE) между последовательностями внутри пациента и между пациентами

Таблица 4

Средние генетические расстояния (± SE) между последовательностями внутри пациента и между пациентами

Рисунок 2

Дерево объединения соседей, построенное с использованием ядерных нуклеотидных последовательностей вируса гепатита С (ВГС) 20 клонов, полученных от 5 случайно выбранных пациентов, а также клонов, соответствующих различным генотипам ВГС.Значения начальной загрузки ≥70, полученные после 1000 повторений таблицы данных, показаны в узлах дерева.

Рисунок 2

Дерево соседних соединений, построенное с использованием ядерных нуклеотидных последовательностей вируса гепатита С (ВГС) 20 клонов, полученных из 5 случайно выбранных пациентов, а также пациентов, относящихся к разным генотипам HCV. Значения начальной загрузки ≥70, полученные после 1000 повторений таблицы данных, показаны в узлах дерева

Что касается PBMC, геномная цепь РНК HCV была обнаружена у 6 (50%) из 12 пациентов, тогда как репликация HCV (антигеномная Нить РНК HCV) была продемонстрирована в 5 (83%) из 6 образцов PBMC от пациентов, у которых была обнаружена геномная цепь РНК HCV в этих клетках (таблица 3). Опять же, средняя нагрузка геномной цепи РНК HCV была значительно выше (P = 0,043), чем нагрузка антигеномной цепи РНК HCV (2,2 × 10 ⁵ ± 1,9 × 10 ⁵ против 1,5 × 10 ⁵ ± 8,5 × 10 ⁴ копий / мкг тотальной РНК соответственно). У 2 пациентов, у которых не было РНК ВГС в образцах биопсии печени, также не было РНК ВГС в образцах РВМС

Что касается гистологических результатов биопсии печени, 6 (60%) из 10 пациентов, у которых была обнаружена РНК ВГС. имели минимальные гистологические изменения (таблица 3).У двух других пациентов (20%) был неалкогольный стеатогепатит (у одного была гиперхолестеринемия и была избыточная масса тела, а у другого — избыточная масса тела), и у одного пациента был стеатоз (с гиперлипидемией). У оставшегося пациента с РНК ВГС, обнаруженной в образце биопсии печени, был обнаружен хронический активный гепатит с портальной активностью 2 степени, дольчатой ​​активностью 2 степени и фиброзом 1 стадии. У этого пациента другие причины поражения печени (инфекция вирусом гепатита B, аутоиммунитет, токсичность лекарств, метаболические и генетические нарушения, употребление алкоголя) были исключены на основании клинических и аналитических данных.У 2 пациентов, у которых не было РНК HCV в образцах биопсии печени, были минимальные гистологические изменения

Обсуждение

Анти-ВГС-антитела-позитивные, сывороточные РНК-негативные пациенты с нормальным уровнем АЛТ могут рассматриваться как пациенты, которые избавились от ВГС-инфекции либо спонтанно, либо после успешного противовирусного лечения [2, 3]. Однако недавние исследования [7–10] продемонстрировали, что РНК HCV может присутствовать в печени или PBMC таких пациентов, что указывает на продолжающуюся инфекцию HCV.Насколько нам известно, не проводилось исследований по поиску наличия РНК ВГС в печени здоровых, положительных по антителам к ВГС, отрицательных по РНК ВГС в сыворотке крови с нормальным уровнем АЛТ, у которых в анамнезе не было острых или острых заболеваний. хроническое заболевание печени

В настоящем исследовании РНК ВГС была обнаружена в образцах биопсии печени у 10 (83%) из 12 здоровых пациентов с положительными антителами к ВГС со стабильно нормальным уровнем АЛТ и без РНК ВГС, обнаруженной в сыворотке. Специфичность результатов была продемонстрирована данными секвенирования, которые показали отсутствие перекрестного загрязнения между образцами.Кроме того, все результаты были подтверждены гибридизацией in situ. Следует отметить, что 8 из 10 пациентов с внутрипеченочной РНК ВГС не имели рискованного поведения в отношении инфекции ВГС, тогда как другие 2 пациента получали переливание крови> 25 лет назад

Как упоминалось выше, в предыдущих исследованиях [9, 10] также сообщили о наличии РНК ВГС в печени пациентов, которые избавились от инфекции ВГС после успешного противовирусного лечения, хотя и в меньших процентах (2% и 27%), чем было отмечено в нашем исследовании.Помимо различий в изученных популяциях, это расхождение можно объяснить несколькими факторами. Одним из факторов может быть возможная деградация РНК HCV в результате неправильного хранения образцов печени, что приводит к ложноотрицательным результатам [15]. Хотя McHutchison et al. [10] проанализировали положительные внутренние контроли, чтобы гарантировать целостность РНК, чтобы подтвердить результаты их ПЦР, было доказано, что амплификация положительных внутренних контролей не гарантирует целостность РНК HCV [15].Другой причиной может быть другая методология, использованная для выделения РНК HCV, а также для амплификации РНК HCV.

Кроме того, антигеномная цепь РНК HCV была обнаружена в 10 из 10 образцов печени, которые содержали геномную вирусную РНК. Этот результат демонстрирует, что ВГС реплицируется в клетках печени у большинства пациентов (83%), у которых в анамнезе не было заболеваний печени, но у которых был положительный результат теста на антитела к ВГС в отсутствие РНК ВГС в сыворотке и у которых уровень АЛТ был постоянно нормальным уровни. Таким образом, следует учитывать, что после заражения гепатитом С полное исчезновение вируса гепатита С не является частым явлением, по крайней мере, у нелеченных пациентов. В свете этих результатов пациенты с положительными антителами к ВГС и отрицательными по РНК ВГС в сыворотке с нормальным уровнем АЛТ, которые, как считается, вылечили ВГС, могут фактически иметь продолжающуюся инфекцию ВГС. Таким образом, здоровые пациенты с нормальным уровнем АЛТ, у которых обнаружены положительные антитела к ВГС, но отрицательные по РНК ВГС в сыворотке во время рутинного скрининга на антитела к ВГС (т.е., для донорства крови, беременности, эпидемиологических исследований или медицинских осмотров) следует тщательно отслеживать

РНК HCV также была обнаружена в 50% образцов PBMC, полученных из наших антител с антителами к HCV и отрицательных по РНК HCV сыворотки пациенты с нормальным уровнем АЛТ. Частота инфицирования HCV, отмеченная в образцах PBMC в настоящем исследовании, согласуется с данными Radkowski et al. [8], которые обнаружили РНК HCV в образцах некультивируемых PBMC, полученных от 7 из 11 пациентов, у которых также были нормальные значения ALT и антитела против HCV, но у которых не было обнаруживаемой вирусной РНК в сыворотке, хотя эти авторы не изучали образцы биопсии печени.Кроме того, 5 из наших 6 пациентов с геномной цепью РНК HCV, обнаруженной в образцах PBMC, также имели антигеномную цепь РНК HCV; следовательно, в этих клетках происходила вирусная репликация. В свете этих результатов, часть пациентов с положительными антителами к ВГС с нормальным уровнем АЛТ и отрицательной сывороткой на РНК ВГС следует рассматривать как потенциально инфекционных. Для подтверждения этой гипотезы необходимо провести эпидемиологическое исследование. Кроме того, следует проспективно изучить пациентов с положительными антителами к ВГС и нормальными уровнями АЛТ, но у которых РНК ВГС не обнаружена в образцах РВМС, поскольку у большинства этих пациентов наблюдается репликация ВГС в печени, и, следовательно, он может случиться так, что вирионы HCV могут попадать в кровоток во время цитотоксической или иммуносупрессивной терапии. В поддержку этой гипотезы, случай с одним пациентом, который избавился от инфекции ВГС и после 8,5 лет бездействия с отрицательными результатами сывороточного РНК ВГС, снова получил положительные результаты сывороточного РНК ВГС (с тем же вирусом, что и первоначально наблюдаемый) после получения недавно была опубликована терапия преднизоном [16]

Что касается гистологических данных печени у 10 пациентов с внутрипеченочной РНК ВГС, у 2 из них был неалкогольный стеатогепатит, а у 1 — стеатоз, очевидно, не связанный с инфекцией ВГС, потому что эти пациенты либо были лишний вес или нарушение обмена веществ.У шести других пациентов гистологические изменения были минимальными. Эти результаты предполагают, что, несмотря на наличие и репликацию HCV в печени этих пациентов, гистологическое поражение минимально. Однако у 1 пациента (10%) был диагностирован хронический активный гепатит с фиброзом печени, и, таким образом, необходимо изучить естественное течение и эволюцию этих пациентов.

Таким образом, большинство здоровых пациентов с положительным результатом теста на антитела к ВГС. и имеют нормальный уровень АЛТ, но у которых РНК ВГС не обнаружена в сыворотке, у них продолжается инфекция ВГС, поскольку РНК ВГС обнаруживается в печени.Эпидемиологическое и клиническое значение этого открытия должно быть изучено в будущем.

Ссылки

1. Заявление конференции по развитию консенсуса национальных институтов здравоохранения

: ведение гепатита C: 2002 г. — 10–12 июня 2002 г.

,

Hepatology

,

2002

, vol.

36

(стр.

S3

—

20

) 2.,,, Et al.

Долгосрочная смертность и заболеваемость гепатитом не A, не B и типа C, ассоциированным с переливанием крови: совместное исследование Национального института сердца, легких и крови

,

Hepatology

,

2001

, vol.

33

(стр.

455

—

63

) 3.,.

Результаты клинических испытаний пегинтерферонов в комбинации с рибавирином

,

Semin Liver Dis

,

2003

, vol.

23

(стр.

35

—

46

) 4.,,, Et al.

Штамм-специфическое подавление Т-клеток и защитный иммунитет у пациентов с хронической инфекцией вируса гепатита С

,

J Virol

,

2005

, vol.

79

(стр.

6976

—

83

) 5., , , и другие.

Добровольные доноры крови с антителами к вирусу гепатита С: клинические, биохимические, вирусологические и гистологические особенности. Группа по изучению гепатита C

,

Ann Intern Med

,

1995

, vol.

123

(стр.

330

—

7

) 6.,,, Et al.

Оккультная инфекция вирусом гепатита С у пациентов, у которых этиология стойких отклонений от нормы результатов функциональных тестов печени неизвестна

,

J Infect Dis

,

2004

, vol.

189

(стр.

7

—

14

) 7.,,,,,.

Персистенция вируса гепатита С после спонтанного или вызванного лечением разрешения гепатита С

,

J Virol

,

2004

, vol.

78

(стр.

5867

—

74

) 8.,,, Et al.

Доказательства персистенции вируса у пациентов с положительным результатом теста на антитела к вирусу гепатита С и нормальным уровнем аланинаминотрансферазы

,

J Infect Dis

,

2005

, vol.

191

(стр.

1730

—

3

) 9.,,, Et al.

Персистенция вируса гепатита С у пациентов, успешно пролеченных от хронического гепатита С

,

Hepatology

,

2005

, vol.

41

(стр.

106

—

14

) 10.,,, Et al.

Печеночная РНК HCV до и после лечения только интерфероном или в сочетании с рибавирином

,

Hepatology

,

2002

, vol.

35

(стр.

688

—

93

) 11..

Классификация хронических вирусных гепатитов: необходимость переоценки

,

J Hepatol

,

1991

, vol.

13

(стр.

372

—

4

) 12.,.

Как избежать ложноположительных результатов с помощью ПЦР

,

Nature

,

1989

, vol.

339

(стр.

237

—

8

) 13.,,,,.

Интерфейс окна ClustalX: гибкие стратегии для множественного выравнивания последовательностей с помощью инструментов анализа качества

,

Nucleic Acids Res

,

1997

, vol.

25

(стр.

4876

—

82

) 14.,,,.

MEGA2: программное обеспечение для анализа молекулярной эволюционной генетики

,

Bioinformatics

,

2001

, vol.

17

(стр.

1244

—

5

) 15.,,,,.

Влияние отложенного замораживания биопсий печени на обнаружение цепей РНК вируса гепатита С

,

J Hepatol

,

2000

, vol.

32

(стр.

1019

—

25

) 16.,,,,.

Повторное появление вируса гепатита С через 8,5 лет у пациента с гипогаммаглобулинемией: доказательства скрытого вирусного резервуара

,

J Infect Dis

,

2005

, vol.

192

(стр.

1088

—

92

)

© 2006 Американское общество инфекционных болезней

Использование теста на авидность IgG к вирусу гепатита С (ВГС) для выявления недавней инфекции ВГС

РЕЗЮМЕ

Не существует надежного и простого диагностического маркера для диагностики недавней инфекции вируса гепатита С (ВГС).Было показано, что авидность специфических антител IgG низкая при первичной вирусной инфекции и со временем увеличивается. Мы сообщаем о разработке теста на авидность вируса гепатита С на основе имеющегося в продаже теста. Панель из 117 сывороток сначала исследовали на авидность IgG. В него вошли образцы пациентов с недавними (группа 1, n = 14), хроническими (группа 2, n = 70) и вылеченными (группа 3, n = 33) инфекциями ВГС. Значения индекса авидности (AI), наблюдаемые у недавно инфицированных пациентов, были значительно ниже (12.0% ± 9,2% [среднее ± стандартное отклонение]), чем у хронических носителей (83,1% ± 15,2%). Используя порог в 43,0%, этот анализ различал группы 1 и 2 с очень высокой чувствительностью (98%) и специфичностью (100%). Для группы 3 наблюдалось более широкое распределение значений AI (54,8% ± 27,3%), что позволяет предположить, что этот индекс не будет полезен для пациентов с отрицательной реакцией на РНК HCV. Слепая проверка теста была проведена с панелью из 36 образцов сыворотки 17 сероконвертеров HCV. Описанный здесь анализ является полезным инструментом для отличия недавней инфекции от хронической у пациентов с вирусом гепатита С.

Вирус гепатита С (ВГС) может передаваться или передаваться через кровь. Внутривенное употребление наркотиков стало основным механизмом передачи ВГС в западных странах (5). Пациенты с острой инфекцией ВГС обычно протекают бессимптомно. У пациентов с симптомами может проявляться желтуха, но чаще они жалуются на усталость, тошноту, боль в животе или симптомы гриппа. В среднем у 30% пациентов с острым гепатитом С наблюдается спонтанный вирусный клиренс в течение первых 3 месяцев после клинического начала заболевания (15).Следует учитывать хроническое заболевание, если виремия сохраняется более 6 месяцев. Хронический гепатит С также обычно протекает бессимптомно в течение длительного периода времени. В большинстве случаев это приводит к случайному диагнозу на поздней стадии заболевания.

В настоящее время не существует надежного и простого диагностического маркера для диагностики недавней инфекции вирусом гепатита С. Повышение уровня аминотрансферазы в сыворотке может указывать на недавнюю инфекцию, но также наблюдается в фазах обострения хронического гепатита С.Они также могут возникать из-за других острых заболеваний, например, вызванного алкоголем гепатита. Специфические ответы IgM на HCV не служат полезными маркерами при диагностике недавнего гепатита C, потому что IgM могут присутствовать на аналогичных уровнях как при недавнем, так и при хроническом заболевании (14, 20). Сероконверсия ВГС остается единственным полезным маркером недавней инфекции ВГС.

Точная оценка заболеваемости ВГС может быть полезна для целевых мероприятий среди групп высокого риска, но это серьезная проблема для эпидемиологов.Авидность антитела может быть ранним и надежным маркером недавней вирусной инфекции. Авидность постепенно увеличивается со временем после воздействия иммуногена из-за быстрых мутаций в ДНК, кодирующей вариабельную часть антитела (8, 19). Антитела низкой авидности обычно указывают на недавнюю инфекцию. Тесты авидности были разработаны для многих вирусных инфекций (вирус краснухи, цитомегаловирус, вирус ветряной оспы и ВИЧ-1) (2, 6, 7, 10, 16). Коммерческие иммуноанализы для обнаружения антител к HCV были адаптированы для проверки авидности.Они подтвердили, что авидность к HCV увеличивается со временем после первичной инфекции (3, 11, 17). Однако ограниченная оценка таких анализов на небольших популяциях препятствовала их разработке для использования в клинической практике. Совсем недавно разработка «собственного» анализа авидности IgG к HCV с использованием комбинации целевых антигенов была подтверждена с помощью панелей сероконверсии и образцов от хронически инфицированных лиц (12).

Здесь мы сообщаем о разработке анализа авидности вируса гепатита C, основанного на коммерчески доступном иммуноферментном анализе третьего поколения (ELISA).Тест оценивался с использованием панели установленных недавних и хронических инфекций ВГС. Также обсуждаются полезность и клиническое значение индекса авидности против ВГС (AI).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Популяция исследования. Протестированные образцы сыворотки были разделены на четыре группы: группы 1–3, обозначенные как обучающая выборка, и четвертая группа, проверочная выборка. Валидационная выборка позволила проверить параметры, оцененные с помощью обучающей выборки.

Для теста авидности мы исследовали три панели сывороток: сыворотки группы 1 были от пациентов с недавней первичной инфекцией HCV, группа 2 была от пациентов с хронической инфекцией HCV, а группа 3 была от пациентов с разрешенной инфекцией HCV (Таблица 1) .Группа 1 состояла из первых антител к HCV сыворотки от 14 пациентов с недавней первичной инфекцией HCV. В 10 случаях наблюдалась сероконверсия против HCV, и задержка между последним отрицательным и первым положительным определением антител к HCV никогда не превышала 6 месяцев. В других случаях (случаи с T11 по T14) первый положительный образец на ВГС был получен вблизи пика аланинаминотрансферазы (АЛТ) (> 1000 МЕ / мл) (за 3 недели до пика АЛТ и через 4 недели после). . Глядя на последовательные образцы, можно увидеть увеличение интенсивности профиля иммуноблоттинга (RIBA HCV 3.0 [Chiron Corporation, CA]) может подтвердить недавнее заражение (таблица 2). Последовательные сыворотки ( n = 39) от пяти из этих нелеченных и иммунокомпетентных пациентов (образцы T1, T2, T3, T13 и T14) анализировали на изменения авидности IgG к HCV с течением времени. Образцы группы 2 были от 70 пациентов с хронической инфекцией ВГС, которые были положительными по анти-ВГС IgG и РНК ВГС в течение более 6 месяцев. Образцы группы 3 были от 33 человек, положительных на IgG к HCV, но отрицательных на РНК HCV в сыворотке. Пациенты группы 2 или 3 в анамнезе не получали противовирусную терапию.

ТАБЛИЦА 1.

Исходные характеристики обучающих и проверочных образцов

ТАБЛИЦА 2.

Эпидемиологические и биологические характеристики пациентов, недавно инфицированных ВГС (группа 1)

Слепая проверка теста была проведена с панелью из 36 образцов сыворотки из 17 Сероконвертеры ВГС (от V1 до V17) предоставлены Французским национальным институтом переливания крови (INTS; Париж, Франция) (таблица 1). Все эти образцы были взяты у пациентов, которые регулярно проходили гемодиализ; Таким образом, можно было точно определить дату их сероконверсии.Все образцы дали положительный результат на РНК HCV. Для 29 образцов сыворотки время с момента последнего отрицательного результата на ВГС составило менее 6 месяцев. Семь других образцов показали более длительное время по сравнению с последним отрицательным результатом на ВГС: 6,1 месяца, 14 месяцев, 16 месяцев, 18 месяцев, 27 месяцев, 44 месяца и 85 месяцев.

IgG к HCV тестировали с помощью тест-системы ELISA на HCV 3.0 (Ortho-Clinical Diagnostics Inc., Johnson and Johnson Company, NJ) и подтвердили с помощью иммуноблоттинга RIBA HCV 3.0. РНК HCV выявляли с помощью набора для обнаружения вируса Amplicor 2.0 (Roche Diagnostics Corporation, Нью-Джерси) или Abbott RealTime HCV (Abbott Molecular Inc., Иллинойс).

Измерение авидности IgG к HCV. Мы использовали реактивы и микропланшеты из тест-системы Ortho HCV 3.0 ELISA. Образцы сыворотки были предварительно разведены (10 мкл в 100 мкл разбавителя образцов из набора). Затем 20 мкл разбавленных образцов и 200 мкл разбавителя для образцов инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C.

Каждый образец загружали в две лунки. Образец аспирировали, две лунки заполняли 200 мкл промывочного буфера с 6 М мочевиной или без нее и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре.Два контрольных образца, один для недавней первичной инфекции HCV (собранный через 45 дней после пика ALT) и один от пациента с хронической инфекцией, были включены в каждый анализ.

AI определяли как отношение оптической плотности после инкубации с мочевиной к оптической плотности после инкубации без мочевины и выражали в процентах.

Для значений оптической плотности от 2,0 до 3,5 определение AI вычислялось напрямую, как описано выше. Для значений выше насыщения (поглощение> 3,5) образец разбавляли 1: 4 стерильной водой перед определением AI.Образцы с низкими значениями оптической плотности (<2,0) систематически повторно тестировались без разбавления для более надежного определения AI. Мы выбрали концентрацию мочевины (6 M) и продолжительность контакта (30 минут) в предварительном тесте, чтобы определить, какие параметры позволяют наиболее точно идентифицировать недавние и хронические инфекции.

Для оценки вариабельности анализа были оценены коэффициенты вариации (CV) внутри и между анализами путем тестирования трех сывороток с разными значениями AI, т.е.е., высокий (90%), средний (65%) и низкий (20%). Было получено пятнадцать повторов для определения вариации внутри анализа и 10 — для вариации между анализами.

Статистический анализ. Мы использовали критерий Краскела-Уоллиса, непараметрический аналог однофакторного дисперсионного анализа, для сравнения индексов авидности выборок из групп 1, 2 и 3. Затем использовали U-критерий Манна-Уитни. сравнить индексы авидности между двумя группами. Все тесты были двусторонними, и значение P и было ниже 0.05 считались статистически значимыми. Для групп 1 и 2 дискриминантная способность индекса авидности была проанализирована с использованием кривых рабочей характеристики приемника (ROC). Рассчитывалась площадь под кривыми ROC. Мы определили оптимальные значения с точки зрения как чувствительности, так и специфичности, определив точку пересечения двух кривых. Линейная регрессия с двумя наклонами использовалась, чтобы показать эволюцию индекса авидности во времени для 5 пациентов из группы 1.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Вариабельность анализа.Средние коэффициенты вариации внутри анализа составили 4,8% для высоких значений AI, 5,0% для промежуточных значений и 6,6% для низких значений. Средние межисследовательские CV для высоких, промежуточных и низких значений AI составили 4,0%, 5,4% и 13,1% соответственно.

Индекс авидности IgG к HCV для обучающей выборки. В целом, средние значения AI значительно различались между тремя группами пациентов ( P <0,0001) (рис. 1). Среднее значение AI ± стандартное отклонение (SD) было значительно ниже для пациентов с недавней инфекцией ВГС (группа 1) (12.0% ± 9,2%), чем у пациентов с хронической инфекцией ВГС (группа 2) (83,1% ± 15,2%) ( P <0,0001). Значения AI были промежуточными у пациентов с разрешенной инфекцией (группа 3) (54,8% ± 27,3%). В этой группе пациентов, у которых инфекция ВГС исчезла спонтанно, было более широкое распределение значений AI, что позволяет предположить, что этот индекс менее полезен для пациентов, отрицательных по РНК ВГС.

РИС. 1.

значений AI IgG к HCV для обучающей выборки. Группа 1 (недавняя первичная инфекция HCV; n = 14), группа 2 (хроническая инфекция HCV; n = 70) и группа 3 (разрешенная инфекция HCV; n = 33).Данные для 3 групп были описаны с помощью коробчатых диаграмм (медианное значение и межквартильный размах). Для каждой группы значения AI, соответствующие медиане, минимуму, максимуму, а также 1-й и 3-й квартили, указаны в скобках.

Эффективность анализа для различения пациентов с недавней инфекцией и пациентов с хронической инфекцией была проанализирована для групп 1 и 2 с помощью анализа кривой ROC. Используя порог в 43%, чувствительность и специфичность анализа достигли 98% и 100% соответственно.Площадь под кривыми ROC равна 0,99. Все образцы из группы 1 имели значения AI ниже этого порога, тогда как 69 из 70 образцов из группы 2 имели значения AI выше порога.

Информация о датах пика АЛТ была доступна для пяти пациентов в группе 1 (пациенты Т1, Т2, Т3, Т13, Т14). AI увеличивался со временем в течение первых 20 месяцев ( r ² = 0,862 [95% доверительный интервал, 0,712–0,937; P <0,0001]) (рис. 2 и 3).

РИС. 2.

Изменения значений AI IgG к HCV с течением времени для пяти пациентов с недавней первичной инфекцией HCV (группа 1). Показана эволюция AI для пациентов T1, T2, T3, T13 и T14. Период наблюдения (50 месяцев) выражается в месяцах после пика АЛТ. Порог в 43% обозначен пунктирной линией.

РИС. 3.

Увеличение значений AI IgG к HCV с течением времени после пика ALT, показано для пяти пациентов из группы 1 (недавняя первичная инфекция). Показаны результаты линейной регрессии с двумя наклонами.Порог в 43% обозначен пунктирной линией.

Anti-HCV IgG AI для проверочного образца. Ранняя сероконверсия наблюдалась для 29 сывороток из проверочного образца. Эти сыворотки были взяты у пациентов в течение 6 месяцев после получения последней анти-HCV-отрицательной сыворотки. Среднее значение AI ± SD составило 16,4% ± 16,3%. Два образца имели значения AI выше 43% (чувствительность 93%). Для образцов с задержкой более 6 месяцев между последним отрицательным анти-HCV и первым положительным определением анти-HCV (семь сывороток) среднее значение AI ± SD составило 73% ± 16.1%; все эти сыворотки имели AI выше 43% (специфичность, 100%) (рис. 4). Мы смогли показать изменения AI с течением времени для пяти пациентов (пациенты от V1 до V5) с доступными последовательными образцами (рис. 5).

РИС. 4. Значения AI

Anti-HCV IgG для пациента из проверочной пробы. Период наблюдения выражается в месяцах после последнего отрицательного результата по анти-ВГС. Порог в 43% обозначен пунктирной линией.

РИС. 5.

Изменения значений AI IgG к HCV с течением времени для пяти пациентов из проверочной выборки.Период наблюдения выражается в месяцах после последнего отрицательного результата по IgG к HCV. Порог в 43% обозначен пунктирной линией.

ОБСУЖДЕНИЕ

Отличие недавней инфекции ВГС от хронической может быть полезно в различных контекстах. Определение того, соответствует ли недавно обнаруженная виремия у человека ранней фазе или хронической инфекции, может позволить улучшить ведение пациента. На уровне популяции различение недавно инфицированных и хронически инфицированных пациентов может позволить оценить заболеваемость ВГС с помощью серологических обследований.

Не существует надежных одноразовых тестов для выявления недавних инфекций ВГС. Рекомбинантный иммуноблоттинг на последовательных образцах может указывать на недавнюю инфекцию, когда наблюдается увеличение либо интенсивности, либо количества реактивных антигенов, но необходимы как минимум два образца.

Здесь мы описываем модификацию коммерческого анализа для измерения аффинности антител к ВГС. Этот анализ основан на лечении мочевиной, которая разрушает слабый комплекс антиген-антитело.Индекс авидности определяли путем сравнения результатов ELISA для сывороток, обработанных мочевиной и без нее. Сообщалось о нескольких адаптациях коммерческих иммуноферментных анализов для определения авидности IgG к HCV. Во-первых, Ward et al. сообщили об адаптации ELISA второго поколения против HCV (17). В более поздней работе Coppola et al. использовали тот же ИФА третьего поколения, что и мы (тест-система ИФА HCV 3.0 [Орто-Клиническая Диагностика]) (3).

В обучающей выборке мы наблюдали рост AI с течением времени в течение первых 20 месяцев после пика ALT, за которым следовала фаза плато, в которой значения AI оставались стабильными (рис.3). Максимум AI был достигнут через 6 и 7 месяцев соответственно для пациентов T3 и T2. У пациента T13 подъем был медленнее: максимум был достигнут через 32 месяца. Канно и Казуяма сообщили, что максимальное значение AI наблюдалось в среднем через 25 месяцев у нелеченных пациентов (11). Более быстрый рост значений AI наблюдался Coppola et al. Через 16-20 дней после появления симптомов среднее значение AI уже составляло 65% у 27 пациентов с недавней инфекцией ВГС (4). Однако эти данные не сопоставимы с нашими результатами, поскольку использовался другой денатурирующий агент (гуанидин, 1 М).

В нашем исследовании субъекты были определены как «недавно инфицированные», если в течение последних 6 месяцев произошла сероконверсия к HCV. Они были определены как «хронические носители», когда антитела против HCV и РНК HCV выявлялись в течение более 6 месяцев. Значения AI, наблюдаемые у недавно инфицированных пациентов (группа 1) в обучающей выборке, были значительно ниже, чем у хронических носителей (группа 2). Используя порог в 43%, этот анализ различал эти два болезненных состояния с очень высокой чувствительностью (98%) и специфичностью (100%).Поскольку небольшая обучающая выборка недавних инфекций (группа 1) была ограничением этого исследования, предварительные результаты были подтверждены на втором этапе исследования с использованием валидационной выборки, которая была протестирована вслепую. Этот образец для валидации состоял из 36 сывороток от 17 пациентов с виремией с предполагаемой датой сероконверсии. Только в двух из 29 образцов, собранных в течение 6 месяцев после последнего отрицательного результата на ВГС, значение AI превышало 43,0%.

В первом случае мы наблюдали очень быстрый рост индекса авидности, всего с 4% через 2 месяца до 47.0% через 3,6 месяца. Во втором случае AI был ниже порогового значения на 0,7 месяца (41%), но достиг 68,0% через 3,9 месяца. Значения AI восьми образцов, собранных после шестого месяца, были выше порогового значения.

Точно установлено, что от 20 до 30% пациентов, подвергшихся воздействию ВГС, спонтанно избавляются от вируса. Их реактивность против HCV затем постепенно снижается и может привести к серореверсии (13). Мы рассмотрели 33 образца от пациентов с разрешенной инфекцией, у которых был отрицательный результат на РНК HCV и положительный результат на антитела к HCV.Значения AI варьировали от 13% до 98% у этих пациентов (среднее значение 54,8%). Из 33 исследованных образцов 13 имели значения AI ниже 43,0%, что демонстрирует перекрытие между значениями, соответствующими значениям, наблюдаемым сразу после заражения, и значениям, наблюдаемым у пациентов с разрешенной инфекцией. Дата последнего отрицательного результата теста на ВГС не была доступна для этой группы пациентов, поэтому мы не могли определить, вылечили ли они свою инфекцию недавно или давно. Такой большой разброс значений AI согласуется с предыдущими результатами, полученными Климашевской и др.(12). Изучению заболеваемости ВГС на уровне страны или среди групп высокого риска будет способствовать наличие метода, позволяющего датировать инфекцию. Описанный здесь анализ может применяться у пациентов с виремией, но не может быть рекомендован для пациентов без вируса до тех пор, пока не будет установлена ​​лучшая характеристика.

Было доказано, что медикаментозное лечение очень эффективно на ранних стадиях инфицирования, что подчеркивает особую важность выявления недавней первичной инфекции ВГС у отдельных пациентов.Кроме того, несколько исследований продемонстрировали эффективность 12- или 24-недельного курса монотерапии пегилированным интерфероном (ПЕГ-ИФН) у пациентов с острым гепатитом С, когда терапия начинается в течение 3 месяцев (1, 9, 18).

Определение ИИ также может помочь врачу определить период воздействия ВГС, что дает представление о предполагаемом пути передачи.

СНОСКИ

• Получено 15 февраля 2010 г.
• Возвращено на доработку 26 марта 2010 г.
• Принято 30 июня 2010 г.

• Авторское право © 2010 Американское общество микробиологии

ССЫЛКИ

1. 1.

   Каллери, Г., Г. Карити, Ф. Гайоттино, Ф. Г. Де Роса, О. . Bargiacchi, S. Audagnotto, S. Quaglia, T. De Blasi, P. Romano, A. Traverso, G. Leo, R. Carbone, B. Del Mastro, M. Tinelle, P. Caramello, and G. Di Perri .
   2007. Краткий курс пегилированного интерферона-альфа при остром гепатите HCV. J. Viral Hepat.14
   :
   116-121.

2. 2.↵

   Поверенный Д., Б. Т. Колвин и К. М. О’Тул.
   1993. 7-летний анализ антител к Gag (p17 и p24) у ВИЧ-1-серопозитивных пациентов с гемофилией: титр иммуноглобулина G и авидность являются ранними предикторами клинического течения. СПИД
   7
   :
   S87-S90.

3. 3.↵

   Коппола, Н., Р. Писапиа, К. Маррокко, С. Мартини, Л. М. Ватерио, В. Мессина, Г. Тонзилло, К. Саннелли, П.Филиппини, Ф. Пиччинино и Э. Саньелли.
   2007. Индекс авидности IgG к HCV при остром гепатите C. J. Clin. Virol.
   40
   :
   110-115.

4. 4.↵

   Коппола, Н., Р. Писапиа, Г. Тонзилло, А. Масиелло, С. Мартини, М. Пизатуро, В. Мессина, К. Саннелли, М. Мачера, Г. Синьориелло , и Э. Саннелли.
   2009. Улучшение этиологической диагностики острого гепатита С: диагностический протокол, основанный на титре анти-HCV-IgM и индексе авидности IgG. Дж.Clin. Virol.
   46
   :
   222-229.

5. 5.↵

   Esteban, J. I., S. Sauleda, and J. Quer.
   2008. Меняющаяся эпидемиология вирусной инфекции гепатита С в Европе. J. Hepatol.
   48
   :
   148-162.

6. 6.↵

   Grangeot-Keros, L., M. J. Mayaux, P. Lebon, F. Freymuth, G. Eugene, R. Stricker и E. Dussaix.
   1997. Значение индекса авидности IgG к цитомегаловирусу (ЦМВ) для диагностики первичной ЦМВ-инфекции у беременных.J. Infect. Дис.
   175
   :
   944-946.

7. 7.↵

   Hedman, K., and S.A. Rousseau.
   1989. Измерение авидности специфических IgG для проверки недавно перенесенной первичной краснухи. J. Med. Virol.
   27
   :
   288-292.

8. 8.↵

   Иноуэ, С., А. Хасегава, С. Мацуно и С. Катов.
   1984. Изменения авидности антител после вирусных инфекций: обнаружение с помощью иммуносорбентного анализа, в котором используется мягкий денатурирующий белок агент.J. Clin. Microbiol.
   20
   :
   525-529.

9. 9.↵

   Jaeckel, E., M. Cornberg, H. Wedemeyer, T. Santantonio, J. Mayer, M. Zankel, G. Pastore, M. Dietrich, C. Trautwein, MP Manns, и Немецкая группа по терапии острого гепатита С.
   2001. Лечение острого гепатита С интерфероном альфа-2b. N. Engl. J. Med.
   345
   :
   1452–1457.

10. 10.↵

    Юнкер, А. К. и П. Тилли.
    1994. Авидность антител к вирусу ветряной оспы и подклассы IgG у детей с рецидивирующей ветряной оспой.J. Med. Virol.
    43 год
    :
    119-124.

11. 11.↵

    Канно А. и Я. Казуяма.
    2002. Анализ авидности антител иммуноглобулина G для серодиагностики вирусной инфекции гепатита С. J. Med. Virol.
    68
    :
    229-233.

12. 12.↵

    Климашевская, С., А. Обриадина, Т. Уланова, Г. Бочкова, А. Бурков, А. Араужо, С. Л. Страмер, Л. Х. Тоблер, М. П. Буш и Х. А. Филдс.
    2007. Отличие острых от хронических и разрешенных инфекций, вызванных вирусом гепатита С (ВГС), путем измерения индекса авидности иммуноглобулина G против ВГС.J. Clin. Microbiol.
    45
    :
    3400-3403.

13. 13.↵

    Lanotte, P., F. Dubois, S. Le Pogam, C. Guerois, B. Fimbel, Y. Bacq, Y. Gruel, A. Goudeau и F. Barin.
    1998. Кинетика антител против вируса гепатита С может прогнозировать клиренс вируса у больных гемофилией. J. Infect. Дис.
    178
    :
    556-559.

14. 14.↵

    Papatheodoridis, G. V., J. K. Delladetsima, A. Katsoulidou, V. Sypsa, M. Albrecht, G.Мишель, А. Хатзакис и Н. К. Тассопулос.
    1997. Значение основного уровня IgM анти-HCV при хроническом гепатите C. J. Hepatol.
    27
    :
    36-41.

15. 15.↵

    Santantonio, T., J. Wiegand, and J. T. Gerlach.
    2008. Острый гепатит C: текущее состояние и нерешенные проблемы. J. Hepatol.
    49
    :
    625-633.

16. 16.↵

    Томас, Х. И., С. Уилсон, К. М. О’Тул, К. М. Листер, А. М. Саид, Р. П. Уоткинс и П.Морган-Капнер.
    1996. Дифференциальное созревание авидности антител IgG к gp41, p24 и p17 после инфицирования ВИЧ-1. Clin. Exp. Иммунол.
    103
    :
    185-191.

17. 17.↵

    Уорд, К. Н., В. Даливал, К. Л. Эшворт, Э. Дж. Клаттербак и К. Г. Тео.
    1994. Измерение авидности антител к вирусу гепатита С позволяет отличить первичные ответы антител от пассивно приобретенных антител. J. Med. Virol.
    43 год
    :
    367-372.

18. 18.↵

    Wiegand, J., P. Buggisch, W. Boecher, S. Zeuzem, CM Gelbmann, T. Berg, W. Kauffmann, B. Kallinowski, M. Cornberg, E. Jaeckel, H. Wedemeyer, MP Manns и немецкая группа по изучению острого гепатита С HEP-NET.
    2006. Ранняя монотерапия пегилированным интерфероном альфа-2b при острой инфекции гепатита C: исследование HEP-NET острого HCV-II. Гепатология
    43 год
    :
    250-256.

19. 19.↵

    Wolter, T., C. Gassmann, V. Vetter и G. Bauer.
    1997 г.Определение авидности: использование основного иммунологического механизма позволяет улучшить серодиагностику инфекций. Clin. Лаборатория.
    43 год
    :
    125-135.

20. 20.↵

    Заайер, Х. Л., Л. Т. Миммс, Х. Т. Кайперс, Х. В. Рисинк, К. Л. ван дер Поэль, С. Таскар и П. Н. Лели.
    1993. Вариабельность ответа IgM при инфицировании вирусом гепатита С. J. Med. Virol.
    40
    :
    184–187.

Характеристики пациентов с положительными антителами к вирусу гепатита С в больнице в Дуале, Камерун

Основные моменты

•

Существует острая необходимость в реализации программ по повышению осведомленности, диагностике и диагностике. и лечение инфекции вируса гепатита С (ВГС) в Камеруне.

•

Участники с положительными антителами к вирусу гепатита С были изучены в больнице общего профиля Дуала

•

Почти 40% не имели симптомов.

•

Переливание крови, хирургическое вмешательство и скарификация в анамнезе остаются потенциальными факторами риска.

•

Клиническое обследование и исходная биохимия крови очень полезны при первоначальной оценке.

•

Почти у половины пациентов был выявлен выраженный фиброз печени, METAVIR F3 / F4.

•

Генотип 1 был наиболее распространенным.

Резюме

Введение

Инфекция, вызванная вирусом гепатита С (ВГС), является серьезной проблемой общественного здравоохранения, особенно в условиях ограниченных ресурсов, где у многих пациентов диагностируется на стадии осложнений. В Камеруне, где ВГС является эндемическим заболеванием, мало что известно о клиническом, биологическом и вирусологическом профиле пациентов, инфицированных ВГС.

Методы

Был проведен обзор клинических случаев всех пациентов, положительных на антитела против ВГС, диагностированных в амбулаторной гастроэнтерологической клинике больницы общего профиля Дуала, Камерун, с января 2008 года по декабрь 2014 года.

Результаты

Всего в исследование были включены 524 пациента, 53% из которых составляли женщины. Средний возраст составил 56 ± 13 лет. Переливание крови в анамнезе и история скарификации были наиболее частыми потенциальными факторами риска заражения ВГС, что было обнаружено у 16% и 13% исследуемой популяции, соответственно. В настоящее время употребление алкоголя было обнаружено у 24% пациентов. Коинфекция вирусом гепатита В и ВИЧ составила 3,6% и 3,4% соответственно. Среди пациентов 39% не жаловались на диагноз; только 16% были диагностированы при плановом медицинском осмотре.Клинически наиболее частой находкой была гепатомегалия (26,1% пациентов). Трансаминазы выше верхней границы нормы были обнаружены у 55,2% пациентов, особенно в возрасте> 57 лет ( p = 0,001). Генотипы 1 (43,95%), 2 (25,11%) и 4 (28,25%) были наиболее распространенными. Цирроз печени присутствовал у 11% пациентов и гепатоцеллюлярная карцинома у 4%, последняя чаще встречается у мужчин ( p <0,001) и у лиц старше 57 лет ( p = 0,03).

Выводы

В гастроэнтерологической клинике больницы общего профиля Дуала, в то время как почти 40% пациентов, у которых были антитела к вирусу гепатита С, не имели симптомов и были диагностированы случайно, у некоторых уже наблюдались осложнения, в том числе цирроз и гепатоцеллюлярная карцинома.Существует острая необходимость в реализации программ по повышению осведомленности и диагностике инфекции ВГС, а также в разработке обширных и целенаправленных руководств по лечению ВГС для улучшения ведения этих пациентов в Камеруне.

Ключевые слова

Вирус гепатита С

Клинический

Вирологический

Гистологический

Генотип

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

Просмотреть аннотацию

Copyright © 2016 Авторы. Опубликовано Elsevier Ltd.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Тест на вирус гепатита С — информация, подготовка, результаты тестов и многое другое

что такое гепатит с?

Гепатит С — инфекционное заболевание печени, вызываемое вирусом гепатита С (ВГС). На начальной стадии инфекции симптомы заболевания слабо выражены или отсутствуют, а по мере того, как болезнь переходит в хроническую инфекцию, симптомы становятся заметными, а острые симптомы отмечаются примерно в 15% v случаев.

Инфекция вирусом гепатита С может привести к заболеванию печени, а иногда и к циррозу, а у людей, страдающих циррозом, могут развиться такие осложнения, как печень, недостаточность, рак печени и расширение кровеносных сосудов в желудке и пищеводе.

что вызывает гепатит с?

Гепатит С чаще встречается у молодых людей, и вирус гепатита С обычно передается через кровь в контакт с кровью, как в случае внутривенного употребления наркотиков, плохо стерилизованного медицинского оборудования, уколов иглой и переливания крови. Гепатит С также может передаваться от инфицированной матери ребенку во время родов. Гепатит С также передается половым путем с инфицированным человеком.

симптомы гепатита С

Во многих случаях гепатит С не проявляет никаких симптомов, в то время как в некоторых случаях гепатит С может вызывать тяжелые симптомы.Некоторые из общих симптомов гепатита C следующие:

• Желтуха
• Боль в животе
• Снижение аппетита
• Тошнота
• Усталость

Лечение гепатита С

Лечение гепатита С зависит от нескольких факторов, таких как тип заражения вирусом гепатита С. Существует шесть типов вируса гепатита С, которые называются генотипом 1, 2, 3, 4, 5 и генотипом 6. Генотип 1 считается наиболее распространенным типом вируса гепатита С.

Болезнь гепатита С в основном лечится с помощью различных лекарств, которые помогают бороться с ВГС и выводить их из организма. Стоимость лечения гепатита С в Индии варьируется из-за множества факторов, таких как тип используемого лекарства, его качество и доступность, город и т. Д.

что такое тест на гепатит с?

Тест на гепатит С — это анализ крови, который используется для обнаружения вируса гепатита С. Есть несколько типов теста на гепатит С, который используется врачами для диагностики гепатита С.Разнообразные тесты на гепатит C:

Тест на антитела к гепатиту С: Тест на антитела к гепатиту С используется врачами, чтобы установить, был ли человек поражен ВГС в любой момент его / ее жизни, путем обнаружения антител к гепатиту С в крови.

Качественный тест РНК гепатита С: также называемый ПЦР-тестом, этот тест проверяет текущую инфекцию вируса.

Количественный тест РНК гепатита С: Как следует из названия, это количественный тест, измеряющий количество вируса гепатита С в организме.Количественный тест РНК гепатита С также называется тестом на «вирусную нагрузку».

зачем вам тест на гепатит с?

Вирус гепатита С в первую очередь поражает печень, которая выполняет в организме ряд важнейших функций; и HCV убивает здоровые клетки в печени, вызывая повреждение и разрушение печени, тем самым препятствуя многим жизненно важным функциям организма. Таким образом, чрезвычайно важно пройти тестирование на вирус гепатита С, поскольку чем раньше будет обнаружен ВГС, тем быстрее начнется лечение, чтобы устранить и убить вирус.

Процедура теста на гепатит С

Тест на антитела к гепатиту С — это анализ крови, который определяет количество антител в крови. Для теста требуется простой образец крови, который обычно берется из вены предплечья. Кроме того, никаких особых требований не требуется.

нормальный диапазон гепатита С

Нормальный диапазон гепатита С в анализе крови на гепатит С отсутствует, так как отчеты о тестах на гепатит читаются как положительные или отрицательные.

чем мы можем помочь?

Для проведения теста на гепатит С требуется только основной образец крови, который также можно получить в справочной службе для проведения теста; В этом вам помогут наши высоконадежные и хорошо зарекомендовавшие себя службы здравоохранения на дому, в которых вы можете не только пройти домашний тест на гепатит С, но и получить консультацию врача дома. Таким образом, вам не нужно беспокоиться о том, чтобы пройти обследование, собрать отчеты о тестах на гепатит и затем бежать к врачам. Поскольку мы разработали наши услуги по уходу на дому, заботясь о комфорте пациентов.Итак, если вам нужно пройти домашний тест на гепатит С, пройти курс лечения гепатита С на дому или получить какие-либо другие медицинские услуги на дому, просто позвоните нам, и мы будем там к вашим услугам.

Понимание результатов анализа вируса гепатита С (AHCV) — Всего

Тесты показаны в таблице ниже.В целом, если тест на антитела к ВГС положительный, значит, кто-то, вероятно, когда-то был инфицирован гепатитом С.

‘* Контрольный диапазон — это набор значений, который помогает медицинскому работнику интерпретировать результаты медицинского теста. Это может варьироваться в зависимости от возраста, пола и других факторов. Референсные диапазоны могут также различаться в разных лабораториях по величине и единицам измерения в зависимости от используемых инструментов и метода установления референсных диапазонов ’

Диагностическая точность тестов для выявления антител к гепатиту С: метаанализ и обзор литературы | BMC Infectious Diseases

Выбор исследования

Всего было идентифицировано 11 163 ссылок и удалено 6163 дубликатов.Была исследована каждая из 5000 уникальных цитат. Всего в окончательный анализ было включено 52 исследования (рис. 1) [8, 16, 19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32, 33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56,57, 58,59,60,61,62,63,64,65,66,67,68]. Из 52 исследований 32 оценивали точность 30 различных диагностических тестов (RDT) [19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33, 34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50], из которых 5 оценивали RDT по сравнению с одной только EIA [25, 26, 31 , 34, 49], 13 сравнивали результаты БДТ с NAT или иммуноблотом [19, 20, 21, 22, 27, 29, 32, 37, 42, 43, 45, 47, 50], а 14 фокусировались на оценке БДТ путем сравнения с результатами ИФА, иммуноблота или NAT [23,24,25,26, 30, 34, 35, 38, 39, 41, 44, 48, 49, 51].Одиннадцать исследований оценивали диагностическую точность ДЭТ ротовой жидкости [22, 24, 27, 29, 33, 34, 43, 44, 45, 47, 52].

Рис. 1

Блок-схема PRISMA, показывающая выбор исследований, изучающих диагностическую точность тестов на антитела к ВГС

Недостаточно данных для проведения субанализа на основе коинфекции ВИЧ или других сопутствующих инфекций.

Характеристики исследования

Из 52 включенных исследований девять были опубликованы до 2000 года [37, 38, 42, 53,54,55,56,57,58], 12 исследований сообщили об оценке с использованием образцов ротовой жидкости, и 34 исследования оценивались POC тесты.Из 52 исследований была оценена 41 торговая марка наборов для тестирования (Таблица 1).

Оценка качества исследований

Во всех исследованиях использовался кросс-секционный дизайн или дизайн случай-контроль. Риск систематической ошибки при выборе пациентов, индексном тесте или эталонном стандарте оценивался с помощью QUADAS-2 (таблица 2). Среди включенных исследований 25 имели по крайней мере одну категорию, относящуюся к группе высокого риска [19, 22, 25, 26, 27, 28, 30, 31, 34, 36, 37, 38, 39, 41, 45, 46, 47. , 48,49,50, 53, 55, 56, 58,59,60,61,62].Риск предвзятости при отборе пациентов обычно возникает из-за плохого описания отбора пациентов и клинического сценария. Смещение в индексном тесте было в первую очередь из-за отсутствия сообщений о слепоте при чтении результатов теста. Смещение в эталонном стандарте было связано с использованием нескольких эталонных стандартов (EIA, NAT и / или иммуноблоттинг). Предвзятость в потоке и сроках была вызвана, прежде всего, отсутствием представленных деталей.

Таблица 2 Оценка качества с помощью QUADAS-2 включенных исследований

Диагностическая точность

Общая клиническая эффективность анализов

В 52 включенных исследованиях было получено 127 точек данных из 52 273 уникальных измерений.Некоторые исследования внесли дополнительные точки данных, сравнивая точность двух или более тестов, сообщая данные из нескольких исследовательских центров или сообщая о точности теста более чем для одного типа образцов. Размеры выборки включенных исследований варьировались от 37 до 17 894 человек. Чувствительность включенных исследований составляла от 22 до 100%, а специфичность — от 77 до 100%. Общая объединенная чувствительность и специфичность для всех тестов составляли 97% (95% ДИ: 97–98%) и 99% (95% ДИ: 98–99%) соответственно.На рисунке 2 показаны оценки чувствительности и специфичности каждого исследования.

Рис. 2

Чувствительность и специфичность тестов на антитела к ВГС, включенных в обзор ( n = 52)

Производители и точность БДТ среди включенных исследований

В целом, 32 исследования оценили точность 30 различных БДТ (таблица 3). Наиболее часто оцениваемым тестовым набором был OraQuick ADVANCE® от OraSure Technologies.

Таблица 3 Производители и точность RDT среди включенных исследований

Объединенная точность теста для RDT по сравнению с одним только EIA

В целом, пять исследований оценивали RDT по сравнению с одним только EIA, с общей выборкой 15 943.Из пяти исследований размеры выборки варьировались от 197 до 2754, чувствительность — от 83 до 100%, а специфичность — от 99 до 100%. Объединенные чувствительность и специфичность составили 98% (95% ДИ 98% -100%) и 100% (95% ДИ 100% -100%), соответственно, в то время как гетерогенность наблюдалась во включенных исследованиях ( P <0,001) ( Таблица 3, Дополнительный файл 1).

Для трех исследований, которые были проведены в течение последних 10 лет [25, 49, 51], общий размер выборки составил 12 992 с объединенной чувствительностью и специфичностью 99% (95% ДИ 99% -100%) и 100%. (95% ДИ 100% -100%) соответственно.

Точность ДЭТ по сравнению с NAT или иммуноблотом

В целом, 13 исследований оценивали ДЭТ по сравнению с NAT или иммуноблотом [19,20,21,22, 27, 29, 32, 37, 42, 43, 45, 47, 50], с общей выборкой 7083. Среди этих исследований размеры выборки варьировались от 36 до 549, чувствительность — от 76 до 100%, а специфичность — от 77% до 100%. Объединенные чувствительность и специфичность составили 93% (95% ДИ 91-95%) и 98% (95% ДИ 98-99%), соответственно, в то время как во включенных исследованиях наблюдалась гетерогенность ( P <0.001) (таблица 3, дополнительный файл 2).

Точность теста RDT по сравнению с EIA, NAT или иммуноблотом

В целом, 14 исследований оценивали RDT со ссылкой на EIA с NAT и / или иммуноблотом [25, 26, 31, 33,34,35, 38, 39, 41, 45 , 48, 49], с общей выборкой 42 212 человек. Из 14 исследований размеры выборки варьировались от 168 до 2754, чувствительность — от 29 до 100%, а специфичность — от 90 до 100%. Объединенные чувствительность и специфичность составили 97% (95% ДИ 96% -98%) и 100% (95% ДИ 100% -100%), соответственно, в то время как во включенных исследованиях наблюдалась гетерогенность ( P <0.001) (таблица 3, дополнительный файл 3).

Объединенная точность теста для оральных образцов по сравнению с образцами крови

ИФА с использованием образцов ротовой жидкости

В целом, в 11 исследованиях сравнивалась точность ИФА с использованием образцов ротовой жидкости с образцом крови в качестве эталона с общим размером образца 12370 [22, 24, 27, 29, 33, 34, 43, 44, 45, 47, 52]. Из 12 исследований размеры выборки варьировались от 37 до 2176, чувствительность — от 72 до 100%, а специфичность — от 91 до 100%. Объединенные чувствительность и специфичность составили 94% (95% ДИ 93–96%) и 100% (95% ДИ 99–100%) соответственно.Неоднородность наблюдалась во включенных исследованиях ( P <0,001) (таблица 3, дополнительный файл 4).

Образцы крови

В целом, в 47 исследованиях для оценки использовались образцы крови с общим количеством образцов 90 008. Размеры выборки варьировались от 37 до 17 894, чувствительность — от 29 до 100%, а специфичность — от 18 до 100%. Объединенные чувствительность и специфичность составили 98% (95% ДИ 97–98%) и 98% (95% ДИ 98–98%), соответственно. Во включенных исследованиях наблюдалась неоднородность ( P <0.001) (таблица 3, рис.3).

Рис. 3

Точность объединенных тестов на антитела к ВГС для образцов крови ( n = 47 исследований)

Объединенная точность теста OraQuick по сравнению с другими брендами для пероральных наборов

OraQuick

В целом, восемь исследований сообщили о чувствительности и специфичности OraQuick (OraSure Technologies, PA, США), с общей выборкой 9024 [22, 24, 27, 33 , 34,35, 43, 45]. Размер выборки этих исследований составлял от 172 до 2183, чувствительность — от 90% до 100%, а специфичность — от 95% до 100%.Объединенные чувствительность и специфичность составили 98% (95% ДИ 97–99%) и 100% (95% ДИ 90–100%), соответственно. Неоднородность наблюдалась во включенных исследованиях ( P <0,001) (таблица 3, дополнительный файл 5).

В целом, шесть исследований сообщили о чувствительности и специфичности для других трех марок пероральных наборов [29, 43,44,45, 47, 52], с общей выборкой 6652. Размер выборки этих исследований варьировался от 37 до 1081, чувствительность варьировала от 72 до 100%, а специфичность — от 91 до 100%.Объединенные чувствительность и специфичность составили 88% (95% ДИ 84–92%) и 99% (95% ДИ 99–100%), соответственно, в то время как между включенными исследованиями наблюдалась гетерогенность ( P <0,001) ( Таблица 3, Дополнительный файл 6).

Другие результаты

Наше исследование также показало, что общая чувствительность и специфичность исследований, проведенных среди населения в целом, составляли 95% (95% ДИ 94% -96%) и 99% (95% ДИ 98% -99%) среди Группы высокого риска составляли 97% (95% ДИ 96% -98%) и 94% (95% ДИ 94% -95%), а среди пациентов больницы были 97% (95% ДИ 96% -98%) и 100%. (95% ДИ 100% -100%) соответственно.Общая чувствительность и специфичность комбинированного теста на антитела и антиген составляли 86% (95% ДИ 79% -99%) и 99% (95% ДИ: 98% -100%).

Подход GRADE (классификация рекомендаций, оценка, разработка и оценка для оценки общего качества доказательств

GRADE для RDT по сравнению с EIA

ДЭТ

HCV Ab показали сопоставимую чувствительность и специфичность по сравнению с EIA. Среди пяти исследований, оценивающих RDT по сравнению с EIA, 15 943 образцов были оценены, и наблюдался умеренный риск систематической ошибки (таблица 4), но был устойчиво высокий уровень специфичности.Поскольку единицы анализа варьировались в разных исследованиях (таблица 4), наблюдалась косвенность. Кроме того, общая сила объединенной оценки была умеренной, с объединенной чувствительностью и специфичностью 99% (95% ДИ 98% -100%) и 100% (95% ДИ 100% -100%), соответственно. При вероятности перед тестированием 5% вероятность после теста после положительного результата теста составляет 97%, а вероятность после теста после отрицательного результата теста составляет 100%.

Таблица 4 Точность объединенных тестов для различных стратегий тестирования ( n = 52 исследования) *

GRADE для пероральной БДТ по сравнению с эталоном крови

Использование пероральных БДТ Ат к HCV имело сопоставимую чувствительность и специфичность по сравнению со стандартами крови (дополнительный файл 7).В 12 исследованиях, в которых оценивалась пероральная БДТ по сравнению с эталоном крови, было проанализировано 14 547 образцов.