Арбидол как принимать: Арбидол инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Arbidol капс. 100 мг: 5, 10, 20 или 40 шт. (3331)

Арбидол в капсулах 100 мг: инструкция по применению

Содержимое капсул – смесь, содержащая гранулы и порошок от белого до белого с зеленовато-желтоватым или кремоватым оттенком цвета.

• 
  Лечение: 100 мг x 4 р/сут, 5 дней
• 
  Постконтактная профилактика: 100 мг x 1 р/сут, 10-14 дней
• 
  Сезонная профилактика: 100 мг x 2 раза в неделю, 3 недели

Скачать инструкцию

Активное вещество: Умифеновир (умифеновира гидрохлорида моногидрат (арбидол) в пересчете на умифеновира гидрохлорид) – 100 мг.

• 
  Регистрационный номер: Р N003610/01
• 
  Торговое наименование: Арбидол®
• 
  Международное непатентованное наименование: умифеновир
• 
  Лекарственная форма: капсулы

Состав на одну капсулу

Действующее вещество: умифеновира гидрохлорида моногидрат (в пересчете на умифеновира гидрохлорид) – 100 мг.

Вспомогательные вещества: ядро: крахмал картофельный – 30,14 мг, целлюлоза микрокристаллическая – 55,76 мг, кремния диоксид коллоидный (аэросил) – 2,0 мг, повидон К 25 (коллидон 25) – 10,1 мг, кальция стеарат — 2,0 мг.

Капсулы твердые желатиновые № 1:

Корпус: титана диоксид (Е 171) – 2,0000%, желатин – до 100%.

Крышечка: титана диоксид (Е 171) – 1,3333%, краситель солнечный закат желтый (Е 110) – 0,0044%, хинолиновый желтый (Е 104) – 0,9197%, желатин – до 100%.

Описание

Капсулы твердые желатиновые №1. Корпус белого цвета, крышечка желтого цвета. Содержимое капсул — смесь, содержащая гранулы и порошок от белого до белого с зеленовато-желтоватым или кремоватым оттенком цвета.

Фармакотерапевтическая группа: противовирусное средство

Код АТХ: J05AX13

Фармакологические свойства

Фармакодинамика. Противовирусное средство. Специфически подавляет in vitro вирусы гриппа А и В (Influenzavirus A, B), включая высокопатогенные подтипы A(h2N1)pdm09 и A(H5N1), а также другие вирусы — возбудители острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) (коронавирус (Сoronavirus), ассоциированный с тяжелым острым респираторным синдромом (ТОРС), риновирус (Rhinovirus), аденовирус (Adenovirus), респираторно-синцитиальный вирус (Pneumovirus) и вирус парагриппа (Paramyxovirus)). По механизму противовирусного действия относится к ингибиторам слияния (фузии), взаимодействует с гемагглютинином вируса и препятствует слиянию липидной оболочки вируса и клеточных мембран. Оказывает умеренное иммуномодулирующее действие, повышает устойчивость организма к вирусным инфекциям. Обладает интерферон-индуцирующей активностью – в исследовании на мышах индукция интерферонов отмечалась уже через 16 часов, а высокие титры интерферонов сохранялись в крови до 48 часов после введения. Стимулирует клеточные и гуморальные реакции иммунитета: повышает число лимфоцитов в крови, в особенности Т-клеток (СD3), повышает число Т-хелперов (CD4), не влияя на уровень Т-супрессоров (CD8), нормализует иммунорегуляторный индекс, стимулирует фагоцитарную функцию макрофагов и повышает число естественных киллеров (NKклеток).

Терапевтическая эффективность при вирусных инфекциях проявляется в уменьшении продолжительности и тяжести течения болезни и ее основных симптомов, а также в снижении частоты развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией, и обострений хронических бактериальных заболеваний.

При лечении гриппа или ОРВИ у взрослых пациентов в клиническом исследовании показано, что эффект препарата Арбидол® у взрослых пациентов наиболее выражен в остром периоде заболевания и проявляется сокращением сроков разрешения симптомов болезни, снижением тяжести проявлений заболевания и сокращением сроков элиминации вируса. Терапия препаратом Арбидол® приводит к более высокой частоте купирования симптомов заболевания на третьи сутки терапии по сравнению с плацебо. Через 60 ч после начала терапии разрешение всех симптомов лабораторно подтвержденного гриппа более чем в 5 раз превышает аналогичный показатель в группе плацебо.

Установлено значимое влияние препарата Арбидол® на скорость элиминации вируса гриппа, что, в частности, проявлялось уменьшением частоты выявления РНК вируса на 4е сутки.

Относится к малотоксичным препаратам (LD50 > 4 г/кг). Не оказывает какого-либо отрицательного воздействия на организм человека при пероральном применении в рекомендуемых дозах.

Фармакокинетика. Быстро абсорбируется и распределяется по органам и тканям. Максимальная концентрация в плазме крови достигается через 1,5 ч. Метаболизируется в печени. Период полувыведения равен 17-21 ч. Около 40 % выводится в неизмененном виде, в основном с желчью (38,9 %) и в незначительном количестве почками (0,12 %). В течение первых суток выводится 90 % от введенной дозы.

Показания к применению

• 
  Профилактика и лечение у взрослых и детей: грипп А и В, другие ОРВИ.
• 
  Комплексная терапия рецидивирующей герпетической инфекции.
• 
  Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений.
• 
  Комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии у детей старше 6 лет.

Противопоказания

Повышенная чувствительность к умифеновиру или любому компоненту препарата; детский возраст до 6 лет. Первый триместр беременности. Период грудного вскармливания.

С осторожностью:


Второй и третий триместры беременности

Применение при беременности и в период грудного вскармливания

В исследованиях на животных не было выявлено вредных воздействий на течение беременности, развитие эмбриона и плода, родовую деятельность и постнатальное развитие. Применение препарата Арбидол® в первом триместре беременности противопоказано. Во втором и третьем триместре беременности Арбидол® может применяться только для лечения и профилактики гриппа и в том случае, если предполагаемая польза для матери превышает потенциальный риск для плода. Соотношение польза/риск определяется лечащим врачом.

Неизвестно, проникает ли Арбидол® в грудное молоко у женщин в период лактации. При необходимости применения препарата Арбидол® следует прекратить грудное вскармливание.

Способ применения и дозы

Внутрь, до приема пищи.

Разовая доза препарата (в зависимости от возраста):

Возраст	Разовая доза
Дети с 6 до 12 лет	100 мг (1 капсула )
Дети старше 12 лет и взрослые	200 мг (2 капсулы)

Режим дозирования (в зависимости от возраста):

Показание	Схема приема препарата
У детей с 6 лет и взрослых:
Неспецифическая профилактика в период эпидемии гриппа и других ОРВИ	в разовой дозе 2 раза в неделю в течение 3-х недель
Неспецифическая профилактика при непосредственном контакте с больными гриппом и другими ОРВИ	в разовой дозе 1 раз в день в течение 10-14 дней
Лечение гриппа и других ОРВИ	в разовой дозе 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5 суток
Комплексная терапия рецидивирующей герпетической инфекции	в разовой дозе 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5-7 суток, затем разовую дозу 2 раза в неделю в течение 4-х недель
Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений	в разовой дозе за 2 суток до операции, затем на 2-е и 5-е сутки после операции
У детей с 6 лет:
Комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии	в разовой дозе 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5 суток

Применяйте препарат только согласно тем показаниям, тому способу применения и в тех дозах, которые указаны в инструкции.

Прием препарата начинают с момента появления первых симптомов заболевания гриппом и другими ОРВИ, желательно не позднее 3 суток от начала болезни.

Если после применения препарата Арбидол® в течение трех суток при лечении гриппа и других ОРВИ сохраняется выраженность симптомов заболевания, в том числе высокая температура (38 °С и более), то необходимо обратиться к врачу для оценки обоснованности приема препарата.

При лечении гриппа и ОРВИ возможна сопутствующая симптоматическая терапия, включая прием жаропонижающих препаратов, муколитических и местных сосудосуживающих средств.

Побочное действие

Препарат Арбидол® относится к малотоксичным препаратам и обычно хорошо переносится.

Побочные эффекты возникают редко, обычно слабо или умеренно выражены и носят преходящий характер.

Частота возникновения нежелательных лекарственных реакций определена в соответствии с классификацией ВОЗ: очень часто (с частотой более 1/10), часто (с частотой не менее 1/100, но менее 1/10), нечасто (с частотой не менее 1/1000, но менее 1/100), редко (с частотой не менее 1/10000, но менее 1/1000), очень редко (с частотой менее 1/10000), частота неизвестна (не может быть установлена по имеющимся данным).

Нарушения со стороны иммунной системы: редко – аллергические реакции.

Если любые из указанных в инструкции побочных эффектов усугубляются, или Вы заметили любые другие побочные эффекты, не указанные в инструкции, сообщите об этом врачу.

Передозировка


Не отмечена.

Взаимодействие с другими лекарственными препаратами

При назначении с другими лекарственными средствами отрицательных эффектов отмечено не было.

Специальные клинические исследования, посвященные изучению взаимодействий препарата Арбидол® с другими лекарственными средствами, не проводились.

Сведения о наличии нежелательного взаимодействия с жаропонижающими, муколитическими и местными сосудосуживающими лекарственными средствами в условиях клинического исследования не были выявлены.

Особые указания

Необходимо соблюдать рекомендованную в инструкции схему и длительность приема препарата. В случае пропуска приема одной дозы препарата, пропущенную дозу следует принять как можно раньше и продолжить курс приема препарата по начатой схеме. Если после применения препарата Арбидол® в течение трех суток при лечении гриппа и других ОРВИ сохраняется выраженность симптомов заболевания, в том числе высокая температура (38 °С и более), то необходимо обратиться к врачу для оценки обоснованности приема препарата.

Влияние на способность управлять транспортными средствами и механизмами Не проявляет центральной нейротропной активности и может применяться в медицинской практике у лиц различных профессий, в т.ч. требующих повышенного внимания и координации движений (водители транспорта, операторы и т.д.).

Форма выпуска

Капсулы, 100 мг.

По 5 или 10 капсул в контурную ячейковую упаковку. 1, 2 или 4 контурные упаковки с инструкцией по применению в пачку из картона.

Условия хранения

Хранить при температуре не выше 25^оС.

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности

3 года.

Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке.

Условия отпуска

Отпускают без рецепта.

Владелец регистрационного удостоверения/организация, принимающая претензии потребителей

ПАО «Отисифарм», Россия,

123317, г. Москва, ул. Тестовская, д. 10

Тел.: +7 (800) 775-98-19

Факс: +7 (495) 221-18-02

Производитель

ОАО «Фармстандарт-Лексредства»,

305022, Россия, г. Курск, ул. 2-я Агрегатная, 1а/18, тел./факс: (4712) 34-03-13

Арбидол инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Arbidol таб.

, покр. пленочной оболочкой, 50 мг: 10, 20, 30 или 40 шт. (17161)

📜 Инструкция по применению Арбидол® 💊 Состав препарата Арбидол® ✅ Применение препарата Арбидол® 📅 Условия хранения Арбидол® ⏳ Срок годности Арбидол® Сохраните у себя Поделиться с друзьями Пожалуйста, заполните поля e-mail адресов и убедитесь в их правильности Описание лекарственного препарата Арбидол® (Arbidol) Основано на официальной инструкции по применению препарата, утверждено компанией-производителем и подготовлено для электронного издания справочника Видаль 2018 года, дата обновления: 2021. 01.28 Владелец регистрационного удостоверения: Контакты для обращений: ОТИСИФАРМ АО (Россия) Лекарственная форма Арбидол® Таб., покр. пленочной оболочкой, 50 мг: 10, 20, 30 или 40 шт. рег. №: ЛСР-003900/07 от 19.11.07 — Бессрочно Дата перерегистрации: 05. 04.19 Форма выпуска, упаковка и состав препарата Арбидол ® Таблетки, покрытые пленочной оболочкой от белого до белого с кремоватым оттенком цвета, круглые, двояковыпуклые; на изломе — от белого до белого с зеленовато-желтоватым или кремовым оттенком цвета. 1 таб. умифеновира гидрохлорида моногидрат 51.75 мг,  что соответствует содержанию умифеновира гидрохлорида 50 мг Вспомогательные вещества: крахмал картофельный — 31.86 мг, целлюлоза микрокристаллическая — 57.926 мг, повидон (повидон K30) — 8.137 мг, кальция стеарат — 0.535 мг, кроскармеллоза (кроскармеллоза натрия) — 1.542 мг. Состав оболочки: Опадрай 10F280003 белый (Opadry 10F280003 White) — 6 мг (гипромеллоза (гидроксипропилметилцеллюлоза 2910) — 3.54 мг, макрогол (полиэтиленгликоль) — 0. 48 мг, полисорбат 80 (твин 80) — 0.06 мг, титана диоксид — 1.92 мг). 10 шт. — упаковки ячейковые контурные (1) — пачки картонные. 10 шт. — упаковки ячейковые контурные (2) — пачки картонные. 10 шт. — упаковки ячейковые контурные (3) — пачки картонные. 10 шт. — упаковки ячейковые контурные (4) — пачки картонные. Фармакологическое действие Противовирусный препарат. Специфически подавляет in vitro вирусы гриппа А и В (Influenza virus А, В), включая высокопатогенные подтипы A(h2N1)pdm09 и A(H5N1), а также другие вирусы — возбудители ОРВИ (коронавирус (Coronavirus), ассоциированный с тяжелым острым респираторным синдромом (ТОРС), риновирус (Rhinovirus), аденовирус (Adenovirus), респираторно-синцитиальный вирус (Pneumovirus) и вирус парагриппа (Paramyxovirus)). По механизму противовирусного действия относится к ингибиторам слияния (фузии), взаимодействует с гемагглютинином вируса и препятствует слиянию липидной оболочки вируса и клеточных мембран. Оказывает умеренное иммуномодулирующее действие, повышает устойчивость организма к вирусным инфекциям. Обладает интерферон-индуцирующей активностью — в исследовании на мышах индукция интерферонов отмечалась уже через 16 ч, а высокие титры интерферонов сохранялись в крови до 48 ч после введения. Стимулирует клеточные и гуморальные реакции иммунитета: повышает число лимфоцитов в крови, в особенности Т-клеток (CD3), повышает число Т-хелперов (CD4), не влияя на уровень Т-супрессоров (CD8), нормализует иммунорегуляторный индекс, стимулирует фагоцитарную функцию макрофагов и повышает число естественных киллеров (NK-клеток). Терапевтическая эффективность при вирусных инфекциях проявляется в уменьшении продолжительности и тяжести течения болезни и ее основных симптомов, а также в снижении частоты развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией, и обострений хронических бактериальных заболеваний. Относится к малотоксичным препаратам (LD50 >4 г/кг). Не оказывает какого-либо отрицательного воздействия на организм человека при пероральном применении в рекомендуемых дозах. Фармакокинетика Всасывание и распределение Быстро абсорбируется и распределяется по органам и тканям. Cmax в плазме крови при приеме в дозе 50 мг достигается через 1.2 ч, в дозе 100 мг — через 1.5 ч. Метаболизм и выведение Метаболизируется в печени. T1/2 равен 17-21 ч. Около 40% выводится в неизмененном виде, в основном с желчью (38.9%) и в незначительном количестве почками (0.12%). В течение первых суток выводится 90% введенной дозы. Показания препарата Арбидол ® профилактика и лечение у взрослых и детей: грипп А и В, другие ОРВИ; комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии у детей старше 3 лет; комплексная терапия хронического бронхита, пневмонии и рецидивирующей герпетической инфекции; профилактика послеоперационных инфекционных осложнений. Режим дозирования Препарат принимают внутрь, до приема пищи. Разовая доза (в зависимости от возраста): Возраст Разовая доза препарата, мг умифеновира (таблетки) с 3 до 6 лет 50 мг (1 таб.) с 6 до 12 лет 100 мг (2 таб.) старше 12 лет и взрослые 200 мг (4 таб.) Показание Схема приема препарата У детей с 3 лет и взрослых: Неспецифическая профилактика в период эпидемии гриппа и других ОРВИ в разовой дозе 2 раза в неделю в течение 3 недель. Неспецифическая профилактика при непосредственном контакте с больными гриппом и другими ОРВИ в разовой дозе 1 раз/сут в течение 10-14 дней. Лечение гриппа и других ОРВИ в разовой дозе 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5 суток. У детей с 3 лет: Комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии в разовой дозе 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5 суток. У детей с 3 лет и взрослых: Комплексная терапия хронического бронхита, пневмонии, герпетической инфекции в разовой дозе 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5-7 суток, затем разовую дозу 2 раза в неделю в течение 4 недель Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений в разовой дозе за 2 суток до операции, затем на 2 и 5 сутки после операции Прием препарата начинают с момента появления первых симптомов заболевания гриппом и другими ОРВИ, желательно не позднее 3 суток от начала болезни. Если после приема препарата Арбидол® в течение 3 суток при лечении гриппа и других ОРВИ сохраняется выраженность симптомов заболевания, в т. ч. высокая температура (38°С и более), пациенту необходимо обратиться к врачу для оценки обоснованности приема препарата. Препарат следует применять только согласно тем показаниям, тому способу применения и в тех дозах, которые указаны в инструкции. Побочное действие Арбидол® относится к малотоксичным препаратам и обычно хорошо переносится. Побочные эффекты возникают редко, обычно слабо или умеренно выражены и носят преходящий характер. Частота возникновения нежелательных лекарственных реакций определена в соответствии с классификацией ВОЗ: очень часто (>1/10), часто (≥1/100, но <1/10), нечасто (≥1/1000, но <1/100), редко (≥1/10 000, но <1/1000), очень редко (<1/10 000), частота неизвестна (не может быть установлена по имеющимся данным). Со стороны иммунной системы: редко — аллергические реакции. Если любые из указанных в инструкции побочных эффектов усугубляются или отмечаются любые другие побочные эффекты, не указанные в инструкции, пациенту необходимо сообщить об этом врачу. При лечении гриппа и ОРВИ возможна сопутствующая симптоматическая терапия, включая прием жаропонижающих препаратов, муколитических и местных сосудосуживающих средств. Противопоказания к применению повышенная чувствительность к умифеновиру или любому компоненту препарата; детский возраст до 3 лет; I триместр беременности; период грудного вскармливания. Применение при беременности и кормлении грудью В исследованиях на животных не было выявлено вредных воздействий на течение беременности, развитие эмбриона и плода, родовую деятельность и постнатальное развитие. Применение препарата Арбидол® в I триместре беременности противопоказано. Во II и III триместрах беременности Арбидол® можно применять только для лечения и профилактики гриппа и в том случае, если предполагаемая польза для матери превышает потенциальный риск для плода. Соотношение польза/риск определяется лечащим врачом. Неизвестно, выделяется ли Арбидол® с грудным молоком у женщин в период лактации. При необходимости применения препарата Арбидол® следует прекратить грудное вскармливание. Применение у детей Препарат противопоказан к применению у детей в возрасте до 3 лет. Особые указания Необходимо соблюдать рекомендованную схему и длительность приема препарата. В случае пропуска приема одной дозы препарата пропущенную дозу следует принять как можно раньше и продолжить курс приема препарата по начатой схеме. Если после приема препарата Арбидол® в течение 3 суток при лечении гриппа и других ОРВИ сохраняется выраженность симптомов заболевания, в т.ч. высокая температура (38°С и более), то необходимо обратиться к врачу для оценки обоснованности приема препарата. Влияние на способность к управлению транспортными средствами и механизмами Не проявляет центральной нейротропной активности и может применяться в медицинской практике у лиц различных профессий, требующих повышенного внимания и координации движений (в т.ч. водители транспорта, операторы). Передозировка Случаи передозировки препарата не отмечены. Лекарственное взаимодействие При назначении с другими лекарственными средствами отрицательных эффектов отмечено не было. Специальные клинические исследования, посвященные изучению взаимодействия препарата Арбидол® с другими лекарственными средствами, не проводились. Сведения о наличии нежелательного взаимодействия с жаропонижающими, муколитическими и местными сосудосуживающими лекарственными средствами в условиях клинического исследования не выявлены. Условия хранения препарата Арбидол ® Препарат следует хранить в недоступном для детей месте при температуре не выше 25°С. Срок годности препарата Арбидол ® Срок годности — 3 года. Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке. Условия реализации Препарат отпускается без рецепта. Контакты для обращений 123112 Москва, ул. Тестовская, д. 10 Тел. : +7 (495) 221-18-00 E-mail: [email protected] Сохраните у себя Поделиться с друзьями Пожалуйста, заполните поля e-mail адресов и убедитесь в их правильности

показания и противопоказания, состав и дозировка – АптекаМос

Лекарственные формы порошок 25мг/5мл 37г таблетки 50мг таблетки 100мг капсулы 100мг капсулы 50мг

Международное непатентованное название ? Умифеновир

Состав Арбидол капсулы 100мг Состав на одну капсулу. Действующее вещество: Умифеновира гидрохлорида моногидрат (в пересчете на Умифеновира гидрохлорид) — 100 мг. Вспомогательные вещества: крахмал картофельный — З0,14 мг, целлюлоза микрокристаллическая — 55,76 мг, кремния диоксид коллоидный (аэросил) — 2,0 мг, повидон К 25 (коллидон 25) — 10,1 мг, кальция стеарат — 2,0 мг.

Группа ? Противовирусные — производные амантадина и других соединений

Производители ЩВЗ(Россия), Фармстандарт-Лексредства(Россия)

Показания к применению Арбидол капсулы 100мг Профилактика и лечение у взрослых и детей: грипп А и В, другие ОРВИ. Комплексная терапия рецидивирующей герпетической инфекции. Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений. Комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии у детей старше 6 лет.

Способ применения и дозировка Арбидол капсулы 100мг Внутрь, до приема пищи. Разовая доза: детям с 6 до 12 лет — 100 мг (1капсула). Дети старше 12 лет и взрослые — 200 мг (2 капсулы). Неспецифическая профилактика: в период эпидемии гриппа и других ОРВИ: детям от 6 до 12 лет — 100 мг, старше 12 лет и взрослым — 200 мг два раза в неделю в течение 3 недель. При непосредственном контакте с больными гриппом и другими ОРВИ: детям от 6 до 12 лет — 100 мг, старше 12 лет и взрослым — 200 мг один раз в день в течение 10- 14 дней. Лечение гриппа и других ОРВИ: Детям от 6 до 12 лет — 100 мг, старше 12 лет и взрослым — 200 мг 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5 суток. Комплексная терапия рецидивирующей герпетической инфекции: детям от 6 до 12 лет — 100 мг, старше 12 лет и взрослым — 200 мг 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5-7 суток, затем разовую дозу 2 раза в неделю в течение 4 недель. Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений: детям от 6 до 12 лет — 100 мг, старше 12 лет и взрослым — 200 мг за 2 суток до операции, затем на 2 и 5 сутки после операции. Комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии у детей старше 6 лет: от 6 до 12 лет — 100 мг, старше 12 лет — 200 мг 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5 суток. Применяйте препарат только согласно тем показаниям, тому способу применения и в тех дозах, которые указаны в инструкции. Прием препарата начинают с момента появления первых симптомов заболевания гриппом и другими ОРВИ, желательно не позднее 3 суток от начала болезни. Если после применения препарата Арбидол в течение трех суток при лечении гриппа и других ОРВИ сохраняется выраженность симптомов заболевания, в том числе высокая температура (38 °С и более), то необходимо обратиться к врачу для оценки обоснованности приема препарата. При лечении гриппа и ОРВИ возможна сопутствующая симптоматическая терапия, включая прием жаропонижающих препаратов, муколитических и местных сосудосуживающих средств.

Противопоказания Арбидол капсулы 100мг Повышенная чувствительность к умифеновиру или любому компоненту препарата. Детский возраст до 6 лет. Первый триместр беременности. Период грудного вскармливания. С осторожностью: Второй и третий триместры беременности.

Фармакологическое действие Фармакодинамика. Противовирусное средство. Специфически подавляет in vitro вирусы гриппа А и В (Iпfluenzavirus А, В), включая высокопатоген-ные подтипы А(h2NI1)pdm 09 и А(Н5N1), а также другие вирусы — возбудители острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) (коронавирус (Соronavirus), ассоциированный с тяжелым острым респира торным синдромом (ТОРС), риновирус (Rhinovirus), аденовирус (Adenovirus), респираторно-синцитиальный вирус (Pneumovirus) и вирус парагриппа (Раramyxovirus). По механизму противовирусного действия относится к ингибиторам слияния (фузии), взаимодействует с гемагглютинином вируса и препятствует слиянию липидной оболочки вируса и клеточных мембран. Оказывает умеренное иммуномодулирующее действие, повышает устойчивость организма к вирусным инфекциям. Обладает интерферон-индуцирующей активностью — в исследовании на мышах индукция интерферонов отмечалась уже через 16 часов, а высокие титры интерферонов сохранялись в крови до 48 часов после введения. Стимулирует клеточные и гуморальные реакции иммунитета: повышает число лимфоцитов в крови, в особенности Т-клеток (СDЗ), повышает число Т-хелперов (СD4), не влияя на уровень Т-супрессоров (СD8), нормализует иммунорегуляторный индекс, стимулирует фагоцитарную функцию макрофагов и повышает число естественных киллеров (NK-клеток). Терапевтическая эффективность при вирусных инфекциях проявляется в уменьшении продолжительности и тяжести течения болезни и ее основных симптомов, а также в снижении частоты развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией, и обострений хронических бактериальных заболеваний. При лечении гриппа или ОРВИ у взрослых пациентов в клиническом исследовании показано, что эффект препарата Арбидол у взрослых пациентов наиболее выражен в остром периоде заболевания и проявляется сокращением сроков разрешения симптомов болезни, снижением тяжести проявлений заболевания и сокращением сроков элиминации вируса. Терапия препаратом Арбидол приводит к более высокой частоте купирования симптомов заболевания на третьи сутки терапии по сравнению с плацебо — через 60 ч после начала терапии разрешение всех симптомов лабораторно подтвержденного гриппа более чем в 5 раз превышает аналогичный показатель в группе плацебо. Установлено значимое влияние препарата на скорость элиминации вируса гриппа, что, в частности, проявлялось уменьшением частоты выявления РНК вируса на 4-е сутки. Относится к малотоксичным препаратам. Не оказывает какого-либо отрицательного воздействия на организм человека при пероральном применении в рекомендуемых дозах. Фармакокинетика. Быстро абсорбируется и распределяется по органам и тканям. Максимальная концентрация в плазме крови достигается в дозе 100 мг через 1,5 ч. Метаболизируется в печени. Период полувыведения равен 17-21 ч. Около 40% выводится в неизмененном виде, в основном с желчью (38,9%) и в незначительном количестве почками (0,12%). В течение первых суток выводится 90% от введенной дозы.

Побочное действие Арбидол капсулы 100мг Препарат Арбидол относится к малотоксичным препаратам и обычно хорошо переносится. Побочные эффекты возникают редко, обычно слабо или умеренно выражены и носят преходящий характер. Частота возникновения нежелательных лекарственных реакций определена в соответствии с классификацией ВОЗ: очень часто (с частотой более 1/10), часто (с частотой не менее 1/100, но менее 1/10), нечасто (с частотой не менее 1/1000, но менее 1/100), редко (с частотой не менее 1/10000, но менее 1/1000), очень редко (с частотой менее 1/10000), частота неиз¬вестна (не может быть установлена по имеющимся данным). Нарушения со стороны иммунной системы: редко — аллергические реакции. Если любые из указанных в инструкции побочных эффектов усугубляются, или Вы заметили любые другие побочные эффекты, не указанные в инструкции, сообщите об этом врачу.

Передозировка Нет данных.

Взаимодействие Арбидол капсулы 100мг При назначении арбидола с другими лекарственными препаратами отрицательных эффектов отмечено не было. Специальные клинические исследования, посвященные изучению взаимодействий препарата Арбидол с другими лекарственными средствами, не проводились. Сведения о наличии нежелательного взаимодействия с жаропонижающими, муколитическими и местными сосудосуживающими лекарственными средствами в условиях клинического исследования не были выявлены.

Особые указания Необходимо соблюдать рекомендованную в инструкции схему и длительность приема препарата. В случае пропуска приема одной дозы препарата, пропущенную дозу следует принять как можно раньше и продолжить курс приема препарата по начатой схеме. Если после применения препарата Арбидол в течение трех суток при лечении гриппа и других ОРВИ сохраняется выраженность симптомов заболевания, в том числе высокая температура (38 °С и более), то необходимо обратиться к врачу для оценки обоснованности приема препарата. Влияние на способность управлять транспортными средствами и механизмами: Не проявляет центральной нейротропной активности и может применяться в медицинской практике у лиц различных профессий, в т.ч. требующих повышенного внимания и координации движений (водители транспорта, операторы и т.д.).

Условия хранения Хранить в недоступном для детей месте при температуре не выше 25 С.

Минздрав рекомендует россиянам схемы лечения гриппа A/h2N1

Кроме того, чиновники в качестве альтернативной схемы рекомендуют сочетать альфа и гамма интерфероны, принимать их от двух до шести раз в день в течении десяти дней. После перерыва в одну неделю повторяется та же схема лечения.

«Для лечения беременных женщин (начиная с 14-ой недели беременности) можно использовать Интерферон альфа-2b в суппозиториях — по 500000 МЕ два раза в день (суточная доза 1000000ME) в течение пяти суток», — говорится в пресс-релизе.

Лечение среднетяжелых и тяжелых случаев

В лечении гриппа, который протекает со средней тяжестью, врачи рекомендуют комбинировать кагоцел и арбидол.

В первый день от начала болезни нужно принимать кагоцел по две таблетки три раза в день, последующие три дня — по одной таблетке три раза в день. Кроме того, нужно принимать арбидол четыре раза в сутки по две таблетки каждые шесть часов в течение семи-десяти дней.

Кроме арбидола и кагоцела, специалисты советуют не пренебрегать альфа и гамма интерферонами по той же схеме, которая описана выше.

Можно также лечиться ингаверином — суточная доза 90 мг один раз в день в течение пяти дней, тамифлю — по 75 мг в два раза в день в течение пяти дней. Препараты необходимо принимать в первые дни болезни.

Для лечения беременных женщин (начиная с 14-ой недели беременности) можно использовать альфа интерфероны в суппозиториях по 500000МЕ два раза в день в течение пяти суток. Затем необходима поддерживающая терапия по 150000МЕ два раза в день по два раза в неделю в течение трех недель.

Рекомендации по лечению больных с тяжелыми формами гриппа такие же, как при лечении среднетяжелых случаев.

Кроме того, специалисты рекомендуют не злоупотреблять симптоматическим лечением, но по рекомендации врача можно принимать антибактериальные средства, анальгетики, нестероидные противовоспалительные препараты, противоаллергические средства.

Болезнь лучше предупредить

В качестве профилактики заболевания медики рекомендуют принимать кагоцел (два дня по две таблетки в день, затем — перерыв пять дней и еще два дня по две таблетки в день), или арбидол при непосредственном контакте с больным гриппом или ОРВИ (по две таблетки в день в течение 10-14 дней), или альфа и гамма интерфероны.

Беременным женщинам (начиная с 14-ой недели беременности) можно использовать альфа интерферон в суппозиториях по 150000МЕ два раза в день в течение пяти суток.

Ученые оценили эффективность «Арбидола» при лечении COVID-19

Китайские ученые пришли к выводу, что противовирусный препарат «Арбидол», а также комбинация лекарств лопинавира и ритонавира не являются эффективными средствами для лечения пациентов с коронавирусом.

Ученые провели исследование действия препаратов после того, как они попали в список потенциальных средств от COVID-19, составленный Национальной комиссией по здравоохранению Китая. В эксперименте приняли участие 86 пациентов с легкой и средней формами заболевания.

Отмечается, что 34 пациента принимали комбинацию лопинавир/ритонавир, 35 получали «Арбидол», еще 17 заболевших не принимали какую-либо терапию. При этом динамика течения болезни у всех инфицированных была практически одинаковой, в том числе по уровню снижения температуры, смягчению кашля или улучшению результатов КТ грудной клетки.

В конце февраля Федеральная антимонопольная служба начала расследование по делу о рекламе «Арбидола» как средства от коронавируса. Из рекламы, распространявшейся в эфире радиостанций, следовало, что «Арбидол» обладает терапевтической эффективностью против коронавируса COVID-2019. При этом, по данным ФАС, специфических лекарств для лечения коронавируса не существует.

10 марта по результатам рассмотрения дела ФАС сообщила, что реклама «Арбидола», который был заявлен производителем как средство для лечения пневмонии COVID-19, выходит за пределы инструкции препарата, пишут «Известия».

Ранее Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) рекомендовала не принимать ибупрофен при лечении от коронавируса. Для этих целей специалисты советуют пить парацетамол. Об заявил пресс-секретарь организации Кристиан Линдмайер.

— Не было опубликовано новых свидетельств того, что ибупрофен повышает риск смертности. Недостаточно исследований, и эксперты пока изучают данные. Пока же мы рекомендуем предпочесть парацетамол и не использовать ибупрофен в качестве самолечения, — отметил Кристиан Линдмайер.

По его словам, ибупрофен можно принимать по назначению врача, если препарат необходим по медицинским показателям.

В Краснодарском крае на 23 апреля подтверждено 58 новых случаев заражения коронавирусной инфекцией.

Оперативный штаб Краснодарского края сообщает, что среди заболевших 32 женщины и 26 мужчин, в том числе пять несовершеннолетних в возрасте от 5 до 17 лет.

Всего на сегодня в регионе 539 пациентов с подтвержденным диагнозом COVID-19.

Причиной роста числа зараженных коронавирусом в России стал тот факт, что жители страны не сразу начали соблюдать режим самоизоляции. Такое мнение высказала главный внештатный специалист по инфекционным заболеваниям Минздрава РФ Елена Малинникова.

Краснодарский край вошел в топ-3 регионов по эффективности борьбы с COVID-19.

Минздрав утвердил активность Арбидола против коронавируса в инструкции препарата

Минздрав России одобрил изменение инструкции к препарату «Арбидол Максимум» (умифеновир).

В ведомстве констатировали, что препарат проявляет особую активность против коронавируса. Это же подтверждают многочисленные независимые исследования. В Минздраве сочли, что будет справедливым добавить в инструкцию выводы этих наблюдений. Теперь обновленная инструкция опубликована в Государственном реестре лекарственных средств (ГРЛС).

«Арбидол» давно зарекомендовал себя как средство, которое можно применять в лечении ОРВИ и гриппа, а также для профилактики вирусных заболеваний. С началом пандемии врачи стали использовать препарат против коронавируса, включив его в состав комплексного лечения пациентов. Здесь важно отметить, что Арбидол не является симптоматическим препаратом. Он предназначен для прямого действия.

Российские врачи отмечают, что профилактика коронавируса должна иметь системный характер. Для этого нужно использовать интерфероны и противовирусные препараты. К последним как раз относится Арбидол.

Для здоровых людей старше 60 лет с хроническими заболеваниями специалисты советуют принимать Арбидол по 200 мг два раза в неделю (курс – 3 недели). Это в том случае, если у человека нет контактов с заболевшими. Тем, кто имел контакты, рекомендуется принимать по 200 мг один раз в день (курс 10-14 дней).

Профессор кафедры фармакологии ПМГМУ им. Сеченова Елена Карева рассказала, что противовирусная активность препарата была доказана в ходе многих исследований. Одно из них проводилось в Центре имени Чумакова. Карева уточнила, что «Арбидол» хорошо применять как для лечения легких форм коронавируса, так и для профилактики. Для понимания разницы – вакцина является только средством профилактики, она не лечит. Но это, конечно, не значит, что следует отказаться от прививки.

Профессор кафедры аллергологии и иммунологии РУДН Оксана Гизингер в интервью порталу NEWS.ru тоже положительно отозвалась об Арбидоле. «Эффективность «Арбидола» доказана как у медицинских работников, так и внутри семьи», – заявила она.

В настоящее время Арбидол входит в рекомендации Минздрава РФ по профилактике, амбулаторному и стационарному лечению коронавируса в легких формах. Легко коронавирус переносят свыше 80% пациентов.

Противовирусное действие Арбидола подтверждают ученые из многих стран, где проводились соответствующие исследования. Например, в КНР, Австралии, Индии, Иране.

В Китае Национальная комиссия здравоохранения включила умифеновир в план лечения заболевших коронавирусом в конце 2019 года. Китай проводил исследования умифеновира в Медицинском колледже Тунцзи при Хуачжунском университете науки и технологии. Исследователи тогда искали в числе уже существующих препаратов тот, который способен предотвратить передачу коронавируса от больного человека к здоровому. Исследование показало, что препарат хорошо блокирует проникновение вируса в клетку.

Австралийские ученые тоже пришли к выводу, что препарат для лечения гриппа может быть эффективен против COVID-19.

Недавно ученые из иранского Института медицинских наук (Iran University of Medical Sciences) тоже исследовали Арбидол сравнив его влияние на организм с калетрой (лопинавир-ритонавир). Изыскание проводилось в период с апреля по июнь 2020 года. Они заключили, что практически по всем параметрам умифеновир превзошел конкурента. Особенно ярко арбидол проявил себя в плане безопасности – у калетры оказалось куда больше побочных эффектов. Подробно об исследовании иранских ученых ранее писал британский научный журнал BMC Infectious Diseases.

 

Противовирусные действия Советы медиков о борьбе с опасными инфекциями: Общество: Россия: Lenta.ru

О том, стоит ли пытаться отличить ОРВИ от COVID-19 самостоятельно, как правильно защищаться от инфекций в эпоху пандемии и об эффективности отечественных противовирусных препаратов — в комментариях авторитетных российских врачей и ученых на «Ленте.ру».

По мнению Ирины Кравченко, врача-инфекциониста, главного внештатного специалиста по инфекционным болезням Республики Татарстан и Приволжского федерального округа, человеку без медицинского образования отличать грипп, ОРВИ и COVID-19 «никакого смысла нет, иногда даже специалисты на клиническом уровне сделать этого не могут». Для определения точного диагноза необходимы лабораторные исследования.

С ней согласна и фармаколог, доктор медицинских наук Елена Карева из Москвы, которая отмечает, что «симптомы данных заболеваний часто успешно маскируются самим заболевшим, который спешит принять симптоматические препараты — анальгетики, жаропонижающие, капли от насморка и так далее».

Врач-инфекционист высшей квалификационной категории, кандидат медицинских наук, доцент Ольга Лесина из Пензы уверена: каким бы инфекционным заболеванием ни заболел пациент, всегда нужно оценивать эпидемиологическую обстановку. «И если у нас идет пандемия коронавирусной инфекции, каждый случай повышения температуры и каких-то недомоганий, респираторных симптомов, покашливания нужно расценивать как возможность этой инфекции — COVID-19, у которой сейчас идет пандемический подъем», — отметила специалист.

«Практика показывает, что все-таки поздно у нас обращаются к врачу — на седьмой, девятый, десятый день, — посетовала она. — А как известно, к шестому-восьмому дню уже развивается вирусная пневмония и заболевание может быстро прогрессировать, а состояние больного ухудшаться. (…) Если обращение к врачу задерживается, а человек болеет как привык — «перетерплю, пережду эту ситуацию», то это — основная ошибка», — уверена Ольга Лесина.

Ее поддерживает Ирина Кравченко, которая видит основные ошибки заболевших COVID-19 том, что люди занимаются самолечением, часто не обращаются за медицинской помощью, начинают применять препараты, которые не показаны при коронавирусной инфекции, в частности антибактериальные.

Ирина Кравченко

«А это приводит к позднему назначению противовирусной терапии, которая наиболее эффективна в первые дни заболевания», — заключает она. Елена Карева также обращает внимание на бесконтрольное применение антибактериальных препаратов. По ее словам, опасность таится не только в побочных эффектах, но и в риске отрицательных лекарственных взаимодействий.

Кандидат медицинских наук, заведующая кафедрой инфекционных болезней Омской государственной медицинской академии Лариса Пузырева рассказала, что 45 процентов из тех пациентов в Омской области, которых лечили в стационаре, поступали на поздних стадиях — КТ3, КТ4. «Это говорит о том, что пациент находился дома и не оценивал критически свое состояние. Пациенты воспринимали слабость, температуру 37,5 как признаки обычного ОРЗ. 10-20 дней самолечения в итоге приводили к коронавирусной пневмонии с площадью поражения до 75 процентов и выше. Это, конечно же, самые тяжелые пациенты», — делится медик.

«Если человек ощущает признаки ОРВИ (симптомы всем известны), то ему следует обратиться к врачу для диагностики и назначения лечения, — советует Елена Карева. — До посещения врача можно предпринять следующее: использовать рекомендованную схему начала лечения — капли/спрей интерферона на слизистую носа и арбидол по лечебной схеме (200 мг каждые 6 часов). Чем раньше начнется противовирусная терапия, тем она эффективнее».

По словам врача-инфекциониста Ольги Лесиной, при любом инфекционном заболевании рекомендуется как можно чаще проветривать помещение, «не создавать тяжелую атмосферу, когда воздух влажный и в нем вирусы обитают и могут заражать других членов семьи». «Очень важны все барьерные мероприятия — маски, мытье рук, перчатки, индивидуальная посуда. И, конечно, медикаментозную профилактику мы тоже используем», — подчеркивает она.

Врач-инфекционист, кандидат медицинских наук, доцент Ольга Зыкова из Пензы сообщила, что сейчас она занимается амбулаторным приемом пациентов с COVID-19: «В соответствии с методическими рекомендациями при легкой форме заболевания, когда основные клинические проявления — это признаки ОРВИ без пневмонии, мы применяем «Арбидол»». Эффект, по словам Ольги Зыковой, «хороший, утяжеления не происходит». «Чем раньше мы начали лечение, тем оно эффективней. Могу сказать, что при применении этого препарата переход в среднюю степень тяжести — единичные случаи, а в основном пациенты у нас выздоравливают», — делится медик.

«Бывают ситуации, когда пациенты приходят необследованные, — рассказала Ольга Зыкова. — В текущей ситуации пандемии, конечно, есть разрешение в тех же методических рекомендациях, что до постановки диагноза COVID-19 можно применять любые противовирусные препараты, но я считаю, что в данном случае оправдано применение «Арбидола» в любом случае. Поэтому, назначая его с первого дня приема, попадаем в точку».

Лариса Пузырева

А Лариса Пузырева вспомнила: «Когда мы работали в «красной зоне» и еще ничего не было известно, то на основе собственных знаний, интуиции и международной информации кто-то начал принимать «Арбидол», кто-то разные другие препараты. Так вот, из тех сотрудников, кто принимал «Арбидол», работая при этом в самом эпицентре заболевания, за полгода никто не болел COVID-19». По ее словам, врачи «сами не ожидали такого эффекта, но так получилось».

Фото: Александр Казаков / «Коммерсантъ»

Инфекционист-педиатр, кандидат медицинских наук, заведующая кафедрой инфекционных болезней Смоленского государственного медицинского университета, заслуженный врач России Антонина Грекова считает большой ошибкой родителей, когда очень часто с первого дня заболевания они начинают давать детям антибиотик. «В первые дни заболевания, конечно, надо начинать прием противовирусного препарата», — рекомендует специалист.

Вторая ошибка родителей, по мнению Антонины Грековой, — несвоевременность обращения: «Тяжесть течения заболевания будет зависеть от своевременности обращения. Если заниматься самолечением, то впоследствии это может утяжелить состояние, привести к развитию осложнений и даже тяжких последствий».

Пытаться отличить самостоятельно ОРВИ от COVID-19 заслуженный врач России Антонина Грекова не советует, по ее наблюдениям, клиника у детей ковида и респираторных вирусных инфекций практически одинакова: «Единственное, что если будет клиника гриппа, то там на первом месте — высокая температура, 39-40, интоксикация. Но с этим может разобраться только специалист, родители этого делать не должны».

Согласно рекомендации инфекциониста-педиатра, с первых часов коронавирусной инфекции надо как можно раньше начать прием противовирусных препаратов, которые имеют доказанный эффект. «В детской практике в последних клинических рекомендациях Министерства здравоохранения — интерферон альфа-2b (как интраназальные, так и ректальные) и умифеновир («Арбидол») с двух лет», — сообщила Антонина Грекова.

«У детей COVID-19 протекает примерно в 80 процентах случаев в легкой или даже бессимптомной форме, в 15 процентах — в среднетяжелой форме, и только примерно в 5 процентах — в тяжелой. Большинство детей переносит его как обычную респираторную инфекцию, ее сложно отличить, — рассказала она. — Поэтому дети лечатся чаще всего амбулаторно участковыми педиатрами, которые уже отработали алгоритм лечения согласно действующим клиническим рекомендациям».

По словам Антонины Грековой, если в семье кто-то заболел, то, согласно клиническим рекомендациям, те же препараты, используемые для лечения легких и среднетяжелых форм COVID-19, можно принимать и для профилактики. «Если в семье кому-то уже поставили диагноз, то всем остальным членам семьи надо обратиться к врачу, который назначит профилактическую дозу противовирусных препаратов, входящие в клинические рекомендации, плюс симптоматические лекарства от кашля или насморка», — добавила она.

Быстрая доставка новостей — в «Ленте дня» в Telegram

Эффективность арбидола для профилактики COVID-19 у медицинских работников

Front Public Health. 2020; 8: 249.

, ¹ , ¹ , ² , ^{3, *} , ^{1, *} , ³ , ³ , ¹ и

64 1

4 Чунгуан Ян

¹ Кафедра урологии, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи, Университет науки и технологий Хуачжун, Ухань, Китай

Чунджин Кэ

¹ Кафедра урологии, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи, Университет Хуачжун of Science and Technology, Ухань, Китай

Daoyuan Yue

² Отделение клинической лаборатории, Медицинский колледж Тунцзи, Больница Тунцзи, Университет науки и технологий Хуачжун, Ухань, Китай

Wengang Li

³ Отделение Профилактика и здоровье, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи, Университет науки и технологий Хуачжун, Ухань, Китай

Чжицюань Ху

¹ Отделение урологии, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи, Университет науки и технологий Хуачжун, Ухань, Китай

Вэй Лю

³ Департамент профилактики и здравоохранения, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи, Университет науки и технологий Хуачжун, Ухань, Китай

Шухуа Ху

³ Департамент профилактики и здравоохранения, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи, Университет науки и технологий Хуачжун, Ухань, Китай

Ван Шаоган

¹ Отделение урологии, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи , Хуачжунский университет науки и технологий, Ухань, Китай

Цзихонг Лю

¹ Отделение урологии, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи, Университет науки и технологий Хуачжун, Ухань, Китай

¹ Отделение урологии, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи, Университет науки и технологий Хуачжун, Ухань, Китай

90 004 2 Кафедра клинической лаборатории, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи, Хуачжунский университет науки и технологий, Ухань, Китай

³ Кафедра профилактики и здравоохранения, Медицинский колледж Тунцзи, больница Тунцзи, Университет науки и технологий Хуачжун, Ухань, Китай

Отредактировал: Чжунхэн Чжан, Госпиталь сэра Ран Ран Шоу, Китай

Рецензировал: Ана Афонсо, Университет Сан-Паулу, Бразилия; Юнань Сюй, Чжэцзянский университет, Китай

Эта статья была отправлена ​​в раздел «Инфекционные болезни — эпиднадзор, профилактика и лечение» журнала «Границы общественного здравоохранения»

Поступила в редакцию 6 мая 2020 г .; Принята в печать 20 мая 2020 г.

Авторские права © 2020 Ян, Кэ, Юэ, Ли, Ху, Лю, Ху, Ван и Лю.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (CC BY). Использование, распространение или воспроизведение на других форумах разрешено при условии указания автора (авторов) и правообладателя (ов) и ссылки на оригинальную публикацию в этом журнале в соответствии с принятой академической практикой. Запрещается использование, распространение или воспроизведение без соблюдения этих условий.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

Реферат

Справочная информация: Передовые медицинские работники относятся к группе населения, восприимчивой к COVID-19 во время вспышки COVID-19, но необходимо изучить профилактические препараты против инфекции SARS-CoV-2.

Метод: В это исследование были включены специалисты первичного звена здравоохранения с диагнозом COVID-19 до 9 февраля 2020 года в больнице Тунцзи, Ухань, Китай, и такое же количество контрольных лиц в неинфицированной группе.Клинические и лабораторные данные были собраны с использованием стандартизированных форм.

Результаты: Всего в это исследование было включено 164 субъекта, 82 случая в инфицированной группе и 82 контрольной группы в неинфицированной группе со средним возрастом 37 лет, в том числе 63 мужчины и 101 женщина. Девятнадцать (23,2%) пациентов в инфицированной группе получали арбидол перорально, а 48 (58,5%) в неинфицированной группе (OR = 0,214, 95% ДИ 0,109–0,420). Совокупный уровень неинфицированных медицинских работников в группе арбидола был значительно выше, чем у лиц в группе, не принимавшей арбидол (лог-ранговый тест, χ ² = 98.74; P <0,001). Было госпитализировано 48 пациентов (58,5%) в группе инфицирования, средний возраст которых составлял 39 (31–49) лет, из которых 7 (14,6%) получали арбидол с профилактической целью. Тридцать четыре пациента (41,5%) с легкими симптомами получали лечение вне больницы, средний возраст среди которых составлял 34 (30–39) лет, и двенадцать пациентов (35,3%) принимали арбидол внутрь с профилактической целью. Частота госпитализаций была достоверно связана с возрастом ( P = 0,024) и пероральным приемом арбидола (OR = 0.313, 95% ДИ 0,108–0,909). В подобранном по возрасту исследовании случай-контроль частота госпитализаций не была достоверно связана с приемом арбидола ( P = 0,091).

Заключение: Профилактический пероральный прием арбидола был связан с более низкой частотой инфицирования SARS-CoV-2, но не с частотой госпитализации медицинских работников, что послужило основой для выбора профилактических препаратов для групп высокого риска.

Ключевые слова: SARS-CoV-2, COVID-19, арбидол, медицинский работник, первичная профилактика

Введение

Коронавирусное заболевание 2019 (COVID-19) быстро распространилось по всему миру с момента его открытия в декабре 2019 года (1).По состоянию на 14 апреля 2020 года SARS-CoV-2 поразил в общей сложности 1,8 миллиона человек, в том числе десятки тысяч медицинских работников (2). Медицинские работники восприимчивы к COVID-19. Предыдущая литература подтверждает, что область работы медицинских работников значительно влияет на вероятность заражения, когда они находятся в тесном контакте с коронавирусом (3). Более того, исследования показали значительную корреляцию между возрастом и прогнозом пациентов, инфицированных SARS-CoV-2 (4). Однако в настоящее время нет профилактических препаратов, подтвержденных клиническими исследованиями (5).Эксперименты показали, что арбидол, а именно умифеновир, подавляет репликацию вирусов SARS (6). Было также показано, что арбидол блокирует репликацию вируса, ингибируя слияние липидных мембран вируса гриппа с клетками-хозяевами (7). Основываясь на результатах вышеупомянутых исследований и доступности препарата, некоторые медицинские работники в больнице Тунцзи в профилактических целях приняли на себя пероральный противовирусный препарат арбидол в клинической практике, но его роль не ясна.

Таким образом, мы использовали сопоставимое по возрасту исследование случай-контроль для ретроспективного анализа корреляции между COVID-19 и профилактическим пероральным применением арбидола медицинскими работниками в больнице Tongji, чтобы изучить влияние арбидола на COVID-19 среди медицинских работников.

Методы

Дизайн исследования и участники

После вспышки в Ухане большое количество медицинских работников в нашей больнице оказались на переднем крае вспышки, что является хорошей выборкой для анализа. Таким образом, были ретроспективно отобраны работающие в больнице Тунцзи медицинские работники, которым был поставлен диагноз COVID-19 с помощью теста на нуклеиновую кислоту мазка из горла (инфекционная группа) до 9 февраля 2020 года. В зависимости от возраста и области работы они были сопоставлены по частоте, и было выбрано такое же количество неинфицированных медицинских работников, работающих в больнице Тунцзи (неинфицированная группа).Отделения высокого риска включали амбулаторное отделение и отделение неотложной помощи, отделение лихорадки, респираторное отделение, торакальное хирургическое и инфекционное отделение, тогда как другие отделения не относились к отделениям высокого риска. Неизвестно, принимали ли инфицированные и неинфицированные пациенты профилактически пероральный арбидол перед отбором. Защитные меры, принятые медицинскими работниками, были единогласно запрошены в том же отделении или на рабочем месте, например, защитный костюм, защитные очки, маски и т. Д.Пациенты в группе инфекции, которые принимали арбидол в течение 2 недель до появления первых симптомов, были определены как принимающие арбидол. Субъекты из неинфицированной группы, которые принимали перорально арбидол в тот же период, также были определены как принимающие арбидол. Профилактическая доза была определена как 200 мг каждые сутки перорально, тогда как терапевтическая доза была определена как 600 мг каждые сутки перорально.

Это исследование было рассмотрено и одобрено Медицинским этическим комитетом больницы Тунцзи при Хуачжунском университете науки и технологий (идентификатор IRB: TJ-C20200133).

Сбор данных

Сбор информации осуществлялся в основном с помощью системы электронных медицинских карт нашей больницы и телефонных интервью. Индикаторы сбора данных включали в основном возраст, пол, сопутствующие заболевания, род занятий, отдел работы, время начала COVID-19, прием арбидола, место изоляции (больница / дом / гостиница), лабораторные параметры, наличие тяжелой пневмонии во время госпитализации и клинические исходы. . Клинические данные были получены с использованием стандартизованных форм для всех вовлеченных субъектов.Два исследователя независимо проанализировали данные.

Результаты

Определено распределение COVID-19 среди медицинских работников нашей больницы с 5 января 2020 года. Статистический анализ был включен для изучения взаимосвязи между исходными характеристиками медицинских работников и инфекцией SARS-CoV-2. В группе инфицированных оценивалась связь профилактического перорального приема арбидола с госпитализацией и развитием тяжелой пневмонии.

Статистический анализ

Статистическая программа SPSS 23.0 использовался в этом исследовании. Для проверки нормальности данных использовался однократный тест k-s. Категориальные переменные были описаны как частота и проценты, а непрерывные переменные были описаны с использованием средних или медианных значений и межквартильного диапазона (IQR). Средние значения для непрерывных переменных сравнивались с использованием независимых групп t -тестов, когда данные были нормально распределены; в противном случае использовался тест Манна – Уитни. Пропорции категориальных переменных сравнивались с использованием критерия χ2, хотя точный критерий Фишера использовался, когда данные были ограничены.Уровни безинфекционной выживаемости сравнивали с использованием лог-рангового теста. Тесты проводились при уровне α = 0,05 (обе стороны), и P <0,05 указывает, что разница статистически значима.

Результаты

После вспышки в Ухани количество подтвержденных случаев быстро увеличивалось, с первоначальной оценкой R ₀ 2,2 (95% ДИ 1,4–3,9) (8). Аналогичным образом, число подтвержденных случаев заболевания среди медицинского персонала продолжает расти.В это исследование были включены в общей сложности 164 человека, 82 случая в инфицированной группе и 82 контрольной группы в неинфицированной группе со средним возрастом 37 лет, в том числе 63 мужчины и 101 женщина (). Шестьдесят специалистов здравоохранения работали в отделениях высокого риска и 104 пациента работали в отделениях не высокого риска. Небольшое количество случаев сопровождалось основными заболеваниями, в основном гипертонией и диабетом. Распределение начала заболевания среди медицинских работников в инфицированной группе, включенной в исследование, показано в.

Таблица 1

Исходные характеристики медицинских работников, включенных в исследование.

Исследования	Все испытуемые	Зараженные	Неинфицированные	P -значение
группа	группа
		( n = 82)	( n 9018 9018 9025 9025 9018 9018 9018 9025 9025 9018 9018 9018 9025 , лет	37 (31–46)	37 (31–46)	37 (32–43)	0.958
Отделение				1.000
Отделение высокого риска	60 (37%)	30 (37%)	30 (37%)	67 Отделение не высокого риска	104 (63%)	52 (63%)	52 (63%)
Пол				0,077
Мужской 63 (38%)	26 (32%)	37 (45%)
Женский	101 (62%)	56 (68%)	45 (55%)
Род занятий				0.254
Врач	64 (39%)	27 (33%)	37 (45%)
Медсестра	85 (52%)	46 (56%)	39 (48%)
Прочие	15 (9%)	9 (11%)	6 (7%)
Любые сопутствующие заболевания
Есть	13 (8%)	7 (9%)	6 (7%)
Нет	151 (92%)	75 (91%)	76 (93%)
Арбидол				<0.001
Есть	67 (41%)	19 (23%)	48 (59%)
Нет	97 (59%)	63 (77%)	34 (41%)

Распределение медицинских работников, участвовавших в расследовании. (A) Начало заболевания среди подтвержденных случаев COVID-19 в больнице Тунцзи. (B) Состав лиц, участвовавших в этом исследовании. (C) Уровень безинфекционной выживаемости людей, принимающих арбидол, и контрольной группы в течение 45 дней после вспышки COVID-19.

Девятнадцать (23,2%) пациентов в инфицированной группе получали арбидол перорально с профилактической целью, а 48 (58,5%) пациентов в неинфицированной группе принимали арбидол. Сравнительный анализ инфицированных и неинфицированных групп показал, что не было никакой корреляции между инфекцией SARS-CoV-2 и полом, родом занятий и сопутствующими заболеваниями медицинских работников, но была значимая корреляция с арбидолом (23,2 против 58,5%). , OR = 0,214, 95% ДИ 0,109–0,420; P <0,001), что указывает на то, что арбидол защищает от COVID-19 у медицинских работников ().Совокупное количество медицинских работников, заболевших COVID-19 в нашей больнице, продолжало расти с 5 января 2020 года по 8 февраля 2020 года. Недостаточная осведомленность о защите и недостаточные медицинские средства защиты были важными причинами заражения медицинского персонала на ранней стадии. Совокупный уровень неинфицированных медицинских работников в группе, принимавшей арбидол, был значительно выше, чем у лиц в группе, не принимавшей арбидол (лог-ранговый тест, χ ² = 98,74; P <0,001) ().

48 пациентов (58,5%) в группе инфекции были госпитализированы со средним возрастом 39 (31–49) лет, из которых 7 (14,6%) принимали арбидол в профилактических целях. Тридцать четыре человека (41,5%) имели легкие симптомы и были изолированы за пределами больницы (дома или в отеле). Средний возраст составлял 34 (30–39) лет, двенадцать человек (35,3%) принимали арбидол перорально. Среди пациентов, инфицированных SARS-CoV-2, сравнительный анализ между госпитализированной группой и не госпитализированной группой показал, что частота госпитализаций была связана с возрастом ( P = 0.024) и пероральное применение арбидола (OR = 0,313, 95% ДИ 0,108–0,909; P = 0,029) (). Кроме того, пероральный прием арбидола также отрицательно коррелировал с продолжительностью положительного мазка из зева ( r = -0,286, P = 0,011). Между тем, не было никакой корреляции с полом, профессией или сопутствующими заболеваниями медицинских работников, что позволяет предположить, что более молодой возраст и профилактическое пероральное употребление арбидола могут защитить от прогрессирования заболевания.

Таблица 2

Характеристики инфицированных медицинских работников, включенных в исследование.

902

.230

, г / л 40,9 (38,9–44,7)

(180,8–263,0)

Факторы исследования	Все пациенты ( n = 82)	Госпитализация ( n = 48)	Без госпитализации ( n = 34) P -значение
Возраст, лет	37 (31–46)	39 (31–49)	34 (30–39)	0,024
Отдел			0.503
Отделение высокого риска	30 (37%)	19 (40%)	11 (32%)
Отделение невысокого риска	52 (63%)	29 (60%)	23 (68%)
Пол				0,180
Мужской	26 (32%)	184 (32%)	184 (32%)	184 8 (24%)
Женский	56 (68%)	30 (63%)	26 (76%)
Любые сопутствующие заболевания
Есть	7 (9%)	6 (13%)	1 (3%)
Нет	75 (91%)	42 (87%)	33 (97%)
Арбидол				0,029
Да	19 (23%)	7 (15%)	12
Нет	63 (77%)	41 (85%)	22 (65%)
нейтрофилов, × 10 9 на л	3.5 (2,2–4,3)	3,3 (2,0–3,9)	4,1 (3,2–5,1)	0,242
Лимфоцитов, × 10 9 на л	1,3 (1,0–1,6)	1,2 ( 0,8–1,5)	1,6 (1,1–2,1)	0,011
Моноциты, × 10 9 на л	0,5 (0,4–0,6)	0,5 (0,4–0,6)	0,5 (0,4– 0,6)	0,357
Эозинофилы, × 10 9 на л	0,1 (0.0–0,1)	0,1 (0,0–0,1)	0,0 (0,0–0,1)	0,999
Базофилы, × 10 9 на л	0,0 (0,0–0,0)	0,0 (0,0– 0,0)	0,0 (0,0–0,0)	0,536
Тромбоциты, × 10 9 на л	202,6 (160,0–235,0)	191,7 (156,0–215,0)	1952–158,0 (158,0)	0,008
Гемоглобин, г / л	135,1 (126,0–145,0)	136.7 (126,0–148,0)	129,0 (117,8–141,0)	0,103
ALT, U / L	24,5 (11,0–29,0)	22,5 (12,0–27,0)	32,1 (10,3–55,0)	0,149
AST, U / L	26,8 (18,0–29,0)	26,1 (19,0–29,0)	29,0 (17,3–41,8)	0,932
	39,8 (38,5–43,5)	45,2 (44,1–48,0)	0.001
Общий билирубин, мкмоль / л	8,3 (5,1–9,7)	8,8 (5,1–10,1)	6,4 (4,8–7,6)	0,141
LDH, U / L	234,4 (184,0–266,0)	216,6 (174,0–244,0)	0,446
АМК, ммоль / л	3,8 (2,9–4,5)	4,0 (2,9)	3,1 (2,7–3,7)	0,063
Креатинин, мкмоль / л	68.0 (55,5–78,0)	71,0 (56,0–83,0)	55,1 (50,0–59,0)	0,008
Протромбиновое время, секунды	13,5 (12,9–14,0)	13,6 (12,94–14,0)	13,6 (12,94–14,0)	13,1 (12,7–13,4)	0,265
D-димер, мкг / мл	0,4 (0,0–0,6)	0,4 (0,2–0,5)	0,3 (0,0–0,7)	0,551
Положительный мазок из зева, дни	8 (6–12)	9 (6–14)	7 (5–11)	0.018

Чтобы свести к минимуму возможные искажающие эффекты возраста, было проведено исследование типа случай-контроль. Однако в подобранном по возрасту исследовании случай-контроль частота госпитализаций не была достоверно связана с приемом арбидола ( P = 0,091) (). Кроме того, пероральный прием арбидола не имел значительной корреляции с продолжительностью положительного мазка из зева ( r = -0,240, P = 0,056) в зависимости от возраста, что указывает на то, что профилактический пероральный прием арбидола не может замедлить прогрессирование COVID-19.У четырех из 48 госпитализированных пациентов развилась тяжелая пневмония со средним возрастом 51 (43–62) года, и все они не принимали профилактический пероральный арбидол. Средний возраст 44 пациентов, не находящихся в критическом состоянии, составлял 39 (30–48) лет, 7 из них принимали арбидол перорально. Тяжелая пневмония была связана с возрастом ( P = 0,027), но не было обнаружено корреляции с полом, профессией, сопутствующими заболеваниями или пероральным приемом арбидола медицинских работников, что свидетельствует о уязвимости пожилых пациентов к тяжелой пневмонии.Один из 82 заболевших умер от дыхательной недостаточности во время госпитализации, остальные пациенты вылечились.

Таблица 3

Клинические характеристики инфицированных медицинских работников в подобранном исследовании случай-контроль.

U25 / 9025 22,5 (11,0–24,5) , г / л

Факторы исследования	Все пациенты	Госпитализация	Без госпитализации	P -значение		( n = 34)	( n = 34)
Возраст, лет	34.5 (30–40)	36,5 (30–41)	34 (30–39)	0,963
Отдел				0,318
		(38%)	15 (44%)	11 (32%)
Невысокий риск	42 (62%)	19 (56%)	23 (68%)
Пол				0.417
Мужской	19 (28%)	11 (32%)	8 (24%)
Женский	49 (72%)	23 (68%)	26 (76%)
Любые сопутствующие заболевания				0,500
Да	3 (4%)	2 (6%)
Нет	65 (96%)	32 (94%)	33 (97%)
Арбидол				0.091
Есть	17 (25%)	5 (15%)	12 (35%)
Нет	51 (75%)	29 (85%)	22 (65%)
Нейтрофилов, × 10 9 на л	3,3 (2,1–4,2)	2,8 (1,9–3,8)	4,1 (3,2–5,1)	0,017
Лимфоцитов, × 10 9 на л	1,3 (1,0–1,6)	1.2 (0,9–1,6)	1,6 (1,1–2,1)	0,066
Моноциты, × 10 9 на л	0,5 (0,4–0,7)	0,5 (0,4–0,7)	0,5 ( 0,4–0,6)	0,553
Эозинофилы, × 10 9 на л	0,1 (0,0–0,1)	0,1 (0,0–0,1)	0,0 (0,0–0,1)	0,772
Базофилы, × 10 9 на л	0,0 (0,0–0,0)	0,0 (0,0–0.0)	0,0 (0,0–0,0)	0,478
Тромбоциты, × 10 9 на л	208,5 (162,0–237,0)	195,0 (158,0–217,0)	1952,0 (158,0)	0,052
Гемоглобин, г / л	134,0 (123,0–145,0)	136,2 (126,0–148,5)	129,0 (117,8–141,0)	0,152
19,1 (11,0–22,0)	32.1 (10,3–55,0)	0,639
AST, U / L	25,7 (17,5–28,5)	24,4 (18,0–28,0)	29,0 (17,3–41,8)	0,830
41,7 (39,2–44,9)	40,5 (38,8–43,7)	45,2 (44,1–48,0)	0,001
Общий билирубин, мкмоль / л	8,1 (4,94–10,1) 9025	8,8 (4,9–10,5)	6,4 (4,8–7,6)	0,502
LDH, ед. / Л	227.4 (185,0–253,8)	230,9 (186,0–259,0)	216,6 (174,0–244,0)	0,522
АМК, ммоль / л	3,6 (2,8–4,4)	3,8) 2,9–4	3,1 (2,7–3,7)	0,113
Креатинин, мкмоль / л	65,2 (52,5–74,5)	68,6 (56,5–78,0)	55,1 (50,0–59,0)	0,025	0,025	0,025	Протромбиновое время, секунды	13,6 (12,9–14,2)	13,6 (13,0–14,2).4)	13,1 (12,7–13,4)	0,187
D-димер, мкг / мл	0,3 (0,0–0,5)	0,3 (0,0–0,5)	0,3 (0,0–0,7)	0,668
Положительный мазок из зева, дни	8 (6–11)	9 (6–12)	7 (5–11)	0,286

Обсуждение

Для преодоления текущего тяжелого эпидемическая ситуация, COVID-19 стал горячей точкой исследования. В настоящее время имеется большое количество литературы, посвященной эпидемиологии, клиническим характеристикам и прогнозу заболевания (1, 4, 9).Однако исследований по лекарственной профилактике для этой особой группы медицинских работников не проводилось.

Это исследование показало, что профилактический пероральный прием арбидола был значительно связан со снижением уровня инфицирования SARS-CoV-2 среди медицинских работников, что показало, что арбидол может играть профилактическую роль у медицинских работников. Арбидол представляет собой противовирусное соединение широкого спектра действия, которое блокирует контакт, адгезию и слияние вирусных липидных капсул и мембран клеток-хозяев и блокирует репликацию вируса (6, 10). In vivo и in vitro Эксперименты подтверждают, что арбидол оказывает ингибирующее действие на различные респираторные вирусы, включая вирусы с оболочкой и без оболочки, а также вирусы РНК и ДНК (11). Рандомизированное контролируемое исследование давало рабочим арбидол (200 мг / сут) перорально во время эпидемии гриппа в течение 10–18 дней и обнаружило, что арбидол оказывает значительный профилактический эффект (12). Аналогичным образом Титова и соавт. пероральный прием арбидола пациентам с астмой и хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) для профилактики вирусных инфекций (13).Недавно пероральное применение арбидола показало благоприятный клинический ответ у пациентов с COVID-19 (14). Эти результаты согласуются с результатами, полученными в нашем исследовании, о том, что арбидол отрицательно связан с инфекцией SARS-CoV-2.

Стоит отметить, что это исследование показало, что профилактический пероральный прием арбидола не был существенно связан с частотой госпитализаций и продолжительностью положительных мазков из зева у медицинских работников с COVID-19. Более того, нет статистической корреляции между профилактическим лечением и тяжелой пневмонией, что заслуживает дальнейшего рассмотрения.Возможные причины предполагались следующим образом. Арбидол эффективно блокирует проникновение вируса в клетки-хозяева и блокирует начальные стадии патогенного процесса вируса, обеспечивая профилактическую защиту (10, 11). Однако, когда в клетках-хозяевах реплицируется большое количество вирусов, защитный эффект арбидола ограничен. Поэтому перспективным вариантом может быть комбинированное применение арбидола и других противовирусных препаратов. Следует отметить, что профилактический пероральный прием арбидола чаще применялся среди не госпитализированных пациентов (35 vs.15%), хотя эта разница не была значимой после сопоставления с возрастом ( P = 0,091). Необходимы дальнейшие исследования, чтобы выяснить роль и механизм арбидола при инфекциях SARS-CoV-2.

Арбидол был допущен к продаже в Китае в 2006 году для лечения инфекций верхних дыхательных путей, вызванных вирусами гриппа A и B. Он хорошо переносится людьми и безопасен. Шестьдесят семь медицинских работников, которые принимали пероральный арбидол, могли переносить его (в среднем 6,7 дней) в нашем исследовании, среди которых мало людей имели легкую диарею даже в терапевтической дозе (~ 10%).О серьезных побочных эффектах, связанных с пероральным приемом арбидола, не сообщалось.

Ограничения этого исследования

Это исследование также имеет ограничения. Это одноцентровое ретроспективное исследование ограниченного размера, в котором отсутствует многоцентровое проспективное когортное исследование для улучшенной проверки. Кроме того, нет гарантии, что осведомленность участников о защите и меры защиты были полностью согласованы.

Заключение

Таким образом, арбидол в значительной степени ассоциировался с уменьшением инфицирования SARS-CoV-2 и может играть профилактическую роль среди медицинских работников.Этот вывод также имеет определенное значение для других групп высокого риска, таких как члены семей пациентов с COVID-19 и персонал по борьбе с инфекционными заболеваниями.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Медицинским этическим комитетом больницы Тунцзи при Университете науки и технологий Хуачжун.Письменное информированное согласие на участие не требовалось для этого исследования в соответствии с национальным законодательством и институциональными требованиями.

Вклад авторов

CY, WLi и ZH внесли существенный вклад в дизайн исследования. CK и DY отвечали за черновик рукописи. JL взяла на себя ответственность за получение этического одобрения. WLiu и SH взяли на себя ответственность за сбор данных. CY и ZH внесли основной вклад в анализ и интерпретацию данных. CY и JL участвовали в диагностике и лечении медицинских работников.SW внесла в рукопись существенные исправления.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Сноски

Финансирование. Работа поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (№ 81702989).

Ссылки

1. Zhu N, Zhang D, Wang W, Li X, Yang B, Song J, et al.. Новый коронавирус от пациентов с пневмонией в Китае, 2019. N Engl J Med. (2020). 382: 727–33. 10.1056 / NEJMoa2001017 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Всемирная организация здоровья . Панель управления ВОЗ по коронавирусной болезни (COVID-19). Доступно на сайте: https://covid19.who.int/ (по состоянию на 14 апреля 2020 г.) 3. Чо Си, Кан Дж. М., Ха Й., Пак Дж. Э., Ли Дж. Й., Ко Дж. Х. и др. . Вспышка БВРС-КоВ после контакта с одним пациентом в отделении неотложной помощи в Южной Корее: эпидемиологическое исследование вспышки.Ланцет. (2016) 388: 994–1001. 10.1016 / S0140-6736 (16) 30623-7 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 4. Ван Д., Ху Б., Ху Ц., Чжу Ф., Лю Х, Чжан Дж. И др. . Клинические характеристики 138 госпитализированных пациентов с пневмонией, инфицированной новым коронавирусом 2019 г., в Ухане, Китай. ДЖАМА. (2020) 323: 1061–9. 10.1001 / jama.2020.1585 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Ли Дж., Де Клерк Э. Варианты лечения нового коронавируса 2019 г. (2019-nCoV). Nat Rev Drug Discov. (2020) 19: 149–150.10.1038 / d41573-020-00016-0 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Хамитов Р.А., Логинова С., Щукина В.Н., Борисевич С.В., Максимов В.А., Шустер А.М. [Противовирусная активность арбидола и его производных в отношении возбудителя тяжелого острого респираторного синдрома в культурах клеток]. Vopr Virusol. (2008) 53: 9–13. [PubMed] [Google Scholar] 7. Крамарев С.А., Мощич А.П. [Лечение гриппа и ОРВИ]. Лик Справа. (2013). 99–106. [PubMed] [Google Scholar] 8. Ли Кью, Гуань Х, Ву П, Ван Х, Чжоу Л., Тонг И и др.. Динамика ранней передачи новой пневмонии, инфицированной коронавирусом, в Ухане, Китай. N Engl J Med. (2020) 382: 1199–207. 10.1056 / NEJMoa2001316 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9. Zhou F, Yu T, Du R, Fan G, Liu Y, Liu Z и др. . Клиническое течение и факторы риска смертности взрослых пациентов с COVID-19 в Ухане, Китай: ретроспективное когортное исследование. Ланцет. (2020) 395: 1054–62. 10.1016 / S0140-6736 (20) 30566-3 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Борискин Ю.С., Ленева И.А., Печер Е.И., Поляк С.Ю.Арбидол: противовирусное соединение широкого спектра действия, блокирующее слияние вирусов. Curr Med Chem. (2008) 15: 997–1005. 10.2174 / 0708784049658 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Гагаринова В.М., Игнатьева Г.С., Синицкая Л.В., Иванова А.М., Родина М.А., Турьева А.В. [Новый химический препарат арбидол: его профилактическая эффективность во время эпидемий гриппа]. Ж Микробиол Эпидемиол Иммунобиол. (1993) 40–3. [PubMed] [Google Scholar] 13. Титова О.Н., Петрова М.А., Шкляревич Н.А., Кузубова Н.А., Александров А.Л., Ковалева Л.Ф. и др.. Эффективность арбидола в профилактике вирусных обострений бронхиальной астмы и хронической обструктивной болезни легких. Тер Арх. (2018) 90: 48–52. 10.26442 / terarkh3018

-52 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дэн Л., Ли Ц., Цзэн Ц., Лю Х, Ли Х, Чжан Х и др. . Арбидол в сочетании с LPV / r по сравнению с одним LPV / r против коронавирусной болезни 2019: ретроспективное когортное исследование. J Infect. (2020) S0163-4453 (20) 30113-4. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Frontiers | Эффективность арбидола для профилактики COVID-19 у медицинских работников

Введение

Коронавирусное заболевание 2019 г. (COVID-19) быстро распространилось по всему миру с момента его открытия в декабре 2019 г. (1).По состоянию на 14 апреля 2020 года SARS-CoV-2 поразил в общей сложности 1,8 миллиона человек, в том числе десятки тысяч медицинских работников (2). Медицинские работники восприимчивы к COVID-19. Предыдущая литература подтверждает, что область работы медицинских работников значительно влияет на вероятность заражения, когда они находятся в тесном контакте с коронавирусом (3). Более того, исследования показали значительную корреляцию между возрастом и прогнозом пациентов, инфицированных SARS-CoV-2 (4). Однако в настоящее время нет профилактических препаратов, подтвержденных клиническими исследованиями (5).Эксперименты показали, что арбидол, а именно умифеновир, подавляет репликацию вирусов SARS (6). Было также показано, что арбидол блокирует репликацию вируса, ингибируя слияние липидных мембран вируса гриппа с клетками-хозяевами (7). Основываясь на результатах вышеупомянутых исследований и доступности препарата, некоторые медицинские работники в больнице Тунцзи в профилактических целях приняли на себя пероральный противовирусный препарат арбидол в клинической практике, но его роль не ясна.

Таким образом, мы использовали сопоставимое по возрасту исследование случай-контроль для ретроспективного анализа корреляции между COVID-19 и профилактическим пероральным применением арбидола среди медицинских работников в больнице Тонгцзи, чтобы изучить влияние арбидола на COVID-19 среди медицинских работников.

Методы

Дизайн исследования и участники

После вспышки в Ухане большое количество медицинских работников в нашей больнице были на передовой, что является хорошей выборкой для анализа. Таким образом, были ретроспективно отобраны работающие в больнице Тунцзи медицинские работники, которым был поставлен диагноз COVID-19 с помощью теста на нуклеиновую кислоту мазка из горла (инфекционная группа) до 9 февраля 2020 года. В зависимости от возраста и области работы они были сопоставлены по частоте, и было выбрано такое же количество неинфицированных медицинских работников, работающих в больнице Тунцзи (неинфицированная группа).Отделения высокого риска включали амбулаторное отделение и отделение неотложной помощи, отделение лихорадки, респираторное отделение, торакальное хирургическое и инфекционное отделение, тогда как другие отделения не относились к отделениям высокого риска. Неизвестно, принимали ли инфицированные и неинфицированные пациенты профилактически пероральный арбидол перед отбором. Защитные меры, принятые медицинскими работниками, были единогласно запрошены в том же отделении или на рабочем месте, например, защитный костюм, защитные очки, маски и т. Д.Пациенты в группе инфекции, которые принимали арбидол в течение 2 недель до появления первых симптомов, были определены как принимающие арбидол. Субъекты из неинфицированной группы, которые принимали перорально арбидол в тот же период, также были определены как принимающие арбидол. Профилактическая доза была определена как 200 мг каждые сутки перорально, тогда как терапевтическая доза была определена как 600 мг каждые сутки перорально.

Это исследование было рассмотрено и одобрено Медицинским этическим комитетом больницы Тунцзи при Хуачжунском университете науки и технологий (идентификатор IRB: TJ-C20200133).

Сбор данных

Сбор информации осуществлялся в основном с помощью системы электронных медицинских карт нашей больницы и телефонных интервью. Индикаторы сбора данных включали в основном возраст, пол, сопутствующие заболевания, род занятий, отдел работы, время начала COVID-19, прием арбидола, место изоляции (больница / дом / гостиница), лабораторные параметры, наличие тяжелой пневмонии во время госпитализации и клинические исходы. . Клинические данные были получены с использованием стандартизованных форм для всех вовлеченных субъектов.Два исследователя независимо проанализировали данные.

Результаты

Определено распределение COVID-19 среди медицинских работников нашей больницы с 5 января 2020 года. Статистический анализ был включен для изучения взаимосвязи между исходными характеристиками медицинских работников и инфекцией SARS-CoV-2. В группе инфицированных оценивалась связь профилактического перорального приема арбидола с госпитализацией и развитием тяжелой пневмонии.

Статистический анализ

Статистическая программа SPSS 23.0 использовался в этом исследовании. Для проверки нормальности данных использовался однократный тест k-s. Категориальные переменные были описаны как частота и проценты, а непрерывные переменные были описаны с использованием средних или медианных значений и межквартильного диапазона (IQR). Средние значения для непрерывных переменных сравнивались с использованием независимых групп t -тестов, когда данные были нормально распределены; в противном случае использовался тест Манна – Уитни. Пропорции категориальных переменных сравнивались с использованием критерия χ2, хотя точный критерий Фишера использовался, когда данные были ограничены.Уровни безинфекционной выживаемости сравнивали с использованием лог-рангового теста. Тесты проводились при уровне α = 0,05 (обе стороны), и P <0,05 указывает на то, что разница статистически значима.

Результаты

После вспышки в Ухане количество подтвержденных случаев быстро увеличивалось: первоначальная оценка R ₀ составила 2,2 (95% ДИ 1,4–3,9) (8). Аналогичным образом, число подтвержденных случаев заболевания среди медицинского персонала продолжает расти.В это исследование были включены в общей сложности 164 человека, 82 случая в инфицированной группе и 82 контрольной группы в неинфицированной группе со средним возрастом 37 лет, в том числе 63 мужчины и 101 женщина (Таблица 1). Шестьдесят специалистов здравоохранения работали в отделениях высокого риска и 104 пациента работали в отделениях не высокого риска. Небольшое количество случаев сопровождалось основными заболеваниями, в основном гипертонией и диабетом. Распределение начала заболевания среди медицинских работников в инфицированной группе, включенной в исследование, показано на рисунках 1A, B.

Таблица 1 . Исходные характеристики медицинских работников, включенных в исследование.

Рисунок 1 . Распределение специалистов здравоохранения, участвовавших в расследовании. (A) Начало заболевания среди подтвержденных случаев COVID-19 в больнице Тунцзи. (B) Состав лиц, участвовавших в этом исследовании. (C) Уровень безинфекционной выживаемости людей, принимающих арбидол, и контрольной группы в течение 45 дней после вспышки COVID-19.

Девятнадцать (23,2%) пациентов в инфицированной группе получали арбидол перорально с профилактической целью, а 48 (58,5%) пациентов в неинфицированной группе принимали арбидол. Сравнительный анализ инфицированных и неинфицированных групп показал, что не было никакой корреляции между инфекцией SARS-CoV-2 и полом, родом занятий и сопутствующими заболеваниями медицинских работников, но была значимая корреляция с арбидолом (23,2 против 58,5%). , OR = 0,214, 95% ДИ 0,109–0,420; P <0,001), что указывает на то, что арбидол защищает от COVID-19 у медицинских работников (таблица 1).Совокупное количество медицинских работников, заболевших COVID-19 в нашей больнице, продолжало расти с 5 января 2020 года по 8 февраля 2020 года. Недостаточная осведомленность о защите и недостаточные медицинские средства защиты были важными причинами заражения медицинского персонала на ранней стадии. Совокупный уровень неинфицированных медицинских работников в группе, принимавшей арбидол, был значительно выше, чем у лиц в группе, не принимавшей арбидол (лог-ранговый тест, χ ² = 98,74; P <0,001) (рисунок 1C).

48 пациентов (58,5%) в группе инфекции были госпитализированы со средним возрастом 39 (31–49) лет, из которых 7 (14,6%) принимали арбидол в профилактических целях. Тридцать четыре человека (41,5%) имели легкие симптомы и были изолированы за пределами больницы (дома или в отеле). Средний возраст составлял 34 (30–39) лет, двенадцать человек (35,3%) принимали арбидол перорально. Среди пациентов, инфицированных SARS-CoV-2, сравнительный анализ между госпитализированной группой и не госпитализированной группой показал, что частота госпитализаций была связана с возрастом ( P = 0.024) и пероральное применение арбидола (OR = 0,313, 95% ДИ 0,108–0,909; P = 0,029) (Таблица 2). Кроме того, пероральный прием арбидола также отрицательно коррелировал с продолжительностью положительного мазка из зева ( r = -0,286, P = 0,011). Между тем, не было никакой корреляции с полом, профессией или сопутствующими заболеваниями медицинских работников, что позволяет предположить, что более молодой возраст и профилактическое пероральное употребление арбидола могут защитить от прогрессирования заболевания.

Таблица 2 . Характеристики инфицированных медицинских работников, включенных в исследование.

Чтобы свести к минимуму возможные искажающие эффекты возраста, было проведено исследование типа случай-контроль. Однако в подобранном по возрасту исследовании случай-контроль частота госпитализаций не была достоверно связана с приемом арбидола ( P = 0,091) (таблица 3). Кроме того, пероральный прием арбидола не имел значимой корреляции с продолжительностью положительного мазка из зева ( r = -0,240, P = 0,056) в зависимости от возраста, что указывает на то, что профилактический пероральный прием арбидола не может замедлить прогрессирование COVID-19.У четырех из 48 госпитализированных пациентов развилась тяжелая пневмония со средним возрастом 51 (43–62) года, и все они не принимали профилактический пероральный арбидол. Средний возраст 44 пациентов, не находящихся в критическом состоянии, составлял 39 (30–48) лет, 7 из них принимали арбидол перорально. Тяжелая пневмония была связана с возрастом ( P = 0,027), но корреляции с полом, профессией, сопутствующими заболеваниями или пероральным приемом арбидола не было обнаружено, что позволяет предположить, что пациенты пожилого возраста подвержены тяжелой пневмонии.Один из 82 заболевших умер от дыхательной недостаточности во время госпитализации, остальные пациенты вылечились.

Таблица 3 . Клинические характеристики инфицированных медицинских работников в подобранном исследовании случай-контроль.

Обсуждение

Чтобы преодолеть нынешнюю серьезную эпидемическую ситуацию, COVID-19 стал горячей точкой для исследований. В настоящее время имеется большое количество литературы, посвященной эпидемиологии, клиническим характеристикам и прогнозу заболевания (1, 4, 9).Однако исследований по лекарственной профилактике для этой особой группы медицинских работников не проводилось.

Это исследование показало, что профилактический пероральный прием арбидола был значительно связан со снижением уровня инфицирования SARS-CoV-2 среди медицинских работников, что показало, что арбидол может играть профилактическую роль у медицинских работников. Арбидол представляет собой противовирусное соединение широкого спектра действия, которое блокирует контакт, адгезию и слияние вирусных липидных капсул и мембран клеток-хозяев и блокирует репликацию вируса (6, 10). In vivo и in vitro Эксперименты подтверждают, что арбидол оказывает ингибирующее действие на различные респираторные вирусы, включая вирусы с оболочкой и без оболочки, а также вирусы РНК и ДНК (11). Рандомизированное контролируемое исследование давало рабочим арбидол (200 мг / сут) перорально во время эпидемии гриппа в течение 10–18 дней и обнаружило, что арбидол оказывает значительный профилактический эффект (12). Аналогичным образом Титова и соавт. пероральный прием арбидола пациентам с астмой и хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) для профилактики вирусных инфекций (13).Недавно пероральное применение арбидола показало благоприятный клинический ответ у пациентов с COVID-19 (14). Эти результаты согласуются с результатами, полученными в нашем исследовании, о том, что арбидол отрицательно связан с инфекцией SARS-CoV-2.

Стоит отметить, что это исследование показало, что профилактический пероральный прием арбидола не был существенно связан с частотой госпитализаций и продолжительностью положительных мазков из зева у медицинских работников с COVID-19. Более того, нет статистической корреляции между профилактическим лечением и тяжелой пневмонией, что заслуживает дальнейшего рассмотрения.Возможные причины предполагались следующим образом. Арбидол эффективно блокирует проникновение вируса в клетки-хозяева и блокирует начальные стадии патогенного процесса вируса, обеспечивая профилактическую защиту (10, 11). Однако, когда в клетках-хозяевах реплицируется большое количество вирусов, защитный эффект арбидола ограничен. Поэтому перспективным вариантом может быть комбинированное применение арбидола и других противовирусных препаратов. Следует отметить, что профилактический пероральный прием арбидола чаще применялся среди не госпитализированных пациентов (35 vs.15%), хотя эта разница не была значимой после сопоставления с возрастом ( P = 0,091). Необходимы дальнейшие исследования, чтобы выяснить роль и механизм арбидола при инфекциях SARS-CoV-2.

Арбидол был допущен к продаже в Китае в 2006 году для лечения инфекций верхних дыхательных путей, вызванных вирусами гриппа A и B. Он хорошо переносится людьми и безопасен. Шестьдесят семь медицинских работников, которые принимали пероральный арбидол, могли переносить его (в среднем 6,7 дней) в нашем исследовании, среди которых мало людей имели легкую диарею даже в терапевтической дозе (~ 10%).О серьезных побочных эффектах, связанных с пероральным приемом арбидола, не сообщалось.

Ограничения данного исследования

Это исследование также имеет ограничения. Это одноцентровое ретроспективное исследование ограниченного размера, в котором отсутствует многоцентровое проспективное когортное исследование для улучшенной проверки. Кроме того, нет гарантии, что осведомленность участников о защите и меры защиты были полностью согласованы.

Заключение

Таким образом, арбидол в значительной степени был связан с уменьшением инфицирования SARS-CoV-2 и может играть профилактическую роль среди медицинских работников.Этот вывод также имеет определенное значение для других групп высокого риска, таких как члены семей пациентов с COVID-19 и персонал по борьбе с инфекционными заболеваниями.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Комитетом по медицинской этике больницы Тунцзи при университете науки и технологий Хуачжун.Письменное информированное согласие на участие не требовалось для этого исследования в соответствии с национальным законодательством и институциональными требованиями.

Авторские взносы

CY, WLi и ZH внесли существенный вклад в дизайн исследования. CK и DY отвечали за черновик рукописи. JL взяла на себя ответственность за получение этического одобрения. WLiu и SH взяли на себя ответственность за сбор данных. CY и ZH внесли основной вклад в анализ и интерпретацию данных.CY и JL участвовали в диагностике и лечении медицинских работников. SW внесла в рукопись существенные исправления.

Финансирование

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (№ 81702989).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Список литературы

1.Zhu N, Zhang D, Wang W, Li X, Yang B, Song J и др. Новый коронавирус от пациентов с пневмонией в Китае, 2019 г. N Engl J Med. (2020). 382: 727–33. DOI: 10.1056 / NEJMoa2001017

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

3. Чо СИ, Кан Дж. М., Ха Й. Е., Пак Г. Е., Ли Дж. Й., Ко Дж. Х. и др. Вспышка БВРС-КоВ после контакта с одним пациентом в отделении неотложной помощи в Южной Корее: эпидемиологическое исследование вспышки. Ланцет. (2016) 388: 994–1001.DOI: 10.1016 / S0140-6736 (16) 30623-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

4. Ван Д., Ху Б., Ху Ц., Чжу Ф., Лю X, Чжан Дж. И др. Клинические характеристики 138 госпитализированных пациентов с пневмонией, инфицированной новым коронавирусом 2019 г., в Ухане, Китай. JAMA. (2020) 323: 1061–9. DOI: 10.1001 / jama.2020.1585

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Хамитов Р.А., Логинова С., Щукина В.Н., Борисевич С.В., Максимов В.А., Шустер А.М.[Противовирусная активность арбидола и его производных в отношении возбудителя тяжелого острого респираторного синдрома в культурах клеток]. Vopr Virusol. (2008) 53: 9–13.

PubMed Аннотация | Google Scholar

7. Крамарев С.А., Мощич А.П. [Лечение гриппа и ОРВИ]. Лик Справа . (2013). 99–106.

PubMed Аннотация | Google Scholar

8. Ли Кью, Гуань Х, Ву П, Ван Х, Чжоу Л., Тонг И и др. Динамика ранней передачи новой пневмонии, инфицированной коронавирусом, в Ухане, Китай. N Engl J Med. (2020) 382: 1199–207. DOI: 10.1056 / NEJMoa2001316

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

9. Zhou F, Yu T, Du R, Fan G, Liu Y, Liu Z и др. Клиническое течение и факторы риска смертности взрослых пациентов с COVID-19 в Ухане, Китай: ретроспективное когортное исследование. Ланцет. (2020) 395: 1054–62. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (20) 30566-3

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10.Борискин Ю.С., Ленева И.А., Печер Е.И., Поляк С.Ю. Арбидол: противовирусное соединение широкого спектра действия, блокирующее слияние вирусов. Curr Med Chem. (2008) 15: 997–1005. DOI: 10.2174 / 0708784049658

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12. Гагаринова В.М., Игнатьева Г.С., Синицкая Л.В., Иванова А.М., Родина М.А., Турьева А.В. [Новый химический препарат арбидол: его профилактическая эффективность во время эпидемий гриппа]. Ж Микробиол Эпидемиол Иммунобиол .(1993) 40–3.

PubMed Аннотация | Google Scholar

13. Титова О.Н., Петрова М.А., Шкляревич Н.А., Кузубова Н.А., Александров А.Л., Ковалева Л.Ф. и др. Эффективность арбидола в профилактике вирусных обострений бронхиальной астмы и хронической обструктивной болезни легких. Тер Арх. (2018) 90: 48–52. DOI: 10.26442 / terarkh3018

-52

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

14. Дэн Л., Ли Ц., Цзэн Ц., Лю Х, Ли Х, Чжан Х и др.Арбидол в сочетании с LPV / r по сравнению с одним LPV / r против коронавирусной болезни 2019: ретроспективное когортное исследование. J Заражение. (2020) S0163-4453 (20) 30113-4.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Влияние арбидола (умифеновира) на COVID-19: рандомизированное контролируемое исследование | BMC Infectious Diseases

С тех пор, как COVID-19 превратился в пандемию, на пациентах с COVID-19 были исследованы различные противовирусные препараты [13]. Арбидол — российский противовирусный препарат, который, по-видимому, эффективен против многих вирусов, включая грипп A, B и C, респираторно-синцитиальный вирус (RSV), коронавирус, связанный с тяжелым острым респираторным синдромом (SARS-CoV), аденовирус, парагрипп, полиовирус, риновирус. , вирус Коксаки, вирус Зика, вирусы гепатита В и С [14,15,16].Было продемонстрировано, что БРА оказывает двойное действие на прикрепление и репликацию клеток и, следовательно, на вирусы широкого спектра действия [8, 17], поэтому его применяют для постконтактной профилактики и лечения [18]. Поэтому БРА считается одним из противовирусных препаратов, которые могут быть эффективными при лечении пациентов с COVID-19. В настоящем рандомизированном контролируемом исследовании мы сравнили эффективность и безопасность противовирусных БРА и КАЛЕТРА у пациентов с COVID-19 и показали несколько преимуществ в группе БРА по сравнению с группой КАЛЕТРА.В ходе исследования было назначено 100 пациентов, 50 пациентов были назначены для приема БРА, а 50 — для приема КАЛЕТРА.

Мы сообщили, что тошнота / рвота были наиболее частым побочным эффектом среди участников исследования. Данные также показали, что оба препарата не имели серьезных побочных эффектов. Аналогичным образом, отчеты не обнаружили опасных для жизни нежелательных явлений в группах ARB и KALETRA [19, 20], за исключением Li et al. исследование, в котором был представлен пожилой пациент мужского пола с историей сахарного диабета и гипертонии в группе КАЛЕТРА, у которого возникла тяжелая диарея на третий день от начала лечения [19].

COVID-19 Пациенты, получавшие КАЛЕТРА, с большей вероятностью покажут более высокие уровни лейкоцитов и уровни СРБ в сыворотке, чем пациенты, получавшие БРА. Что касается дифференциала лейкоцитов, количество нейтрофилов, по-видимому, выше, а количество лимфоцитов у пациентов, получавших КАЛЕТРА, ниже, чем у пациентов с БРА [20]. В настоящем отчете мы отметили, что КАЛЕТРА, по сравнению с БРА, была значительно связана с более высокими уровнями лейкоцитов и СОЭ в сыворотке крови после 7 дней приема. С другой стороны, хотя мы обнаружили, что пациенты в группе КАЛЕТРА имели более высокие доли СРБ ≥ 2+, чем в группе БРА через 7 дней после поступления, между ними не было значимой разницы.Через 7 дней приема количество нейтрофилов в группе КАЛЕТРА было значительно ниже, чем в группе БРА. Однако разные результаты между отчетами могут быть связаны с различиями в дизайне исследований, схемах лечения и размерах выборки.

Мы показали, что несколько большее количество пациентов в группе БРА имели тяжелый клинический статус по сравнению с группой КАЛЕТРА (24% против 22%, соответственно), хотя между группами он существенно не отличался. Однако считается, что БРА сводит к минимуму вероятность ухудшения клинического состояния.Сообщалось, что более низкая распространенность пациентов с COVID-19, получавших БРА (8,6%), ухудшилась до тяжелого клинического состояния по сравнению с пациентами, получавшими КАЛЕТРУ (23,5%) во время госпитализации, но существенной разницы между двумя группами лечения не было. найдено [19].

Хотя все пациенты в обеих группах имели одинаковую степень тяжести при поступлении, 18,6% пациентов в группе БРА были кандидатами для направления в отделение интенсивной терапии (ОИТ) при поступлении по сравнению с 81% пациентов в группе КАЛЕТРА.Пациенты в группе ARB провели меньшую продолжительность госпитализации (7,2 дня) по сравнению с группой KALETRA (9,6 дня, p -значение = 0,02). Кроме того, у 81% пациентов в группе ARB было легкое поражение при КТ грудной клетки через 30 дней госпитализации по сравнению с 53% в группе KALETRA ( p -значение = 0,004). Примечательно, что мы заметили несколько демографических, клинических и лабораторных детерминант продолжительности госпитализации пациентов с COVID-19, включая ИБС, сатурацию кислорода при поступлении, лечение БРА, уровни Na ​​в плазме и лимфоцитоз со значением вероятности 0.06. В связи с этим в двух когортных исследованиях из Ухани, Китай, было отмечено, что пациенты с COVID-19 в возрасте ≥80 лет с лимфопенией (<1,1 × 10 ⁹ / л) имели более длительную госпитализацию [21, 22].

В совокупности наши результаты указывают на более низкую долю госпитализаций в ОИТ, более короткую продолжительность пребывания в больнице и более высокий процент легкого поражения КТ грудной клетки после 30 дней госпитализации среди пациентов с COVID-19, которые лечились с помощью БРА, по сравнению с КАЛЕТРОЙ. это означает, что БРА может превзойти КАЛЕТРУ в лечении пациентов с COVID-19.Хотя на сегодняшний день ни вакцины, ни противовирусные препараты не одобрены для лечения COVID-19, «Национальная комиссия здравоохранения и Национальное управление традиционной китайской медицины» недавно рекомендовали КАЛЕТРУ в сочетании с БРА и сообщили о его противовирусных эффектах [23]. Однако, насколько нам известно, ограниченное количество документов оценивает эффективность и безопасность БРА для пациентов с COVID-19. В соответствии с нашим исследованием, ретроспективное исследование, проведенное в Китае, сравнивало эффективность и безопасность КАЛЕТРА и БРА у пациентов с COVID-19 [20].Они не обнаружили вирусной нагрузки в группе БРА, в то время как вирусная нагрузка 44,1% была обнаружена в группе КАЛЕТРА, и пришли к выводу, что монотерапия БРА может быть более эффективной, чем КАЛЕТРА для лечения COVID-19. Аналогичным образом, другое ретроспективное исследование показало, что БРА в сочетании с КАЛЕТРОЙ, по сравнению с одним КАЛЕТРА, улучшит вирусный клиренс и КТ грудной клетки [24]. Когортное исследование 504 госпитализированных пациентов с COVID-19 со смешанной степенью тяжести заболевания показало, что БРА значительно снизила смертность (OR = 0.183, 95% ДИ = 0,075–0,446), и он с большей вероятностью поглощал поражения при КТ грудной клетки [25]. Однако рандомизированное контролируемое исследование Li et al. и ретроспективное исследование Chen et al. предположили, что ни симптомы COVID-19, ни поражение КТ грудной клетки, ни время до отрицательного результата ПЦР SARS-CoV-2 в респираторных образцах не было улучшено / уменьшено у пациентов, получавших КАЛЕТРУ и БРА [19, 26]. Несмотря на небольшой размер выборки в Li et al. исследование [19], они не набирали пациентов с тяжелыми или критическими заболеваниями.Кроме того, в отличие от Li et al. [19], мы давали КАЛЕТРА и АРБ в сочетании с гидроксихлорохином каждой группе. Тем не менее, мы считаем, что наши результаты могут помочь врачам разработать соответствующие стратегии лечения среди новых доказательств в отношении лечения COVID-19.

Препарат против вируса гриппа, арбидол, является эффективным ингибитором SARS-CoV-2 in vitro

С декабря 2019 года новое заболевание COVID-19, вызванное тяжелым острым респираторным синдромом, коронавирусом 2 (SARS-CoV-2), быстро распространилось в более чем 200 стран и заразило более 1 страны.50 млн человек, в том числе погибших (данные на 10 апреля 2020 г.). 11 марта Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) охарактеризовала COVID-19 как пандемию и призвала ускорить разработку диагностических средств, вакцин и лекарств для борьбы с этим новым заболеванием. Помимо нового коронавируса, инфекции, вызванные вирусом гриппа, на протяжении многих лет представляли постоянную угрозу для здоровья населения мира. По оценкам Центров по контролю и профилактике заболеваний (CDC) только в Соединенных Штатах, за зимний сезон 2019–2020 гг. Было зарегистрировано не менее 39 миллионов заболеваний, 400 000 госпитализаций и 24 000 смертей от гриппа (https: // www.cdc.gov/flu/weekly/index.htm). Учитывая текущую одновременную циркуляцию SARS-CoV-2 и вирусных инфекций гриппа, большой интерес представляет поиск доступных и жизнеспособных противогриппозных препаратов для лечения обоих заболеваний.

Фактически, на ранних стадиях вспышки COVID-19 для лечения пациентов с COVID-19 применялись некоторые противогриппозные препараты (например, осельтамивир) ^1,2 . Ранее мы сообщали, что фавипиравир (T705), противогриппозный препарат, одобренный в Японии и Китае, показал определенную эффективность против SARS-CoV-2 in vitro ³ .Кроме того, арбидол, противогриппозный препарат, нацеленный на вирусный гемагглютинин (НА), используется в клинических испытаниях против COVID-19 (ChiCTR2000029573) и недавно был добавлен в Руководство по диагностике и лечению COVID-19 (шестое и седьмое издание) в Китае. Недавнее ретроспективное исследование показало, что лечение арбидолом показало тенденцию к улучшению скорости выделения и снижению смертности пациентов с COVID-19 ⁴ . Однако, насколько нам известно, систематического анализа эффективности противогриппозных препаратов против SARS-CoV-2 не проводилось.

В этом исследовании мы оценили шесть доступных в настоящее время и лицензированных противогриппозных препаратов против SARS-CoV-2. К препаратам относятся арбидол, балоксавир, ланинамивир, осельтамивир, перамивир и занамивир ^5,6 . Ингибиторы M2 (амантадин и римантадин) не рассматривались в этом исследовании, поскольку они не были рекомендованы ВОЗ для лечения гриппа из-за лекарственной устойчивости. Во-первых, цитотоксичность соединений в клетках почек африканской зеленой мартышки Vero E6 (ATCC-1586) измеряли с помощью стандартного набора для подсчета клеток-8 (CCK8).Затем клетки инфицировали SARS-CoV-2 при множественности инфицирования (MOI) 0,05 в присутствии либо соединения, либо диметилсульфоксида (DMSO) в качестве контроля. Кривые «доза-ответ» определяли путем количественной оценки числа копий вирусной РНК в супернатанте инфицированной клетки через 48 часов после инфицирования (p.i.). Как показано на рис. 1а, арбидол эффективно ингибировал вирусную инфекцию in vitro. 50% максимальная эффективная концентрация (EC ₅₀ ) и 50% цитотоксическая концентрация (CC ₅₀ ) арбидола составляли 4.11 (3,55–4,73) и 31,79 (29,89–33,81) мкМ соответственно, а индекс селективности (SI = CC ₅₀ / EC ₅₀ ) составил 7,73. Балоксавир частично подавлял инфекцию SARS-CoV-2 (~ 29%) при высокой концентрации 50 мкМ (рис. 1а). Напротив, ланинамивир, осельтамивир, перамивир и занамивир не проявляли активности против SARS-CoV-2 даже при самых высоких концентрациях препарата (рис. 1а). Противовирусный эффект соединений также оценивали, наблюдая цитопатические эффекты (CPE) и иммунофлуоресцентное окрашивание инфицированных клеток.Как показано на дополнительном рисунке S1, при 48 часах на дюйм. только в клетках, обработанных арбидолом, но не другими пятью препаратами, экспрессия вирусных NP и CPE, вызванная SARS-CoV-2, была существенно снижена. Следует отметить, что мы также попробовали некоторые линии клеток легких человека, например фибробласты легких человеческого эмбриона MRC-5 и линию клеток рака легких Calu-3, однако они не были очень эффективны для репликации SARS-CoV-2 и, следовательно, не были использованный для этого исследования.

Рис. 1: Сравнительная противовирусная эффективность противогриппозных препаратов и механизм действия арбидола против инфекции SARS-CoV-2 in vitro.

a Противовирусная активность препаратов. Противовирусную эффективность оценивали на клетках Vero E6 с помощью qRT-PCR анализа выхода вируса через 48 ч p.i. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (SD) от двух независимых повторов. b , c Время добавления арбидола. Были созданы три экспериментальные группы (постоянная, начальная и пост-начальная), как описано в дополнительных методах. Через 16 ч p.i. выход вируса в клеточном супернатанте количественно оценивали с помощью qRT-PCR ( b ), а экспрессию NP в инфицированных клетках анализировали с помощью вестерн-блоттинга ( c ).Значения под блотом представляют собой относительную интенсивность полосы (NP / GAPDH), нормализованную по отношению к группе ДМСО. d Влияние арбидола на связывание SARS-CoV-2. Клетки Vero E6 обрабатывали арбидолом (10 мкМ) или ДМСО в течение 1 часа перед заражением SARS-CoV-2 при 4 ° C в течение 1 часа. Супернатант (несвязанные вирионы) и клетки, содержащие связанные вирионы (связанные вирионы), собирали для количественной оценки копий вирусной РНК с помощью qRT-PCR. e , f Влияние арбидола на внутриклеточный трафик SARS-CoV-2.Совместную локализацию вирионов с EE или LE анализировали с помощью иммунофлуоресцентных анализов, как описано в дополнительных методах. e Доля вирионов, которые совместно локализованы с EE или EL в каждой группе ( n > 150 клеток), была количественно определена с помощью изображения J. f Репрезентативные конфокальные микроскопические изображения вирионов (красный) и LAMP1 ⁺ EL. (зеленый) в каждой группе. Ядра (синие) окрашивали красителем Hoechst 33258. Белые стрелки: вирионы, локализованные вместе с EL; стержни: 10 мкм.Для ( b ) и ( e ) статистический анализ был выполнен с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с GraphPad Prism. Для ( d ) был проведен статистический анализ и рассчитан непарный двусторонний тест t . * P <0,05; *** П <0,001; нс, не имеет значения.

Сообщается, что помимо вируса гриппа арбидол ингибирует широкий спектр вирусов, вмешиваясь в несколько этапов цикла репликации вируса ⁷ .Стадия репликации SARS-CoV-2, на которую нацелена арбидол, была исследована путем проведения предварительного эксперимента по времени добавления с использованием вируса с MOI 0,05. Арбидол инкубировали с клетками во время процесса проникновения вируса (Entry), стадий после входа (Post-entry) или всего процесса инфицирования (Full-time), и выход потомства вируса количественно оценивали с помощью qRT-PCR. Данные показали, что арбидол эффективно блокировал как проникновение вируса, так и пост-входную стадию. Он оказал сильное влияние на проникновение вируса (ингибирование ~ 75%) с меньшим влиянием на события после входа (уровень ингибирования ~ 55%) (рис.1б). Кроме того, вестерн-блоттинг (рис. 1c) и иммунофлуоресцентная микроскопия (дополнительный рис. S2) подтвердили, что уровень экспрессии вирусных NP резко снизился в течение полного рабочего дня (13% в группе DMSO, рис. 1c), и показал больший ингибирующий эффект на этапе входа (41%), чем на этапе после входа (61%).

Подробности того, как арбидол блокирует проникновение SARS-CoV-2 в клетки, были дополнительно исследованы. Вирусу (MOI = 0,05) позволяли связываться с клетками Vero E6 при 4 ° C в течение 1 ч в присутствии арбидола (10 мкМ) или контроля ДМСО.Частицы вируса, связанные с клеткой (связанные вирионы), и частицы в супернатанте (несвязанные вирионы) анализировали с помощью qRT-PCR. Результаты показали, что лечение арбидолом привело к значительному снижению эффективности связывания (67%) по сравнению с контрольной группой ( P <0,05) (рис. 1d). Соответственно, доля несвязавшихся вирионов значительно увеличилась до 156% от контрольной группы после обработки арбидолом ( P <0,001) (рис. 1d).

Затем мы проанализировали внутриклеточный трафик вирусов.Как мы недавно сообщали, внутри инфицированных клеток SARS-CoV-2 претерпевал транспорт везикул, который сначала осуществлялся ранними эндосомами (EE), а затем переносился в эндолизосомы (EL) ⁸ . Совместную локализацию вирионов с EE или EL визуализировали с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии и статистически анализировали ( n > 150 клеток). Как показано на рис. 1e и дополнительном рис. S3, в каждой отслеживаемой временной точке не было значительной разницы в количествах вирионов, совместно локализованных с EE, при сравнении групп, обработанных ДМСО и арбидолом, хотя по мере того, как время заражения шло на (30, 60 и 90 мин с.i.), уровни совместной локализации значительно снизились в группах, обработанных как ДМСО- (24,0%, 5,1% и 3,2%), так и арбидолом (21,4%, 4,1% и 2,8%), что позволяет предположить, что некоторые вирионы уже были транспортируется от ЭЭ к следующему этапу транспорта везикул. Напротив, через 60 мин после введения немного более высокий процент вирионов переносился в EL в группе, обработанной арбидолом (22,4%), чем в группе, получавшей ДМСО (18,3%) ( P <0,05) (рис. 1e, f ). При 90 мин p.i. значительно меньше вирионов (~ 13.5%) были обнаружены в EL в группе ДМСО; тогда как значительно более высокие доли вирионов (~ 23,6%) оставались в пределах EL в группе, обработанной арбидолом, что позволяет предположить, что лекарство захватило вирус в ELs ( P <0,001) (рис. 1e, f). Взятые вместе, эти результаты свидетельствуют о том, что арбидол препятствует не только прикреплению вируса, но и высвобождению SARS-CoV-2 из внутриклеточных везикул (EL).

Среди протестированных препаратов ланинамивир, осельтамивир, перамивир и занамивир являются ингибиторами нейраминидазы (НА), которые наиболее широко назначаются для профилактики и лечения гриппа.Хотя у SARS-CoV-2 аналогов NA не существует, ингибиторы NA, такие как осельтамивир, тем не менее, используются в клинической практике для лечения пациентов с COVID-19 ^1,2 . Наши данные показали, что эти ингибиторы NA не активны против SARS-CoV-2 (рис. 1a), что согласуется с выводом о том, что осельтамивир и занамивир неэффективны в ингибировании SARS-CoV ⁹ . Балоксавир марбоксил — это новое лекарство от гриппа, которое избирательно ингибирует эндонуклеазную активность вирусной полимеразы, ответственной за отрывание кэпированных праймеров от мРНК хозяина для инициации транскрипции вирусной мРНК.Однако этот эндонуклеазный механизм «захвата кэпа» не является общим для коронавирусов, которые кодируют свои собственные ферменты для образования кэп-структур 5ʹ-мРНК ¹⁰ . Это может объяснить, почему балоксавир не смог блокировать инфекцию SARS-CoV-2 (рис. 1а). В процессе обзора этого исследования Choy et al. также показали, что осельтамивир и балоксавир не могут ингибировать SARS-CoV-2 in vitro ¹¹ .

Арбидол, производное индола, на протяжении десятилетий лицензировался в России и Китае против гриппа.Это препарат широкого спектра действия против широкого спектра вирусов в оболочке и без нее. Арбидол взаимодействует преимущественно с ароматическими аминокислотами и влияет на несколько стадий жизненного цикла вируса либо путем прямого воздействия на вирусные белки, либо путем воздействия на вирус-ассоциированные факторы хозяина ⁷ . Например, в вирусе гриппа кристаллические структуры показали, что арбидол вставлен в гидрофобный карман субъединицы слияния НА, тем самым препятствуя конформационному изменению НА при низком pH и блокируя процесс слияния ¹² .В вирусе гепатита С арбидол нарушал как прикрепление вируса, так и движение внутриклеточных пузырьков ¹³ . Аналогичным образом, мы обнаружили, что арбидол играет роль в препятствовании связыванию SAS-CoV-2 (рис. 1d) и перемещению внутриклеточных пузырьков (рис. 1e, f). Арбидол также может связываться с липидными мембранами и может изменять конфигурацию мембран цитоплазмы или эндосомы, которые имеют решающее значение для прикрепления и слияния вирусов ⁷ . Можно было бы дополнительно изучить, нацелен ли арбидол на вирус и / или клетки, используя опубликованный метод ¹⁴ .

Таким образом, из шести противогриппозных препаратов только арбидол эффективно подавлял инфекцию SARS-CoV-2. Функционально он, по-видимому, блокирует проникновение вируса, препятствуя прикреплению и высвобождению вируса из EL. Хотя SI арбидола относительно низок (SI = 7,73), его фармакокинетический профиль, такой как максимальная концентрация (Cmax), более важен для прогнозирования эффективности. Обычно считается, что если Cmax достигает EC ₉₀ , лекарство, скорее всего, будет эффективным; тогда как если Cmax достигает EC ₅₀ , лекарство, возможно, эффективно in vivo.У людей однократное пероральное введение 800 мг арбидола приводит к Cmax ~ 4,1 мкМ ¹⁵ , и эта доза является эффективной и безопасной в отношении различных вирусов гриппа со значениями EC ₅₀ в диапазоне 2,5–20 мкМ ^7,16 . Арбидол также показал противовоспалительную активность, что может повысить его эффективность in vivo ¹⁶ . Учитывая, что ЕС ₅₀ (4,11 мкМ) арбидола против SARS-CoV-2 сопоставим или даже ниже, чем у вирусов гриппа, мы, следовательно, предполагаем, что арбидол потенциально эффективен для лечения пациентов с COVID-19.Однако текущая доза арбидола (200 мг, 3 раза в день), рекомендованная китайскими руководящими принципами, может не обеспечить идеальной терапевтической эффективности для подавления инфекции SARS-CoV-2, и ее следует повысить. Это необходимо подтвердить клиническими испытаниями.

Ссылки

1. 1.

   Chen, N. et al. Эпидемиологические и клинические характеристики 99 случаев новой коронавирусной пневмонии 2019 г. в Ухане, Китай: описательное исследование. Ланцет 395 , 507–513 (2020).

   CAS
   Статья

   Google Scholar

2. 2.

   Huang, C. et al. Клинические особенности пациентов, инфицированных новым коронавирусом 2019 г., в Ухане, Китай. Ланцет 395 , 497–506 (2020).

   CAS
   Статья

   Google Scholar

3. 3.

   Wang, M. et al. Ремдесивир и хлорохин эффективно подавляют недавно появившийся новый коронавирус (2019-nCoV) in vitro. Cell Res. 30 , 269–271 (2020).

   CAS
   Статья

   Google Scholar

4. 4.

   Ван, З., Ян, Б., Ли, К., Вэнь, Л. и Чжан, Р. Клинические особенности 69 случаев коронавирусной болезни в 2019 г. в Ухане, Китай. Clin. Заразить. Dis . ciaa272 (2020).

5. 5.

   De Clercq, E. & Li, G. Утвержденные противовирусные препараты за последние 50 лет. Clin. Microbiol. Ред. 29 , 695–747 (2016).

   Артикул

   Google Scholar

6. 6.

   Гаспарини, Р., Амициция, Д., Лай, П. Л., Брагацци, Н. Л. и Панатто, Д. Соединения с противогриппозной активностью: настоящее и будущее стратегий оптимального лечения и ведения гриппа. Часть I: Жизненный цикл гриппа и доступные в настоящее время лекарства. J. Prev. Med. Hyg. 55 , 69–85 (2014).

   CAS
   PubMed
   PubMed Central

   Google Scholar

7. 7.

   Блейзинг Дж., Поляк С. Дж. И Пешер Э. И. Арбидол как противовирусное средство широкого спектра действия: обновленная информация. Антивирь. Res. 107 , 84–94 (2014).

   CAS
   Статья

   Google Scholar

8. 8.

   Liu, J. et al. Гидроксихлорохин, менее токсичное производное хлорохина, эффективно подавляет инфекцию SARS-CoV-2 in vitro. Cell Discov. 6 , 16 (2020).

   CAS
   Статья

   Google Scholar

9. 9.

   Tan, E. L. et al. Подавление коронавирусной инфекции SARS in vitro клинически одобренными противовирусными препаратами. Emerg. Заразить. Дис. 10 , 581–586 (2004).

   CAS
   Статья

   Google Scholar

10. 10.

    Декрол, Э., Феррон, Ф., Лескар, Дж. И Канард, Б. Обычные и нетрадиционные механизмы кэпирования вирусной мРНК. Nat. Rev. Microbiol. 10 , 51–65 (2011).

    Артикул

    Google Scholar

11. 11.

    Choy, K. T. et al. Ремдесивир, лопинавир, эметин и гомохаррингтонин ингибируют репликацию SARS-CoV-2 in vitro. Antiviral Res. 178 , 104786 (2020).

    CAS
    Статья

    Google Scholar

12. 12.

    Кадам Р. У. и Уилсон И. А. Структурные основы ингибирования слияния вируса гриппа противовирусным препаратом Арбидол. Proc. Natl Acad. Sci. США 114 , 206–214 (2017).

    CAS
    Статья

    Google Scholar

13. 13.

    Blaising, J. et al. Арбидол подавляет проникновение вирусов, препятствуя клатрин-зависимому трафику. Антивирь. Res. 100 , 215–219 (2013).

    CAS
    Статья

    Google Scholar

14. 14.

    Si, L. et al. Тритерпеноиды манипулируют широким спектром слияния вируса с хозяином посредством обертывания домена HR2, преобладающего в вирусных оболочках. Sci. Adv. 4 , eaau8408 (2018).

    CAS
    Статья

    Google Scholar

15. 15.

    Sun, Y. et al. Фармакокинетика однократных и многократных пероральных доз арбидола у здоровых китайских добровольцев. Внутр. J. Clin. Pharmacol. Ther. 51 , 423–432 (2013).

    CAS
    Статья

    Google Scholar

16. 16.

    Liu, Q. et al. Противовирусная и противовоспалительная активность арбидола гидрохлорида при инфицировании вирусом гриппа A (h2N1). Acta Pharmacol. Грех. 34 , 1075–1083 (2013).

    CAS
    Статья

    Google Scholar

Скачать ссылки

Благодарности

Мы благодарим профессора Чжэньхуа Чжэн из Уханьского института вирусологии за любезно предоставленные кроличьи поликлональные антитела против LAMP1; Beijing Savant Biotechnology Co., ltd за любезно предоставленные моноклональные антитела против NP; Цзя Ву, Цзюнь Лю и Хао Тан из лаборатории BSL-3 и доктору Дин Гао из основного факультета Уханьского института вирусологии за их критическую поддержку; ДокторВасилия Арифа за научное редактирование статьи. Эта работа была поддержана грантами Национального научно-технического проекта «Основные инновации и разработки в области новых лекарственных средств» (2018ZX09711003), Национальной программы ключевых исследований и разработок Китая (2020YFC0841700) и Национального фонда естественных наук Китая (31621061).

Информация об авторе

Заметки автора

1. Эти авторы внесли равный вклад: Си Ван, Жуйюань Цао, Хуанью Чжан

Принадлежности

1. Государственная ключевая лаборатория вирусологии, Институт вирусологии Ухани, Центр биобезопасности Mega-Science, Китайская академия наук, Ухань, 430071, Китай

   Си Ван, Хуанью Чжан, Цзя Лю, Минюэ Сю, Хенгруй Ху, Юйфэн Ли, Сюлянь Сунь, Синлоу Ян, Чжэнли Ши, Фэй Дэн, Чжихонг Ху и Манли Ван

Национальный инженерный исследовательский центр по лекарствам неотложной помощи, Пекинский институт фармакологии и токсикологии, Пекин, 100850, Китай

Жуйюань Цао, Лей Чжао, Вэй Ли и Ву Чжун

2. Университет Китайской академии наук, Пекин, 100049 , Китай

   Huanyu Zhang, Mingyue Xu, Hengrui Hu & Yufeng Li

3. Национальный центр вирусных ресурсов Уханьского института вирусологии Китайской академии наук, Ухань, 430071, Китай

   Фей Дэн

Вклады

М.W., W.Z. и Z.H. задумал и спланировал эксперименты. X.W., R.C., H.Z., J.L., M.X., H.H., Y.L., L.Z., W.L., X.Y., Z.S. и F.D. участвовал во множестве экспериментов; M.W., Z.H., W.Z., X.W., R.C., H.Z., J.L., M.X., H.H. Y.L. и X.S. проанализировали данные. M.W., R.C. и Z.H. написал газету. Z.H., M.W. и W.Z. обеспечил окончательное одобрение статьи.

Авторы, ответственные за переписку

Переписка на
Чжихун Ху, У Чжун или Манли Ван.

Этические декларации

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Дополнительная информация

Примечание издателя Springer Nature сохраняет нейтралитет в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и ​​сведений об учреждениях.

Дополнительная информация

Права и разрешения

Открытый доступ Эта статья находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 International License, которая разрешает использование, совместное использование, адаптацию, распространение и воспроизведение на любом носителе или любом формате, при условии, что вы укажете соответствующую ссылку на оригинального автора (авторов) и источник, укажите ссылку на лицензию Creative Commons и укажите, были ли внесены изменения.Изображения или другие сторонние материалы в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной линии для материала. Если материал не включен в лицензию Creative Commons для статьи и ваше предполагаемое использование не разрешено законодательными актами или превышает разрешенное использование, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

Перепечатки и разрешения

Об этой статье

Цитируйте эту статью

Wang, X., Cao, R., Zhang, H. et al. Препарат против вируса гриппа, арбидол, является эффективным ингибитором SARS-CoV-2 in vitro.
Cell Discov 6, 28 (2020). https://doi.org/10.1038/s41421-020-0169-8

Скачать цитату

Дополнительная литература

• Противовирусные препараты арбидол и интерферон альфа-1b способствуют снижению тяжести пациентов с COVID-19: ретроспективное когортное исследование

  • Peng Yin
  • , Juan Meng
  • , Jincheng Chen
  • , Junxiao Gao
  • , Dongqi Wang
  • , Shuyan Liu
  • , Qinglong Guo

  917 Zhung, Мугчунь

  9173

  • , Е Ли
  • и Гуолян Чжан

  Журнал вирусологии
  (2021 год)

• Характеристики SARS-CoV-2 и COVID-19

  • Бен Ху
  • , Хуа Го
  • , Пэн Чжоу
  • и Чжэн-Ли Ши

  Обзоры природы, микробиология
  (2021 год)

• Перекрестно-связывающий пептид и повторно назначенные препараты ингибируют оба пути проникновения SARS-CoV-2.

  • Ханьцзюнь Чжао
  • , Кельвин К.W. To
  • , Hoiyan Lam
  • , Xinxin Zhou
  • , Jasper Fuk-Woo Chan
  • , Zheng Peng
  • , Andrew CY Lee
  • , Jianpiao Cai
  • , Wan -han40 Daniel Ip 917
  • , Крис Чунг-Синг Чан
  • , Ман Лунг Йунг
  • , Анна Цзинься Чжан
  • , Аллен Винг Хо Чу
  • , Шибо Цзян
  • и Квок-Юнг Юн

  Nature Communications
  (2021 год)

• Онтологическое моделирование и анализ экспериментально или клинически проверенных препаратов против коронавирусной инфекции

  • Yingtong Liu
  • , Junguk Hur
  • , Wallace K.Б. Чан
  • , Чжиган Ван
  • , Цзянган Се
  • , Дуксинь Сунь
  • , Самуэль Хендельман
  • , Джонатан Секстон
  • , Хун Юй
  • и Юнцюн Хэ

  Научные данные
  (2021 год)

• CoViTris2020 и ChloViD2020: новая надежда на лечение COVID-19

  Молекулярное разнообразие
  (2021 год)

Как арбидол подавляет новый коронавирус SARS-CoV-2? Атомистические выводы из моделирования молекулярной динамики | Биологическая и медицинская химия | ChemRxiv

Abstract

Пандемия COVID-19 распространяется с угрожающей скоростью, создавая беспрецедентную угрозу для мировой экономики и здоровья людей.В настоящее время для лечения тяжелого острого респираторного синдрома, вызванного коронавирусом 2 (SARS-CoV-2), применяются противовирусные препараты широкого спектра действия. Китайские руководства по профилактике и лечению предлагают использовать противогриппозный препарат арбидол для клинического лечения COVID-19. Отчеты показывают, что арбидол может нейтрализовать SARS-CoV-2. Установлено, что монотерапия арбидолом превосходит лопинавир-ритонавир или фавипиравир при лечении COVID-19. При SARS-CoV-2 арбидол препятствует связыванию вируса с клетками-хозяевами.Однако подробное понимание индуцированного арбидолом ингибирования SARS-CoV-2 неизвестно. Здесь мы представляем атомистическое понимание ингибирования слияния мембран SARS-CoV-2, индуцированного арбидолом, и предлагаем модель ингибирования. Анализ, основанный на моделировании молекулярной динамики (MD), демонстрирует, что арбидол связывается и стабилизируется на границе рецептор-связывающего домена (RBD) / ACE2 с высокой аффинностью. Он образует более сильные межмолекулярные взаимодействия с RBD, чем ACE2. Анализ детального разложения энергетических компонентов и аффинности связывания выявил существенное увеличение аффинности между RBD и ACE2 в связанном с арбидолом комплексе RBD / ACE2, предполагая, что арбидол может создавать благоприятные взаимодействия между ними.Основываясь на результатах нашего МД-моделирования, мы предполагаем, что связывание арбидола индуцировало структурную жесткость в гликопротеине вируса, приводящую к ограничению конформационных перестроек, связанных с прикреплением к мембране и проникновением вируса. Кроме того, были идентифицированы ключевые остатки RBD и ACE2, которые взаимодействовали с арбидолом. , открывая двери для разработки терапевтических стратегий и более эффективных производных арбидола или ведущих кандидатов в лекарственные средства.

Примечания к версии

Первая версия

Cite
Эта статья

Исследуемые антивирусные препараты для борьбы с COVID-19

Фарм. США .2021; 46 (2): 29-35.

РЕФЕРАТ: Пандемия COVID-19 поставила перед мировым исследовательским сообществом величайшую проблему своего поколения. Количество безопасных и эффективных терапевтических агентов ограничено, и в настоящее время проводятся сотни клинических испытаний. Ремдесивир — единственный противовирусный препарат, одобренный FDA для лечения COVID-19. В этой статье обсуждается механизм действия текущих исследуемых противовирусных агентов, доказательства их эффективности и клинические испытания, которые в настоящее время проводятся в Соединенных Штатах.

Пандемия коронавирусного заболевания 2019 г. (COVID-19) по-прежнему представляет собой беспрецедентную проблему для выявления эффективных лекарств для профилактики и лечения. Заболевание вызвано коронавирусом 2 тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV-2), бета-коронавирусом, который генетически похож на SARS-CoV и коронавирус ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV). ¹ Текущее лечение пациентов в основном основано на контроле симптомов и опыте лечения схожих вирусов.В настоящее время проводятся сотни клинических испытаний новых и перепрофилированных агентов, в основном с упором на противовирусные препараты и иммуномодуляторы. Здесь представлен обзор некоторых исследуемых антивирусных препаратов.

Вирус SARS-CoV-2 представляет собой вирус с одноцепочечной РНК-оболочкой с тремя видами белков на оболочке, включая спайковый белок (S-белок), белок оболочки и мембранный белок. ² S-белок играет важную роль в распознавании и связывании клетки-хозяина, а также опосредует слияние оболочки вируса с клеточной мембраной.Его активация расщепления опосредуется членом 2 подсемейства серина трансмембранной протеазы (TMPRSS2). S-белок в SARS-CoV и SARS-CoV-2 распознает и связывается с одним и тем же рецептором хозяина, рецептором ангиотензинпревращающего фермента 2 (ACE 2). ¹ Эти рецепторы обычно экспрессируются на эпителиальных клетках альвеол, трахеи, бронхов и серозных желез бронхов дыхательных путей. ³ Таким образом, ингибиторы TMPRSS2 или ингибиторы АПФ являются потенциальными терапевтическими агентами для COVID-19.

Как только S-белок связывается с клеткой-хозяином, вирус проникает в клетку посредством эндоцитоза, где образуются лизосомы, а РНК высвобождается и транслируется в белки вирусной полимеразы, регулируемые соответствующей протеазой и pH. ² Ингибиторы закисления эндосом, такие как хлорохин, и ингибиторы слияния мембран, такие как арбидол, могут оказаться полезными для блокирования этой стадии. ²

РНК завершает транскрипцию и трансляцию вирусных белков, и репликация РНК происходит в цитоплазме.Аналоги нуклеозидов, такие как ремдезивир, ингибиторы протеаз, такие как лопинавир / ритонавир (LPVr), и ингибиторы протеазы SARS-CoV-2 3CLpro (для процессинга полипротеинов, транслируемых с вирусной РНК), такие как пиридинсодержащие кетоамиды, могут блокировать этот процесс. Наконец, РНК объединяется с белковой оболочкой, чтобы генерировать новые частицы коронавируса, которые высвобождаются от хозяина через аппарат Гольджи для заражения новых клеток. ²

В настоящее время проводится несколько клинических испытаний, многие из которых сосредоточены на перепрофилировании устоявшихся противовирусных препаратов, особенно тех, которые ранее показали эффективность против БВРС-КоВ и ТОРС-КоВ. ТАБЛИЦА 1 представляет собой снимок некоторых текущих испытаний в США. ⁴

Аналоги нуклеозидов

Ремдесивир (Veklury): Ремдесивир является широким противовирусным препаратом, первоначально разработанным для борьбы с вирусом Эфир. Он подавляет репликацию вируса за счет преждевременного прекращения транскрипции РНК, тем самым нарушая репродуктивную способность вируса. ³ В мае 2020 года ремдесивир был одобрен FDA в соответствии с разрешением на экстренное использование (EUA) для лечения госпитализированных пациентов с COVID-19.Позже EUA была расширена, чтобы охватить и пациентов с нетяжелыми заболеваниями. ⁵

Рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование было проведено для изучения времени до выздоровления у госпитализированных пациентов с COVID-19, получавших ремдесивир (ударная доза 200 мг в день 1 и 100 мг в день до 9 дней). дополнительные дни). ⁶ Результаты показали, что у ремдесивира более короткое время восстановления, чем у плацебо ( P <0,001), и что ремдесивир мог предотвратить прогрессирование до более тяжелого респираторного заболевания.Данные были также получены в результате рандомизированного открытого исследования, в котором оценивалась разная продолжительность приема ремдесивира, и открытого исследования, в котором оценивалась разная продолжительность приема ремдесивира по сравнению со стандартом лечения (SoC). ^7,8 Эти испытания не зафиксировали существенной разницы между 5-дневным курсом и 10-дневным курсом.

На основании этих результатов ремдесивир был одобрен FDA для лечения COVID-19 у взрослых и детей в возрасте от 12 лет и старше с массой тела не менее 40 кг и требующих госпитализации. ⁹ Рекомендуемая доза — это однократная ударная доза ремдесивира 200 мг в день 1 с последующими поддерживающими дозами ремдесивира 100 мг один раз в день со дня 2, вводимая в течение 30–120 минут. Использование ремдесивира противопоказано пациентам с клинически значимыми реакциями гиперчувствительности в анамнезе на ремдесивир или какие-либо компоненты продукта. Наиболее частыми побочными эффектами ремдесивира являются тошнота и повышение результатов тестов на аланинаминотрансферазу (АЛТ) и аспартатаминотрансферазу (АСТ).Ремдесивир тестируется для использования в расширенных популяциях, а также в комбинированной терапии ( ТАБЛИЦА 1 ).

Молнупиравир: Молнупиравир (MK-4482 [ранее EIDD-2801]; Merck) является пролекарством аналога рибонуклеозида EIDD-1931. Это пероральный противовирусный агент клинической стадии, который проявляет свое действие, вызывая ошибки копирования во время репликации вирусной РНК вируса SARS-CoV-2. ¹⁰ Это исследуемая молекула, коммерчески недоступная в США.S. Препарат был протестирован в рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании I фазы с участием людей, целью которого была оценка его безопасности, переносимости и фармакокинетики после перорального приема здоровым добровольцам. Два рандомизированных плацебо-контролируемых двойных слепых клинических исследования фазы II / III проводятся для оценки эффективности и безопасности молнупиравира у взрослых участников с COVID-19 ( ТАБЛИЦА 1).

Рибавирин: Рибавирин — аналог гуанозина, который мешает полимеразам, что приводит к деградации РНК. ¹¹ Обладает противовирусным действием широкого спектра действия против РНК и ДНК вирусов. Рибавирин одобрен FDA для лечения хронической вирусной инфекции гепатита С (ХГС) в комбинации с пегинтерфероном альфа-2а (PEGASYS) у пациентов в возрасте 5 лет и старше с компенсированным заболеванием печени, ранее не получавших интерферон альфа, и у взрослых пациентов, коинфицированных ХГС. ВИЧ. ¹² Рекомендуемая доза составляет 800 мг внутрь ежедневно в течение 48 недель. Он противопоказан беременным женщинам и мужчинам, женщины-партнеры которых беременны, пациентам с гемоглобинопатией и при одновременном применении диданозина.Наиболее частые побочные эффекты, связанные с использованием рибавирина, включают усталость / астению, гипертермию, миалгию и головную боль. Рибавирин может взаимодействовать с другими аналогами нуклеозидов и азатиоприном.

Одно исследование показало эффективность рибавирина как потенциального агента против SARS-CoV-2. ¹³ Рибавирин в настоящее время проходит испытания для оценки его эффективности в качестве компонента тройной терапии ( ТАБЛИЦА 1 ).

Фавипиравир (Avigan): Трифосфат фавипиравира представляет собой аналог пуринового нуклеозида, который конкурентно ингибирует вирусную РНК-зависимую РНК-полимеразу, останавливая репликацию вируса. ¹⁴ Обладает активностью против гриппа A и B, а также против некоторых возбудителей вирусной геморрагической лихорадки и SARS-CoV-2 in vitro. ¹⁴

Фавипиравир коммерчески недоступен в США, но одобрен для новых штаммов эпидемического гриппа, которые не реагируют на стандартные противовирусные препараты в Японии. ¹⁴

На ранних стадиях пандемии было проведено небольшое открытое нерандомизированное контролируемое исследование пациентов с COVID-19 в Китае, в котором сравнивали фавипиравир с контрольной группой, получавшей LPVr.Исследование отметило значительное сокращение времени до выведения вируса SARS-CoV-2 у пациентов, получавших фавипиравир, по сравнению с контрольной группой. ¹⁵ В другом открытом проспективном рандомизированном многоцентровом исследовании, проведенном в Китае, сравнивалось влияние фавипиравира и умифеновира на скорость клинического выздоровления через 7 дней у взрослых с пневмонией COVID-19. Было обнаружено, что группа, принимавшая фавипиравир, имела более высокий уровень клинического выздоровления за 7 дней, чем группа, принимавшая умифеновир. ¹⁶ Наиболее частыми нежелательными явлениями были нарушения ферментов печени, психиатрические симптомы, желудочно-кишечные симптомы и повышение уровня мочевой кислоты в сыворотке крови, что связано с удлинением интервала QT и тератогенными эффектами.

Ингибиторы протеаз

Лопинавир и ритонавир (Калетра): Репликация SARS-CoV-2 включает расщепление полипротеинов на РНК-зависимую РНК-полимеразу и геликазу. Это достигается с помощью двух протеаз: 3-химотрипсиноподобной протеазы (3CLpro) и папаин-подобной протеазы (PLpro). ¹⁷ Лопинавир является ингибитором протеазы 3CLpro in vitro, но быстро метаболизируется ферментной системой цитохрома P450. Таким образом, он не обеспечивает достаточной биодоступности при пероральном введении. ¹⁸ Ритонавир, другой ингибитор протеазы, подавляет этот метаболический эффект и поэтому назначается одновременно для увеличения периода полувыведения лопинавира.

LPVr коммерчески доступен как Kaletra. Он одобрен FDA для лечения ВИЧ-инфекции 1 типа у взрослых и детей. ¹⁹ Рекомендуемая суточная доза для взрослых составляет 800/200 мг в один или два приема. Использование Калетры противопоказано пациентам с известной гиперчувствительностью к любому из ее компонентов.Существует возможность лекарственного взаимодействия с лекарствами, клиренс которых сильно зависит от CYP3A или с индукторами CYP3A. Часто сообщаемые побочные эффекты включают диарею, тошноту, рвоту, гипертриглицеридемию и гиперхолестеринемию. Не рекомендуется употребление Калетры в период кормления грудью.

LPVr ранее демонстрировал благоприятный клинический ответ со снижением частоты неблагоприятных клинических исходов на 21-й день, снижением вирусной нагрузки через 48 часов, снижением использования стероидов и снижением частоты нозокомиальных инфекций при SARS-CoV. ²⁰

На основании этого он был протестирован при лечении SARS-CoV-2. Однако серия открытых испытаний не продемонстрировала значительной клинической пользы. Исследование LOTUS China было первым рандомизированным контролируемым исследованием LPVr. ²¹ Исследование среднего размера, в котором изучалась комбинация лопинавира и ритонавира при SARS-CoV-2. В общей сложности 199 пациентов получали либо LPVr 400/100 мг два раза в день в течение 14 дней в дополнение к SoC, либо только SoC.Исследование не обнаружило существенных различий во времени до клинического улучшения или 28-дневной смертности. ²¹ Однако пациенты в исследуемой группе имели более короткое пребывание в отделении интенсивной терапии (средняя разница 5 дней) и меньшая продолжительность от рандомизации до выписки из больницы (средняя разница в 1 день). ²¹ Исследование не обнаружило каких-либо существенных различий для других исходов, таких как продолжительность кислородной терапии, продолжительность госпитализации и время от рандомизации до смерти. Авторы пришли к выводу, что лечение LPVr не имело значительного положительного эффекта в лечении пациентов с SARS-CoV-2. ²¹

Рандомизированная оценка терапии COVID-19 (RECOVERY) — это рандомизированное контролируемое открытое испытание, в котором изучается, требуется ли лечение LPVr, гидроксихлорохином, кортикостероидами (низкие дозы дексаметазона), азитромицином, плазмой выздоравливающих, синтетическими нейтрализующими веществами. антитела или тоцилизумаб предотвращают смерть пациентов с COVID-19. Группа LPVr в этом исследовании была остановлена, поскольку не показала улучшения исходов пациентов, госпитализированных с COVID-19, с точки зрения 28-дневной смертности, продолжительности пребывания в больнице или риска перехода к инвазивной ИВЛ или смерти. ²²

Исследование SOLIDARITY — это международное рандомизированное клиническое исследование, оценивающее влияние лечения COVID-19 на три важных исхода у пациентов с COVID-19: смертность, потребность в вспомогательной вентиляции легких и продолжительность пребывания в больнице. Промежуточные опубликованные результаты показывают, что ремдесивир, гидроксихлорохин, LPVr и интерферон практически не влияли на измеряемые исходы у госпитализированных пациентов. ²³

Возможно, что обычные дозы LPVr не достигают концентраций препарата в плазме, необходимых для подавления репликации SARS-CoV-2. ²⁴ Более того, ни одно из исследований с опубликованными результатами не было слепым.

Ингибиторы подкисления эндосом

Хлорохин и гидроксихлорохин (Плаквенил): Хлорохин и его аналог гидроксихлорохин являются ингибиторами закисления эндосом, которые увеличивают рН эндосомы-2 и, следовательно, ингибируют фермент SARS-2, и, следовательно, клеточные мембраны. ^2,4 Кроме того, хлорохин ингибирует гликозилирование клеточного рецептора ACE-2 и, следовательно, ингибирует связывание SARS-CoV-2 с клеткой-хозяином.

Оба эти агента одобрены FDA противомалярийными средствами; гидроксихлорохин также одобрен FDA для лечения ревматоидного артрита и красной волчанки. ²⁵ У них есть узкое терапевтическое окно и токсикологические исходы, включая ретинопатию, нейромиопатию и кардиомиопатию после длительного использования. ²⁶

Исследования in vitro показали положительный эффект хлорохина и гидроксихлорохина против SARS-CoV-2. ²⁷ Этот эффект клинически наблюдался в большом ретроспективном когортном исследовании, проведенном для оценки роли терапии гидроксихлорохином отдельно и в комбинации с азитромицином у госпитализированных пациентов с COVID-19. ²⁸ Однако многие рандомизированные клинические испытания показали обратное. ²⁹ Принимая во внимание потенциальную токсичность, связанную с использованием этих агентов, хлорохин и гидроксихлорохин не рекомендуются для лечения пациентов с COVID-19. ^17,30-33 В исследовании TriACT изучается использование гидроксихлорохина в сочетании с рибавирином и нитазоксанидом у пациентов с COVID-19 ( ТАБЛИЦА 1 ).

Нитазоксанид (Alinia): Нитазоксанид — это пролекарство широкого спектра действия, которое быстро превращается в активные метаболиты тизоксанида и конъюгаты тизоксанида. ³⁴ Он эффективен против различных глистных, протозойных, бактериальных и вирусных инфекций, одобренных FDA для перорального лечения диареи, вызванной Cryptosporidium parvum или Giardia lamblia . ³⁵ Рекомендуемая доза для взрослых составляет 500 мг нитазоксанида каждые 12 часов в течение 3 дней во время еды. Его использование противопоказано пациентам с известной гиперчувствительностью к нитазоксаниду или любому из его компонентов. Использование нитазоксанида связано с болями в животе, головной болью, хроматурией и тошнотой.

Было показано, что нитазоксанид подавляет репликацию широкого спектра респираторных вирусов в клеточных культурах, включая SARS-CoV-2. ³⁶ Раннее многоцентровое рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование, посвященное устранению симптомов COVID-19 у пациентов, получавших 500 мг нитазоксанида три раза в день в течение 5 дней, не обнаружило разницы в разрешении симптомов между тестовая и контрольная группы. ³⁷ Однако исследовательская группа отметила, что нитазоксанид значительно снижает вирусную нагрузку и является безопасным в применяемых дозировках.

Ингибиторы слияния мембран

Умифеновир (арбидол): Умифеновир представляет собой ненуклеозидный противовирусный препарат, который ингибирует контакт, адгезию и слияние вирусного липидного белка в гемагглютиновой оболочке хозяина за счет связывания с липидным белком-хозяином и его активации. Он также демонстрирует иммуномодулирующий эффект, побуждая организм вырабатывать интерферон. ²

Умифеновир используется в Китае и России для лечения гриппа и вызывает легкие побочные эффекты, такие как тошнота, дискомфорт в животе и головная боль.Ранние исследования показали, что умофеновир может ингибировать инфекцию SARS-CoV-2 in vitro; однако дальнейшие исследования дали противоречивые результаты. ³⁸

В то время как одно ретроспективное исследование не смогло продемонстрировать улучшение прогноза у пациентов с COVID-19, другое исследование показало, что умифеновир имел тенденцию улучшать скорость выделения и снижать уровень смертности. ^39,40

Ретроспективное исследование по оценке противовирусных эффектов и безопасности LPVr и умифеновира у пациентов с COVID-19 показало, что группы умифеновира имели меньшую вирусную нагрузку, чем группа LPVr ( P <.01). ³⁸ Однако другое исследование, сравнивающее монотерапию LPVr или умифеновиром с SoC у пациентов с COVID-19 легкой и средней степени тяжести, не показало статистической разницы между группами лечения. ⁴¹ Необходимы более тщательные рандомизированные исследования для определения места терапии умифеновиром у пациентов с COVID-19; однако в настоящее время такие исследования в США не проводятся.

Ивермектин (стромектол): Ивермектин представляет собой макроциклический лактон эндектоцида макролидов широкого спектра действия, выделенный из продуктов ферментации Streptomyces avermitili .Он одобрен FDA в качестве перорального глистогонного средства при стронгилоидозе кишечного тракта и онхоцеркозе. ⁴² Известно, что ивермектин обладает противовирусной активностью in vitro, ингибируя ядерный транспорт, опосредованный импортином a / b, и, следовательно, предотвращая проникновение вирусных белков в ядро ​​хозяина для изменения функции клетки-хозяина. Недавно он продемонстрировал in vitro активность против SARS-CoV-2, вызвав 5000-кратное снижение вирусной РНК через 48 часов после его однократного добавления. ⁴³ Ретроспективное наблюдательное когортное исследование показало, что ивермектин был связан с более низкой смертностью во время лечения COVID-19, чем SoC (15% vs.25,2%; P = 0,03), особенно у пациентов с тяжелым поражением легких (38,8% против 80,7%; P = 0,001). ³⁴ Частота успешной экстубации существенно не различалась. ⁴⁴

Фармацевты играют значительную роль не только в обеспечении регулярных поставок лекарств, которые одобрены или проходят испытания, но и в управлении индивидуальным лечением пациентов по мере того, как все больше агентов получают одобрение для использования у пациентов с COVID-19. Еще предстоит проделать значительную работу по разработке безопасных и эффективных методов лечения пациентов.Тем временем фармацевты могут продолжить обучение, следя за новыми разработками в этой области и опираясь на информацию, представленную в этой статье.

Содержание данной статьи носит исключительно информационный характер. Содержание не предназначено для замены профессиональной консультации. Вы полагаетесь на любую информацию, представленную в этой статье, исключительно на свой страх и риск.

ССЫЛКИ

1. Сандерс Дж. М., Monogue ML, Джо
2.Ван Д., Ли З., Лю Ю. Обзор безопасности, клинического применения и противовирусных исследований терапевтических средств COVID-19. J Заражение общественного здравоохранения . 2020; 13 (10): 1405-1414.
3. Abd El-Aziz TM, Stockand JD. Недавний прогресс и проблемы в разработке лекарств против коронавируса COVID-19 (SARS-CoV-2) — обновленная информация о статусе. Инфекция Genet Evo л. 2020; 83: 104327.
4. NIH. ClinicalTrials.gov. http://www.clinicaltrials.gov. Проверено 19 ноября 2020 г.
5. Пресс-релиз FDA.Обновление COVID-19: FDA расширяет разрешение на экстренное использование Veklury (ремдесивира), чтобы включить всех госпитализированных пациентов для лечения COVID-19. www.fda.gov/news-events/press-announcements/covid-19-update-fda-broadens-emergency-use-authorization-veklury-remdesivir-include-all-hospitalized. 28 августа 2020 г. По состоянию на 18 ноября 2020 г.
6. Beigel JH, Tomashek KM, Dodd LE, et al. Ремдесивир для лечения Covid-19 — окончательный отчет. N Engl J Med . 2020; 383 (19): 1813-1826.
7.Goldman JD, Lye DCB, Hui DS и др. Ремдесивир в течение 5 или 10 дней у пациентов с тяжелым Covid-19. N Engl J Med . 2020; 383 (19): 1827-1837.
8. Spinner CD, Gottlieb RL, Criner GJ, et al. Влияние ремдесивира по сравнению со стандартным лечением на клинический статус через 11 дней у пациентов с COVID-19 средней степени тяжести: рандомизированное клиническое исследование. ЯМА . 2020; 324 (11): 1048-1057.
9. Веклуры [вкладыш из упаковки]. Фостер-Сити, Калифорния: Gilead Sciences; 2020. www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2020/214787Orig1s000lbl.pdf. По состоянию на 18 ноября 2020 г.
10. Сеннимо Д. Лечение и лечение коронавирусной болезни 2019 (COVID-19). Medscape. 16 ноября 2020 г. По состоянию на 17 ноября 2020 г. https://emedicine.medscape.com/article/2500114-treatment#showall.
11. Халили Дж. С., Чжу Х., Мак NSA и др. Лечение нового коронавируса рибавирином: основа для оценки COVID-19. J Med Virol . 2020; 92 (7): 740-746.
12. Копегус [вкладыш в упаковке]. Южный Сан-Франциско, Калифорния: Genentech USA; 2011 г.www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2011/021511s023lbl.pdf. Проверено 17 ноября 2020 г.
13. Эльфикы А.А. Анти-HCV, нуклеотидные ингибиторы, против COVID-19. Life Sci . 2020; 248: 117477.
14. Кумс Э.А., Хагбаян Х. Фавипиравир, противовирусный препарат от COVID-19? J Antimicrob Chemother . 2020; 75 (7): 2013-2014.
15. Cai Q, Yang M, Liu D, et al. Экспериментальное лечение COVID-19 фавипиравиром: открытое контрольное исследование. Инжиниринг (Пекин) .2020; 6: 1192-1198.
16. Chen C, Huang J, Zhang Y, et al. Сравнение фавипиравира и арбидола при COVID-19: рандомизированное клиническое исследование. www.medrxiv.org/content/medrxiv/early/2020/04/15/2020.03.17.20037432.full.pdf. medRxiv; 2020. По состоянию на 10 ноября 2020 г.
17. NIH. Рекомендации по лечению COVID-19. www.covid19treatmentguidelines.nih.gov/. По состоянию на 10 ноября 2020 г.
18. Lythgoe MP, Mid
19. Kaletra [вкладыш из пакета]. Северный Чикаго, Иллинойс: AbbVie Inc .; 2016. www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2016/021251s052_021906s046lbl.pdf. По состоянию на 13 ноября 2020 г.
20. Chu CM, Cheng VC, Hung IF, et al. Роль лопинавира / ритонавира в лечении ОРВИ: первоначальные вирусологические и клинические данные. Грудь . 2004; 59 (3): 252-256.
21. Цао Б., Ван И, Вэнь Д. и др. Испытание применения лопинавира-ритонавира у взрослых, госпитализированных с тяжелым Covid-19. N Engl J Med . 2020; 382 (19): 1787-1799.
22. Коллективная группа «ВОССТАНОВЛЕНИЕ». Лопинавир-ритонавир у пациентов, госпитализированных с COVID-19 (RECOVERY): рандомизированное контролируемое открытое платформенное исследование. Ланцет . 2020; 396 (10259): 1345-1352.
23. Пан Х., Пето Р., Карим К.А. и др. Консорциум испытаний солидарности ВОЗ. Перепрофилированные противовирусные препараты для COVID-19 — промежуточные результаты исследования ВОЗ SOLIDARITY. medRxiv . Препринт. www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.10.15.20209817v1. По состоянию на 11 ноября 2020 г.
24. Schoergenhofer C, Jilma B, Stimpfl T, et al. Фармакокинетика лопинавира и ритонавира у пациентов, госпитализированных с коронавирусной болезнью 2019 г. (COVID-19). Энн Интерн Мед. .2020; 173 (8): 670-672.
25. Арален [вкладыш в упаковке]. Бриджуотер, Нью-Джерси: Санофи-Авентис; 2017. www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2017/006002s044lbl.pdf. По состоянию на 2 ноября 2020 г.
26. Плаквенил [вкладыш в упаковке]. Оквилл, Онтарио, Канада: Concordia Pharmaceuticals; 2017. www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2017/009768s037s045s047lbl.pdf. По состоянию на 3 ноября 2020 г.
27. Лю Дж., Цао Р., Сюй М. и др. Гидроксихлорохин, менее токсичное производное хлорохина, эффективно подавляет инфекцию SARS-CoV-2 in vitro. Ячейка Discov . 2020; 6:16.
28. Аршад С., Килгор П., Чаудри З.С. и др. Лечение гидроксихлорохином, азитромицином и их комбинацией у пациентов, госпитализированных с COVID-19. Int J Infect Dis . 2020; 97: 396-403.
29. Хорби П., Мафхэм М., Линселл Л. и др. Эффект гидроксихлорохина у госпитализированных пациентов с COVID-19: предварительные результаты многоцентрового рандомизированного контролируемого исследования. medRxiv . 2020; Препринт. www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.15.07.20151852v1. По состоянию на 10 ноября 2020 г.
30. Cavalcanti AB, Zampieri FG, Rosa RG, et al. Гидроксихлорохин с азитромицином или без него при COVID-19 легкой и средней степени тяжести [исправление опубликовано в N Engl J Med. 2020 ноябрь 19; 383 (21): e119]. N Engl J Med . 2020; 383 (21): 2041-2052.
31. Furtado RHM, Berwanger O, Fonseca HA, et al. Азитромицин в дополнение к стандарту лечения по сравнению с одним стандартом лечения при лечении пациентов, госпитализированных в больницу с тяжелой формой COVID-19 в Бразилии (COALITION II): рандомизированное клиническое исследование. Ланцет . 2020; 396 (10256): 959-967.
32. Geleris J, Sun Y, Platt J, et al. Обсервационное исследование гидроксихлорохина у госпитализированных пациентов с Covid-19. N Engl J Med . 2020; 382 (25): 2411-2418.
33. Розенберг Э.С., Дюфорт Э.М., Удо Т. и др. Связь лечения гидроксихлорохином или азитромицином с внутрибольничной смертностью у пациентов с COVID-19 в штате Нью-Йорк. ЯМА . 2020; 323 (24): 2493-2502.
34. Kelleni MT. Комбинация нитазоксанид / азитромицин для лечения COVID-19: предлагаемый новый протокол для раннего лечения. Pharmacol Res . 2020; 157: 104874.
35. Алиния [вкладыш в упаковке]. Тампа, Флорида: Romark Pharmaceuticals; 2016. По состоянию на 12 ноября 2020 г. https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2016/021497s001,021498s004lbl.pdf.
36. Аль-Хорани Р.А., Кар С. Потенциальные терапевтические средства против SARS-CoV-2, которые нацелены на пост-входные этапы жизненного цикла вируса: всесторонний обзор. Вирусы . 2020; 12 (10): 1092.
37. Rocco PRM, Silva PL, Cruz FF и др. Раннее использование нитазоксанида при легкой форме заболевания Covid-19: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. medRxiv . 2020; Препринт. www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.10.21.20217208v1. По состоянию на 10 ноября 2020 г.
38. Wang X, Cao R, Zhang H, et al. Препарат против вируса гриппа, арбидол, является эффективным ингибитором SARS-CoV-2 in vitro. Ячейка Discov . 2020; 6:28.
39. Lian N, Xie H, Lin S, et al. Лечение умифеновиром не связано с улучшением результатов у пациентов с коронавирусной болезнью 2019: ретроспективное исследование. Clin Microbiol Infect . 2020; 26 (7): 917-921.
40. Ван З., Ян Б., Ли Кью и др. Клинические особенности 69 случаев заболевания коронавирусом 2019 г. в Ухане, Китай. Clin Infect Dis . 2020; 71 (15): 769-777.
41. Li Y, Xie Z, Lin W, et al. Эффективность и безопасность лопинавира / ритонавира или арбидола у взрослых пациентов с COVID-19 легкой / умеренной степени тяжести: поисковое рандомизированное контролируемое исследование [опубликовано в Интернете перед печатью, 19 мая 2020 г.]. Мед (Нью-Йорк) . 2020; 10.1016.
42. Стромектол [вкладыш в упаковке]. Кенилворт, Нью-Джерси: Merck & Co., Inc. www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2008/050742s022lbl.pdf. По состоянию на 14 ноября 2020 г.
43. Caly L, Druce JD, Catton MG, et al. Ивермектин, одобренный FDA, подавляет репликацию SARS-CoV-2 in vitro. Антивирусная защита . 2020; Июнь (178): 104787.
44. Rajter JC, Sherman MS, Fatteh N, et al. Использование ивермектина связано с более низкой смертностью среди госпитализированных пациентов с коронавирусной болезнью 2019: исследование ICON [опубликовано в Интернете перед печатью, 13 октября 2020 года]. Сундук . 2020; S0012-3692 (20) 34898-4.

Чтобы прокомментировать эту статью, свяжитесь с [email protected].

Оценка противовирусной эффективности рибавирина, арбидола и Т-705 (фавипиравира) на мышиной модели крымско-конголезской геморрагической лихорадки

Аннотация

Фон

Мыши, лишенные рецептора интерферона типа I (мыши IFNAR ^{— / —} ), воспроизводят соответствующие аспекты крымско-конголезской геморрагической лихорадки (CCHF) у людей, включая повреждение печени.Мы стремились охарактеризовать патологию печени у мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных вирусом CCHF, с помощью иммуногистохимии и использовали модель для оценки противовирусной эффективности рибавирина, арбидола и Т-705 против вируса CCHF.

Методология / основные выводы

инфицированных вирусом CCHF IFNAR ^{— / —} мышей умерли через 2–6 дней после заражения с повышенным уровнем аминотрансферазы и высокими титрами вируса в крови и органах. Основным патологическим изменением был острый гепатит с обширным мостиковым некрозом, реактивная пролиферация гепатоцитов и легкая или умеренная воспалительная реакция с активацией моноцитов / макрофагов.В некротических областях скопились инфицированные вирусом и апоптотические гепатоциты. Рибавирин, арбидол и Т-705 подавляли репликацию вируса in vitro на ≥3 логарифмических единиц (IC ₅₀ 0,6–2,8 мкг / мл; IC ₉₀ 1,2–4,7 мкг / мл). Рибавирин [100 мг / (кг × день)] не увеличивал выживаемость мышей IFNAR ^{— / —} , но увеличивал время до смерти (p <0,001) и снижал уровни аминотрансферазы и титры вируса. Арбидол [150 мг / (кг × сут)] не имел эффективности in vivo .Животные, получавшие Т-705 через 1 час [15, 30 и 300 мг / (кг × день)] или до 2 дней [300 мг / (кг × день)] после заражения, выжили, не проявили никаких признаков заболевания и вирусов в крови и органах не было. Совместное введение рибавирина и Т-705 имело скорее положительные, чем отрицательные эффекты.

Выводы / Значение

Активированные печеночные макрофаги и клетки, происходящие из моноцитов, могут играть роль в провоспалительном цитокиновом ответе при CCHF. Скопление инфицированных гепатоцитов в некротизированных областях без выраженного воспаления предполагает вирусные цитопатические эффекты.Т-705 очень эффективен против вируса CCHF in vitro и in vivo . Его in vivo эффективность превышает эффективность действующего стандартного препарата для лечения CCHF, рибавирина.

Сведения об авторе

Крымско-конголезская геморрагическая лихорадка (КГЛ) является эндемическим заболеванием в Африке, Азии, Юго-Восточной Европе и на Ближнем Востоке. Летальность составляет 30–50%. Исследования по патофизиологии и лечению CCHF были затруднены из-за отсутствия подходящей модели на животных. Мы использовали инфицированных вирусом CCHF трансгенных мышей с дефектом врожденного иммунного ответа в качестве модели заболевания.Эти мыши умирают от инфекции и проявляют признаки заболевания, аналогичные тем, которые обнаруживаются у людей. Во-первых, мы изучили патологию печени у животных, поскольку некроз печени является характерной особенностью CCHF человека. Во-вторых, мы использовали модель для проверки эффективности противовирусных препаратов, которые используются в клинической практике или на продвинутой стадии клинических испытаний. Помимо рибавирина, стандартного препарата для лечения CCHF, мы протестировали арбидол, препарат, который используется в клинической практике против респираторных инфекций, и Т-705, новый препарат, находящийся в клинической разработке для лечения инфекции вируса гриппа.В то время как рибавирин и арбидол показали некоторый положительный эффект или не показали его, соответственно, Т-705 был очень эффективен в модели на животных. Эти данные обещают клиническую эффективность Т-705 при ГКГН человека.

Образец цитирования: Oestereich L, Rieger T, Neumann M, Bernreuther C, Lehmann M, Krasemann S, et al. (2014) Оценка противовирусной эффективности рибавирина, арбидола и Т-705 (фавипиравира) на мышиной модели крымско-конголезской геморрагической лихорадки. PLoS Negl Trop Dis 8 (5):
e2804.https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804

Редактор: Сунит Кумар Сингх, Центр клеточной и молекулярной биологии (CCMB), Индия

Поступила: 25 августа 2013 г .; Дата принятия: 9 марта 2014 г .; Опубликовано: 1 мая 2014 г.

Авторские права: © 2014 Oestereich et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Это исследование было поддержано грантами FP7 228292 (Европейский вирусный архив) и 260644 (низкомолекулярные ингибиторы-лидеры по сравнению с возникающими и забытыми РНК-вирусами) Европейского сообщества. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Вирус Крымско-Конго геморрагической лихорадки (CCHFV) представляет собой РНК-вирус с отрицательной цепью, принадлежащий к роду Nairovirus семейства Bunyaviridae .Вирус эндемичен в Африке, Азии, Юго-Восточной Европе и на Ближнем Востоке. Hyalomma клещей передают вирус людям, диким животным и животным. Люди также могут заразиться при контакте с зараженным домашним скотом. Передача от человека к человеку происходит в основном в больничных условиях. У людей вирус вызывает лихорадочное заболевание, которое может быть связано с кровотечением, некрозом печени, шоком и полиорганной недостаточностью. Другими отличительными признаками заболевания являются повышенные уровни сывороточного аспартата и аланинаминотрансферазы (AST и ALT соответственно), тромбоцитопения и диссеминированная внутрисосудистая коагулопатия.Средняя летальность составляет 30–50%, но может быть выше при внутрибольничных вспышках [1] — [5].

Патофизиология болезни изучена недостаточно. Считается, что повреждение эндотелиальных клеток и клеток печени, индукция провоспалительных цитокинов и нарушение регуляции каскада коагуляции играют роль [3] — [8]. Исследования патофизиологии Крымско-Конго геморрагической лихорадки (КГЛ) затруднены из-за отсутствия подходящей модели на животных, поскольку до сих пор не описано ни одного млекопитающего с полностью функциональной иммунной системой, за исключением людей, у которого заболевание развивается при заражении.Первой животной моделью была новорожденная мышь [9]. Недавно были описаны две модели трансгенных мышей для CCHF: во-первых, у мышей, лишенных сигнального преобразователя и активатора транскрипции 1 (STAT1 ^{— / —} мыши), и во-вторых, у мышей, лишенных рецептора интерферона типа I (альфа / бета) (IFNAR). ^{— / —} мышей) [10] — [12]. Обе мыши с нокаутом имеют дефект врожденного иммунного ответа, быстро умирают от инфекции CCHFV и воспроизводят соответствующие аспекты CCHF человека. Суррогатные модели для CCHF используют IFNAR ^{— / —} мышей, инфицированных вирусом Dugbe или Hazara [13], [14], двумя наировирусами, связанными с CCHFV, которые, как известно, не вызывают заболевания у человека.Работа с этими моделями может осуществляться на уровне биобезопасности (BSL) -2, в то время как для работы с инфекционными CCHFV необходимы средства BSL-4.

В настоящем исследовании мы стремились более подробно охарактеризовать патологические изменения в печени мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных CCHFV. Кроме того, мы использовали эту модель для оценки противовирусной эффективности рибавирина, арбидола и Т-705 (фавипиравира) против CCHFV in vivo . Эти препараты либо используются в клинической практике, либо находятся на продвинутой стадии клинических испытаний.Рибавирин подавляет репликацию CCHFV в культуре клеток [15] и вводится пациентам с CCHF, хотя его клиническая польза не доказана и обсуждается спорно [16] — [19]. Он показывает положительные эффекты на неонатальных моделях мышей и STAT1 ^{— / —} [9], [10]. Рибавирин в настоящее время является единственным препаратом, доступным для лечения хронической сердечной недостаточности. Арбидол представляет собой противовирусное средство широкого спектра действия, проявляющее активность против ряда РНК-вирусов in vitro и in vivo , в первую очередь вируса гриппа A [20] — [24].В России и Китае препарат используется в клинической практике в основном для профилактики и лечения острых респираторных инфекций, в том числе гриппа. Предполагается, что арбидол действует посредством гидрофобных взаимодействий с мембранами и вирусными белками, таким образом подавляя слияние и проникновение вируса [25] — [27]. Т-705 является мощным ингибитором in vitro и на животных моделях вируса гриппа, флебовирусов, хантавирусов, аренавирусов, альфавирусов, пикорнавирусов и норовирусов [28] — [35]. После преобразования в Т-705-рибофуранозил-5′-трифосфат, он предположительно действует как аналог нуклеотида, который избирательно ингибирует вирусную РНК-зависимую РНК-полимеразу или вызывает летальный мутагенез при включении в вирусную РНК [36] — [40].Т-705 (фавипиравир) в настоящее время находится на поздней стадии клинических разработок для лечения вирусной инфекции гриппа.

Материалы и методы

Заявление об этике

Это исследование было проведено в строгом соответствии с рекомендациями Немецкого общества лабораторных животных под наблюдением ветеринара. Протокол был одобрен Комитетом по этике экспериментов на животных города Гамбурга (разрешение № 44/11). Были предприняты все усилия, чтобы минимизировать количество животных, используемых для экспериментов, и уменьшить страдания животных во время экспериментов.Весь персонал, проводящий эксперименты на животных, прошел программу обучения и подготовки в соответствии с категорией B или C Федерации европейских ассоциаций лабораторных зоотехников. Об экспериментах на животных в этом исследовании сообщается в соответствии с рекомендациями ARRIVE [41]. В этом исследовании было использовано 162 мыши, и все мыши были включены в анализ.

Вирусы

Штамм

CCHFV Afg-09 2990 был выделен в 2009 году в нашей лаборатории от пациента со смертельным течением инфекции [42] и пересеян 2 раза, прежде чем он был использован в этом исследовании.Запас вируса выращивали на клетках Vero E6, количественно определяли с помощью иммунофокусного анализа (см. Ниже) и хранили при -70 ° C до использования в экспериментах in vitro, и in vivo, .

Противовирусные препараты

Рибавирин (номер CAS 36791-04-5; PubChem CID 37542) был получен от MP Biomedicals (номер заказа 02196066), арбидола гидрохлорид (номер CAS 131707-23-8; PubChem CID 131410) от Waterstone Technology, США ( номер заказа 49823), а Т-705 (фавипиравир; номер CAS 259793-96-9; PubChem CID 4
) был специально синтезирован BOC Sciences, Creative Dynamics, США.

Тестирование противовирусных препаратов и токсичности в культуре клеток

Соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) в концентрации примерно 10 мг / мл и хранили при -20 ° C. Конечная концентрация ДМСО в супернатанте клеточной культуры составляла 0,1%. Клетки Vero E6 выращивали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM) (PAA Laboratories) с добавлением 5% фетальной телячьей сыворотки (FCS) и стрептомицином / пенициллином, и высевали с плотностью 4 × 10 ⁴ клеток на лунку 24- лунный планшет за 1 день до заражения.Клетки инокулировали CCHFV при множественности инфицирования (MOI) 0,01 в лаборатории BSL-4. Посевной материал удаляли через 1 ч и заменяли свежей средой с различными концентрациями соединения. Для экспериментов с арбидолом клетки дополнительно обрабатывали арбидолом за 18 ч до заражения. Концентрацию инфекционных вирусных частиц в супернатанте клеточной культуры измеряли через 2–4 дня после заражения (p.i.) с помощью иммунофокусного анализа. Рост и жизнеспособность клеток при обработке соединением определяли методом 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенил-2H-тетразолийбромида (МТТ), как описано [43].Сигмоидальная кривая доза-ответ была подогнана к данным с использованием Prism GraphPad 6.0 (программное обеспечение GraphPad). Ингибирующие концентрации, которые снижали титр вируса на 50%, 90% и 99% (IC ₅₀ , IC ₉₀ и IC ₉₉ , соответственно) и цитотоксические концентрации, которые снижали рост клеток на 50% и 90%. % (CC ₅₀ и CC ₉₀ соответственно) были рассчитаны из сигмоидальных функций.

Для анализа комбинаций двух препаратов была протестирована матрица концентраций 8 × 8.Лекарства x и y испытывали в концентрациях c = 0; IC ₉₀ /8; IC ₉₀ /4; IC ₉₀ /2; IC ₉₀ ; IC ₉₀ • 2; IC ₉₀ • 4; IC ₉₀ • 8 во всех возможных комбинациях ( c _x , c _y ). Значения IC ₉₀ были получены из предыдущих экспериментов с одним лекарством. Данные комбинации лекарственных препаратов анализировали с использованием модели взаимодействия лекарственных средств независимости Блисса [44].Эта модель определяется уравнением E _xy = E _x + E _y — ( E _x • E _y ), где E _xy — это аддитивный эффект лекарств x и y , как предсказано их индивидуальными эффектами E _x и E _y . E _x = ( V _obs (0,0) — V _obs ( c _x , 0)) / V _obs (0,0) и E _y = ( V _obs (0,0) — V _obs (0, c _y )) / V _obs (0,0), где V _obs ( c _x , c _y ) — наблюдаемое, т.е.е. экспериментально определенный титр вируса для ( c _x , c _y ). По аналогии с программой MacSynergy II [44], [45], которая оценивает антивирусные данные в соответствии с моделью независимости Блисса, трехмерный подход использовался для определения областей, в которых наблюдаемые эффекты больше (синергия) или меньше (антагонизм), чем предсказанные E _xy . С этой целью соотношение между прогнозируемым титром вируса V _pred ( c _x , c _y ) = V _obs (0,0) • (1− E _xy ) и наблюдаемый титр вируса V _obs ( c _x , c _y ) был рассчитан для каждой комбинации препаратов ( c _x , c _y ) .Отношение> 1 указывает на синергию (т.е. для ( c _x , c _y ) титр вируса, предсказанный для аддитивного эффекта, выше, чем экспериментально определенный титр вируса), соотношение <1 указывает на антагонизм (т.е. ( c _x , c _y ) титр вируса для прогнозируемого аддитивного эффекта ниже, чем титр вируса, определенный экспериментально).

Эксперименты на мышах

IFNAR ^{— / —} мышей (фон 129Sv) [46] разводили в учреждении для животных, свободных от специфических патогенов, Института Бернхарда-Нохта.Во всех экспериментах использовались самки животных в возрасте от шести до двенадцати недель (средний вес 20 г, диапазон 15-24 г), за исключением девяти самцов, которые использовались для определения летальной дозы вируса. Ожидалось, что размер группы из 5 животных обеспечит достаточно точные оценки выживаемости, вирусемии и параметров клинической химии. Это позволяет выявить 80% -ную разницу в выживаемости между контрольной группой и группой лечения с p (альфа) = 0,05 и степенью (1 — бета) = 0,8. Экспериментальные группы были сопоставимы по возрасту.От трех до пяти животных в группе содержали вместе в обычной клетке без обогащения. У них был доступ к пище и воде ad libitum . Эксперименты по заражению CCHFV проводились в помещении для животных лаборатории BSL-4 с искусственными циклами свет / темнота.

От трех до десяти животных в группе (в зависимости от того, планировался ли сбор органов) инфицировали внутрибрюшинной (i.p.) инъекцией от 0,3 до 10 ⁴ фокусообразующих единиц (FFU) CCHFV в 100 или 200 мкл DMEM, содержащей 2% FCS.Способ введения был выбран для облегчения сопоставимости с ранее описанными моделями мышей CCHF [10], [11]. После заражения мышей ежедневно контролировали на предмет признаков заболевания, а массу тела и ректальную температуру тела измеряли с помощью термометра BIO-TK8851 с ректальным датчиком BIO-BRET-3 для мышей (Bioseb, Франция). Животных с тяжелыми признаками заболевания, такими как судороги, кровотечение, вздутие живота, диарея, агония или потеря веса> 15% в течение 2 дней, умерщвляли. Образцы крови 30–80 мкл на животное отбирали путем пункции хвостовой вены с интервалами 1–4 дня в течение 14 дней (всего ≤5 заборов крови) для клинической биохимии и измерения виремии.Что касается сбора органов, то при соблюдении критериев эвтаназии и в конце эксперимента животных умерщвляли передозировкой изофлурана с последующим смещением шейки матки. Органы собирали после смерти или на 3-й день после рождения. от 2–3 животных, которые были случайным образом выбраны из экспериментальных групп по 7–10 животных и проанализированы на титр инфекционного вируса и гистопатологические изменения. Опыты не повторялись.

Тестирование противовирусных препаратов и токсичности

in vivo

Рибавирин вводили один раз в день i.п. маршрут. Перед каждым применением готовили запас 10 мг / мл в 0,9% NaCl. Животные получали дозу рибавирина 100 мг / (кг × сут) (200 мкл для 20-граммовой мыши) или 200 мкл 0,9% NaCl в качестве плацебо. Доза рибавирина, смертельная для 50% мышей (LD ₅₀ ), составляет 220 мг / (кг × сут) [47]. Лечение было начато через 1 час. и продолжали до смерти или 8-го дня. Арбидол вводили перорально один раз в день с помощью желудочного зонда. Суспензии 15 или 30 мг / мл в 0,5% метилцеллюлозе готовили перед каждым применением.Животные получали арбидол в дозе 75 или 150 мг / (кг × сут) (100 мкл суспензии для 20-граммовой мыши) или 100 мкл 0,5% метилцеллюлозы в качестве плацебо. Лечение начинали за 1 день до заражения и продолжали до смерти или 8-го дня. In vivo токсичность арбидола оценивали на 26 неинфицированных животных, получавших 0, 25, 75, 150, 300 или 600 мг / (кг × день) для 8 дн. В этом диапазоне доз токсических эффектов не наблюдалось. Т-705 вводили перорально дважды в день с помощью желудочного зонда. Подвески 0.Ежедневно готовили 75, 1,5, 3 или 30 мг / мл в 0,5% метилцеллюлозе. Животные получали дозу Т-705 7,5, 15, 30 или 300 мг / (кг × сут) (100 мкл суспензии два раза в день для 20-граммовой мыши) или 100 мкл 0,5% метилцеллюлозы два раза в день. Лечение было начато через 1 час. или позже и продолжалось до смерти или 8 дня.

Титрование вирусов и антител

Частицы инфекционного вируса в крови и образцах органов определялись иммунофокусным методом. Образцы органов гомогенизировали в 500 мкл DMEM – 2% FCS с использованием Lysing Matrix D (MP Biomedicals) в битовой мельнице.Клетки Vero в 24-луночных планшетах инокулировали 200 мкл последовательных 10-кратных разведений образца. Посевной материал удаляли через 1 час и заменяли слоем 1% -метилцеллюлоза – DMEM – 6% FCS. После 5 дней инкубации клетки фиксировали 4% формальдегидом в фосфатно-солевом буфере (PBS), промывали водой и повышали проницаемость 0,5% Triton X-100 в PBS. После промывки и блокирования 10% FCS в PBS очаги инфицированных клеток выявляли с помощью специфичного к нуклеопротеину (NP) CCHFV моноклонального антитела A4 [48].После промывания клетки инкубировали с меченным пероксидазой антимышиным IgG. Очаги визуализировали с помощью тетраметилбензидина и подсчитывали.

Вирусспецифические антитела в крови были обнаружены с помощью иммунофлуоресцентного анализа (IFA) с использованием клеток, инфицированных штаммом CCHFV Afg-09 2990 в качестве антигена. Сыворотку мышей инактивировали в течение 1 ч при 60 ° C и тестировали при разведении 1∶20.

Клиническая химия

Образцы сыворотки разбавляли 1∶10 или выше, при необходимости, в 0,9% NaCl и анализировали на активность AST и ALT с использованием имеющихся в продаже наборов для колориметрического анализа при 25 ° C (предел обнаружения для неразбавленной сыворотки равен 2.25 Ед / л для АСТ и 2,65 Е / л для АЛТ) (Reflotron, Roche Diagnostics). Параметры измеряли для отдельных животных.

Гистология и иммуногистохимия

Легкие, почки, сердце, селезенка, головной мозг и печень собирали, фиксировали в 4% формальдегиде в PBS и заливали парафином с использованием тканевого процессора Leica ASP300 S и станции для заливки Leica EG1160 (Leica). Срезы (4 мкм) окрашивали гематоксилин-эозином (H&E) или обрабатывали для иммуногистохимии (IHC). Срезы ИГХ окрашивали с использованием автоматической системы окрашивания Ventana BenchMark XT (Ventana Medical Systems) и раствора для кондиционирования клеток 1 или 2 (Ventana) в течение 30–60 мин.Срезы инкубировали с первичными антителами, направленными против B-клеточного маркера B220 (1-400; eBioscience), каспазы-3, расщепленной маркером апоптоза (1-100; R&D Systems), Т-клеточного маркера CD3 (1-100; Dako), миелоидного происхождения. клеточный (например, макрофагальный) маркер Iba-1 (1-2000; Wako Chemicals), индуцибельная синтаза оксида азота (iNOS), экспрессируемая активированными клетками, происходящими из моноцитов (1-50; Abcam), и маркер пролиферации клеток Ki67 (1-250; Abcam) на 1 час. Первичные антитела выявляли с помощью иммуноферментного полимера против IgG мыши, кроличьего IgG или IgG крысы. Комплект обнаружения DAB (Ventana).Клетки контрастировали гематоксилином. ИГХ с использованием первичных антител, направленных против NP CCHFV (моноклональное антитело A4 [48], 1–500) и маркера нейтрофилов Ly6G (1–1000; BD Bioscience), выполняли вручную. Срезы кипятили в цитратном буфере (pH 6) в течение 1 ч и инкубировали с антителом при 4 ° C в течение ночи. Первичные антитела детектировали с помощью иммуноферментного полимера против IgG мыши Histofine Simple Stain AP или иммуноферментного полимера против IgG G Histofine Simple Stain MAX PO и окрашивали субстратом Fast Red (Roche) или DAB (Sigma-Aldrich), соответственно.Для контрастного окрашивания использовали раствор гематоксилина Майера. Срезы закрывали монтажной средой Tissue Tek (Sakura Finetek).

Статистический анализ

Статистический анализ выполнялся с помощью GraphPad 6.0 (GraphPad Software). Непарные группы сравнивались с двусторонним U-критерием Манна – Уитни для непрерывных параметров и с двусторонним точным критерием Фишера для частот. Кривые выживаемости сравнивались с логранговым тестом (Мантел-Кокса).

Результаты

Оптимизация модели мыши IFNAR

^{— / —} для антивирусного тестирования

Перед тестированием противовирусных препаратов на мышиной модели IFNAR ^{— / —} мы стремились определить оптимальную инфекционную дозу для штамма CCHFV Afg09-2990 и охарактеризовать заболевание, вызываемое этим конкретным штаммом.С этой целью мышей IFNAR ^{— / —} инфицировали i.p. с 0,3, 1, 3, 10, 100, 1000 и 10 000 FFU. Животные умерли от инфекции даже после инокуляции 0,3 FFU (инокулят, погибшие / инфицированные: 0,3 FFU, 4/5; 1 FFU, 5/5; 3 FFU, 4/5; 10 FFU, 6/8; 100 FFU 13 / 13; 1000 FFU, 8/8; 10,000 FFU, 3/3). Это указывает на то, что только нескольких инфекционных вирусных частиц штамма CCHFV Afg09-2990 достаточно, чтобы инициировать продуктивную инфекцию. Летальный исход постоянно наблюдался при ≥100 FFU. Таким образом, модель была дополнительно охарактеризована для доз инокуляции 10, 100, 1000 и 10000 FFU (рис.1). Животные, инфицированные 100 или 1000 FFU, умирали между 3 и 6 днями, в то время как животные, инфицированные 10 000 FFU, равномерно умирали на 2 день. Перед смертью животные потеряли около 15% массы тела (рис. 1). На 2-й день средние значения АСТ и АЛТ составляли около 300 Ед / л и 100 Ед / л, соответственно, у животных, которым вводили 100–1000 FFU. Оба значения были выше в группе 10 000 FFU (AST 1600 U / л и ALT 500 U / л) (рис. 1). Повышение АСТ и АЛТ указывает на повреждение клеток, в частности клеток печени. На 2-й день титр вируса в крови варьировался от уровня ниже обнаружения в группе 10 FFU, через 3 log ₁₀ FFU / мл в группах 100 и 1000 FFU, до 5 log ₁₀ FFU / мл в 10 000 FFU. группа (рис.1). На 3-й день вирус был обнаружен во всех проанализированных органах (селезенка, почки, печень, сердце, легкие и мозг) с титрами в диапазоне 4–7 log ₁₀ FFU / g независимо от дозы инокуляции (рис. 1). Максимальная концентрация вируса обнаружена в печени. Поскольку инокуляция ≤10 FFU не всегда приводила к летальному исходу, а инокуляция 10 000 FFU оставляла только 2 дня между инфицированием и летальным исходом для терапевтического вмешательства, дальнейшие эксперименты были проведены с дозой 100 или 1000 FFU.

Рисунок 1.Выживаемость, масса тела, АСТ, АЛТ и титр вируса в крови и органах мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных различными дозами CCHFV.

Мышей инокулировали i.p. с 10, 100, 1000 или 10000 FFU вируса. Титры органов определяли у животных, которые умерли от инфекции или подверглись эвтаназии из-за тяжести заболевания. Среднее и стандартное отклонение показаны для титров органов, преобразованных по массе и логарифмически. Вертикальные полосы на графиках для AST и ALT (обратите внимание на логарифмическую шкалу оси Y) и логарифмически преобразованные титры вирусов в крови представляют собой средние значения.Данные для групп 100 и 1000 FFU наивных животных были объединены с соответствующими данными из контрольных групп плацебо, показанными на рис. 5, чтобы обеспечить более надежные оценки параметров. Серым цветом выделен диапазон виремии ниже предела обнаружения иммунофокусного анализа, а также нормальный референсный диапазон АСТ и АЛТ у мышей [59]. Примечания. Группа 10 FFU: 2 выживших животных не показали ни повышения AST / ALT, ни виремии на 4 день (значение ALT для одного животного не определялось). Группа 100 FFU: животное, которое умерло на 6 день, не показало повышения AST / ALT и виремии на 2 и 4 дни.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g001

Гистопатологические корреляты болезни

Легкие, сердце, почки, мозг, печень и селезенка мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных CCHFV, собирали на 3 день и оценивали на срезах, окрашенных H и E. Распределение вируса во всех органах и воспалительный ответ в печени визуализировали с помощью ИГХ. Наивные мыши IFNAR ^{— / —} служили контролем.

Печень.

В печени мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных CCHFV, обнаружен острый гепатит с обширным мостиковым гепатоцеллюлярным некрозом и легкой или умеренной воспалительной реакцией (рис.2). В некротических областях было обнаружено накопление CCHFV NP в гепатоцитах (рис. 2) и расщепленных каспазо-3-положительных (апоптотических) гепатоцитах (рис. 3). Клеточная пролиферация, определяемая окрашиванием ядерного антигена Ki67, была увеличена. Хотя большинство Ki67-положительных клеток можно отнести к воспалительной реакции, пролиферация гепатоцитов также была очевидна (рис. 3). Архитектура Iba-1-положительных макрофагов (клеток Купфера) в некротических областях была нарушена; клетки показали увеличенные клеточные тела и очаговые скопления (рис.3). Кроме того, были обнаружены экспрессирующие iNOS активированные клетки, происходящие из моноцитов, которых нет в нормальной печени (рис. 3). Эти изменения указывают на активацию моноцитов / макрофагов. Количество CD3-позитивных Т-клеток, B220-позитивных В-клеток и Ly6G-позитивных гранулоцитов было немного увеличено (рис. 3).

Рисунок 2. Гистопатология и распределение вирусного антигена в печени и селезенке наивных и инфицированных CCHFV мышей IFNAR ^{— / —} и эффект лечения рибавирином и Т-705.

Животных инокулировали i.p. с 100 FFU CCHFV. Вверху: печень была собрана (i) у наивных животных (ii) у животных, которые скончались от инфекции без лечения на 3-й день p.i., (iii) умерли от инфекции на 9-й день p.i. после обработки рибавирином 100 мг / (кг × сут) и (iv) умерщвлены на 3-й день p.i. во время обработки Т-705 300 мг / (кг × сут). Лечение рибавирином или Т-705 начинали через 1 час в день. и продолжали до смерти или до 8-го дня. Внизу: селезенку собирали у неопытных животных и животных, которые умерли от инфекции без лечения на 3-й день.я. Срезы окрашивали H&E, и распределение CCHFV в ткани визуализировали с использованием моноклональных антител против CCHFV NP. Патогистологические данные являются репрезентативными для 2–3 животных, анализируемых в каждой группе. Шкала шкалы = 50 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g002

Рис. 3. ИГХ для маркеров воспаления, апоптоза и пролиферации в печени наивных и инфицированных CCHFV мышей IFNAR ^{— / —} и эффект лечения рибавирином и Т-705.

Животных инокулировали i.p. с 100 FFU CCHFV. Печень собирали (i) у наивных животных (ii) у животных, которые умерли от инфекции без лечения на 3-й день p.i., (iii) которые умерли от инфекции на 9-й день p.i. после обработки рибавирином 100 мг / (кг × сут) и (iv) умерщвлены на 3-й день p.i. во время обработки Т-705 300 мг / (кг × сут). Лечение рибавирином или Т-705 начинали через 1 час в день. и продолжали до смерти или 8-го дня. Срезы окрашивали антителами против CD3, B220, Ly6G, Iba-1, iNOS, расщепленной каспазы-3 и Ki67.Т-клетки отмечены стрелками, поскольку антитело против CD3 демонстрирует некоторую ложную перекрестную реактивность. Патогистологические данные являются репрезентативными для 2–3 животных, анализируемых в каждой группе. Шкала шкалы = 50 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g003

Селезенка.

В селезенке мышей, инфицированных CCHFV, обнаружено умеренно уменьшенное количество лимфоцитов и повышенное количество клеточного дебриса в красной и белой пульпе. Кроме того, количество мегакариоцитов уменьшилось (рис.2). CCHFV NP был обнаружен в клетках селезенки, хотя сигналы были гораздо менее интенсивными, чем в печени (рис. 2).

Легкие, сердце, почки и мозг.

Гистопатологический анализ не выявил каких-либо явных различий в тканях легких, сердца, почек и головного мозга у мышей, инфицированных CCHFV, и наивных мышей. Уровень антигена вируса был ниже предела обнаружения ИГХ (данные не показаны).

Таким образом, у мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных CCHFV, наблюдались патологические изменения в печени и селезенке.Основным результатом был острый гепатит с обширным некрозом, реактивной пролиферацией гепатоцитов, легкой или умеренной воспалительной реакцией и морфологическими признаками активации моноцитов / макрофагов. CCHFV-инфицированные и апоптотические гепатоциты сгруппированы в некротических областях.

Тестирование противовирусных препаратов и токсичности

in vitro

Противовирусная активность рибавирина, арбидола гидрохлорида и Т-705 против штамма CCHFV Afg09-2990 была протестирована на клетках Vero E6. Все три соединения были способны подавлять репликацию вируса на 3–4 log ₁₀ единиц при концентрациях ≥10 мкг / мл (рис.4). Значения IC ₅₀ и IC ₉₀ находились в диапазоне 0,6–2,8 мкг / мл и 1,2–4,7 мкг / мл соответственно. Значения IC ₉₉ находились в диапазоне 2,0–9,5 мкг / мл. Токсичность клеток в тестовом диапазоне, измеренная с помощью теста МТТ, была очевидна только для гидрохлорида арбидола (рибавирин CC ₅₀ > 32 мкг / мл; арбидола гидрохлорид CC ₅₀ 8,3 мкг / мл, CC ₉₀ 20 мкг / мл; -705 CC ₅₀ > 15 мкг / мл) (рис. 4). В заключение, все три соединения показали мощный противовирусный эффект против CCHFV Afg09-2990 в культуре клеток.Арбидол проявил токсичность с терапевтическим индексом около 10.

.

Рисунок 4. Тестирование противовирусной активности рибавирина, арбидола гидрохлорида и Т-705 в культуре клеток.

Клетки Vero E6 инокулировали CCHFV с MOI 0,01 и добавляли соединение 1–4 дня p.i. с помощью иммунофокусного анализа. Рост и жизнеспособность клеток при обработке соединением определяли методом МТТ. Кривые «доза-ответ» были подогнаны к полученным данным. На графиках показаны репрезентативные эксперименты с точками данных, представляющими среднее значение и стандартное отклонение ≥3 повторов.Значения IC ₅₀ , IC ₉₀ и IC ₉₉ были рассчитаны из сигмоидальных функций 2–3 независимых экспериментов и показаны под графиками (среднее значение и диапазон).

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g004

Противовирусное тестирование

in vivo

Рибавирин сравнивали с группой плацебо, получавшей носитель (0,9% раствор NaCl) (рис. 5). Обе группы мышей IFNAR ^{— / —} были инфицированы 100 FFU CCHFV.Хотя одно животное выжило после лечения, рибавирин существенно не увеличил выживаемость (p = 0,4). Однако препарат увеличивал время до смерти (медиана 3 против 6 дней для плацебо по сравнению с рибавирином, p = 0,0007), снижал уровни AST (p = 0,001) и ALT (p = 0,006) на 2-й день, уменьшал титр вируса в крови на 2-й день (p = 0,0007), увеличение веса на 2-й и 3-й день (p = 0,03 и p = 0,002, соответственно) и снижение конечной концентрации вируса во всех органах по сравнению с плацебо на 3-й день ( р <0.001 отдельно для каждого органа). Гистопатологический анализ органов, собранных на 3-й день у мышей, получавших рибавирин, выявил только небольшие диссеминированные очаги некроза; большая часть паренхимы печени напоминала наивных мышей. Заметное снижение гепатоцеллюлярного некроза коррелировало с низким количеством апоптозных гепатоцитов (расщепленная каспаза-3), Т-клеток (CD3), B-клеток (B220) и активированных клеток, полученных из моноцитов (iNOS). Антиген-положительные клетки (NP) вируса были значительно уменьшены в печени и селезенке по сравнению с необработанными мышами или мышами, получавшими плацебо (данные не показаны).Однако у мышей, получавших рибавирин, которые скончались от инфекции на 4–9 дни, к моменту смерти был обнаружен обширный мостиковый гепатоцеллюлярный некроз (рис. 2). Как и у нелеченных мышей, некроз сопровождался присутствием многочисленных Iba-1-положительных макрофагов (клеток Купфера), демонстрирующих увеличенные тела клеток и очаговую кластеризацию, а также экспрессирующие iNOS активированные клетки, происходящие из моноцитов (рис. 3). Оба изменения указывают на сильную активацию моноцитов / макрофагов. Однако, в отличие от необработанных мышей, вирусный антиген с трудом обнаруживался в ткани печени обработанных мышей (рис.2), что соответствует низкому титру вируса во всех органах (рис. 5, внизу). Таким образом, рибавирин снижает нагрузку CCHFV и задерживает прогрессирование заболевания, но он не предотвращает терминальный некроз печени, активацию моноцитов / макрофагов и летальный исход на мышиной модели IFNAR ^{— / —} .

Рисунок 5. Лечение инфицированных CCHFV мышей IFNAR ^{— / —} рибавирином и арбидола гидрохлоридом.

Мышей инокулировали i.p. с 10, 100 или 1000 FFU вируса. Рибавирин вводили i.п. раз в день. Животные получали дозу рибавирина 100 / (кг × сут) или 0,9% NaCl в качестве плацебо. Лечение было начато через 1 час. и продолжали до смерти или 8-го дня. Арбидол вводили перорально один раз в день с помощью желудочного зонда. Животные получали арбидол в дозе 150 мг / (кг × сут) или 0,5% метилцеллюлозы в качестве плацебо. Лечение начинали за 1 день до заражения и продолжали до смерти или 8-го дня. Титры органов определяли у животных, которые умерли от инфекции или должны были быть подвергнуты эвтаназии из-за тяжести заболевания.Кроме того, три животных из группы, получавшей рибавирин, были случайным образом умерщвлены на 3-й день p.i. для определения титра вируса в органах (данные о весе, AST, ALT и виремии, полученные от этих мышей до дня 3, были включены в соответствующие графики). Среднее и стандартное отклонение показаны для титров органов, преобразованных по массе и логарифмически. Вертикальные полосы на графиках для AST и ALT (обратите внимание на логарифмическую шкалу оси Y) и логарифмически преобразованные титры вирусов в крови представляют собой средние значения. Продолжительность лечения на графиках выживаемости, диапазон виремии ниже предела обнаружения иммунофокусного анализа, а также нормальный референсный диапазон АСТ и АЛТ у мышей [59] заштрихованы серым цветом.Примечания. Группа 100 FFU плацебо: животное, которое умерло на 6 день, не показало повышения AST / ALT и виремии на 4 день. Группа 100 FFU рибавирина: у выжившего животного не обнаруживалась виреемия, но наблюдалось повышение AST. Виремия не определялась на 11-й день. Группа 10 FFU арбидола: у выжившего животного не было повышения уровня АСТ и виремии на 4-й день. Некоторые значения для дней 4, 8 и 11 не определялись из-за недостаточного количества крови.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g005

Гидрохлорид арбидола [75 и 150 мг / (кг × сут)] был протестирован по сравнению с группой плацебо, получавшей носитель (0,5% метилцеллюлозы) [Рис. 5 и данные не показаны для 75 мг / (кг × сут)]. Обе группы были инфицированы 1000 FFU CCHFV. За день до инокуляции мышей предварительно обрабатывали. Однако препарат не изменил ни выживаемость, ни время выживания, ни какой-либо другой измеренный параметр. Даже снижение дозы инокуляции до 10 FFU не имело никакого эффекта по сравнению с исторической контрольной группой.

T-705 был протестирован в сравнении с группой плацебо, получавшей носитель (0,5% метилцеллюлозы) (фиг. 6). Все группы были инфицированы 100 FFU CCHFV. Первоначально была протестирована высокая доза Т-705 [300 мг / (кг × сут)]. Препарат вводили с 0 по 8 день. Животные, получавшие плацебо, умерли между 3 и 4 днями. На 3 день они показали потерю веса почти на 20%, повышение температуры тела до 40 ° C, значения AST 1 200–2 51 000 Ед / л и значения АЛТ 260–6 700 Ед / л. Все животные экспериментальной группы пережили инфекцию и не проявили никаких признаков заболевания.Вирус не обнаружен ни в крови, ни в органах на протяжении всего периода наблюдения (рис. 6 и данные не представлены). Гистопатология и ИГХ на 3-й день выявили в основном нормальную ткань печени без вирусного антигена и воспалительных клеток (рис. 2 и 3).

Фигура 6. Обработка инфицированных CCHFV мышей IFNAR ^{— / —} Т-705 и эксперименты по времени добавления.

Мышей инокулировали i.p. с 100 FFU вируса. Т-705 вводили перорально дважды в день с помощью желудочного зонда.Животные получали дозу Т-705 300 мг / (кг × сут) или 0,5% метилцеллюлозы в качестве плацебо. Лечение начинали через 1 час, 1 день или 2 дня каждый день. и продолжали до смерти или до 8-го дня. Двое животных на схему лечения были умерщвлены на 3-й день p.i. для определения титра вируса в органах. Среднее и стандартное отклонение показаны для веса и температуры. Вертикальные полосы на графиках для AST и ALT (обратите внимание на логарифмическую шкалу оси Y) и логарифмически преобразованные титры вирусов в крови представляют собой средние значения. Продолжительность лечения на графиках выживаемости, диапазон виремии ниже предела обнаружения иммунофокусного анализа, а также нормальный референсный диапазон АСТ и АЛТ у мышей [59] заштрихованы серым цветом.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g006

Для определения эффективности препарата на поздней стадии инфекции были проведены эксперименты по времени добавления (рис. 6). Лечение высокой дозой лекарственного средства начинали через 1 день или 2 дня после инокуляции вируса и продолжали до 8 дня. Выживаемость составляла 100% в обеих группах, и животные почти не проявляли никаких признаков заболевания. Только если лечение начиналось через 2 дня p.i., незначительные изменения веса, температуры и AST наблюдались на 3 день.Вирус оставался не обнаруживаемым в крови и органах в обеих группах времени добавления на протяжении всего периода наблюдения. Чтобы предоставить доказательства инфицирования животных в группах лечения Т-705, развитие CCHFV-специфических антител измеряли 21 день p.i. Только 1/10 (10%) животных, получавших лечение после контакта, но 10/10 (100%) животных, получавших лечение с 1-го дня или 2 p.i. выработали антитела, что указывает на то, что репликации вируса при постэкспозиционной обработке Т-705 было недостаточно даже для выработки антител.

Чтобы определить наименьшую эффективную дозу Т-705, животные получали 30, 15 или 7,5 мг / (кг × сут) Т-705 или 0,5% метилцеллюлозы в качестве плацебо (рис. 7). Лечение было начато через 1 час. и продолжали до смерти или до 8-го дня. Все животные из групп, получавших 30 и 15 мг / (кг × день), выжили и почти не проявляли никаких признаков заболевания. Вирус был обнаружен на низком уровне только в крови одного животного из группы, получавшей 15 мг / (кг × сут), на 11 день (фиг. 7). Доза 7,5 мг / (кг × сут) не предотвратила летального исхода, хотя и увеличила время до смерти (p = 0.0007) и снижал уровни AST (p = 0,0007) и ALT (p = 0,004) на 3-й день. Вместе взятые, T-705 высокоэффективен против CCHFV в мышиной модели IFNAR ^{— / —} .

Рисунок 7. Определение наименьшей эффективной дозы Т-705.

Мышей инокулировали i.p. с 100 FFU вируса. Т-705 вводили перорально дважды в день с помощью желудочного зонда. Животные получали дозу Т-705 30, 15 или 7,5 мг / (кг × сут) или 0,5% метилцеллюлозы в качестве плацебо. Лечение начато 1 ч. Р.я. и продолжали до смерти или до 8-го дня. Титр вируса в органах определяли у животных, которые умерли от инфекции, и у 3 животных из группы 30 мг / (кг × день), которые были умерщвлены на 3-й день. Анализ органов не проводился для группа 15 мг / (кг × сут) (nd). Среднее и стандартное отклонение (или диапазон для n = 2) показаны для веса, температуры и логарифмически преобразованных титров органов. Вертикальные полосы на графиках для AST и ALT (обратите внимание на логарифмическую шкалу оси Y) и логарифмически преобразованные титры вирусов в крови представляют собой средние значения.Продолжительность лечения на графиках выживаемости, диапазон виремии ниже предела обнаружения иммунофокусного анализа, а также нормальный референсный диапазон АСТ и АЛТ у мышей [59] заштрихованы серым цветом. Примечания. Группа плацебо: животное, которое умерло на 5-й день, не показало повышения AST / ALT и виремии на 3-й день. 7,5 мг / (кг × день) Группа T-705: выжившее животное не показало ни повышения AST / ALT, ни виремии. время.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g007

Комбинация рибавирина и Т-705

in vitro и in vivo

Рибавирин в настоящее время используется в клинических условиях для лечения хронической сердечной недостаточности [16] — [19].Поэтому важно знать, можно ли назначать Т-705 в комбинации с рибавирином и как оба препарата взаимодействуют. Сначала в культуре клеток определяли противовирусную активность 64 комбинаций рибавирина и Т-705. Матрица концентраций 8 × 8 была разработана на основе значений IC ₉₀ для обоих препаратов, как определено выше. Частицы инфекционного вируса измеряли через 3 дня p.i. с помощью иммунофокусного анализа и жизнеспособность клеток определяли методом МТТ. Поверхность доза-ответ демонстрирует, что комбинации рибавирина и Т-705 проявляют сильные противовирусные эффекты с подавлением репликации вируса более чем на 5 логарифмических единиц (рис.8А). Возможные антагонистические или синергетические эффекты оценивались с использованием модели независимости Bliss по аналогии с алгоритмами программы MacSynergy II [44], [45]. Этот анализ выявил явные синергетические эффекты, когда лекарства были объединены в концентрациях, близких к их IC ₉₀ . В этой области матрицы титр экспериментального вируса был на 2 логарифмических единицы ниже, чем титр, предсказанный в соответствии с моделью независимости Блисса для аддитивного эффекта (фиг. 8B). МТТ-тест не выявил токсичности препарата по всей матрице (рис.8Б).

Рисунок 8. Тестирование противовирусной активности комбинации рибавирина и Т-705 в культуре клеток.

Клетки Vero E6 инокулировали CCHFV с MOI 0,01 и добавляли соединения. Матрица комбинации лекарств 1 × 8 была разработана, как описано в разделе «Материалы и методы». Концентрацию инфекционных вирусных частиц в супернатанте клеточной культуры измеряли через 3 дня p.i. с помощью иммунофокусного анализа. Рост и жизнеспособность клеток при обработке соединением определяли методом МТТ.(A) Поверхность «доза-реакция» для комбинации рибавирина и Т-705. Сигмоидальные кривые доза-ответ были подогнаны к данным для одного лекарства, и значения IC ₅₀ и IC ₉₀ для рибавирина и Т-705 были рассчитаны на основе функций. (B) По аналогии с программой MacSynergy II [44], [45], трехмерный подход использовался для определения областей, в которых наблюдаемые эффекты больше (синергия) или меньше (антагонизм), чем предсказано моделью независимости Блисса. С этой целью соотношение между предсказанным титром вируса и наблюдаемым титром вируса было рассчитано для каждой комбинации лекарственных средств.Отношение> 1 указывает на синергию (т. Е. Титр вируса, предсказанный для аддитивного эффекта, выше, чем титр вируса, определенный экспериментально), отношение <1 указывает на антагонизм (т. Е. Титр вируса для предсказанного аддитивного эффекта ниже, чем титр вируса, определенный экспериментально) . Комбинации лекарств, показывающие явное различие между экспериментальным и прогнозируемым титром (≥4-кратное), отмечены желтым цветом, а соотношение указано красным. Значения МТТ показаны синим цветом для каждой комбинации препаратов.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pntd.0002804.g008

Для тестирования эффектов комбинации препаратов in vivo животные получали дозу Т-705 30 или 7,5 мг / (кг × сут) в сочетании с дозой рибавирина 100 мг / (кг × сут). Доза Т-705 30 мг / (кг × сут), которая является защитной при введении одного лекарственного средства, была выбрана для проверки того, влияет ли добавление рибавирина на эффективность Т-705. Чтобы выяснить, может ли комбинация двух малоэффективных доз привести к эффективному лечению, одновременно вводили 7,5 мг / (кг × сутки) Т-705 и 100 мг / (кг × сутки) рибавирина.Ни один из параметров в группе 30 мг / (кг × сутки) Т-705 плюс 100 мг / (кг × сутки) рибавирина (рис.9, слева) не отличался статистически значимо от параметров группы 30 мг / (кг × сутки). г) Группа монотерапии Т-705 (рис. 7). С другой стороны, комбинация дозы 7,5 мг / (кг × сутки) Т-705 с дозой рибавирина 100 мг / (кг × сутки) (рис.9 справа) улучшила выживаемость по сравнению с монотерапией. лечения (рис. 5 и 7), хотя увеличение не достигло статистической значимости (p = 0,08 для T-705 + рибавирин vs.Только Т-705 и p = 0,07 для Т-705 + рибавирин по сравнению с одним рибавирином; двусторонний точный тест Фишера). В заключение, Т-705 и рибавирин проявляют синергетические эффекты в соответствии с моделью независимости Блисса при объединении в концентрациях, близких к их IC ₉₀ in vitro . Совместное введение обоих препаратов на животной модели предполагает, что комбинированное лечение дает скорее положительные, чем побочные эффекты.

Рисунок 9. Лечение мышей комбинацией рибавирина и Т-705.

Мышей инокулировали i.p. с 100 FFU вируса. Т-705 вводили перорально дважды в день с помощью желудочного зонда. Рибавирин вводили внутрибрюшинно. раз в день. Животные получали дозу Т-705 30 или 7,5 мг / (кг × сутки) в сочетании с дозой рибавирина 100 мг / (кг × сутки). Контрольные группы плацебо показаны на рис. 7, так как оба эксперимента проводились параллельно. Лечение было начато через 1 час. и продолжалось до смерти или до 8-го дня. Для веса и температуры показаны среднее и стандартное отклонение.Вертикальные полосы на графиках для AST и ALT (обратите внимание на логарифмическую шкалу оси Y) и логарифмически преобразованные титры вирусов в крови представляют собой средние значения. Продолжительность лечения на графиках выживаемости, диапазон виремии ниже предела обнаружения иммунофокусного анализа, а также нормальный референсный диапазон АСТ и АЛТ у мышей [59] заштрихованы серым цветом. Примечания. У двух животных, умерших на 6-й день, не было обнаруживаемого вируса в органах или крови и не было повышения уровня АСТ / АЛТ.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pntd.0002804.g009

Обсуждение

В этом исследовании мы использовали IFNAR ^{— / —} мышей в качестве модели in vivo для оценки эффективности противовирусных препаратов против CCHFV. Основным патологическим изменением у мышей, инфицированных недавно выделенным штаммом CCHFV Afg09-2990, был острый гепатит с обширным некрозом, реактивной пролиферацией гепатоцитов, легкой или умеренной воспалительной реакцией и морфологическими признаками активации моноцитов / макрофагов.В некротических областях обнаружены гепатоциты, инфицированные CCHFV, и гепатоциты с апоптозом. Рибавирин, арбидола гидрохлорид и Т-705 были активны против CCHFV Afg09-2990 в культуре клеток. Однако гидрохлорид арбидола был неактивным in vivo . Рибавирин был частично активен, тогда как Т-705 был высокоэффективным на мышиной модели. Последний препарат был эффективен, даже если окно для терапевтического вмешательства составляло менее 2 дней.

Три модели мыши для CCHF были описаны в прошлом: модель новорожденных мышей, мыши STAT1 ^{— / —} и мыши IFNAR ^{— / —} [9] — [12].Последние модели используют дефект врожденного иммунного ответа, который, по-видимому, необходим для защиты мышей от продуктивной инфекции CCHFV. Во всех трех моделях мыши умирают от инфекции в течение нескольких дней. Мы предпочитаем работать с мышами IFNAR ^{— / —} , поскольку генетический дефект касается только передачи сигналов интерферона I типа, в то время как дефицит STAT1 предотвращает активацию генов из-за сигнала интерферонов I или II типа, а новорожденные мыши иммунологически иммунны. толерантный (неонатальная толерантность).Мыши IFNAR ^{— / —} очень восприимчивы к инфекции CCHFV. Посевной материал, достаточный для инициации продуктивной инфекции, очень низкий — 0,3 FFU, что предположительно соответствует всего нескольким инфекционным вирусным частицам. Это согласуется с экспериментами на мышах AG129, лишенных рецепторов интерферона типа I и типа II, в которых инокулята 0,1 БОЕ вируса лимфоцитарного хориоменингита было достаточно для заражения животных [49].

Совсем недавно было показано, что модель IFNAR ^{— / —} имитирует признаки болезни CCHF человека [12].Эти данные расширены здесь более подробным иммуногистопатологическим анализом печени. Гистопатология, измерение вирусной нагрузки, окрашивание антигенов в различных органах и измерение AST и ALT демонстрируют, что печень является основным органом-мишенью CCHFV. Хотя вирус был обнаружен во всех органах, его титр в печени самый высокий и в некоторых экспериментах превышает 7 log ₁₀ FFU / g. Более высокий титр вируса в печени по сравнению с другими органами может объяснить, почему анализ ИГХ на вирусный антиген выявил четко положительные клетки только в печени, в то время как сигналы в других органах были слабыми или отсутствовали.В исключительных случаях значения АСТ и АЛТ достигали 10 000 Ед / л и 1000 Ед / л соответственно, что свидетельствует о массивном повреждении клеток печени. Однако, хотя АЛТ специфичен для этого органа, АСТ также присутствует на высоком уровне в сердце, скелетных мышцах, почках, головном мозге и эритроцитах [50]. Следовательно, высокое соотношение AST / ALT также может указывать на повреждение внепеченочных клеток. В целом, гистологические и биохимические данные совместимы с диагнозом молниеносного поражения печени. Наши результаты также согласуются с патологическими наблюдениями при CCHF человека; гепатоцеллюлярный некроз с гиперпластическими и гипертрофическими клетками Купфера и легкими или отсутствующими воспалительными клеточными инфильтратами является выдающимся гистопатологическим открытием у людей [3].Заслуживают внимания два новых аспекта, которые могут дать некоторые ключи к разгадке патофизиологии CCHF. Во-первых, в некротических поражениях печени кластеризовались как гепатоциты, инфицированные CCHFV, так и апоптотические гепатоциты. Это может указывать на то, что клетки, инфицированные CCHFV, подвергаются апоптозу и некрозу. Поскольку воспалительная реакция была от легкой до умеренной, прямое цитопатическое действие вируса на гепатоциты может быть связано с индукцией апоптоза и некроза. Важно отметить, что эта гипотеза была выдвинута в ранних исследованиях ИГХ на людях с CCHF [3].Во-вторых, в печени были обнаружены активированные Iba-1-положительные макрофаги и активированные клетки, происходящие из моноцитов, экспрессирующие iNOS. Эти клетки могут играть решающую роль в сильных провоспалительных иммунных ответах после инфекции CCHFV, о чем свидетельствует значительное увеличение сывороточных провоспалительных цитокинов и молекул хемоаттрактантов у мышей IFNAR ^{— / —} и STAT1 ^{— / —} , а также у людей. [6] — [8], [10], [12].

В этом исследовании мы использовали модель мыши IFNAR ^{— / —} для тестирования противовирусных препаратов против CCHFV in vivo .Рибавирин является стандартным лечением при ГКГН человека, хотя его клиническая эффективность не доказана [16] — [19] — и показывает положительные эффекты на неонатальных моделях и моделях мышей STAT1 ^{— / —} [9], [10]. Поэтому мы сначала оценили модель мышей IFNAR ^{— / —} с использованием этого препарата. Время выживания было увеличено, при этом выживаемость не увеличилась, что в значительной степени соответствует результатам экспериментов по заражению высокими дозами на мышах STAT1 ^{— / —} [10]. Несмотря на задержку прогрессирования заболевания и снижение вирусной нагрузки в крови и органах, о чем свидетельствуют титрование вируса и ИГХ, рибавирин не смог предотвратить летальный патофизиологический каскад.Важно отметить, что развитие терминального некроза печени с заметной активацией моноцитов / макрофагов при фактическом отсутствии вируса в органе демонстрирует, что пути хозяина, когда они запускаются вирусом, опосредуют патологию и смерть независимо от наличия триггера.

Вторым испытанным соединением был арбидол гидрохлорид, противовирусный препарат широкого спектра действия, применяемый в клинической практике против гриппа [20] — [24]. Арбидола гидрохлорид эффективно подавлял CCHFV в культуре клеток. Однако никаких положительных эффектов на мышиной модели IFNAR ^{— / —} не наблюдалось.Препарат вводили тем же путем, но в более высоких дозах, чем в предыдущих исследованиях, которые показали положительный эффект против гриппа A, вируса Коксаки B и хантаана у мышей [20], [22]. Соединение обладало значительной токсичностью при более высоких концентрациях в культуре клеток. Вполне возможно, что его противовирусный эффект in vitro , по крайней мере, частично объясняется общеклеточными токсическими эффектами, которые не обнаруживаются в анализе МТТ, используемом для оценки жизнеспособности клеток. Следовательно, возможно, что данные in vitro переоценивают истинный противовирусный эффект препарата против CCHFV.Кроме того, арбидол чрезвычайно гидрофобен, что может снизить его пероральную биодоступность у мышей. Возможно, в будущем стоит испытать арбидол в составе фармацевтических препаратов с повышенной растворимостью [51].

Важным наблюдением в нашем исследовании является сильный противовирусный эффект Т-705 против CCHFV в культуре клеток и на мышиной модели IFNAR ^{— / —} . Было показано, что это соединение высокоактивно против ряда вирусов in vitro и in vivo , включая ортомиксовирусы, аренавирусы и буньявирусы родов hantavirus и phlebovirus [28] — [34].Следовательно, его активность против CCHFV, буньявируса рода nairovirus , не является неожиданной. Однако, ввиду низкой или недостаточной активности рибавирина и арбидола in vivo , оба из которых имеют почти такие же значения IC ₅₀ и IC ₉₀ , чем T-705, высокая эффективность in vivo T -705 удивительно. IC ₅₀ для CCHFV в 5–30 раз ниже, чем значения IC ₅₀ для других буньявирусов [35], что может указывать на особую чувствительность этого вируса к T-705.Даже если его вводили за 2 дня до предполагаемого времени смерти, животные выживали и почти не проявляли признаков болезни. Если препарат вводится сразу после контакта, он подавляет репликацию вируса ниже уровня, необходимого для выработки антител. Мы могли снизить дозу в 20 раз [с 300 до 15 мг / (кг × сут)], при этом лекарство все еще показывало эффективность после воздействия.

Механизм действия Т-705 против CCHFV неизвестен. По аналогии с другими сегментированными вирусами с отрицательной цепью, Т-705-рибофуранозил-5′-трифосфат может быть включен в формирующуюся цепь РНК и ингибировать дальнейшее удлинение цепи или вызвать летальный мутагенез [36] — [40].Как рибавирин действует против CCHFV, до сих пор неизвестно, хотя препарат используется в клинической практике уже несколько десятилетий. Для других вирусов было предложено несколько механизмов: он может быть включен в вирусную РНК, вызывая летальный мутагенез [52], препятствовать кэппированию [53], ингибировать вирусную РНК-полимеразу [54], [55] или ингибировать фермент клетки-хозяина инозин. монофосфатдегидрогеназа (IMPDH) приводит к снижению уровня GTP [56] — [58]. T-705-рибофуранозил-5′-монофосфат был в 150 раз слабее рибавирин-5′-монофосфата по своему ингибирующему эффекту IMPDH, что позволяет предположить, что IMPDH не является основным ферментом-мишенью для T-705 [39], [40].Учитывая, что механизм действия обоих препаратов плохо изучен, трудно предсказать, как они взаимодействуют. Однако, поскольку рибавирин является стандартным препаратом для лечения CCHF [16] — [19], комбинированное лечение рибавирин / T-705 было бы очевидным вариантом в клинической практике. Наши эксперименты предполагают, что оба препарата не действуют антагонистическим образом in vitro и in vivo . Согласно модели независимости Блисса есть даже свидетельства синергического взаимодействия in vitro , а эксперименты на модели животных указывают на полезное, а не неблагоприятное взаимодействие in vivo .В заключение, наши данные обещают клиническую эффективность комбинированного лечения Т-705 или рибавирин / Т-705 при ГКГН человека.

Благодарности

Авторы благодарят Cesar Munoz-Fontela за плодотворные обсуждения. Отделение вирусологии Института Бернхарда-Нохта — это центр, сотрудничающий с ВОЗ по справочным материалам и исследованиям по арбовирусам и геморрагической лихорадке (DEU-115).

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: LO TR XdL SÖ SG.Проведены эксперименты: LO TR MN ML SK SW SÖ. Проанализированы данные: LO TR MN CB ML SK SÖ SG. Внесенные реагенты / материалы / инструменты анализа: PE. Написал статью: LO TR MN CB SÖ SG.

Ссылки

1. 1.
   Joubert JR, King JB, Rossouw DJ, Cooper R (1985) Нозокомиальная вспышка крымско-конголезской геморрагической лихорадки в больнице Tygerberg. Часть III. Клиническая патология и патогенез. S Afr Med J 68: 722–728.
2. 2.
   Свейнпол Р., Гилл Д.Е., Шеперд А.Дж., Леман П.А., Минхардт Дж. Х. и др.(1989) Клиническая патология Крымско-Конго геморрагической лихорадки. Rev Infect Dis 11 Suppl 4: S794–800.
3. 3.
   Берт Ф.Дж., Свейнпол Р., Шие В.Дж., Смит Дж.Ф., Леман П.А. и др. (1997) Иммуногистохимическая локализация и локализация in situ вируса Крымско-Конго геморрагической лихорадки (CCHF) в тканях человека и значение для патогенеза CCHF. Arch Pathol Lab Med 121: 839–846.
4. 4.
   Whitehouse CA (2004) Крымско-конголезская геморрагическая лихорадка. Antiviral Res 64: 145–160.
5. 5.Эргонул О. (2006) Крымско-Конго геморрагическая лихорадка. Lancet Infect Dis 6: 203–214.
6. 6.
   Ergonul O, Tuncbilek S, Baykam N, Celikbas A, Dokuzoguz B (2006) Оценка сывороточных уровней интерлейкина (IL) -6, IL-10 и фактора некроза опухоли альфа у пациентов с Крымско-Конго геморрагической лихорадкой. J Infect Dis 193: 941–944.
7. 7.
   Саксида А., Дух Д., Врабер Б., Дедушадж И., Ахмети С. и др. (2010) Взаимодействие иммунных механизмов и вирусной нагрузки в патогенезе крымско-конго геморрагической лихорадки.Clin Vaccine Immunol 17: 1086–1093.
8. 8.
   Папа А., Бино С., Вело Э, Харкси А., Кота М. и др. (2006) Уровни цитокинов при Крымско-Конго геморрагической лихорадке. J Clin Virol 36: 272–276.
9. 9.
   Tignor GH, Hanham CA (1993) Эффективность рибавирина в модели инфекции вируса крымско-конголезской геморрагической лихорадки (CCHF) in vivo. Antiviral Res 22: 309–325.
10. 10.
    Бенте Д.А., Алимонти Дж. Б., Шие В. Дж., Камю Дж., Штрохер У. и др. (2010) Патогенез и иммунный ответ вируса Крымско-Конго геморрагической лихорадки на модели мышей с нокаутом STAT-1.J Virol 84: 11089–11100.
11. 11.
    Bereczky S, Lindegren G, Karlberg H, Akerstrom S, Klingstrom J, et al. (2010) Инфекция, вызванная вирусом крымско-конголезской геморрагической лихорадки, смертельна для взрослых мышей с нокаутом рецепторов интерферона I типа. J Gen Virol 91: 1473–1477.
12. 12.
    Зивчек М., Сафронец Д., Скотт Д., Робертсон С., Эбихара Н. и др. (2013) Смертельная вирусная инфекция крымско-конголезской геморрагической лихорадки у мышей с нокаутом рецепторов интерферона альфа / бета связана с высокой вирусной нагрузкой, провоспалительными реакциями и коагулопатией.J Infect Dis 207: 1909–1921.
13. 13.
    Boyd A, Fazakerley JK, Bridgen A (2006) Патогенез инфекции вирусом Дугбе у мышей дикого типа и мышей с дефицитом интерферона. J Gen Virol 87: 2005–2009.
14. 14.
    Доуэлл С.Д., Финдли-Уилсон С., Рейнер Э., Пирсон Г., Пикерсгилл Дж. И др. (2012) Инфекция вирусом Хазара смертельна для взрослых мышей с нокаутом рецепторов интерферона I типа и может выступать в качестве суррогата инфекции, вызываемой патогенным для человека вирусом крымско-конголезской геморрагической лихорадки.J Gen Virol 93: 560–564.
15. 15.
    Watts DM, Ussery MA, Nash D, Peters CJ (1989) Ингибирование вирусной инфекционности крымско-конголезской геморрагической лихорадки дает in vitro рибавирин. Am J Trop Med Hyg 41: 581–585.
16. 16.
    Фишер-Хох С.П., Хан Дж. А., Рехман С., Мирза С., Хуршид М. и др. (1995) Крымская конго-геморрагическая лихорадка, леченная пероральным рибавирином. Ланцет 346: 472–475.
17. 17.
    Элалди Н., Бодур Х., Ачиоглу С., Челикбас А., Озкурт З. и др. (2009) Эффективность перорального лечения рибавирином при Крымско-Конго геморрагической лихорадке: квазиэкспериментальное исследование, проведенное в Турции.J Заражение 58: 238–244.
18. 18.
    Ascioglu S, Leblebicioglu H, Vahaboglu H, Chan KA (2011) Рибавирин для пациентов с Крымско-Конго геморрагической лихорадкой: систематический обзор и метаанализ. J Antimicrob Chemother 66: 1215–1222.
19. 19.
    Дуйгу Ф., Кая Т., Байсан П. (2012) Переоценка 400 случаев крымско-конголезской геморрагической лихорадки в эндемичной зоне: подходит ли лечение рибавирином? Переносимые переносчиками зоонозы Dis 12: 812–816.
20. 20.
    Shi L, Xiong H, He J, Deng H, Li Q и др.(2007) Противовирусная активность арбидола против вируса гриппа A, респираторно-синцитиального вируса, риновируса, вируса Коксаки и аденовируса in vitro и in vivo. Arch Virol 152: 1447–1455.
21. 21.
    Чжун Кью, Ян З., Лю И, Дэн Х, Сяо Х и др. (2009) Противовирусная активность арбидола против вируса Коксаки B5 in vitro и in vivo. Arch Virol 154: 601–607.
22. 22.
    Deng HY, Luo F, Shi LQ, Zhong Q, Liu YJ и др. (2009) Эффективность арбидола в отношении летальных инфекций вируса Хантаана у мышей-сосунков и in vitro.Acta Pharmacol Sin 30: 1015–1024.
23. 23.
    Delogu I, Pastorino B, Baronti C, Nougairede A, Bonnet E и др. (2011) Противовирусная активность арбидола против вируса чикунгунья in vitro и характеристики выбранного устойчивого мутанта. Antiviral Res 90: 99–107.
24. 24.
    Брукс М.Дж., Бурцева Е.И., Эллери П.Дж., Марш Г.А., Лью А.М. и др. (2012) Противовирусная активность арбидола, препарата широкого спектра действия против респираторных вирусов, варьируется в зависимости от условий испытаний.J Med Virol 84: 170–181.
25. 25.
    Борискин Ю.С., Ленева И.А., Печер Е.И., Поляк С.Ю. (2008) Арбидол: противовирусное соединение широкого спектра действия, блокирующее слияние вирусов. Curr Med Chem 15: 997–1005.
26. 26.
    Ленева И.А., Рассел Р.Дж., Борискин Ю.С., Хэй А.Дж. (2009) Характеристики устойчивых к арбидолу мутантов вируса гриппа: значение для механизма противогриппозного действия арбидола. Противовирусный Res 81: 132–140.
27. 27.
    Teissier E, Zandomeneghi G, Loquet A, Lavillette D, Lavergne JP, et al.(2011) Механизм ингибирования слияния оболочечной вирусной мембраны противовирусным препаратом арбидол. PLoS One 6: e15874.
28. 28.
    Фурута Ю., Такахаши К., Фукуда Ю., Куно М., Камияма Т. и др. (2002) Активность соединения Т-705 против вируса гриппа in vitro и in vivo. Антимикробные агенты Chemother 46: 977–981.
29. 29.
    Гоуэн Б. Б., Вонг М. Х., Юнг К. Х., Сандерс А. Б., Менденхолл М. и др. (2007) Активность Т-705 in vitro и in vivo против аренавирусных и буньявирусных инфекций.Антимикробные агенты Chemother 51: 3168–3176.
30. 30.
    Gowen BB, Smee DF, Wong MH, Hall JO, Jung KH и др. (2008) Лечение поздней стадии заболевания на модели аренавирусной геморрагической лихорадки: эффективность и снижение токсичности Т-705 предлагает альтернативу рибавирину. PLoS One 3: e3725.
31. 31.
    Кисо М., Такахаши К., Сакаи-Тагава Ю., Шинья К., Сакабе С. и др. (2010) Активность Т-705 (фавипиравира) против летальных вирусов гриппа A H5N1. Proc Natl Acad Sci U S A 107: 882–887.
32. 32.
    Гоуэн Б. Б., Вонг М. Х., Юнг К. Х., Сми Д. Ф., Морри Д. Д. и др. (2010) Эффективность фавипиравира (Т-705) и производных пиразина Т-1106 на моделях флебовирусных заболеваний. Antiviral Res 86: 121–127.
33. 33.
    Менденхолл М., Рассел А., Сми Д.Ф., Холл Дж. О., Скирпстунас Р. и др. (2011) Эффективная пероральная терапия фавипиравиром (Т-705), начатая после начала клинического заболевания на модели аренавирусной геморрагической лихорадки. PLoS Negl Trop Dis 5: e1342.
34. 34.
    Safronetz D, Falzarano D, Scott DP, Furuta Y, Feldmann H, et al.(2013) Противовирусная эффективность фавипиравира против двух известных этиологических агентов хантавирусного легочного синдрома. Антимикробные агенты Chemother 57: 4673–4680.
35. 35.
    Furuta Y, Gowen BB, Takahashi K, Shiraki K, Smee DF и др. (2013) Фавипиравир (Т-705), новый ингибитор вирусной РНК-полимеразы. Antiviral Res 100: 446–454.
36. 36.
    Баранович Т., Вонг С.С., Армстронг Дж., Марджуки Х., Уэбби Р.Дж. и др. (2013) T-705 (фавипиравир) индуцирует летальный мутагенез вирусов гриппа A h2N1 in vitro.J Virol 87: 3741–3751.
37. 37.
    Джин З., Смит Л.К., Раджванши В.К., Ким Б., Девал Дж. (2013) Неоднозначное спаривание оснований и высокая субстратная эффективность рибофуранозил-5′-трифосфата Т-705 (фавипиравира) по отношению к полимеразе вируса гриппа А. PLoS One 8: e68347.
38. 38.
    Naesens L, Guddat LW, Keough DT, van Kuilenburg AB, Meijer J, et al. (2013) Роль гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазы человека в активации противовирусного агента Т-705 (фавипиравир). Mol Pharmacol 84: 615–629.
39. 39.
    Сми Д.Ф., Херст Б.Л., Эгава Х., Такахаши К., Кадота Т. и др. (2009) Внутриклеточный метаболизм фавипиравира (T-705) в неинфицированных и инфицированных вирусом гриппа A (H5N1) клетках. J Antimicrob Chemother 64: 741–746.
40. 40.
    Фурута Ю., Такахаши К., Куно-Маекава М., Сангава Х., Уехара С. и др. (2005) Механизм действия Т-705 против вируса гриппа. Антимикробные агенты Chemother 49: 981–986.
41. 41.
    Килкенни С., Браун В.Дж., Катхилл И.К., Эмерсон М., Альтман Д.Г. (2010) Улучшение отчетности по бионаучным исследованиям: рекомендации ARRIVE по отчетности об исследованиях на животных.PLoS Biol 8: e1000412.
42. 42.
    Ölschläger S, Gabriel M, Schmidt-Chanasit J, Meyer M, Osborn E, et al. (2011) Полная последовательность и филогенетическая характеристика вируса Крымско-Конго геморрагической лихорадки из Афганистана. J Clin Virol 50: 90–92.
43. 43.
    Günther S, Asper M, Roser C, Luna LK, Drosten C и др. (2004) Применение ПЦР в реальном времени для тестирования антивирусных соединений против вируса Ласса, коронавируса SARS и вируса Эбола in vitro. Antiviral Res 63: 209–215.
44. 44.
    Greco WR, Bravo G, Parsons JC (1995) Поиск синергизма: критический обзор с точки зрения поверхности отклика. Pharmacol Rev 47: 331–385.
45. 45.
    Причард М.Н., Шипман С.-младший (1990) Трехмерная модель для анализа лекарственного взаимодействия. Antiviral Res 14: 181–205.
46. 46.
    Muller U, Steinhoff U, Reis LF, Hemmi S, Pavlovic J, et al. (1994) Функциональная роль интерферонов типа I и типа II в противовирусной защите. Наука 264: 1918–1921.
47. 47.
    Sidwell RW, Bailey KW, Wong MH, Barnard DL, Smee DF (2005) Эффекты вирамидина, ингибирующие вирус гриппа in vitro и in vivo. Противовирусный Res 68: 10–17.
48. 48.
    Эммерих П., Авшич-Зупанк Т., Чиникар С., Саксида А., Том-Болдуан С. и др. (2010) Ранняя серодиагностика острой вирусной инфекции Крымско-Конго геморрагической лихорадки человека с помощью новых методов захвата. Дж. Клин Вирол 48: 294–295.
49. 49.
    Ciurea A, Klenerman P, Hunziker L, Horvath E, Odermatt B и др.(1999) Персистенция вируса лимфоцитарного хориоменингита на очень низких уровнях у иммунных мышей. Proc Natl Acad Sci U S A 96: 11964–11969.
50. 50.
    Джаннини EG, Testa R, Savarino V (2005) Изменение ферментов печени: руководство для клиницистов. Cmaj 172: 367–379.
51. 51.
    Еропкин М.Ю., Соловский М.В., Смирнова М.Ю., Брязжикова Т.С., Гудкова Т.М. и др. (2009) Синтез и биологическая активность водорастворимых полимерных комплексов арбидола. Pharm Chem J 43: 563–567.
52. 52.Кротти С., Мааг Д., Арнольд Дж. Дж., Чжун В., Лау Дж. Й. и др. (2000) Противовирусный рибонуклеозид рибавирин широкого спектра действия представляет собой мутаген РНК вируса. Nat Med 6: 1375–1379.
53. 53.
    Госвами BB, Borek E, Sharma OK, Fujitaki J, Smith RA (1979) Противовирусный агент широкого спектра действия рибавирин ингибирует кэппирование мРНК. Biochem Biophys Res. Commun. 89: 830–836.
54. 54.
    Эрикссон Б., Хельгстранд Э., Йоханссон Н.Г., Ларссон А., Мисиорни А. и др. (1977) Ингибирование полимеразы рибонуклеиновой кислоты вируса гриппа рибавиринтрифосфатом.Антимикробные агенты Chemother 11: 946–951.
55. 55.
    Fernandez-Larsson R, O’Connell K, Koumans E, Patterson JL (1989) Молекулярный анализ ингибирующего действия фосфорилированного рибавирина на полимеразную реакцию in vitro вируса везикулярного стоматита. Антимикробные агенты Chemother 33: 1668–1673.
56. 56.
    Стритер Д.Г., Витковски Д.Т., Харе Г.П., Сидвелл Р.В., Бауэр Р.Дж. и др. (1973) Механизм действия 1-бета-D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамида (виразол), нового противовирусного агента широкого спектра действия.Proc Natl Acad Sci U S A 70: 1174–1178.
57. 57.
    Leyssen P, Balzarini J, De Clercq E, Neyts J (2005) Преобладающий механизм, с помощью которого рибавирин проявляет свою противовирусную активность in vitro против флавивирусов и парамиксовирусов, опосредуется ингибированием дегидрогеназы IMP. J Virol 79: 1943–1947.
58. 58.
    Smee DF, Bray M, Huggins JW (2001) Исследования противовирусной активности и механизма действия рибавирина и микофеноловой кислоты против ортопоксвирусов in vitro. Antivir Chem Chemother 12: 327–335.
59. 59.
    Zhou X, Hansson GK (2004) Влияние пола и возраста на биохимические контрольные диапазоны сыворотки у мышей C57BL / 6J. Comp Med 54: 176–178.

.