Опухоль периферическая легкого: Периферический рак легкого: причины, симптомы и лечение

Периферический рак легкого: причины, симптомы и лечение

  Если быть точными, то раковые заболевания занимают наибольшую часть от всех недугов во всем мире. Рак способен развиваться буквально во всех органах. У женщин периферический рак легкого развивается после 50 лет, а у мужчин он может начаться даже после 45. Периферический рак легкого представляет собой образование в виде узла, который появляется на слизистых оболочках бронх или же альвеол. Врачи выделяют как доброкачественную опухоль, так и злокачественную. Если же верить статистике, то злокачественные встречаются куда чаще.

Читайте также: Симптомы и лечение параканкрозной пневмонии

Основные причины возникновения

На сегодняшний день главной причиной появления рака легких является вдыхание канцерогенов. В основном это связано именно с сигаретным дымом. Особенное внимание стоит обратить курильщикам с многолетним стажем. Как раз они более всего подвержены заболеванию, так как смолы оседают именно в верхней доле легкого, что и снижает функционирование органов.

Обратите внимание на то, что канцерогены попадают в легкие не только с дымом сигарет. Загрязненный воздух также может являться первопричиной рака. Заводы, индустриальные районы, дома рядом с трассами – все это и даже больше влияет на ваше здоровье не самым лучшим образом. Если же вы живете именно поблизости таких мест, вам стоит задуматься о покупке жилье в другом, более благоприятном для вашего здоровья месте.

Несмотря на то что курение оставалось и до сих пор остается главной причиной возникновения рака, ученые выделяют еще несколько факторов:

• На возникновение влияют хронические заболевания легких в запущенной форме. Сюда можно отнести и воспалительные процессы, и инфекционные.
• Признаки максимального снижения иммунитета. Иммунодефицит также относится сюда.
• Радиоактивное излучение может вызвать рак легкого.
• Прямой или непрямой контакт с опасными химическими веществами, такими как мышьяк, никель или же хром.
• Различные неблагоприятные процессы, которые происходят во внешней среде.

Можно смело утверждать, что состояние бронхов – это главная роль в развитии болезни. Все начинается именно с бронхиальных клеток и переходит в более тяжелые формы.

Основные симптомы рака легкого

Если же разбирать основные симптомы рака левого легкого, то стоит сразу же сказать, что они могут долгое время просто не показываться. Плоскоклеточная опухоль развивается очень быстро. Вы и сами не заметите, как она перерастет уже в третью стадию.

Что же касается рака верхней доли, то специалисты отмечают переход злокачественной или же доброкачественной опухоли на плевру. При этом опухоль имеет округлую форму. Локализация происходит на отдельном участке органа, а потом стремительно поражает легкое метастазами. Обратите внимание, что имеется возможность перехода метастазов даже на ближайшие органы.

Периферический рак легкого характеризуется кашлем, сильными болями в груди или же кровохарканьем. Общее недомогание также включено в общий диагноз. Как показывает практика, симптомы могут либо остро проявляться, либо же стихать. Все зависит от стадии развития болезни.

Профессионалы выделяют несколько основных форм развития болезни:

1. Первая фаза называется биологической. Наблюдается она с того момента, когда происходит диагностика.
2. Бессимптомная фаза. Протекает она с момента диагностирования и до появления первых симптомов.
3. Клиническая фаза является последней. Можно сказать, что именно здесь рак дает о себе знать с полной силой. В случае если меры не приняты вовремя, сложно сказать, сколько времени живут на данной стадии. Обычно данный срок не превышает нескольких месяцев.

Основные методы лечения

Врачи утверждают, что главным основанием оперативного лечения рака правого легкого является отсутствие метастазов. Главной процедурой считается удаление зараженной части правого легкого вместе со здоровыми тканями. После этого часть обязанностей берет на себя левое легкое. Что же касается прогнозов, то положительные наблюдаются в 55% случаев, при этом гарантируется пятилетняя выживаемость.

После операции назначается лучевая терапия, а также химиотерапия, которая производится различными препаратами. Кстати, последний вариант является более предпочтительным среди всех других методик. Проводить ее можно только в следующих случаях:

• В случае когда опухоль находится очень близко к пищеводу, данную операцию не проводят. Вместо нее используются активная химиотерапия.
• Процедура подобного лечения производится в районе горла.
• Расположение раковых опухолей возле важных кровеносных сосудов или же сердца.

Обратите внимание, что химиотерапия назначается как профилактика появления метастазов, а также после удаления рака.

Прогнозы на лечение периферического рака легких довольно неутешительные. Дело в том, что рак может поражать центральный орган очень быстро, даже при выявлении его через рентген. Обратите внимание, что периферический рак легкого особенно стойкий к применению различных препараторов.

 

3. Периферический рак легкого: этиология, диагностика, клиника, лечение.

Рак
легкого, развивающийся из бронхиол и
мелких бронхов, называется периферическим.
Клинически он начинает проявляться
только после прорастания в плевру и
крупные бронхи. Именно этой причиной и
обусловлена высокая смертность от этой
формы онкологического процесса.

Формы:
Кортико-плевральная форма, Полостная
форма, Узловая форма.

Этиология:
Развитие рака лёгкого связано с факторами
окружающей среды, условиями производства,
вредными привычками и индивидуальным
стилем жизни. Канцерогенное действие
на лёгочную ткань оказывают многие
химические вещества: полициклические
ароматические углеводороды, входящие
в состав продуктов термической обработки
угля и нефти (смолы, коксы, газы и другие
вещества), некоторые простые органические
вещества (хлорметиловые эфиры, винилхлорид
и другие), металлы и их соединения
(мышьяк, хром, кадмий). Среди факторов
риска развития рака легкого необходимо
отметить генетический аспект (три и
более случаев развития рака лёгкого в
семье), а также экзогенные (курение,
загрязнение окружающей среды) и эндогенные
факторы (возраст старше 50 лет, хронические
лёгочные и эндокринные заболевания).
Рак чаще возникает в правом лёгком
(56%), преимущественно в верхней доле.

Клиника:
Эта форма рака лёгкого долгое время
прогрессирует без клинических симптомов,
и, как правило, болезнь диагностируют
довольно поздно. Первые признаки
обнаруживают при появлении давления
опухоли на рядом расположенные структуры
и органы или прорастании их.

Наиболее
характерными симптомами периферического
рака лёгкого считают одышку и боли в
грудной клетке.

Прорастание
опухолью бронха сопровождается кашлем
и кровохарканьем, хотя эти симптомы в
отличие от центрального рака не считают
ранними. Часто беспокоят признаки общего
воздействия опухоли на организм:
слабость, повышение температуры тела,
быстрая утомляемость, снижение
трудоспособности и др.

В
поздних стадиях заболевания, при
распространении патологического
процесса на крупный бронх и сужении его
просвета, клиническая картина
периферического рака становится похожей
на таковую центральной формы болезни
и результаты физикального обследования
одинаковы при обеих формах рака лёгкого.
Вместе с тем, в отличие от центрального
рака, при рентгенологическом исследовании
на фоне ателектаза выявляют тень самой
периферической опухоли. При периферическом
раке опухоль нередко распространяется
по плевре с развитием плеврального
выпота.

«Полостная»
форма периферического рака бывает
результатом некроза и расплавления
тканей в центре опухоли. Пациента
беспокоят признаки воспалительного
процесса (кашель, необильное отхождение
мокроты, кровохарканье, повышение
температуры тела). Деструкцию опухоли
чаще наблюдают у лиц мужского пола, в
возрасте старше 50 лет, при больших
размерах опухолевого узла.

Рак
верхушки лёгкого — разновидность
периферического рака. Клиническая
картина болезни в этих случаях бывает
обусловлена прорастанием опухолью
купола плевры, плечевого сплетения,
поперечных отростков и дужек нижних
шейных позвонков, а также симпатического
ствола.

Диагностика:

При
установлении диагноза рака легких
большое значение имеют все компоненты
обследования больного — от сбора анамнеза
и физикального обследования до рутинных
и специальных методов обследования. В
зависимости от клинических проявлений
и анатомических особенностей роста
опухоли применение тех или других
диагностических методов проводится в
определенной последовательности.
Остановимся на обязательных и
дополнительных методах обследования
во время первичной и уточняющей
диагностики рака легких.

Обязательные
методы обследования:

1.
Общеклиническое обследование.

2.
Рентгенологическое исследование
(стандартная рентгенография в двух
проекциях, контрастирование пищевода,
томография, компьютерная томография).

3.
Бронхоскопическое исследование с
биопсией.

4.
Цитологическое исследование мокроты
(5-6 анализов).

5.
Трансторакальная биопсия опухоли
(периферический рак).

6.
Ультразвуковое исследование органов
брюшной полости и забрюшинного
пространства.

7.
Лабораторная диагностика.

В
случае мелкоклеточного рака к обязательным
диагностическим процедурам также
относят:

1.
Компьютерную томографию головного
мозга.

2.
Биопсию костного мозга.

3.
Сканирование костей.

Дополнительные
методы обследования:

1.
Рентгенологические (бронхография,
ангиография, компьютерная томография
головного мозга, костей и тому подобное).

2.
Хирургические (биопсия периферических
лимфатических узлов, торакоскопия).

3.
Биопсия костного мозга.

4.
Сканирование костей.

Подчеркнем,
что применение того или иного
диагностического метода не является
догмой. Например, цитологическое
исследование мокроты нецелесообразно,
если процесс верифицирован во время
бронхоскопии или биопсии лимфатического
узла.

Рентгенологические
признаки, которые встречаются постоянно:
наличие круглой тени в легких для
опухолей, диаметр которых превышает
3-4 см.

Периферический
рак размерами 1-2 см чаще представляет
собой полигональную тень в легочной
паренхиме, напоминая звездчатый рубец.
Такая тень может обнаруживаться на фоне
измененной или абсолютно нормальной
легочной ткани.

Для
периферического рака характерна
нечеткость, размытость контуров тени.
Опухолевая инфильтрация легочной ткани
приводит к образованию вокруг узла
своеобразной лучистости, что может
обнаруживаться только в одном из краев
новообразования. Полицикличноть контуров
лучше всего выявляется на томограммах.
На начальных стадиях заболевания тень
чаще имеет вид инфильтрата, малоинтенсивная,
состоит как-будто из 2-3 небольших
облакообразных участков, которые
сливаются, и только с ростом приобретает
вид более однородного узла.

При
наличии периферического рака легких
может выявляться дорожка, которая
соединяет ткани опухоли с тенью корня,
обусловленная либо лимфогенным
распространением опухоли-, либо
перибронхиальным, периваскулярным ее
ростом.

Периферический
рак может проявляться стенозом или
окклюзией бронха. С ростом опухоли в
случае вовлечения в процесс субсегментарных
или сегментарных бронхов возникает
вентильный стеноз, гиповентиляция, а
при полной окклюзии бронха — и ателектаз.
В этот период клиническая и рентгенологическая
картина периферического рака соот-ветствует
картине центрального рака. В случае
распада в опухолевом узле рентгенологическая
картина может напоминать абсцесс легких.

Периферический
рак рентгенологически следует
дифференцировать от доброкачественных
опухолей, пороков развития, туберкуломы,
ограниченного пневмосклероза, солитарного
метастаза опухоли другой локализации,
абсцесса, отдельных форм микозов, кист
и тому подобного.

Цитологическое
исследование мокроты является одним
из первых диагностических мероприятий,
которое применяется у больных с легочной
патологией. Этот метод позволяет выявить
даже ранний рак легких (carsinomainsitu). Высокая
эффективность цитологии мокроты для
выявления рака может быть достигнута
только последовательным четырех-пятиразовым
исследованием (ежедневным или с
промежутками в 1-2 дня). Особенно ценно
цитологическое исследование мокроты,
полученной после бронхоскопии. В таком
случае диагностика заболевания возрастает
до 94% — центрального и до 83% — периферического
рака. Преимущество метода заключается
в том, что его можно применять амбулаторно.

Лечение:
Выбор метода лечения зависит от стадии
болезни, гистологической структуры,
сопутствующих болезней и др. Хирургическое
вмешательство – основной метод лечения.
По мнению большинства специалистов,
лечение центрального рака правого
легкого хирургическим методом показано
на I-II стадии болезни. При более
распространенных формах операция
сочетается с химиотерапией и облучением.
Лечение центрального рака левого легкого
с помощью хирургического метода
заключается в удалении единым блоком
совместно с легким (или его частью)
корня, жировой клетчатки, средостения,
лимфатических узлов, расположенных на
пораженной стороне.

Прежде,
чем обсуждать вопрос о лечении заболевания,
необходима тщательная диагностика и
оценка состояния пациента. Тактика
терапии решается в каждом конкретном
случае индивидуально. К сожалению,
нередко уже на первом обращении к врачу
регистрируется неоперабельный рак.
Больные, которые не получали лечение
по каким-либо причинам, проживут не
больше года. После радикальной операции
выживаемость каждого третьего пациента
достигает более 3 лет. Прогноз зависит
от стадии болезни.

59. Периферические доброкачественные опухоли легких. Симптомы, методы дифференциальной диагностики. Хирургическое лечение, выбор метода лечения.

Периферические опухоли часто развиваются
бессимптомно и могут быть выявлены
случайно при рентгенологическом
исследовании. Опухоль больших размеров,
достигая грудной стенки или диафрагмы,
может вызывать боль в груди, затруднение
дыхания. При локализации опухоли в
медиальных отделах легкого возникает
боль в области сердца. При сдавле-нии
крупного бронха отмечается так называемая
централизация перифери­ческой опухоли.
Клиническая картина в этих случаях
сходна с клинической картиной центральной
опухоли.

При рентгенологическом исследовании
выявляются характерные при­знаки
периферической опухоли: округлая форма,
ровные контуры тени. Наличие в опухоли
известковых включений не является
патогномоничным, так как они могут быть
при туберкулезе, периферической
карциноме, эхинококкозе. Ангиопульмонография,
тонкоигольная биопсия по­зволяют
дифференцировать доброкачественную
опухоль от злокачест­венной.

При доброкачественной опухоли сосуды
огибают опухоль в легком; при злокачественной
опухоли видна «ампутация» сосудов,
подходящих к ней. При бронхоскопии —
важнейшем методе диагностики центральных
опухо­лей — можно выявить косвенные
признаки периферической опухоли:
сме­щение бронхиальных ветвей,
изменение угла их отхождения, иногда
суже­ние просвета бронха за счет
сдавления снаружи.

Окончательный диагноз может быть
поставлен при пункционной био­псии,
которую проводят под контролем
компьютерной томографии или ультразвукового
исследования.

В тех случаях, когда специальные методы
исследования не дают возмож­ности
поставить диагноз, выполняют торакоскопию
или торакотомию и производят биопсию.

Лечение. Хирургическое лечение
доброкачественных опухолей легких
яв­ляется методом выбора. Чем раньше
удаляют опухоль, тем меньше травма и
объем оперативного вмешательства,
меньше опасность развития осложне­ний
и необратимых изменений в легких. Раннее
удаление опухоли позволя­ет избежать
опасности малигнизации и метастазирования.

Периферические опухоли в зависимости
от величины и глубины расположения их
в толще легкого удаляют путем энуклеации,
краевой или сегментарной резекции
легкого, а при значительных размерах
опухоли и не­обратимых изменениях в
легочной ткани производят лобэктомию.

60. Рак легкого. Этиология, значение курения и неблагоприятных факторов внешней среды для развития заболеваний, группы риска. Профилактика заболеваний.

Этиология. Курение табака в 80% случаев
является основным фактором развития
рака легких. Загрязнение воздуха вредными
выбросами автомоби­лей и промышленных
предприятий, асбестоз также способствуют
заболева­нию раком легких. В табачном
дыме и смоле с помощью спектрального
ана­лиза выявлено около 50 канцерогенных
веществ. Наиболее вредными из них
являются нитрозамины (диметил- и
диэтилнитрозамины), бензпирены и
ра­диоактивный изотоп полоний (²¹⁰Ро)
с длительным периодом полураспада.
Фильтры на сигаретах оказались не более
чем «фиговым листком», не
пред­охраняющим от попадания
канцерогенов в легкие. В помещениях,
где по­стоянно курят, находящиеся там
люди (члены семьи, сослуживцы), не по
своей воле, вдыхая табачный дым, становятся
«пассивными курильщиками». Они
заболевают раком легких чаще, чем лица,
не подвергающиеся воздей­ствию
табачного дыма. У лиц, длительно и много
курящих (более 1 пачки сигарет в день),
рак легких развивается в 10,8 раза чаще,
чем у некурящих. Начатое в молодые годы
(12—14 лет) курение табака повышает риск
забо­левания раком легких в 52 раза.
Специальные эпидемиологические
иссле­дования курящих и некурящих,
проведенные в США на большом числе
об­следуемых, убедительно показали,
что смертность от рака легких среди
ку­рящих в 20 раз выше, чем у некурящих.
Наибольшее количество канцероге­нов
попадает в легкие при докуривании
сигарет до конца.

К веществам, несомненно оказывающим
канцерогенное действие, отно­сят
также соединения, образующиеся при
сгорании нефти и ее производ­ных, а
также руды, содержащие радиоактивные
вещества или кобальт, ни­кель, асбест,
мышьяк. Задерживаясь в организме, они
воздействуют на ДНК эпителия бронхов
и легких, вызывают мутагенные изменения
и превраще­ние нормальных клеток в
раковые. В настоящее время стало известно,
что трансформация нормальных клеток в
злокачественные может произойти от
многих внутренних и внешних причин.
Синергическое действие ряда кан­церогенов
приводит к развитию рака. Хронический
бронхит у курильщиков способствует
метаплазии мерцательного эпителия
бронхов и последующему его злокачественному
перерождению.

Рак легкого — практически смертельная
болезнь. У пациентов, посту­пивших
для оперативного лечения с бессимптомным
раком, прогноз более благоприятный. При
появлении клинических сиптомов почти
75% больных являются инкурабельными.
Прогноз бывает более благоприятным,
если клинические симптомы проявляются
непродолжительное время (до 3 мес).

Прогноз значительно ухудшается при
существовании явных симптомов свыше 9
мес. После установления диагноза рака
легких в течение одного го­да выживают
20% больных, по истечении 5 лет — всего
8%.

Профилактика. Предупреждение
развития рака легких требует более
энергичной борьбы с курением, в том
числе пассивным, когда некурящие вдыхают
дым от сигарет в накуренных помещениях
(некурящие жены муж­чин, злоупотребляющих
курением табака, заболевают раком
легкого в 2 раза чаще, чем жены некурящих
мужей). Большое значение имеют мероприятия
по поддержанию чистоты воздуха в
городских районах с оживленным
авто­мобильным движением, установка
фильтров, улавливающих дым промыш­ленных
предприятий, устранение запыленности
воздуха и улучшение вен­тиляции
помещений в шахтах, цехах фабрик и
заводов, производящих ас­бест, лаки,
горюче-смазочные материалы. Большое
значение в предупреж­дении развития
рака легких придается профилактической
работе с лицами, относящимися к группам
риска (больные хроническими пневмониями,
ку­рящие старше 45 лет, лица, работающие
на вредных для здоровья предприятиях,
и т. д.). Они должны находиться под
постоянным врачебным наблю­дением
(рентгенологическое исследование,
цитологическое исследование мокроты).

62. Рак легкого. Клиническая картина центрального и периферического рака в зависимости от характера роста и локализации опухоли.

Клиническая картина и диагностика.
Рак легкого длительное время про­текает
бессимптомно или «маскируется»
симптомами, которые обычно встречаются
при других заболеваниях легких.
Симптоматика рака легкого зависит от
локализации опухоли (центральное,
периферическое расположе­ние), степени
обтурации пораженного бронха (частичная,
полная), интен­сивности возникающих
при этом осложнений (ателектаз, пневмония,
плев­рит), особенностей местного роста
опухоли и метастазирования.

Период от появления комплекса раковых
клеток до возможного выявле­ния
опухоли при рентгенологическом
исследовании протекает бессимптом­но.
Это так называемый доклинический период
развития рака. При даль­нейшем
прогрессировании рака появляются
различные, часто неспецифич­ные
симптомы, перерастающие в характерные
для болезни признаки. Этот период
называют периодом клинических проявлений
рака легких.

Ранние симптомы рака редко бывают
специфичными, мало беспокоят больных
и остаются часто незамеченными, не
побуждают пациента обра­титься к
врачу. Однако некоторые больные испытывают
в этот период по­вышенную утомляемость,
снижение работоспособности и интереса
к теку­щим происшествиям в природе и
жизни общества. Периодически у них
на­блюдается повышение температуры
тела, легкое недомогание. В этом пе­риоде
рак часто скрывается под маской бронхитов,
пневмонии, повторных острых респираторных
заболеваний. Беспокойство больного и
членов его семьи начинается тогда, когда
эти бронхиты, пневмонии начинают часто
(через 1—2 мес) повторяться. В этом нет
ничего удивительного, ведь сухой кашель
или кашель с выделением мокроты,
появляющийся позднее, явля­ется одним
из часто встречающихся симптомов рака
легкого. Наличие не­большой,
рентгенологически не выявляемой опухоли
может быть доказано только при
цитологическом исследовании мокроты,
смыва из бронха или материала, полученного
при бронхоскопии и биопсии. Рентгенологически
выявляемый доклинический рак может
быть обнаружен при профилактиче­ской
флюорографии среди лиц, составляющих
группу риска.

Общим симптомом для большинства форм
рака легких является кашель — от
незначительного, похожего на кашель
курящих, до мучительного, над­садного,
часто повторяющегося. Причина такого
кашля — стеноз или обту-рация крупного
бронха, вовлечение его в прогрессирующий
рост опухоли. Выделение мокроты (не
имеющей неприятного запаха) бывает то
скудным, то обильным в случае стеноза
бронха, расширения дистальной части
его и скопления бронхиального секрета.
Кровохарканье не является ранним
сим­птомом рака. Кровь в мокроте может
появляться в виде прожилок, иногда
мокрота приобретает вид малинового
желе, что и является побудительным
мотивом для обращения к врачу.

Боли в груди на пораженной стороне часто
беспокоят больного. Они раз­личны по
интенсивности, кратковременны в начале
болезни и мучительно длительны при
прогрессировании раковой инвазии в
плевру, межреберные нервы, внутригрудную
фасцию.

Одышка — один из достоверных признаков
обширности поражения ле­гочной ткани,
сокращения дыхательной поверхности,
реализующейся в ви­де дыхательной
недостаточности. Сначала одышка
появляется только при физической
нагрузке. Позднее, в связи с ателектазом
значительной части легкого или накоплением
плеврального экссудата, сдавливающего
легкое, она не покидает больного и в
покое.

Рак легкого часто сопровождается
неспецифическими симптомами — слабость,
потеря массы тела. Позднее могут появиться
различные паранео-пластические синдромы,
такие как синдром Мари—Бамбергера
(мучитель­ные боли в суставах,
припухлость вокруг них), синдром
Ламберта—Итона (мышечная слабость,
подобная миастенической), синдром
Кушинга, пора­жения кожи и др.

Несмотря на многообразие клинических
проявлений рака легкого, мож­но
выделить несколько наиболее типичных
вариантов его течения.

Центральный (прикорневой) рак.
1.Экзофитная опухоль быстрее других
дает клинические проявления. Рост
опухоли в просвет бронха вызы­вает
некоторое разрушение слизистой оболочки
и сужение просвета бронха, дистальнее
которого скапливается мокрота, что
обусловливает появление кашля. Частый,
иногда надсадный кашель травмирует
опухоль, приводя к появлению в мокроте
крови. Даже небольшой полипообразный
рак бронха может вызвать сужение просвета
и затруднение вентиляции соответствую­щего
бронху отдела легкого, особенно на
выдохе, в результате чего дыхание иногда
принимает свистящий характер (как при
астматическом бронхите). При
рентгенологическом исследовании
выявляется эмфизема участка ле­гочной
ткани, вентилируемого через пораженный
суженный бронх. Во время быстрого
глубокого вдоха в результате затруднения
по­ступления воздуха в пораженные
отделы легкого происходит смещение
сре­достения в сторону пораженного
легкого. По мере увеличения размеров
опухоли просвет бронха все более
суживается, наступает гиповентиляция,
а затем ателектаз сегмента, доли или
всего легкого (в зависимости от
локали­зации опухоли).

Ателектаз при опухоли бронха часто
бывает связан с респираторной инфекцией.
Из-за отека слизистой оболочки в об­ласти
сужения и наличия сгустка мокроты
про­свет бронха сужается, вентиляция
соответст­вующего участка легкого
резко ослабевает. В свя­зи с этим
появляется так называемый раковый
пневмонит. Отличие его от пневмонии
состоит в том, что симптомы заболевания
быстро (ино­гда в течение 2—4 дней)
исчезают после приме­нения
противовоспалительных и отхаркиваю­щих
средств. Иногда они самостоятельно
про­ходят после отхождения сгустка
мокроты, обту-рировавшего бронх. Через
некоторое время симптомы пневмонита
повторяются вновь, что должно заставить
врача предположить наличие центрального
рака легкого.

Нередко в этот период появляются боли
в суставах. При стойком ателектазе
наблюдается отставание части грудной
клетки при дыхании, сужение межреберных
про­межутков на стороне поражения,
иногда смещение трахеи в сторону
пора­женного легкого. Перкуторно
определяют тупость над областью
ателектаза, отсутствие дыхательных
шумов, голосового дрожания.

При рентгенологическом исследовании
отмечается уменьшение разме­ров
пораженной части легкого, смещение
корня легкого в боль­ную сторону. При
томографии нередко определяют «ампутацию»
поражен­ного бронха или резкое его
сужение. На компьютерной томограмме
можно определить распространение
опухоли на окружающие ткани. При
бронхо­скопии выявляют опухоль в
просвете бронха. Для дифференциальной
диаг­ностики производят биопсию.

2. Э н д о ф и т н а я опухоль разрастается
в толще стенки бронха, по­этому приводит
к сужению бронха, нарушению его
проходимости, развитию гиповентиляции
ателектаза на более поздних стадиях,
чем экзофитная. Наи­более ранним ее
симптомом является кашель, сопровождающийся
выделе­нием мокроты, иногда с прожилками
крови. По мере дальнейшего роста

опухоли симптоматика становится схожей
с на­блюдаемой при экзофитной форме
рака.

3. Узловая перибронхиальная кар­цинома
— самая частая форма рака бронха. Опухоль
растет не в просвет бронха, а за его
пределы, в легочную ткань. Прорастая
стенку бронха, она охватывает его с
одной стороны или окружает циркулярно
в виде муфты. В результа­те просвет
бронха суживается лишь в небольшой
степени. Разрастающаяся опухоль со
временем затрудняет прохождение воздуха
по отходящим от него бронхиальным
ветвям. Соответствую­щие участки
легкого спадаются, уплотняются, в них
развивается воспалительный процесс
(пневмонит). Температура тела повышается
до субфебрильных цифр. Периброн-хиально
развивающаяся опухоль вовлекает в
процесс лимфатические и кро­веносные
сосуды, что приводит к быстрому
метастазированию. Вовлечение в процесс
нервных веточек обусловливает появление
тупых болей в грудной полости.

При физикальном исследовании выявляют
некоторое укорочение перку­торного
звука над пораженной частью легкого,
ослабление дыхания, иногда свистящее
дыхание вблизи корня, где воздух проходит
через суженный бронх.

При рентгенологическом исследовании
в корне легкого определяют опу­холевый
узел, нередко имеющий вид «гусиной
лапки». При значительном сужении
просвета бронха выявляют гиповентиляцию
легочной ткани. Осо­бенно информативны
томография и компьютерная томография,
при кото­рых четко определяется
опухолевый узел, метастазы в лимфатические
узлы корня легкого, деформация и сужение
просвета бронха перибронхиально растущей
опухолью. Бронхоскопия часто дает лишь
косвенные признаки перибронхиальной
опухоли и реже, чем при экзофитной
опухоли, позволяет верифицировать
диагноз.

4. Разветвленная форма перибронхиального
рака харак­теризуется отсутствием
выраженного опухолевого узла. Прорастая
через стенку бронха, опухоль охватывает
его циркулярно, а затем, разрастаясь в
легочной ткани, распространяется по
ходу его ветвей и находящихся рядом
сосудов. Просвет бронхов остается
свободным от опухолевых разрастаний,
в результате чего клиническая картина
схожа с таковой при бронхите. По мере
вовлечения в процесс окружающих тканей
и нарушения дренажной функции бронхов
усиливается кашель, принимающий надсадный
характер, появляется мокрота с прожилками
крови. Развивается картина хронической
пневмонии. Диагностика этой формы рака
трудна, и нередко диагноз ставят лишь
при обнаружении метастазов в лимфатические
узлы корня легкого, сре­достения или
в отдаленные органы (позвоночник,
головной и спинной мозг).

Периферический рак. 1. Внутридолевая
опухоль развивается внутри доли легкого
и в начале заболевания протекает без
заметных сим­птомов. Поражение обычно
выявляют случайно при рентгенологическом
исследовании во время диспансеризации.
На рентгенограммах опухоль имеет вид
округлой тени диаметром 2—5 см с четкими
контурами. Если опухоль в это время не
распознана и не предпринято лечение,
то она по­степенно увеличивается,
сдавливает, а затем и прорастает мелкие
бронхи­альные ветви. Обычно вслед за
этим присоединяется перифокальный
вос­палительный процесс, сопровождающийся
повышением температуры те­ла, кашлем,
выделением мокроты, ухудшением
самочувствия. Клиниче­скую картину
нередко расценивают как обычное
воспаление легких, на­значают
антибактериальную терапию. Это приводит
к быстрому улучше­нию общего состояния
больного, однако тень в легком остается,
не исче­зают и тупые боли на пораженной
стороне груди.

Дальнейшее течение заболевания
определяется локализацией опухоле­вого
узла. При расположении его ближе к корню
легкого рано возникает сдавление, а
затем обтурация крупного бронха.
Развивается ателектаз сег­мента или
доли с характерной для него клинической
картиной. Рентгено­логически, помимо
тени треугольной формы, характерной
для появивше­гося ателектаза, определяют
округлый узел в области вершины указанной
тени.

2. Субплевральные опухоли проявляются
основным, а часто и единственным симптомом
— болями на стороне поражения. Рост
опухоли происходит преимущественно к
периферии лег­кого, что приводит к
диссеминации раковых кле­ток по плевре
или врастанию опухоли в грудную стенку,
сопровождается интенсивными болями,
связанными с вовлечением в процесс
межребер­ных нервов.

При локализации опухоли в медиальных
отде­лах легкого могут наблюдаться
боли, напоми­нающие стенокардические.

К субплевральным формам относится также
рак верхушки легкого (рак Панкоста) с
характер­ной локализацией. В начале
заболевания отмеча­ются боли в области
надплечья, часто иррадиирующие в руку.
При дальнейшем росте опухоли иногда
присоединяется сдавление подключичной
вены, лимфатических сосудов, появляется
отек руки. Позже в процесс вовлекается
симпатический ствол, на стороне пораже­ния
развивается синдром Бернара—Горнера
(птоз, миоз, энофтальм).

«Полостная» форма периферического
рака представляет собой ре­зультат
некроза и расплавления ткани в центре
опухоли. Тень опухоли с по­лостью в
центре хорошо выявляется при томографии.
При раз­рушении стенки крупного бронха
содержимое полости выделяется наружу
при кашле, в результате чего клиническая
и рентгенологическая картины становятся
сходными с таковыми при абсцессе легкого.
Часто заболеванию сопутствуют явления
неспецифической остеоартропатии.

Характерными признаками «полостной»
формы периферического рака, позволяющими
отличить его от банального абсцесса,
являются постепенное развитие заболевания,
умеренное повышение температуры тела
и отсутствие обильного отхождения
мокроты. Обычно отделяется 100—150 мл
слизистой мокроты с примесью крови без
запаха. Состояние больного, несмотря
на от­деление мокроты, не улучшается.
Характерной рентгенологической
особен­ностью этой формы «абсцесса»
являются полости с толстыми стенками,
внутренний контур которых бухтообразно
изъеден, отсутствие секвестров легочной
ткани, небольшое количество жидкости
внутри полости.

Бронхоскопия при периферическом раке
до прорастания его в крупный бронх
выявляет лишь косвенные признаки:
смещение бронхиальных ветвей, сужение
просвета их, изменение формы. Для
гистологического подтвержде­ния
диагноза производят биопсию опухоли,
пунктируя ее тонкой иглой че­рез
грудную стенку.

Атипичные формы рака легких. 1.
Медиастинальная форма ха­рактеризуется
наличием множественных метастазов в
лимфатические узлы средостения при
отсутствии отчетливо определяемого
первичного очага в легком.

Первые симптомы медиастинальной формы
рака — отечность лица и шеи, одышка,
сухой кашель, иногда внезапное изменение
тембра голоса (за счет сдавления опухолью
возвратного нерва). В далеко зашедшей
стадии за­болевания клиническая
картина определяется наличием
медиастинального синдрома: боли в
грудной клетке, периферический лимфоспазм
и стеноти-ческое дыхание, обусловленные
сдавлением органов средостения, в том
числе верхней полой вены, возвратного
нерва, пищевода.

Рентгенологически выявляется расширение
тени средостения, чаще бо­лее выраженное
с одной стороны; контуры тени
полициклические, что ука­зывает на
увеличение лимфатических узлов. Важную
роль в уточнении ди­агноза играют
компьютерная томография, медиастиноскопия
с биопсией и ангиографическое исследование.

2. Милиарная форма характеризуется
отсутствием выявляемого первичного
очага. Процесс по своей клинической и
рентгенологической картине напоминает
милиарный туберкулез легких. Диагноз
может быть по­ставлен при цитологическом
исследовании мокроты, при торакоскопии
с биопсией ткани легкого.

Дифференциальная диагностика. Различные
формы рака легких следует дифференцировать
от воспалительных заболеваний,
доброкачественных опухолей и кист
легких, а также от метастазов опухолей
другой локали­зации.

Центральный рак легкого отличается от
хронической пневмонии повтор­ными и
частыми обострениями, легко поддающимися
терапии, наличием инфильтрата в легком,
остающегося после обострения, обнаружением
в мокроте атипических клеток, признаками
опухолевого поражения бронхов, выявляемыми
при бронхоскопии. Окончательный диагноз
в сомнительных случаях возможен лишь
после биопсии участка измененной стенки
бронха или скарификата его слизистой
оболочки.

Гистологическое исследование кусочка
опухоли, полученного при био­псии,
помогает поставить окончательный
диагноз и при подозрении на доб­рокачественную
центральную опухоль.

Наиболее труден дифференциальный
диагноз между периферической карциномой,
туберкулемой, доброкачественными
опухолями и кистами лег­кого.

При туберкулеме до ее распада и прорыва
содержимого в бронх, ко­гда в мокроте
появляются микобактерии туберкулеза,
а рентгенологически выявляется каверна
в легком, дифференциальный диагноз
может быть про­веден только на основании
пункционной биопсии образования в
легком. Косвенными признаками туберкулемы
являются преимущественная лока­лизация
образования в кортикальных отделах
легкого, неоднородность те­ни,
выявляемая при рентгенологическом
исследовании. Последнее объяс­няется
наличием различных полиморфологических
компонентов в туберку-леме (от экссудативной
пневмонии до обезызвествленного
казеоза).

Доброкачественные опухоли легких
отличаются очень медлен­ным ростом
и четкими контурами тени на рентгенограммах.
Окончатель­ный диагноз возможен
только после гистологического или
цитологического исследования.

Бронхогенные кисты имеют округлую
форму, гомогенную струк­туру, обычно
выявляются в молодом возрасте. При
инфицировании и про­рыве содержимого
кисты в бронх образуется полость,
содержащая воздух и жидкость с
горизонтальным уровнем, как при абсцессе
легкого.

Эхинококковые кисты дифференцируют от
периферической кар­циномы на основании
данных анамнеза, особенностей
рентгенологической картины (одна или
несколько овальных гомогенных теней в
легком с ров­ными контурами, наличие
симптома отслоения, феномена субкапсулярного
контрастирования), положительной реакции
— латекс-агглютинации или иммуноферментного
анализа.

При лимфогранулематозе узлов средостения
нередко уве­личены и другие группы
лимфатических узлов. Пункция узла и
обнаруже­ние клеток Березовского—Штернберга
подтверждают диагноз лимфогранулематоза
и помогают дифференцировать от него
перибронхиально расту­щий узловой
рак корня легкого. Диагноз может быть
уточнен также при медиастиноскопии с
биопсией одного из пораженных лимфатических
узлов. Иногда возникает необходимость
провести дифференциальный диагноз
ме­жду раком легких и опухолью
средостения. Для этого применяют
компью­терную томографию (см.
«Средостение») и биопсию.

При метастазах в легкие рака других
органов дифференциаль­ная диагностика
затруднена. Метастатические опухоли в
легких имеют ок­руглую форму. Они
могут быть одиночными и множественными.
Диагноз подтверждается при обнаружении
первичной опухоли и получении резуль­татов
биопсии.

этапов, лечение, история болезни. Рак периферических долей

В последнее время наблюдается тенденция роста числа онкологических заболеваний. На это влияют многие факторы. Одно из самых распространенных заболеваний — периферический рак легких. Заболеваемость ими за последние несколько лет резко возросла, причем во всех странах. Чаще всего его жертвами становятся мужчины, но женщины не обходят стороной проблему.

Что такое рак легких?

В большинстве стран онкология считается первой причиной ранней смерти населения.Среди всех видов рака чаще всего возникают опухоли в легких. В то же время нормальные клетки перестают функционировать, как прежде, и начинают безудержно делиться. Итак, есть раковая опухоль.

Он может иметь различное гистологическое строение, и развитие в каждом конкретном случае характеризуется скоростью его роста. Если имеется дифференцированный плоскоклеточный рак, то он развивается медленно, недифференцированный, напротив, отличается быстрым ростом и способностью давать обширные метастазы.

Обычно опухоль развивается в одном из легких, чаще всего возникает периферический рак доли легкого. Причем с большей вероятностью эта опухоль находится в верхних долях. Увеличивается воздухообмен и более комфортная структура бронхов. Он практически по прямой продолжает трахею, а значит, все вредные вещества беспрепятственно проникают внутрь.

Причины рака легких

В большинстве случаев начало процесса роста раковых клеток происходит по вине человека.Пренебрежение своим здоровьем приводит к таким плачевным последствиям. Чаще всего периферический рак легких начинает развиваться по следующим причинам:

1. Курение. Это одна из самых главных и главных причин появления болезни. В табачном дыме содержится огромное количество вредных и ядовитых веществ, которые также являются канцерогенами. Практически 75-90% всех случаев развития рака связаны с курением. Это включает пассивное курение. Некоторые врачи считают, что это даже опаснее, чем прямое курение сигареты.

2. Профессиональные факторы, среди которых особое место занимают следующие вредные вещества:

• никель и его соединения;
• мышьяк;
• радон и продукты его распада;
• каменноугольная смола.

3. Загрязнение атмосферы. Это явление можно наблюдать не только на территории вредного предприятия, но и вдоль автомобильных дорог, и даже далеко за пределами мегаполисов. Особенно страдает население тех регионов и городов, где есть предприятия тяжелой, химической и нефтеперерабатывающей промышленности.

4. Загрязнение воздуха в жилых помещениях. Это включает не только задымленность квартир, но и загрязнения, связанные с радоном и его производными, которые чаще всего содержатся:

• в строительных материалах, используемых для строительства и отделки помещений;
• в питьевой воде.

5. Воздействие некоторых вирусов на ДНК клетки.

6. Генетическая предрасположенность, но при этом заболевании ее роль невелика.

Стоит отметить, что все эти факторы являются синергистами по отношению друг к другу, что с большей вероятностью может спровоцировать периферический рак легких.

Разновидности

В медицине существует несколько классификаций опухолей легких. Если рассматривать расположение в органе, то выделяют:

1. Центральный рак, он развивается непосредственно внутри бронхов, он делится на:

• эндобронхиальный;
• перибронхиальный;
• разветвленный.

2. Периферический рак легкого характеризуется опухолью, которая локализуется в легком. Он также делится на:

• круглая опухоль;
  
• пневмоноподобные;
• рак верхушки легкого.

Центральный рак встречается в два раза чаще, а среди периферических видов в большинстве случаев диагностируется периферический рак правого легкого.

Различные виды недугов различаются не только анатомическим строением, но и течением течения, и, соответственно, методами лечения.

Характеристика периферического рака

Опухоль, развивающаяся непосредственно в тканях легкого, имеет свои отличительные особенности:

1. Круглая опухоль чаще всего имеет форму шаровидного образования, в редких случаях напоминает уплотнение неправильной формы. форма.Опухоли могут быть связаны с просветами бронхов или нет.
2. Рак, подобный пневмонии, был назван из-за его сходства с воспалением легких при рентгенографическом исследовании.
3. Рак верхушки легкого обычно развивается в апикальной части и может прорасти в 1-ю и 2-ю пару ребер, а также в отростки шейных позвонков. При наличии такого рода боли могут появиться в области плеча и предплечья.

Поскольку рак может быть мелкоклеточным и немелкоклеточным, необходимо выяснить это с помощью биопсии, потому что лечение в этих случаях разное.

Симптомы периферического рака

Этот вид заболевания на первых стадиях своего развития никак себя не проявляет. Это связано с тем, что в легких нет болевых рецепторов. По мере роста опухоли в процесс уже вовлекаются бронхи, плевра и соседние органы.

В этот момент признаки начинают проявляться более ярко:

• Присутствует кашель с мокротой, может быть пятно крови.
• Голос становится хриплым.
• Возникает синдром сдавления верхней полой вены.
• По мере прогрессирования периферического рака легких появляется одышка.
• Общая слабость.
• Интоксикация организма.
• Похудание.
• Возможно повышение температуры тела.
• Если диагностирован периферический рак верхней доли левого легкого, может быть боль в плече, шее, слабость в мышцах руки, импа.

Рак легкого: диагностика и лечение

ЛОРЕН Г. КОЛЛИНС , MD, КРИСТОФЕР ХЕЙНС, MD, РОБЕРТ ПЕРКЕЛЬ, М.D. и Роберт Э. ЭНК, доктор медицины, Университетская больница Томаса Джефферсона, Филадельфия, Пенсильвания,

Am Fam Physician. 2007, 1 января; 75 (1): 56-63.

Информация для пациентов: см. Соответствующие раздаточные материалы по отказу от курения.

Рак легких является ведущей причиной смерти от рака в Соединенных Штатах, при этом средний пятилетний коэффициент выживаемости составляет 15 процентов. Курение остается преобладающим фактором риска рака легких. Рак легких классифицируется как мелкоклеточная карцинома или немелкоклеточная карцинома (например,g., аденокарцинома, плоскоклеточный рак, крупноклеточный рак). Эти категории используются для принятия решения о лечении и определения прогноза. Признаки и симптомы могут различаться в зависимости от типа опухоли и степени метастазов. Диагностическая оценка пациентов с подозрением на рак легких включает диагностику тканей; полное обследование, включая оценку метастазов; и функциональная оценка пациента. Гистологический диагноз может быть получен с помощью цитологического исследования мокроты, торакоцентеза, биопсии доступных лимфатических узлов, бронхоскопии, трансторакальной игольной аспирации, видеоторакоскопии или торакотомии.Первоначальная оценка метастатического заболевания основана на анамнезе пациента и физическом обследовании, лабораторных исследованиях, компьютерной томографии грудной клетки, позитронно-эмиссионной томографии и подтверждении тканевого поражения средостения. Дальнейшая оценка метастазов зависит от клинической картины. Лечение и прогноз тесно связаны с типом и стадией выявленной опухоли. При немелкоклеточной карциноме I-IIIA стадий предпочтительнее хирургическая резекция. При запущенном немелкоклеточном раке применяется комплексный подход, который может включать лучевую терапию, химиотерапию и паллиативную помощь.Химиотерапия (в сочетании с лучевой терапией при ограниченном заболевании) является основой лечения мелкоклеточной карциномы. Ни одна крупная организация не рекомендует скрининг для раннего выявления рака легких, хотя скрининг заинтересовал исследователей и врачей. Отказ от курения остается важнейшим компонентом профилактической первичной помощи.

Рак легких — основная причина смерти от рака в США. В 2006 году это заболевание стало причиной более 158 000 смертей — больше, чем от рака толстой кишки, груди и простаты вместе взятых.1 Несмотря на то, что уровень смертности среди мужчин в Соединенных Штатах начал снижаться, легкие недавно превзошли грудь как наиболее частый источник смертельного рака у женщин. 2 Поскольку четверть взрослых курят, рак легких будет оставаться проблемой в течение многих лет. 2 Несмотря на успехи в терапии рака легких, средняя пятилетняя выживаемость составляет всего 15 процентов3. Аденокарцинома превзошла плоскоклеточный рак как наиболее распространенный гистологический тип рака легкого, 4,5 и ранние метастазы становятся все более распространенными.

Просмотр / печать таблицы

СОРТИРОВКА: КЛЮЧЕВЫЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИКИ

Клиническая рекомендация	Рейтинг доказательности	Источники
Пациентам с центральной опухолью легких следует пройти гибкую бронхоскопию.	C	27,28
Пациентам с периферическими опухолями легких, которые не являются кандидатами на хирургическое вмешательство, следует пройти трансторакальную игольную аспирацию.	C	27,28
Пациентам, которым проводится стадирование средостения по поводу рака легкого, следует пройти компьютерную томографию грудной клетки и позитронно-эмиссионную томографию.	C	34,35
Недостаточно доказательств, чтобы рекомендовать или против рутинного скрининга на рак легких.	C	40–42
Для профилактики рака легких курильщикам следует предложить никотиновую заместительную терапию, бупропион (Веллбутрин), нортриптилин (Памелор) и дать рекомендации по отказу от курения.	A	50–53

СОРТИРОВКА: ОСНОВНЫЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИКИ

Клиническая рекомендация	Рейтинг доказательности	9 пациентов с центральными опухолями
			гибкая бронхоскопия.	C	27,28
Пациентам с периферическими опухолями легких, которые не являются кандидатами на хирургическое вмешательство, следует пройти трансторакальную игольную аспирацию.	C	27,28
Пациентам, которым проводится стадирование средостения по поводу рака легкого, следует пройти компьютерную томографию грудной клетки и позитронно-эмиссионную томографию.	C	34,35
Недостаточно доказательств, чтобы рекомендовать или против рутинного скрининга на рак легких.	C	40–42
Для профилактики рака легких курильщикам следует предложить никотиновую заместительную терапию, бупропион (Веллбутрин), нортриптилин (Памелор) и дать рекомендации по отказу от курения.	A	50–53

Факторы риска

Курение является преобладающим фактором риска рака легких (относительный риск [ОР] = от 10 до 30 по сравнению с некурящими) 3,6; Курение напрямую связано с раком легких у 90 процентов женщин и 79 процентов мужчин.7 Воздействие вторичного табачного дыма также является фактором риска.8,9 Приблизительно 3000 взрослых ежегодно умирают от воздействия вторичного табачного дыма, при этом существует зависимость между дозой и реакцией. продолжительность и интенсивность воздействия.10,11

Наиболее распространенным профессиональным фактором риска рака легких является воздействие асбеста (ОР = 6) 7; ОР для курильщиков, которые подвергаются воздействию асбеста, подходы 60.12 Другие общие профессиональные и экологические причины рака легких включают воздействие радона, мышьяка, хрома, никеля, винилхлорида и ионизирующего излучения.13 Существовавшие ранее незлокачественные заболевания легких, такие как хроническая обструктивная болезнь легких , идиопатический фиброз легких и туберкулез также связаны с повышенным риском рака легких.

Патология

Для облегчения лечения и принятия прогнозов рак легких классифицируется как мелкоклеточная карцинома или немелкоклеточная карцинома. Световая микроскопия используется для дальнейшей дифференциации рака легких на четыре основных и несколько второстепенных гистологических классов (Таблица 114,15) .16 Основными гистологическими классами являются аденокарцинома, плоскоклеточная карцинома, мелкоклеточная карцинома и крупноклеточная карцинома.

Посмотреть / распечатать таблицу

ТАБЛИЦА 1

Гистологическая классификация рака легкого

43

00

43 9152

43 9152 бронхоальвеолярная, папиллярная, солидная карцинома со слизью, смешанная

9018

43

902

902 Гистологическая классификация рака легкого

Класс	Распространенность (%)	Подтипы
43
Плоскоклеточная карцинома	25	—
4 Мелкоклеточная карцинома Комбинированная мелкоклеточная карцинома
Крупноклеточная карцинома	10	Крупноклеточная нейроэндокринная, базалоидная, лимфоэпителиоподобная, крупноклеточная с рабдоидным фенотипом	<5 9 0003	—
Карциноид	<5	—
Карцинома бронхиальной железы 15159 43	43

слизистых оболочек

40

слизистых оболочек

Класс	Распространенность (%)	Подтипы
Аденокарцинома	40
Плоскоклеточная карцинома	25	—
Мелкоклеточная карцинома	20	20	Крупноклеточная карцинома	10	Крупноклеточная нейроэндокринная, базалоидная, лимфоэпителиоподобная, крупноклеточная с рабдоидным фенотипом
Аденосквамозная карцинома					<5	—
Карцинома бронхиальной железы	<5	—

с метастазами, которые часто возникают у пациентов с ранними метастазами и периферическими опухолями. при основном заболевании легких.17 Плоскоклеточные карциномы обычно представляют собой центрально расположенные эндобронхиальные образования, которые могут проявляться кровохарканьем, постобструктивной пневмонией или долевым коллапсом. В отличие от аденокарциномы плоскоклеточный рак обычно дает метастазы на поздних стадиях заболевания.

Мелкоклеточные карциномы клинически агрессивны; обычно расположены в центре с обширным поражением средостения; и связаны с ранними внегрудными метастазами, включая паранеопластический синдром. Несмотря на их чувствительность к химиотерапии, мелкоклеточные карциномы часто находятся на поздней стадии на момент постановки диагноза, и у пациентов плохой прогноз.19

Крупноклеточные карциномы плохо дифференцируются. Эти опухоли представляют собой большие периферические образования, связанные с ранними метастазами.17

Клиническая картина

Хотя примерно 10% случаев рака легких у бессимптомных пациентов выявляются на рентгенограммах грудной клетки, у большинства пациентов при постановке диагноза проявляются симптомы.19 Пациенты могут иметь неспецифические системные симптомы. усталости, анорексии и потери веса или с прямыми признаками и симптомами, вызванными первичной опухолью или внутригрудным или внегрудным распространением (Таблица 220).Меньшая часть пациентов имеет паранеопластические синдромы.

Просмотр / печать таблицы

ТАБЛИЦА 2

Распространенные проявления рака легких

9014

9014

9139

3

9139

0146

Плевральный паразит

Плевральный паразит

Пальпатия

Первичная опухоль
Дискомфорт в груди
42								Кровохарканье
Внутригрудное распространение
Инвазия в грудную стенку
Пищеводные симптомы
		паралич нерва
Плевральный выпот
Рецидивирующий паралич гортанного нерва
Обструкция верхней полой вены
Боль в костях, перелом
Замешательство, изменение личности
Повышенный уровень щелочной фосфатазы
2 9146 9139 902 9146 9139 902 Тошнота, рвота
Пальпируемая лимфаденопатия
Судороги
Слабость
9013 9018 Первичная потеря веса опухоль
Дискомфорт в грудной клетке
Кашель
Одышка
Кровотечение 140006
Инвазия в грудную стенку
Симптомы пищевода
Синдром Горнера
Опухоль Панкоста
Рецидивирующий паралич гортанного нерва
Обструкция верхней полой вены
Внегрудное распространение
9014						Повышенный уровень щелочной фосфатазы
Очаговые неврологические нарушения
Головная боль
Тошнота, рвота
Судороги
Слабость
Потеря веса

ПЕРВИЧНАЯ ОПУХОЛЬ

Распространенные проявления дискомфорта в груди, дискомфорт в груди, дискомфорт в груди.Кашель, вторичный по отношению к эндобронхиальному новообразованию или постобструктивной пневмонии, встречается примерно у 75 процентов пациентов.20 Одышка возникает у 60 процентов пациентов и может быть вызвана опухолью, закупоривающей дыхательные пути.20 Периодический болезненный дискомфорт в груди возникает примерно у 50 процентов. пациентов на момент постановки диагноза.20 Кровохарканье обнаруживается почти у 35 процентов пациентов с симптомами первичной опухоли.20 Хотя острый бронхит является наиболее частой причиной кровохарканья, рак легких следует подозревать у пациентов старше 40 лет с кровохарканьем.20

ВНУТРИТОРАКАЛЬНОЕ РАСПРОСТРАНЕНИЕ

Сорок процентов пациентов с диагнозом рака легких изначально имеют признаки и симптомы внутригрудного распространения. Внутригрудное распространение вызвано прямым распространением опухоли или лимфангиитом.

Охриплость голоса в результате рецидивирующего паралича гортанного нерва встречается у 2-18 процентов пациентов.20 Паралич диафрагмального нерва может проявляться одышкой или повышенным левым полушарием на рентгенограмме грудной клетки.20 Опухоль верхней борозды легкого (опухоль Панкоста) может проявляться синдромом Хорнера. и характеризуется плечевой плексопатией и болью по ходу пораженных нервных корешков.21 Инвазия грудной клетки часто сопровождается постоянной плевритной болью. Плевральный выпот может проявляться одышкой, снижением шума дыхания и тупостью при перкуссии. 22 Обструкция пищевода может вызывать дисфагию. Обструкция верхней полой вены характеризуется отеком и полнокровием лица, а также расширенными венами в верхней части туловища, плечах и руках.23 Хотя вовлечение перикарда часто обнаруживается при вскрытии, пациенты редко обращаются с симптоматическим выпотом в перикард или тампонадой.24

ЭКСТРАТОРАЧЕСКОЕ РАСПРОСТРАНЕНИЕ

Около одной трети пациентов с раком легких имеют признаки и симптомы экстраторакального распространения.20 Общие места метастазирования включают кости, печень, надпочечники, лимфатические узлы, головной и спинной мозг.

Неспецифические симптомы экстраторакального распространения включают слабость и потерю веса. Метастазы в кости часто проявляются болью, переломами или повышенным уровнем щелочной фосфатазы и обычно затрагивают длинные кости или позвонки. Пальпируемая лимфаденопатия, особенно в надключичной ямке, свидетельствует о метастазах. У 10 процентов пациентов наблюдаются метастазы в головной мозг, сопровождающиеся головной болью, тошнотой, рвотой, очаговыми неврологическими нарушениями, судорогами, спутанностью сознания или изменениями личности.25 Хотя поражение печени является обычным явлением, повышение уровня трансаминаз относительно редко.

ПАРАНЕОПЛАСТИЧЕСКИЕ СИНДРОМЫ

Приблизительно у 10 процентов пациентов с раком легкого развиваются системные симптомы, связанные с паранеопластическими синдромами. Это вызвано высвобождением биологически активных веществ, вырабатываемых опухолью, или в ответ на опухоль. Симптомы могут предшествовать постановке диагноза, появляться на поздних стадиях течения болезни или предполагать рецидив.

Общие эндокринные синдромы включают гиперкальциемию, синдром несоответствующего антидиуретического гормона и синдром Кушинга.Дигитальные удары и гипертрофическая легочная остеоартропатия — частые скелетные проявления. К менее четко определенным неврологическим синдромам относятся миастенический синдром Ламберта-Итона, периферическая невропатия и кортикальная дегенерация мозжечка26. . Для выбора наиболее подходящего теста обычно требуется консультация пульмонолога, интервенционного радиолога или торакального хирурга.У пациентов с очевидной ранней немелкоклеточной карциномой, которые являются кандидатами на хирургическое вмешательство, торакотомия является рекомендуемым тестом для диагностики тканей и определения стадии. У пациентов с предполагаемым мелкоклеточным или метастатическим немелкоклеточным раком диагноз должен быть установлен с использованием наиболее удобного и наименее инвазивного доступного метода (например, торакоцентез плеврального выпота, эксцизионная биопсия доступного узла, бронхоскопия, трансторакальная пункционная аспирация) .27

Просмотр / печать таблицы

ТАБЛИЦА 3

Методы тканевой диагностики рака легкого

Комментарии

Комментарии

Комментарии

49

49

49

49

Периферические опухоли 2

Метод диагностики	Чувствительность (%)	Специфичность (%)	Показание
Цитология мокроты (не менее трех образцов)	Центральные опухоли: 71	99	Центральная опухоль и кровохарканье	Неинвазивно; после отрицательного результата требуется дальнейшее тестирование
	Периферические опухоли: <50
Торакоцентез	80	> 90		Эксцизионная биопсия доступного узла	—	—	Пальпируемая лимфаденопатия	—
	с гибкой или гибкой 88	90	Центральная или периферическая опухоль и лимфаденопатия средостения	Рентгеноскопия или КТ; трансбронхиальная пункционная аспирация повышает чувствительность периферических опухолей
Периферические опухоли: 60-70
Трансторакальная пункционная аспирация	Периферические опухоли 150002		2 Периферические опухоли кандидаты или когда трансбронхиальная пункционная аспирация не дает результатов	Рентгеноскопический контроль или КТ; помощь цитопатолога увеличивает диагностическую ценность
Видеоассистированная торакоскопия	—	—	Небольшие периферические опухоли (<2 см в диаметре), плевральные выпоты или плевральные опухоли	Может предотвратить необходимость в торакотомии
Торакотомия	—	—	Только четко резектабельные опухоли малого размера и неклеточная диагностика

ТАБЛИЦА 3

Методы тканевой диагностики рака легкого

um не менее трех экземпляров)

49

49

49

Периферические опухоли 2

Метод диагностики	Чувствительность (%)	Специфичность (%)	Показание	Комментарии
Центральная тумба ors: 71	99	Центральная опухоль и кровохарканье	Неинвазивный; после отрицательного результата требуется дальнейшее исследование
Периферические опухоли: <50
Торакоцентез	80	> 90		Эксцизионная биопсия доступного узла	—	—	Пальпируемая лимфаденопатия	—
	с гибкой или гибкой иглой 88	90	Центральная или периферическая опухоль и средостенная лимфаденопатия	Рентгеноскопия или КТ; трансбронхиальная пункционная аспирация повышает чувствительность периферических опухолей
Периферические опухоли: 60-70
Трансторакальная пункционная аспирация	Периферические опухоли 150002		2 Периферические опухоли кандидаты или если трансбронхиальная пункционная аспирация безрезультатна	Рентгеноскопический контроль или КТ; помощь цитопатолога увеличивает диагностическую ценность
Видеоассистированная торакоскопия	—	—	Небольшие периферические опухоли (<2 см в диаметре), плевральные выпоты или плевральные опухоли	Может предотвратить необходимость в торакотомии
Торакотомия	—	—	Только четко резектабельные опухоли малого размера и неклеточная диагностика

Если тип и стадия рака менее ясны, доступны несколько вариантов, в том числе цитология мокроты, гибкая бронхоскопия и трансторакальная пункционная игла.Цитология мокроты — это неинвазивный тест, который может быть полезен для выявления опухолей, расположенных в центре. Тест выявляет 71 процент центральных опухолей, но менее 50 процентов периферических опухолей27; следовательно, после отрицательного результата необходимо дальнейшее тестирование.

Гибкая бронхоскопия (с промыванием бронхов, чисткой щеткой и биопсией) часто является предпочтительным тестом у пациентов с центральными опухолями, с комбинированной чувствительностью 88 процентов у этих пациентов28. При трансбронхиальной пункционной аспирации чувствительность бронхоскопии падает до 70% у пациентов с периферическими опухолями и даже ниже у пациентов с опухолью диаметром менее 2 см.28,29 Пневмоторакс и кровотечение являются серьезными, но редкими осложнениями трансбронхиальной пункционной аспирации.29

Доказано, что трансторакальная игольная аспирация более чувствительна, чем бронхоскопия, у пациентов с периферическими опухолями легких и может использоваться, когда трансбронхиальная игольная аспирация неубедительна или у пациентов. которые не являются кандидатами на хирургическое вмешательство28. Трансторакальная пункционная пункция обычно проводится под контролем рентгеноскопии или компьютерной томографии, а помощь цитопатолога увеличивает диагностическую ценность.Наиболее частым осложнением трансторакальной игольной аспирации является пневмоторакс (от 25 до 30 процентов), но эта процедура редко требует введения дренажной трубки.29

Видеоторакоскопия — это новый метод, который можно использовать для выборки небольших периферических опухолей (менее 2 см в диаметре), плевральные опухоли или плевральный выпот для диагностики или определения стадии. 30

СТАДИЯ

После установления тканевого диагноза необходимо провести тщательное стадирование, включая оценку метастазов (Рисунок 127,29–32) и классификацию стадии , следует выполнять для определения наличия метастазов и выявления кандидатов на хирургическую резекцию.

Просмотр / печать Рисунок

Метастатическая оценка рака легкого

Рисунок 1.

Алгоритм метастатической оценки рака легких.

Информация из справочных материалов с 27 и 29 по 32.

Метастатическая оценка рака легких

---

Рисунок 1.

Алгоритм метастатической оценки рака легких.

Информация из справочников 27 и 29–32.

Первичная оценка метастазов может быть выполнена лечащим врачом и включает подробный анамнез; физический осмотр; полный анализ крови; и уровни электролитов, кальция, печеночных трансаминаз и щелочной фосфатазы. Более чем у 80 процентов пациентов с патологией при обследовании наблюдаются метастатические заболевания.31 Пациенты с анорексией, потерей веса и утомляемостью имеют особенно плохой прогноз.33 обычно выполняется пациентам с подозрением на метастатический рак легких.КТ грудной клетки и верхней части живота может выявить лимфаденопатию корней и средостения, а также поражение печени или надпочечников. Хотя точность КТ составляет 88 процентов (80 процентов чувствительности, 100 процентов специфичности) в средостении, стадия улучшается с помощью ПЭТ.34 Интегрированные сканеры КТ / ПЭТ, по-видимому, имеют лучшие характеристики тестирования, чем только КТ или ПЭТ35

У пациентов с подозрением на При заболевании средостения остальная часть оценки стадии средостения обычно проводится после консультации с узкими специалистами и может включать бронхоскопию с трансбронхиальной иглой или без нее, трансбронхиальную иглу под контролем эндобронхиального ультразвукового исследования, трансторакальную игольную аспирацию, торакоскопию с использованием видео или медиастиноскопию.Клинические проявления диктуют необходимость использования дополнительных мер по стадированию. КТ брюшной полости, сканирование костей и магнитно-резонансная томография головного мозга обычно рекомендуются пациентам с мелкоклеточной карциномой из-за высокой вероятности метастатического поражения.

После завершения оценки метастазов можно определить стадию классификации (таблица 436) на основе типа идентифицированной опухоли и наличия или отсутствия метастатического заболевания. Немелкоклеточная карцинома классифицируется с использованием системы стадирования TNM (опухолевые узлы-метастазы), тогда как мелкоклеточная карцинома классифицируется как ограниченное заболевание, ограниченное ипсилатеральным гемитораксом, или как обширное заболевание с метастазами за пределами ипсилатерального гемиторакса.16

Просмотр / печать таблицы

ТАБЛИЦА 4

Классификация стадий рака легкого

9132

9 IIB (T2N1M0 и T3N0M0)

Ограниченная

9132 9139 hemithorax

Стадия		Описание
Немелкоклеточная карцинома (система стадий TNM000, местная)
	IA (T1N0M0)	T1: диаметр не более 3 см; окружен легким или плеврой; не прорастает в главный бронх
	IB (T2N0M0)	T2: более 3 см в диаметре; может проникать в плевру; может доходить до главного бронха, но оставаться на расстоянии 2 см или более дистальнее киля; может вызвать сегментарный ателектаз или пневмонит
	IIA (T1N1M0)	N1: поражение ипсилатеральных перибронхиальных или прикорневых узлов и внутрилегочных узлов
T3: инвазия грудной стенки, диафрагмы, плевры или перикарда; главный бронх менее 2 см дистальнее киля; ателектаз всего легкого
	IIIA (T1N2M0, T2N2M0, T3N1M0 и T3N2M0)	N2: поражение ипсилатеральных средостенных или субкаринальных узлов (T1N2M0)						N3: поражение контралатеральных узлов или любых надключичных узлов
Продвинутый
	IIIB (T4N1-3M0)	большой инвазии сосудов сердца, средней части сердца: трахею, пищевод, тело позвонка или киль; отдельные опухолевые узелки; злокачественный плевральный выпот
	Внутривенно (T1-4N1-3M1)	Дистанционные метастазы
Мелкоклеточная карцинома
Extensive

Frontiers | Состав иммунных клеток при немелкоклеточном раке легкого человека

Введение

Рак легких является ведущей причиной смерти от рака во всем мире с высокой ежегодной заболеваемостью и 5-летней выживаемостью <20% (1).Немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) - наиболее распространенный тип рака легких, составляющий ~ 90% всех случаев (2). Двумя наиболее распространенными подтипами НМРЛ являются аденокарцинома и плоскоклеточный рак, составляющие 50 и 40% всех случаев соответственно (3, 4). В настоящее время прогноз и выбор лечения в основном основаны на системе определения стадии TNM, которая классифицирует степень рака по четырем категориям, стадии I-IV, в зависимости от размера первичной опухоли (T), свидетельств наличия раковых клеток в региональном разрезе. лимфатические узлы (N) и наличие дистальных метастазов (M) (5).Однако клинические исходы могут сильно различаться у пациентов на одной и той же стадии TNM (6).

Несколько сообщений показали, что тип, плотность и расположение иммунных клеток в микроокружении опухоли играют центральную роль в прогрессировании заболевания. Сообщалось, что при раке яичников (7), колоректальном раке (8, 9), раке груди (10) и раке легких (6, 11–13) иммунологические параметры лучше предсказывают клинический исход, чем стадия TNM. Поэтому было предложено включить иммуноядер, основанный на иммунологическом анализе микроокружения опухоли, как отдельный компонент в систему классификации (8).Преимущества включения иммунных параметров в стадию TNM распространяются на индивидуальный выбор лечения (14). Недавняя разработка ингибиторов иммунных контрольных точек, таких как блокирующие антитела против молекул CTLA-4 или PD-1 / PD-L1, значительно улучшила лечение рака и увеличила выживаемость пациентов. Однако частота объективных ответов на блокаду контрольных точек при НМРЛ в настоящее время составляет всего около 20% (15–18). Следовательно, существует острая необходимость в создании надежных методов для характеристики иммунного ответа в опухолях НМРЛ, чтобы можно было предсказать выживаемость и ответ на иммунотерапию для отдельных пациентов.

Ранние попытки идентифицировать иммунные клетки при НМРЛ использовали иммуногистохимию (19–22). Эти исследования показали, что опухоли НМРЛ содержат множество типов иммунных клеток, включая Т-клетки (23), В-клетки (24), макрофаги (25), NK-клетки (26) и дендритные клетки (ДК) (24, 26) и различные Сообщалось о связи между плотностью иммунных клеток и выживаемостью пациентов (21, 27). Однако в этих исследованиях на основе иммуногистохимии обычно использовалось одно моноклональное антитело для идентификации данного типа иммунных клеток, чего обычно недостаточно.Чтобы получить более надежную идентификацию иммунных клеток при НМРЛ, в нескольких недавних сообщениях использовалась проточная цитометрия с множественными антителами (28–30). Первое исследование проточной цитометрии, в котором была детально изучена небольшая группа пациентов ( n = 6) с аденокарциномой легких, подтвердило наличие большого количества типов иммунных клеток в опухолях (28). Напротив, второе исследование, посвященное Т-клеткам, сообщило только о шести различных линиях иммунных клеток в опухолях НМРЛ: Т-клетки CD4 ⁺ , Т-клетки CD8 ⁺ , гранулоциты, моноциты, В-клетки и NK-клетки (29).Неожиданный вывод из третьего исследования заключался в том, что нейтрофилы были наиболее распространенным типом иммунных клеток в опухолях НМРЛ (30). К сожалению, эти исследования включали ограниченную информацию о стратегии стробирования проточной цитометрии, что затрудняло сравнение результатов (28–30). В результате этих противоречивых данных и неясной методологии точное содержание иммунных клеток в опухолях НМРЛ остается неопределенным.

Чтобы точно установить состав иммунных клеток при НМРЛ, мы проанализировали с помощью 4-лазерной проточной цитометрии большую группу пациентов ( n = 68), все оперированные в Университетской больнице Осло.Точный тип клеток был определен для> 95% всех иммунных клеток CD45 ⁺ в опухолях NSCLC. Чтобы сделать метод доступным для других лабораторий, мы подробно представляем установленные панели антител и стратегии стробирования, используемые для идентификации различных иммунных клеток. Всего было идентифицировано тринадцать различных типов иммунных клеток. Кроме того, наблюдались четыре субпопуляции B-клеток и два субнабора NK-клеток. Эта работа должна представлять собой полезный ресурс для создания иммунного ядра для прогноза пациента и выбора лечения при НМРЛ.

Материалы и методы

Заявление об этике

Все образцы были собраны у пациентов с диагнозом НМРЛ, оперированных в Университетской больнице Осло с января 2013 года по декабрь 2016 года. Все пациенты, включенные в исследование, подписали письменное информированное согласие. Исследование было одобрено Региональным комитетом по этике медицинских и медицинских исследований (Осло, Норвегия, исх. № S-05307).

Пациенты и клинические материалы

Образцы тканей и крови были взяты у пациентов, перенесших лобэктомию, билобэктомию или пневмонэктомию.Пациенты были прооперированы в отделении кардиоторакальной хирургии больниц Рикшоспиталет и Уллевол, университетской больницы Осло, Осло, Норвегия. Пациенты с иммунодефицитом или пациенты, которые ранее получали лечение рака, были исключены из исследования. Были исследованы образцы от 68 пациентов с диагнозом первичного НМРЛ от IA до IIIB (таблица 1) (5). Из 68 пациентов у 38 была диагностирована аденокарцинома, у 26 — плоскоклеточная карцинома, а у 4 пациентов были диагностированы другие, редкие типы НМРЛ (таблица 1).На основании истории курения пациенты были разделены на 3 группы: (i) активные / настоящие курильщики ( n = 32), (ii) бывшие курильщики ( n = 28) и (iii) те, кто никогда не курил. ( n = 8; обозначены некурящие, таблица 1). Активными или настоящими курильщиками были пациенты, которые активно курили во время операции, и те, кто курил по крайней мере за 6 месяцев до операции. Чтобы считаться бывшим курильщиком, пациент должен был бросить курить не позднее, чем за 6 месяцев до операции.

Таблица 1 . Характеристика популяции пациентов ( n = 68).

У пациентов были взяты четыре разных образца: образец опухоли, образец дистального отдела легкого, половина регионарного лимфатического узла и кровь. Образец незлокачественной легочной ткани, называемой дистальным отделом легкого, брали наиболее далеко от опухоли в резецированной доле. Лимфатические узлы были взяты на станции 10 (вокруг бронха) резецированной доли после того, как доля была извлечена у пациента.Лимфатические узлы были резецированы в соответствии с европейскими рекомендациями по хирургии рака легких (31). Отбор проб лимфатических узлов не повлиял на диагностический процесс, и для исследования использовалась только половина лимфатических узлов каждого пациента. Ткани транспортировали на льду в среде DMEM (Gibco, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США, каталожный номер: 10565-018) с добавлением 0,25 мкг / мл амфотерицина (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США, Каталожный номер: A2942). Образцы опухоли и дистального отдела легкого были тщательно промыты (и отжаты) DMEM / амфотерицином, чтобы удалить кровь в максимально возможной степени.Для создания суспензий отдельных клеток ткани (опухоль, дистальный отдел легкого и лимфатический узел) механически диссоциировали с помощью ножниц, а затем инкубировали с DMEM с добавлением 2 мг / мл коллагеназы A (Roche, Базель, Швейцария, № по каталогу: 10103586001) и 50 единиц / мл ДНКазы (Roche, № по каталогу: 11284932001) в течение 1 ч с магнитом для перемешивания при 37 ° C. Переваренные ткани фильтровали через фильтр 100 мкм (Falcon, Corning, NY, USA, № по каталогу: 35236) для удаления крупных клеточных остатков и агрегатов. Суспензии отдельных клеток центрифугировали при 410 g в течение 6 минут при 4 ° C, и осадки ресуспендировали в DMEM с 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS) (Sigma-Aldrich, № по каталогу: F7524).Кровь брали из центрального венозного катетера непосредственно перед операцией, но после анестезии пациента. Образцы крови хранили при комнатной температуре перед выделением мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) с использованием градиента плотности Lymphoprep в соответствии с протоколом производителя (Axis-Shield, Dundee, UK, № по каталогу: 07811).

Проточная цитометрия

Суспензии единичных клеток опухоли, дистального отдела легкого, лимфатического узла и РВМС анализировали с помощью проточной цитометрии. Чтобы заблокировать неспецифическое связывание антител, клетки инкубировали с 12.5 мкг / мл мышиного IgG (Sigma-Aldrich, № по каталогу: I8765-10MG), разведенного в фосфатно-солевом буфере (PBS, Sigma, № ссылки: 14190-094) в течение 15 мин на льду. Затем клетки окрашивали моноклональными антителами, меченными флуорохромом. Мы создали 6 различных панелей антител для идентификации различных иммунных клеток (дополнительные таблицы 1–6). Для определения положительных и отрицательных событий использовали контрольные антитела, соответствующие изотипу. Антитела разводили в проточном буфере, состоящем из PBS с 10% FBS (Sigma, № по каталогу: F7524).Суспензии единичных клеток из тканей и РВМС инкубировали со смесью антител в 96-луночных планшетах с v-дном (Corning, Costar, № по каталогу: 3894) на льду в темноте в течение 20 мин. После инкубации в каждую лунку добавляли 100 мкл проточного буфера и планшеты центрифугировали при 410 g в течение 6 минут при 4 ° C. Супернатанты удаляли, а осадки клеток ресуспендировали в 150 мкл проточного буфера на лунку и снова центрифугировали (410 g в течение 6 минут при 4 ° C). Осадки клеток ресуспендировали в 200 мкл буфера для потока и фильтровали через сито 100 мкм (Falcon, № по каталогу: 352360).Суспензии клеток окрашивали йодидом пропидия (PI) 5 мкг / мл непосредственно перед анализом на проточном цитометре BD LSRFortessa (BD Bioscience). Данные анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo V10 (FlowJo, LLC).

Иммуногистохимия

Были выбраны

репрезентативных областей для количества воспаления в каждой опухоли. Иммуноокрашивание проводили на опухолевой ткани FFPE толщиной 2,5 мкм с использованием прибора Dako Autostainer (Dako, Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США, модель Link 48).Извлечение эпитопов выполняли с помощью Dako Flex HpH в соответствии с протоколом производителя (Dako EnVision FLEX, № по каталогу: K8000). Срезы тканей инкубировали в течение 20 мин с первичными моноклональными антителами против CD45 (клоны 2B11 и PD7 / 26, разведенные 1: 300; Dako, № по каталогу: M0701). Вторичное обнаружение проводили с помощью Dako EnVision TM Flex (Dako, каталожный номер: K8000) в течение 20 минут с последующим окрашиванием диаминобензидином (DAB) в течение 10 минут (Dako EnVision FLEX, каталожный номер K800021-2). После этого слайды обрабатывали 0.5% CuSO ₄ в течение 5 минут перед контрастным окрашиванием гематоксилином (Merck, № по каталогу: 1.15938.0100) для визуализации ядер клеток. Срезы тканей исследовали с помощью микроскопа Nikon Eclipse модели N i -U (Nikon, Токио, Япония), оснащенного линзами объектива Nikon Plan-Fluor (2 ×, 10 ×, 20 ×, 40 × и 60 ×), и изображения были сняты цифровой камерой Infinity 2 (Lumenera Corporation, Nepean, Онтарио, Канада).

Статистика

Статистические расчеты были выполнены с использованием призмы Graph Pad 6.0 (GraphPad). Процентное содержание различных популяций иммунных клеток рассчитывали из общего числа CD45 ⁺ живых лейкоцитов. Чтобы определить, были ли различия между тремя или более группами статистически значимыми, мы использовали непараметрический дисперсионный анализ Краскела-Уоллиса и тест множественного сравнения post-hoc Dunn. Результаты считались статистически значимыми, когда значение p было <0,05.

Результаты

Лейкоциты проникают в опухоли аденокарциномы легких более высокой степени, чем дистальный отдел легкого

Чтобы охарактеризовать состав иммунных клеток при НМРЛ, мы собрали свежие образцы из четырех различных анатомических областей: опухоль, дистальный отдел легкого (образец доброкачественной легочной ткани, взятой наиболее далеко от опухоли в резецированной доле), региональный лимфатический узел и кровь. .Отдельные клетки, выделенные из этих образцов, анализировали с помощью многопараметрической проточной цитометрии. В стратегии стробирования, используемой для идентификации лейкоцитов, ворота ядерных клеток на основе FSC-A и SSC-A были настроены для удаления дебриса из дальнейшего анализа (рис. 1A). Одноклеточный вентиль на основе FSC-A и FSC-H использовался для исключения дублетов и клеточных агрегатов (рис. 1B), а ворота с живыми клетками были сделаны с использованием йодида пропидия (PI) для исключения мертвых клеток (рис. 1C). . Затем использовали панлейкоцитарный маркер CD45, и живые лейкоциты были определены как клетки CD45 ⁺ PI ^— (фигура 1D).Доля лейкоцитов среди всех живых клеток в опухолях аденокарциномы и плоскоклеточного рака варьировала от 34 до 96% в когорте пациентов (Рисунки 1E, F). На инфильтрацию лейкоцитов в опухолях НМРЛ, по-видимому, не повлияло лечение кортикальными стероидами некоторых пациентов, страдающих хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) (дополнительный рисунок 1), как предполагалось в недавнем отчете (32). Процент лейкоцитов был значительно выше в опухолевой ткани аденокарциномы по сравнению с дистальным отделом легкого (Рисунок 1E p = 0.026). Аналогичная тенденция наблюдалась для плоскоклеточного рака, но разница не достигла статистической значимости ( p = 0,068, рисунок 1F). Иммуногистологическое окрашивание CD45 на срезах опухолевой ткани NSCLC было выполнено на нескольких случайно выбранных образцах, и результаты подтвердили результаты, полученные с помощью проточной цитометрии. Образцы пациентов с большим количеством лейкоцитов CD45 ⁺ при проточной цитометрии также показали большое количество клеток CD45 ⁺ в иммуноокрашенных срезах ткани (рисунки 1G – H).Напротив, более низкая частота клеток CD45 ⁺ , измеренная с помощью проточной цитометрии, соответствовала наблюдению меньшего количества инфильтрирующих клеток CD45 ⁺ в иммуноокрашенных срезах ткани (Фигуры 1I, J).

Рисунок 1 . Опухоли NSCLC инфильтрированы различным количеством лейкоцитов CD45 ⁺ . (A – F) Данные получены методом проточной цитометрии 57 пациентов, 32 пациентов с аденокарциномой и 25 пациентов с плоскоклеточным раком. (A) Размер событий (FSC-A) использовался для исключения клеточного мусора и определения всех клеток. (B) Отдельные клетки были идентифицированы с использованием FSC-A и FSC-H, а дублеты были исключены. (C) Живые клетки отрицательны по окрашиванию йодидом пропидия (PI). (D) Живые лейкоциты были определены как клетки CD45 ⁺ PI ^— . (E) и (F) показывают лейкоциты (CD45 ⁺ PI ^—) как процент всех живых клеток, идентифицированных проточной цитометрией аденокарциномы (E) и плоскоклеточной карциномы (F) .Каждый символ на графиках (E, F), представляет данные одного пациента. Статистические расчеты были выполнены с помощью непараметрического анализа Краскела-Уоллиса и пост-теста Данна, сравнивая опухоль с дистальным отделом легкого и лимфатическим узлом (LN). Красные точки на графиках (E), и (F), показывают образцы пациентов, также проанализированные иммуногистохимическим методом. (G – J) Иммуногистохимический анализ срезов тканей опухолей четырех пациентов с НМРЛ. Окрашивание НЕ (синий) и окрашивание анти-CD45 иммунных клеток (коричневый) при 100-кратном увеличении.Область, показанная на фотографиях, представляет воспаление в опухоли в целом. (G) Опухоль аденокарциномы, показывающая высокую инфильтрацию клеток CD45 ⁺ (91% всех клеток по данным проточной цитометрии). (H) Плоскоклеточная карцинома опухоли с высокой инфильтрацией клеток CD45 ⁺ (96% всех клеток при проточной цитометрии). (I) Низкая инфильтрация клеток CD45 ⁺ в плоскоклеточный рак (45% всех клеток по данным проточной цитометрии). (J) Низкая инфильтрация клеток CD45 ⁺ в опухоль аденокарциномы (52% всех клеток при проточной цитометрии).

Т-клетки доминируют в составе иммунных клеток в NSCLC

Чтобы исследовать содержание Т-клеток в опухолях NSCLC, мы сначала определили отдельные живые клетки CD45 ⁺ , обозначив популяцию живых лейкоцитов (Рисунки 2A – C). Ворота лимфоцитов были установлены на основе параметров FSC и SSC (рисунок 2D). Лимфоциты были идентифицированы на основе экспрессии CD3 и CD19, и наблюдались три популяции: CD19 ^— CD3 ⁺ Т-клетки, CD19 ⁺ CD3 ^— B-клетки и CD19 ^— CD3 ^— двойные отрицательные клетки (Рисунок 2E).Т-клетки были дополнительно исследованы на экспрессию CD4 и CD8, что дало три популяции: CD4 ⁺ Т-клетки, CD8 ⁺ Т-клетки и CD4 ^— CD8 ^— двойные отрицательные (DN) Т-клетки ( Рисунок 2F). Каждая из трех популяций Т-клеток проявляла фенотип памяти / эффектора или наивный фенотип, определяемый экспрессией поверхностных маркеров CD45RO и CD45RA, соответственно (Рисунки 2G – I). Большинство Т-клеток представляли собой CD45RA ^— CD45RO ⁺ клетки памяти / эффекторные клетки.Тот факт, что соотношение наивных Т-клеток / Т-клеток памяти было намного ниже в опухолевой ткани (рис. 2) по сравнению с РВМС (дополнительный рис. 2), показывает, что загрязнение крови в образцах опухолей было очень низким. Более того, хотя наивные Т-клетки классически определяются как CD45RA ⁺ CD45RO ^— , следует отметить, что CD45RA ⁺ эффекторные / память CD8 ⁺ Т-клетки (так называемые клетки T _EMRA ) были сообщил (33, 34). Иммунофлуоресцентное окрашивание срезов опухолевой ткани NSCLC выявило присутствие CD45RA ⁺ CD3 ⁺ T-клеток как в строме опухоли (предположительно, T _EMRA ), так и в третичных лимфоидных структурах (TLS), которые образуются на периферии опухоли. (24) (Дополнительный рисунок 3).CD45RA ⁺ CD3 ⁺ Т-клетки в TLS, вероятно, будут наивными Т-клетками (по крайней мере, для некоторых из них), потому что CD45RA ⁺ CD3 ⁺ наивные Т-клетки, как сообщалось, обогащены TLS при НМРЛ ( 35).

Рисунок 2 . Анализ проточной цитометрии Т-клеток в опухолевой ткани НМРЛ. (A) Шлюз для ядерных клеток в зависимости от размера и сложности события (FCS-A и SSC-A, соответственно). (B) Ядерные клетки были дополнительно нанесены на график в FSC-A и FSC-H для гейтирования одиночных клеток и исключения дублетов. (C) Из ворот одиночных клеток живые лейкоциты были определены как CD45 ⁺ PI ^— . (D) Ворота лимфоцитов были созданы на основе FSC-A и SSC-H. (E) CD19 ⁺ В-клетки были исключены из популяции лимфоцитов, а популяция CD19 ^— CD3 ⁺ была определена как Т-клетки. (F) Т-клетки были далее разделены на популяции CD4 ⁺ , CD8 ⁺ и CD4 ^— CD8 ^— .Каждую подгруппу исследовали на наличие наивного фенотипа CD45RA ⁺ CD45RO ^— и эффекторного фенотипа / памяти CD45RA ^— CD45RO ⁺ . (G) Наивное фенотипирование / фенотипирование памяти CD8 ⁺ Т-клеток. (H) Наивное фенотипирование с памятью CD4 ^— CD8 ^— Т-клеток. (I) Наивное фенотипирование с памятью CD4 ⁺ Т-клеток. Проценты, представленные на рисунке, являются средними значениями всех пациентов с НМРЛ, проанализированных на Т-клетки ( n = 30; 15 аденокарцинома, 14 плоскоклеточная карцинома, одна крупноклеточная карцинома).Проценты рассчитывали от общего количества живых лейкоцитов (CD45 ⁺ PI ^— населения). DN, двойные отрицательные Т-клетки.

CD3 ⁺ Т-клетки составляли в среднем 49,5% при аденокарциноме и 41,1% при плоскоклеточном раке всех инфильтрирующих опухоль лейкоцитов CD45 ⁺ (рис. 3А). Среди CD3 ⁺ Т-клеток наиболее часто встречались Т-клетки CD4 ⁺ (28,6% при аденокарциноме и 22,1% при плоскоклеточной карциноме, рис.9% при аденокарциноме и 18,2% при плоскоклеточной карциноме, рисунок 3C). CD4 ^— CD8 ^— , DN Т-клетки составляли небольшую часть популяции Т-клеток (1,5% при аденокарциноме и 1,3% при плоскоклеточном раке, рис. 3D). В последующих анализах мы сравнили репрезентативность CD3 ⁺ Т-клеток в различных анатомических участках (опухоль, дистальный отдел легкого, кровь, лимфатический узел), гистологических подтипах опухолей, стадиях опухоли и историях курения. Статистически значимых различий между образцами опухоли и дистального отдела легкого не наблюдалось (дополнительные рисунки 4, 5).Взятые вместе, эти данные показывают, что CD4 ⁺ Т-клетки представляют собой наиболее многочисленную популяцию Т-клеток при НМРЛ (25,9%), за которой следует CD8 ⁺ Т-клетки (21,7%). CD4 ^— CD8 ^— Т-клетки составляли лишь небольшую часть проникающих в опухоль иммунных клеток (1,4%). Большинство Т-клеток в опухоли — это Т-клетки памяти / эффекторные Т-клетки.

Рисунок 3 . Процент Т-клеток в опухолях НМРЛ разных гистологических типов. Приведены данные для аденокарциномы и плоскоклеточного рака.Стратегия стробирования описана на рисунке 2. Процентное содержание (A) Все CD3 ⁺ Т-клеток, (B) CD3 ⁺ CD4 ⁺ Т-клеток, (C) CD3 ⁺ CD8 ⁺ Т-клеток и (D) CD3 ⁺ CD4 ^— CD8 ^— Т-клеток, то есть дважды отрицательных Т-клеток. Процент Т-клеток рассчитывали из общего количества живых лейкоцитов (CD45 ⁺ PI ^— ) в образце. Каждый символ представляет данные для одного пациента ( n = 42; 25 аденокарцинома, 17 плоскоклеточный рак), а средние значения указаны синими линиями.Статистические расчеты были выполнены с использованием непараметрического анализа Краскела-Уоллиса и пост-теста Данна, и никаких значительных различий между группами не наблюдалось.

B-клетки в опухолях НМРЛ многочисленны и разнообразны

Чтобы охарактеризовать В-клетки в опухолях НМРЛ, мы сначала исключили дебрис, скопления клеток, мертвые клетки и клетки CD45 ^– и определили ворота лимфоцитов (рисунки 4A – D). Из этой популяции лимфоцитов были исключены макрофаги CD14 ⁺ (рис. 4E).Остальные клетки были разделены на основе экспрессии CD3 и CD19 на три популяции: CD19 ^— CD3 ⁺ Т-клетки, CD19 ⁺ CD3 ^— В-клетки и CD19 ^— CD3 ^— дважды отрицательные население (Рисунок 4F). Для дальнейшего анализа субпопуляций B-клеток мы использовали номенклатуру, установленную Jackson et al. и Germain et al. (36, 37). Паттерны экспрессии IgM и IgD были использованы для идентификации трех популяций клеток: IgM ⁺ , IgD ⁺ , IgM ^— , IgD ^— и IgM ⁺ IgD ^— B-клеток (рис. 4H).Из популяции IgM ^— IgD ^— DN, CD27 и CD38 были использованы для идентификации CD27 ⁺ CD38 ^+/- субпопуляции B-клеток, а также CD27 ⁺ CD38 ⁺⁺ плазмы ячеек (Рисунок 4G). Субпопуляция В-клеток CD27 ⁺ CD38 ^+/- может состоять либо из В-клеток памяти, или В-клеток зародышевого центра, либо из обоих (38, 39). Из популяции IgM ⁺ IgD ⁺ CD27 и CD38 были использованы для идентификации наивных В-клеток, являющихся CD38 ^+/- CD27 ^— (фиг.4I).Для сравнения, стратегия стробирования для субпопуляций B-клеток в крови (PBMC) показана на дополнительном рисунке 6.

Рисунок 4 . Анализ проточной цитометрии субпопуляций В-клеток в опухолях НМРЛ. (A) График FSC-A и SSC-A использовали для идентификации ядерных клеток. (B) На графике FSC-A и FSC-H отдельные клетки были заблокированы, а дублеты исключены. (C) Живые лейкоциты были определены как CD45 ⁺ PI ^— . (D) Гейт лимфоцитов был установлен на графике FSC-A и SSC-H. (E) CD14 ⁺ макрофагов были исключены. (F) Ворота В-клеток, определяющие все В-клетки как CD19 ⁺ и CD3 ^—. (G – I) Определение субпопуляций В-клеток. (G) Характеристика IgM ^— IgD ^— B-клеток. Были идентифицированы две популяции: CD27 ⁺ CD38 ⁺⁺ плазматические клетки и CD27 ⁺ CD38 ^+/- клетки (H) График IgD / IgM был использован для идентификации IgM ⁺ IgD ^— субпопуляции B-клеток и для определения IgM ^— , IgD ^— и IgM ⁺ IgD, ⁺ гейтов. (I) Дальнейшая характеристика IgM ⁺ IgD ⁺ B-клеток: наивные B-клетки определены как CD27 ^— CD38 ^+/- . Представленные на рисунке процентные числа представляют собой средние значения всех пациентов с НМРЛ, проанализированных для указанных субпопуляций В-клеток ( n = 23; 12 аденокарцинома, 11 плоскоклеточная карцинома). Для каждого пациента процентное содержание В-клеток и их субпопуляций рассчитывалось из общего количества живых лейкоцитов.

CD19 ⁺ В-клетки составляли в среднем 18% всех иммунных клеток CD45 ⁺ в аденокарциноме и 12,7% в плоскоклеточной карциноме (рисунки 5A, B). Сравнение процентного содержания В-клеток в различных тканях выявило повышенную инфильтрацию В-клеток CD19 ⁺ в опухоль по сравнению с дистальным отделом легкого (Фигуры 5A, B). Это было очевидно как при аденокарциноме ( p <0,0001), так и при плоскоклеточной карциноме ( p = 0,007). Повышенный процент В-клеток в опухоли может быть следствием увеличения количества В-клеток CD27 ⁺ CD38 ^+/- (Фигуры 5C, D).Процент плазматических клеток был одинаковым между опухолью и дистальным отделом легкого (Фигуры 5E, F). При плоскоклеточной карциноме процент В-клеток IgM ⁺ IgD ^— был выше в опухоли по сравнению с дистальным отделом легкого (рисунки 5G, H). Процент наивных В-клеток был одинаковым между опухолью и дистальным отделом легкого (рисунки 5I, J). Наблюдались высокие различия в процентном содержании опухоли, инфильтрирующей CD19 ⁺ B-клетки между отдельными пациентами (Фигуры 5A, B). Процент внутриопухолевых В-клеток не был связан с гистологическим типом опухоли, стадией заболевания или историей курения пациента (дополнительные рисунки 7–9).

Рисунок 5 . Процент всех CD19 ⁺ B-клеток и субпопуляций B-клеток в различных тканях от пациентов с НМРЛ. (A, B) Сравнение процентного содержания CD19 ⁺ B-клеток у пациентов с диагнозом (A) аденокарцинома ( n = 33) и (B) плоскоклеточный рак ( n = 23) . (C, D) Процент CD27 ⁺ CD38 ^+/− B-клеток в тканях пациентов с диагнозом (C) аденокарцинома ( n = 12) и (D) плоскоклеточная карцинома ( n = 11). (E) Наличие плазматических клеток в аденокарциноме ( n = 12) и (F) при плоскоклеточном раке ( n = 11). (G) Процент IgM ⁺ IgD ^— B-клеток в аденокарциноме ( n = 12) и (H) плоскоклеточной карциноме ( n = 11). (I) Процент наивных В-клеток при аденокарциноме ( n = 12) и (J) плоскоклеточный рак ( n = 11).Клетки были закрыты, как показано на фиг. 4. Каждый символ представляет данные одного пациента в процентах от общего числа живых лейкоцитов (CD45 ⁺ PI ^— ), а синие линии указывают средние значения. Статистический анализ проводился с использованием непараметрического анализа Краскела-Уоллиса и пост-теста Данна, сравнивающего опухоль, дистальный отдел легкого и лимфатический узел (ЛУ).

Опухоли NSCLC содержат макрофаги с высокой экспрессией HLA-DR и тремя подгруппами дендритных клеток (DC)

Чтобы охарактеризовать мононуклеарные фагоциты при НМРЛ, мы сначала идентифицировали живые лейкоциты (Рисунки 6A – C) и исключили CD19 ⁺ B-клетки (Рисунок 6E).Для идентификации макрофагов и DC были использованы три отдельные стратегии, как показано стрелками разного цвета на фиг. 6. Макрофаги были определены как клетки HLA-DR ⁺ CD14 ⁺ (зеленая стрелка, фиг. 6F). HLA-DR и CD123 использовали для идентификации HLA-DR ⁺ CD123 ⁺ плазмоцитоидных дендритных клеток (pDC, красная стрелка, фигура 6H). Эту популяцию исследовали на экспрессию CD14 ⁺ и CD11c ⁺ (красная стрелка, фиг. 6I), чтобы убедиться, что макрофаги и другие DC были исключены из ворот, определяющих pDC.Чтобы идентифицировать миелоидные дендритные клетки (mDC), мы использовали HLA-DR и CD11c и наблюдали отдельную популяцию клеток HLA-DR ⁺ CD11c ⁺ (фиолетовая стрелка, фигура 6D). Из популяции HLA-DR ⁺ CD11c ⁺ были исключены макрофаги CD14 ⁺ (фигура 6G). Чтобы исследовать mDC более внимательно, мы использовали маркеры CD1c и CD141 (фиолетовая стрелка, рис. 6J). Мы наблюдали CD141 ^— CD1c ⁺ DC, CD141 ⁺ CD1c ^— DC и третью популяцию CD141 ^— CD1c ^— DN клеток.CD14 ⁺ Макрофаги HLA-DR ⁺ составляли 4,7% от всех лейкоцитов, инфильтрирующих опухоль, тогда как три популяции DC вместе составляли 2,1% всех лейкоцитов в опухоли. Плазмацитоидные ДК были основной подгруппой ДК в опухолях НМРЛ (1,2%), за ними следовали CD1c ⁺ мДК (0,8%) и CD141 ⁺ ДК (0,1%). Следует отметить, что CD11c не является специфическим маркером ДК у человека, поскольку все моноциты человека в крови экспрессируют CD11c (40). Кроме того, макрофаги bona fide CD14 ⁺ HLA-DR ⁺ в опухолях NSCLC также экспрессируют CD11c (а также CD11b) (дополнительная фигура 10).Следовательно, CD11c ⁺ HLA-DR ⁺ CD14 ^— CD1c ^— CD141 ^— Популяция клеток «DN», составляющая 0,5% лейкоцитов в опухоли (рис. 6J), может содержать либо CD1c ^— . CD141 ^— мДК или CD14 ^— макрофагов (или оба). Стратегия стробирования для моноцитов и DC в PBMC показана на дополнительном рисунке 11. Процент DC в опухоли, по-видимому, не изменялся у пациентов с NSCLC с разными стадиями заболевания, за исключением, возможно, CD141 ⁺ DC, которые чаще встречались на стадии I. по сравнению с НМРЛ II стадии, хотя значение p было погранично значимым ( p = 0.04) и потребуется подтверждение на более широкой когорте пациентов (дополнительный рисунок 12).

Рисунок 6 . Анализ проточной цитометрии макрофагов и ДК в опухолях НМРЛ. (A) FSC-A и SSC-A использовали для гейтирования ядерных клеток. (B) FSC-A и FSC-H были использованы для блокировки одиночных клеток и исключения дублетов. (C) Живые лейкоциты были определены как CD45 ⁺ PI ^— . (E) Исключение CD19 ⁺ B-клеток. (D) Шлюз для ячеек HLA-DR ⁺ и CD11c ⁺ . (F) Макрофаги были определены как клетки CD14 ⁺ HLA-DR ⁺ . Экспрессия HLA-DR на макрофагах считалась высокой или низкой, как показано на графике. (G) Миелоидные DC были определены как CD11c ⁺ CD14 ^— . (H) Плазмацитоидные DC были определены как HLA-DR ⁺ CD123 ⁺ , а также (I) CD11c ^— и CD14 ^— . (J) Были идентифицированы два подмножества миелоидных DC: CD141 ⁺ DC и CD1c ⁺ DC. Также наблюдалась двойная отрицательная (DN) популяция. Процентное соотношение популяций клеток, показанное на рисунке, было рассчитано из общего количества живых лейкоцитов и представляет собой средние значения для 30 пациентов (16 аденокарцином, 13 плоскоклеточных карцином и одна крупноклеточная карцинома).

Процент макрофагов CD14 ⁺ HLA-DR ⁺ был ниже в опухоли (для аденокарциномы и всех пациентов с НМРЛ) по сравнению с дистальным отделом легкого (рисунки 7A – C).Не наблюдалось значительной разницы в процентном соотношении подмножеств DC (всех лейкоцитов CD45 ⁺ ) между опухолью и дистальным отделом легкого (дополнительная фигура 13). Однако дальнейший анализ данных показал, что относительная частота (в процентах от всех DC) может быть разной для разных тканей, причем pDC встречаются чаще, а CD1c ⁺ mDC реже встречаются в опухоли по сравнению с дистальной тканью легкого (дополнительные рисунки 14, 15). ). Мы также наблюдали снижение процента инфильтрирующих CD11c ⁺ HLA-DR ⁺ CD14 ^— CD141 ^— CD1c ^— «DN» клеток в опухоли по сравнению с дистальными отделами легких при рассмотрении всех исследованных пациентов с НМРЛ (Рисунки 7D– F).Кроме того, было обнаружено, что фракция макрофагов экспрессирует высокие уровни HLA-DR (рис. 6F), а уровни экспрессии HLA-DR оказались выше на макрофагах в опухоли, дистальном отделе легкого и лимфатическом узле по сравнению с моноцитами в PBMC ( Рисунок 8A). Фактически, некоторые моноциты в крови пациентов с НМРЛ имели очень низкую или отсутствующую экспрессию HLA-DR (рис. 8A) и могут соответствовать ранее сообщенным CD14 ⁺ HLA-DR ^{— / low} популяции клеток-супрессоров миелоидного происхождения ( 41). Мы дополнительно проанализировали популяцию макрофагов, разделив клетки на клетки с высокой и низкой экспрессией HLA-DR (рис. 8A).Используя этот критерий, мы обнаружили, что фракция макрофагов HLA-DR ^high была больше в опухоли по сравнению с дистальным отделом легкого как при аденокарциноме, так и при плоскоклеточном раке (рис. 8B). Эти внутриопухолевые макрофаги с высоким содержанием HLA-DR потенциально могут представлять собой активированные интерфероном-γ (IFN-γ) макрофаги с противоопухолевой активностью (42–46), поскольку было показано, что IFN-γ специфически индуцирует экспрессию HLA-DR на макрофагах (47). .

Рисунок 7 . Макрофаги и миелоидные клетки DN менее распространены в опухолях NSCLC, чем в дистальных отделах легкого. (A) Процент макрофагов / моноцитов у пациентов с аденокарциномой ( n = 18), (B) пациентов с плоскоклеточным раком ( n = 14) и (C) NSCLC ( n = 33). (D) Процент миелоидных клеток DN (предположительно DC и / или макрофагов) в аденокарциноме ( n = 16), (E) плоскоклеточной карциноме ( n = 13) и (F) НМРЛ ( n = 29). Клетки были закрыты, как показано на рисунке 6.Проценты рассчитывали от общего количества живых лейкоцитов (CD45 ⁺ PI ^— ). Каждый символ представляет данные одного пациента. Средние значения обозначены синими линиями. Статистические расчеты были выполнены с помощью непараметрического анализа Краскела-Уоллиса и пост-теста Данна, сравнивающего опухоль, дистальный отдел легкого и лимфатический узел (ЛУ).

Рисунок 8 . Макрофаги в опухолях NSCLC экспрессируют высокие уровни HLA-DR. (A) Макрофаги и моноциты были разделены на две популяции в зависимости от уровня экспрессии HLA-DR на поверхности: группы с высокой и с низкой экспрессией HLA-DR, как указано. (B) Процент макрофагов, экспрессирующих высокие уровни HLA-DR, у пациентов с аденокарциномой ( n = 11) и плоскоклеточным раком ( n = 9). Клетки регистрировали, как показано на фиг. 6. Процентное содержание рассчитывали от общего числа макрофагов / моноцитов, определенных как клетки CD14 ⁺ HLA-DR ⁺ . Каждый символ представляет данные одного пациента. Средние значения обозначены синими линиями. Статистические расчеты были выполнены с помощью непараметрического анализа Краскела-Уоллиса и пост-теста Данна, сравнивающего опухоль, дистальный отдел легкого и лимфатический узел (ЛУ).

Опухоли аденокарциномы имеют пониженный процент NK-клеток

Для идентификации NK-клеток использовались ворота лимфоцитов (Рисунки 9A – D). CD19 ⁺ B-клетки и CD14 ⁺ макрофаги были исключены (Фигуры 9E, F). Остальные клетки были разделены на основе экспрессии CD3 и CD56 на CD3 ⁺ Т-клетки и CD3 ^— NK-клетки CD56 ⁺ (фиг. 9G). Популяция двойных положительных клеток CD3 ⁺ CD56 ⁺ , наблюдаемая на фиг. 9G, может состоять либо из NK T-клеток, либо из обычных T-клеток, экспрессирующих маркер NK / NKT CD56 (48).Дополнительные маркеры потребуются, чтобы отличить NK T-клетки от обычных T-клеток, экспрессирующих CD56. CD3 ^— NK-клетки CD56 ⁺ дополнительно исследовали на экспрессию CD16, определив две подгруппы, NK-клетки CD16 ⁺ и CD16 ^—, соответственно (фиг. 9H). Стратегия стробирования для NK-клеток в PBMC показана на дополнительной фигуре 16. Общая популяция NK-клеток составляла 4,5% от живых лейкоцитов в опухоли. Процентное содержание CD16 ^— NK-клеток (2.2%) и NK-клетки CD16 ⁺ (2,3%) были аналогичными. Было обнаружено, что процент всех NK-клеток CD56 ⁺ ниже в опухоли (для аденокарциномы и для всех пациентов с НМРЛ) по сравнению с дистальным отделом легкого (Рисунки 10A – C). Это различие, по-видимому, в основном связано с уменьшенным процентным содержанием поднабора CD16 ⁺ NK-клеток в опухолевой ткани (Фигуры 10D – F). Напротив, процентное содержание NK-клеток CD16 ^– мало варьировалось между тканями (рисунки 10G – I). Таким образом, опухоли NSCLC содержат две популяции NK-клеток (CD16 ⁺ и CD16 ^— ), и процент NK-клеток в опухоли снижен по сравнению с доброкачественной легочной тканью.

Рисунок 9 . Анализ проточной цитометрии NK-клеток в опухолях NSCLC. (A) График FSC-A и SSC-A использовали для идентификации ядерных клеток. (B) Одиночные клетки были закрыты, а дублеты исключены. (C) Живые лейкоциты были определены как клетки CD45 ⁺ PI ^— . (D) Ворота лимфоцитов были установлены в зависимости от размера и гранулярности клеток. (E) CD19 ⁺ B-клетки были исключены. (F) CD14 ⁺ макрофаги были исключены. (G) NK-клетки были определены как CD3 ^— CD56 ⁺ . (H) Были идентифицированы два подмножества NK-клеток: CD16 ⁺ и CD16 ^— NK-клетки. Процентное соотношение всех популяций было рассчитано из общего числа живых лейкоцитов, и представлены средние значения для 19 пациентов (11 аденокарцином, 8 плоскоклеточных карцином).

Рисунок 10 . Процент NK-клеток ниже в опухолях NSCLC по сравнению с дистальным отделом легкого. (A – C) Процент всех CD56 ⁺ NK-клеток в различных тканях пациентов с диагнозом аденокарцинома (A) ( n = 11), (B) плоскоклеточный рак ( n = 8) и (C) NSCLC ( n = 19). (D – F) Процентное содержание CD56 ⁺ CD16 ⁺ NK-клеток в аденокарциноме (D) , плоскоклеточной карциноме (E) и NSCLC (F) . (G – I) Процент CD56 ⁺ CD16 ^– NK-клеток в аденокарциноме (G) , плоскоклеточной карциноме (H) и NSCLC (I) .Стратегия стробирования представлена ​​на рисунке 9. Каждый символ представляет данные одного пациента в виде процента от всех живых лейкоцитов (CD45 ⁺ PI ^— ). Средние значения обозначены синими линиями. Статистические расчеты были выполнены с использованием непараметрического анализа Краскела-Уоллиса и пост-теста Данна, сравнивающего опухоль, дистальный отдел легкого и лимфатический узел (ЛУ).

Опухоли НМРЛ содержат множество нейтрофилов

Для исследования инфильтрата гранулоцитов использовали живые лейкоцитарные ворота (Рисунки 11A – C).CD19 ⁺ B-клетки, CD3 ⁺ T-клетки и CD14 ⁺ макрофаги были исключены (Фигуры 11D, E). Оставшиеся лейкоциты были разделены на основе экспрессии CD11b (фигура 11F). Популяцию CD11b ^— исследовали на FcεR1α (фигура 11H). Клетки FcεR1α ⁺ были разделены на CD117 ⁺ CD49d ⁺ тучных клеток и CD117 ^— CD49d ⁺ базофилов (фигура 11G). Из популяции CD11b ⁺ (фигура 11F) были отобраны клетки, экспрессирующие CD15 (фигура 11I), и затем разделены на нейтрофилы CD49d ^— и эозинофилы CD49d ⁺ (фигура 11J).Стратегия гейтирования для гранулоцитов в PBMC показана на дополнительном рисунке 17 (обратите внимание, что градиент плотности Lymphoprep, используемый для получения PBMC, удалил большинство нейтрофилов, которые обычно составляют 50% всех лейкоцитов в крови). В среднем гранулоциты составляли 10% от всех лейкоцитов в опухолях НМРЛ. Нейтрофилы составляют самую большую популяцию гранулоцитов, составляющую 8,6% от всех лейкоцитов. Базофилы и эозинофилы составляли 0,4 и 0,3% соответственно, тогда как тучные клетки представляли 1,4% всех иммунных клеток в опухолях НМРЛ (фигура 11).Процент тучных клеток и нейтрофилов в опухоли значительно варьировался среди пациентов (рис. 12).

Рисунок 11 . Анализ проточной цитометрии гранулоцитов в опухолях НМРЛ. (A) График FSC-A и SSC-A использовали для идентификации ядерных клеток. (B) Одиночные клетки были закрыты, а дублеты исключены. (C) Живые лейкоциты были определены как клетки CD45 ⁺ PI ^— . (D) CD3 ⁺ T-клетки и CD19 ⁺ B-клетки были исключены. (E) CD14 ⁺ макрофагов были исключены. (F) CD11b использовали для разделения гранулоцитов: клетки CD11b ^– включают тучные клетки и базофилы, тогда как клетки CD11b ⁺ включают нейтрофилы и эозинофилы. (G) В популяции клеток CD49d ⁺ базофилы были выделены из тучных клеток с помощью CD117. (H) Тучные клетки и базофилы определены как клетки FcεR1 ⁺ . (I) Из популяции лейкоцитов CD11b ⁺ нейтрофилы и эозинофилы были определены как клетки CD15 ⁺ . (J) В популяции CD15 ⁺ нейтрофилами являются CD49d ^— и эозинофилы CD49d ⁺ . Проценты, указанные для каждой популяции гранулоцитов, были рассчитаны из общего количества живых лейкоцитов для 18 пациентов с НМРЛ (11 аденокарцином и 7 плоскоклеточных карцином).

Рисунок 12 . Инфильтрация гранулоцитов в опухолях НМРЛ. (A, B) Инфильтрация тучными клетками при (A) аденокарциноме ( n = 11) и (B) плоскоклеточной карциноме ( n = 7). (C, D) Нейтрофильная инфильтрация при (C) аденокарциноме ( n = 11) и (D) плоскоклеточной карциноме ( n = 7). Каждый символ представляет данные одного пациента в процентах от всех живых лейкоцитов (CD45 ⁺ PI ^— ). Стратегия стробирования описана на рисунке 11. Средние значения обозначены синими линиями. Статистические расчеты были выполнены с помощью непараметрического анализа Краскела-Уоллиса и пост-теста Данна, сравнивающего опухоль, дистальный отдел легкого и лимфатический узел (ЛУ).

Опухоли NSCLC содержат тринадцать различных типов иммунных клеток

Все данные суммированы в таблице 2 и на рисунке 13. Тринадцать различных типов иммунных клеток были идентифицированы в опухолях NSCLC. Т-клетки были наиболее частыми иммунными клетками, составляя 46,5% от всех инфильтрирующих опухоль лейкоцитов CD45 ⁺ (таблица 2). В опухоли наблюдали три типа Т-клеток: CD4 ⁺ , CD8 ⁺ и CD4 ^— CD8 ^— DN Т-клетки. CD4 ⁺ Т-лимфоциты были наиболее многочисленными (25.9%), за которым следуют CD8 ⁺ Т-клетки (21,7%). В-клетки были третьим по частоте типом иммунных клеток в опухолях НМРЛ (15,9%). Среди мононуклеарных фагоцитов, инфильтрирующих опухоль, макрофаги были наиболее многочисленными (4,7%), за ними следовали pDC (1,2%). Были идентифицированы два типа мДК: CD1c ⁺ ДК (0,8%) и CD141 ⁺ ДК (0,1%). NK-клетки составляли в среднем 4,5% всех лейкоцитов. Опухоли NSCLC содержали немного эозинофилов (0,3%), базофилов (0,4%) и тучных клеток (1,4%), тогда как нейтрофилы были наиболее распространенным типом гранулоцитов, составляющим 8.6% всех лейкоцитов (таблица 2).

Таблица 2 . Типы иммунных клеток, идентифицированные в опухолях NSCLC ^# .

Рисунок 13 . Состав иммунных клеток при НМРЛ. (A) Гистограмма показывает состав иммунных клеток в аденокарциноме, плоскоклеточной карциноме, дистальном отделе легкого, региональном лимфатическом узле и PBMC в когорте пациентов с NSCLC ( n = 68). Цвета в столбцах представляют собой средние значения, основанные на данных, собранных для соответствующих популяций клеток в указанной ткани.Дистальный отдел легкого представляет собой объединенные данные о доброкачественной легочной ткани, полученные от пациентов с аденокарциномой и плоскоклеточным раком. Звездочки указывают на значительные различия в процентном соотношении клеток между опухолью и дистальным отделом легкого, рассчитанном с помощью анализа Краскела-Уоллиса и пост-теста Данна. (B) Состав иммунных клеток в опухолях NSCLC представлен в виде круговой диаграммы.

Сравнение лейкоцитарного состава опухоли и дистального отдела легкого показало, что наблюдалось значительное увеличение доли инфильтрирующих В-клеток как для аденокарциномы, так и для плоскоклеточного рака.Напротив, процентное содержание макрофагов и NK-клеток было ниже в опухолях NSCLC по сравнению с дистальным отделом легкого (фигура 13). Остальные популяции клеток показали аналогичный процент опухолей по сравнению с дистальным отделом легкого. Стероидная терапия (которую использовали 50% пациентов с ХПК, включенных в это исследование), по-видимому, не влияла на состав иммунных клеток в опухолях НМРЛ (дополнительный рисунок 18). Статистический анализ выявил несколько корреляций между типами иммунных клеток в опухолях NSCLC (дополнительная таблица 7; дополнительная фигура 19).Например, процент макрофагов в опухоли отрицательно коррелировал с процентом В-клеток (дополнительная фигура 19C). Кроме того, несколько комбинаций гранулоцитов (нейтрофилы / эозинофилы, эозинофилы / тучные клетки, нейтрофилы / тучные клетки) были положительно коррелированы, что позволяет предположить, что микросреда некоторых опухолей НМРЛ может быть склонна к привлечению гранулоцитов в целом (гранулоцитарное воспаление) (дополнительная таблица 7; дополнительная Рисунок 19I – K). Стратегия стробирования, используемая для идентификации иммунных клеток в лимфатических узлах, показана на дополнительных рисунках 20–24.

Когда мы суммировали средние значения для каждого идентифицированного типа иммунных клеток, мы обнаружили недостающую фракцию, обозначенную «другие» на рисунках 13A, B, для достижения 100% лейкоцитов CD45 ⁺ . Эта «другая» популяция потенциально неидентифицированных иммунных клеток оказалась довольно большой, в частности, в опухолях плоскоклеточного рака (рис. 13А). Однако мы подозревали, что такая большая популяция неидентифицированных клеток была не реальной, а скорее результатом артефакта из-за использования пяти различных панелей для идентификации всех типов иммунных клеток.Чтобы прояснить это, мы создали единую панель многоцветной проточной цитометрии (дополнительная таблица 6), охватывающая большинство идентифицированных типов иммунных клеток: Т-клетки, В-клетки, макрофаги, NK-клетки и гранулоциты. Используя эту единую панель для анализа образцов от двух дополнительных пациентов с НМРЛ, мы обнаружили, что мы успешно идентифицировали 95,5 и 96,2% всех лейкоцитов CD45 ⁺ в плоскоклеточной карциноме и аденокарциноме соответственно (дополнительные рисунки 25, 26). Оставшиеся 4–5% неидентифицированных лейкоцитов потенциально могут состоять из DC или врожденных лимфоидных клеток, которые не были окрашены этой панелью.Таким образом, мы можем заключить, что> 95% всех иммунных клеток CD45 ⁺ в опухолях NSCLC были полностью охарактеризованы и что было идентифицировано 13 различных типов иммунных клеток.

Обсуждение

В этом исследовании мы охарактеризовали состав иммунных клеток в опухоли, дистальном отделе легкого, лимфатических узлах и крови 68 пациентов с НМРЛ. Образцы опухоли, дистальных отделов легочной ткани и лимфатических узлов обрабатывали по тому же протоколу с использованием ферментативного расщепления, чтобы можно было сравнивать ткани. Напротив, PBMC выделяли из крови пациентов с использованием другого протокола (градиент плотности), поскольку PBMC по существу использовались в качестве положительного контроля для окрашивания и идентификации клеток, а не для прямого сравнения с тремя исследованными тканями.Мы обнаружили, что опухоли аденокарциномы имели более высокий процент лейкоцитов CD45 ⁺ по сравнению с дистальным отделом легкого. Аналогичная тенденция наблюдалась для опухолей плоскоклеточного рака, хотя значение p не достигло статистической значимости. Эти данные согласуются с предыдущими выводами (28, 30) и подтверждают, что микроокружение опухолей НМРЛ богато иммунными клетками. Тринадцать различных типов иммунных клеток были идентифицированы в опухолях NSCLC, которые в общей сложности составляют> 95% всех лейкоцитов CD45 ⁺ : CD4 ⁺ Т-клетки, CD8 ⁺ Т-клетки, DN Т-клетки, В-клетки, макрофаги, pDC, CD1c ⁺ mDC, CD141 ⁺ mDC, NK-клетки, нейтрофилы, базофилы, эозинофилы и тучные клетки.

Было обнаружено, что

Т-клеток доминируют в иммунном ландшафте (в среднем 46,5% всех клеток CD45 ⁺ ). Наблюдаемый высокий процент Т-клеток среди лейкоцитов, инфильтрирующих опухоль при НМРЛ, согласуется с предыдущими сообщениями (28–30, 49, 50). Однако мы не наблюдали повышенной частоты Т-клеток в опухолях по сравнению с дистальным отделом легкого, как сообщалось другими (28–30, 49). Следует отметить, что наша стратегия стробирования не позволяла различать αβ Т-клетки (предположительно, подавляющее большинство Т-клеток CD3 ⁺ при НМРЛ) и γδ Т-клетки, о которых также сообщалось при опухолях легких (51).Большинство CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клеток в опухоли проявляли фенотип CD45RA ^— CD45RO ⁺ эффектор / память, что можно было ожидать от Т-клеток, присутствующих в нелимфоидных органах. Интересно, что небольшие популяции CD45RA ⁺ CD45RO ^— CD4 ⁺ Т-клеток и CD8 ⁺ Т-клеток также наблюдались в опухолях NSCLC. Иммунофлуоресцентное окрашивание показало, что эти CD45RA ⁺ CD3 ⁺ Т-клетки были локализованы как в строме опухоли (т.е.е. между областями опухолевых клеток) и на периферии опухоли в TLS. CD45RA ⁺ CD3 ⁺ Т-клетки в TLS, вероятно, будут настоящими наивными Т-клетками (35). Напротив, не ожидается, что наивные Т-клетки будут находиться в строме опухоли, то есть вне вторичных или третичных лимфоидных органов. Следовательно, вероятно, что CD45RA ⁺ CD3 ⁺ Т-клетки в строме опухоли состоят из CD45RA ⁺ эффекторной памяти CD8 ⁺ Т-клеток, так называемых клеток T _EMRA (33, 34).Сообщалось, что присутствие Т-клеток в опухоли положительно коррелирует с выживаемостью при нескольких типах рака, включая НМРЛ (52, 53). Следовательно, наличие и статус активации Т-клеток могут быть полезны в качестве маркера исхода заболевания при НМРЛ.

Наблюдаемое увеличение процента В-клеток в опухолях НМРЛ по сравнению с дистальными отделами легочной ткани соответствует предыдущим сообщениям (28–30). Однако в предыдущем исследовании, в котором участвовало большое количество пациентов ( n = 73), B-клетки представляли только 4.4% клеток CD45 ⁺ в опухолях НМРЛ (24), что примерно в 3,5 раза меньше процента (15,9%), обнаруженного в нашей когорте (24). Это большое различие в пропорциях B-клеток может быть связано с различиями в том, как собирались образцы опухолевой ткани, поскольку B-клетки присутствуют в основном на периферии опухоли (54), где они группируются в TLS вместе с DC и T-клетками (24). Сообщалось, что В-клетки являются хорошим маркером клинического исхода как в сочетании с ДК или Т-клетками, так и сами по себе (24, 37, 55).

Три типа DC, а именно pDC (CD123 ⁺ ), CD141 ⁺ DC и CD1c ⁺ DC, были идентифицированы в опухолях NSCLC с использованием установленных маркеров. Ранее сообщалось, что CD141 ⁺ DC снижается в опухолях по сравнению с доброкачественной тканью легких (49). Наши данные не подтвердили такое снижение, хотя мы проанализировали довольно большую когорту пациентов для подмножеств DC ( n = 29). Вероятно, что другие подмножества DC присутствуют в опухолях NSCLC, но не были обнаружены нашей стратегией стробирования.Например, HLA-DR ⁺ CD11c ⁺ CD1c ⁺ CD14 ⁺ воспалительные DC (56) не были исследованы, потому что наша стратегия стробирования использовала CD14 в качестве специфического маркера для макрофагов, и все DC считались CD14 ^— . Кроме того, мы исключили несколько DC: CD141 ⁺ CD1c ⁺ , подмножество, которое наблюдалось в других исследованиях (57, 58). Онтогенетические сопоставления с обычными DC мыши (cDC) классифицировали CD141 ⁺ DC человека и CD1c ⁺ DC как cDC1 и cDC2 соответственно (59).ДК различного клеточного происхождения обладают разными функциями. В то время как pDC обладают потенциалом для усиления противоопухолевого иммунитета за счет продукции IFN типа I (46, 60), считается, что cDC1 и cDC2 специализируются на презентации антигена и активации наивных Т-клеток. Было обнаружено, что CD1c ⁺ DC (cDC2) намного чаще (0,8% от всех лейкоцитов), чем CD141 ⁺ DC (cDC1, 0,1%) в опухолях NSCLC. Это наблюдение согласуется с тем, что cDC2 играет центральную роль «хранителей слизистой оболочки» в легких, как предполагается в недавнем отчете (58).

Процент макрофагов был снижен в опухолях (аденокарцинома и все НМРЛ) по сравнению с дистальным отделом легкого в соответствии с предыдущим отчетом (30). Примечательно, что Kargl et al. сообщили, что макрофаги составляют в среднем 15% всех клеток CD45 ⁺ в опухолях НМРЛ, что в три раза выше, чем в нашем исследовании (4,7%) (30). Мы определили макрофаги как CD45 ⁺ CD3 ^— CD19 ^— CD14 ⁺ HLA-DR ⁺ клетки, тогда как Kargl et al.использовали CD68 ⁺ для идентификации макрофагов из живых лейкоцитов CD45 ⁺ . Несоответствие в стратегии гейтирования может, по крайней мере, частично объяснить наблюдаемую разницу в пропорциях макрофагов. Наше исследование показывает, что увеличивается доля макрофагов с высокой экспрессией HLA-DR в опухоли по сравнению с дистальным отделом легкого. Эти макрофаги HLA-DR ^{с высоким уровнем} могут потенциально представлять макрофаги, активированные IFN-γ, с противоопухолевой активностью (42–46), поскольку IFN-γ, как было показано, специфически индуцирует экспрессию HLA-DR на макрофагах (47).Макрофаги могут способствовать эффективности блокады иммунных контрольных точек PD-1 при НМРЛ, как было предположено в недавнем исследовании, в котором сообщается о большом количестве инфильтрирующих макрофагов (и лимфоцитов) у отвечающих пациентов (61).

Наш анализ NK-клеток идентифицировал как NK-клетки CD16 ⁺ , так и CD16 ^– при НМРЛ и выявил уменьшение количества NK-клеток в опухоли по сравнению с дистальным отделом легкого, что соответствует предыдущим сообщениям (29, 30). Снижение процента NK-клеток в опухоли в основном связано с более низкими уровнями CD16 ⁺ субнабора NK-клеток.Хотя NK-клетки встречаются реже, чем в нормальной легочной ткани, они составляют значительную долю (4,5%) всех иммунных клеток в опухолях NSCLC. NK-клетки могут потенциально участвовать в противоопухолевом иммунитете, убивая раковые клетки и секретируя IFN-γ. Однако сообщалось, что NK-клетки в опухолях NSCLC могут иметь пониженную способность как убивать клетки-мишени, так и продуцировать IFN-γ (62, 63).

Гранулоциты составляют ~ 10% всех иммунных клеток в опухолях НМРЛ. Самой большой популяцией были нейтрофилы (8.6%), за которыми следуют тучные клетки (1,4%), базофилы (0,4%) и эозинофилы (0,3%). Ранее была показана высокая частота нейтрофилов в опухолях НМРЛ (30). Фактически, сообщалось, что нейтрофилы были наиболее распространенным типом иммунных клеток в опухолях НМРЛ, составляя почти 20% всех клеток CD45 ⁺ (30). Хотя наш анализ также показал высокое количество нейтрофилов в опухолях, мы обнаружили, что процент нейтрофилов (8,6% от клеток CD45 ⁺ ) на ~ 50% ниже, чем у Kargl et al.(30). Это различие может частично объясняться различными используемыми маркерами и различиями в стратегии стробирования. Несмотря на то, что процентное содержание нейтрофилов в разных исследованиях различается, нейтрофилы явно представляют собой значительную часть иммунных клеток как при аденокарциноме легкого, так и при плоскоклеточном раке. Несмотря на это, в настоящее время очень мало известно о роли нейтрофилов в развитии рака легких. Было высказано предположение, что нейтрофилы следует разделить на фенотипы N1 и N2, обладающие противоопухолевой и протопухолевой активностью соответственно (64, 65).Несколько исследований показали, что нейтрофилы могут играть пагубную роль в НМРЛ (66, 67).

Недавний успех иммунотерапии рака в клинических испытаниях произвел революцию в лечении рака и поставил иммунную систему в центр внимания как прогностический маркер и цель для новой терапии. Однако остается в значительной степени неизвестным, почему некоторые пациенты реагируют на иммунотерапию, а другие — нет. Подробная характеристика состава иммунных клеток в опухолях, вероятно, будет фундаментальной для разработки новых терапевтических агентов, а также прогностических и прогностических биомаркеров.

Авторские взносы

BS провела эксперименты, проанализировала данные, подготовила рисунки, провела статистический анализ и написала первый черновик рукописи. HB и RS провели эксперименты, проанализировали данные и подготовили рисунки. HB и EB внесли свой вклад в концепцию и дизайн исследования и помогли в экспериментах. AF и CH провели иммуногистохимический / иммунофлуоресцентный анализ. EM и KB помогали с экспериментами. PW набирала пациентов и предоставляла образцы биопсии.ÅH и OB организовали биобанк и помогли предоставить клинические данные. IØ осуществлял надзор, обсуждал результаты и писал разделы рукописи. AC разработал и контролировал исследование, оценивал эксперименты и участвовал в написании рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную версию рукописи.

Финансирование

Эта работа была поддержана при финансовой поддержке Регионального управления здравоохранения Юго-Восточной Норвегии (грант № 2016111) и Исследовательского совета Норвегии (грант №262814).

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Ingjerd Solvoll за неоценимую поддержку при проведении биопсии.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2018.03101/full#supplementary-material

Сокращения

CD, кластер дифференциации; ХОБЛ, хроническая обструктивная болезнь легких; CTLA-4, цитотоксический белок 4, связанный с Т-лимфоцитами; cDC, обычная дендритная клетка; DC, дендритная клетка; DN, двойной отрицательный; FBS, фетальная бычья сыворотка; FFPE, фиксированный формалином, залитый парафином; FSC-A, зона прямого рассеяния; FSC-H, высота прямого рассеяния; HLA-DR, человеческий лейкоцитарный антиген-антиген D связанный; IFN, интерферон; Ig, иммуноглобулин; LN — лимфатический узел; mDC, миелоидная дендритная клетка; Н.К., естественный убийца; НМРЛ, немелкоклеточный рак легкого; PBMC, мононуклеарные клетки периферической крови; PD-1, белок 1 запрограммированной гибели клеток; pDC, плазмоцитоидная дендритная клетка; PI, иодид пропидия; SSC-A, зона бокового рассеяния; SSC-H, высота бокового рассеивания; TLS, третичные лимфоидные структуры; TNM, стадия рака на основе опухоли, лимфатического узла и метастазов.

Список литературы

3. Трэвис У.Д., Брамбилла Э., Ногучи М., Николсон А.Г., Гейзингер К., Ятабе Й. и др. Международная ассоциация по изучению рака легких / Американское торакальное общество / Европейское респираторное общество: международная мультидисциплинарная классификация аденокарциномы легких: резюме. Proc Am Thorac Soc. (2011) 8: 381. DOI: 10.1513 / патс.201107-042ST

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Мирсадраи С., Освал Д., Ализаде Ю., Кауло А., ван Бик Е. Мл.7-я система классификации и стадирования рака легкого TNM: обзор изменений и последствий. World J Radiol. (2012) 4: 128. DOI: 10.4329 / wjr.v4.i4.128

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Валлийский Т.Дж., Грин Р.Х., Ричардсон Д., Уоллер Д.А., О’Бирн К.Дж., Брэддинг П. Инвазия макрофагов и тучных клеток в островки опухолевых клеток дает заметное преимущество в выживаемости при немелкоклеточном раке легкого.