Туя масло дн: ТУЯ ДН инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Thuja DN масло д/местн. прим. гомеопатическое: фл. 20 или 30 мл (24342)

черный

масло перца
FL / FR

черный

масло перца CO2 экстракт
FL / FR

(E) —

тигловая кислота
FL / FR

4-

метил-3-циклогексен-1-карбоновая кислота 9 0013 FR

para-

cymene
FL / FR

обычное

масло цветов пижмы Аргентина
FL / FR

голландское масло обыкновенное 900
FR

обычное

пижма масло Канада
FR

бета-

thujone
FR

alpha-

thujone
FR

1-

додеканол
FL / FR

эпоксидированное

кедровое масло
FR

терпеновое атлас

кедровое масло
FR

atlas

фракции кедрового масла
FR

(R) —

кедровое дерево
6 FR

альфа-

цедрен
FL / FR

4- (3,3-

диметилбицикло (2. 2.1) гепт-2-ил) -2-оксабицикло (2.2.2) октан
FR

iso

лонгифолен-кетон
FR

2-

метокси-4-винилфенол
FL / FR

iso

пинокамфон
FL / FR

4-iso

пропилфенол
FL / FR

альфа-

кариофилленовый спирт
FL / FR

альфа-

цедрен
FL / FR

iso

pinocamp hone
FL / FR

laevo-

периллальдегид
FL / FR

siam

бензоин-смолистый
FL / FR

laevo-

борнилацетат
FL / FR

(E) —

тигловая кислота
FL / FR

4-iso

пропилфенол
FL / FR

laevo-

линалоол
FL / FR

dextro-

фенхон
FL / FR

(Z) -3-

гексен-1-ил бензоат

iso

амилбензоат
FL / FR

пара-

анизиловый спирт
FL / FR

iso

амилсалицилат
FL / FR

(Z) -5-

октен-1-ил пропионат
FL / FR

2-

фенилпропиональдегид
FL / FR

сладкое

базилика

FR

3,6-

диметил-3-октанол
FL / FR

abrialis

лавандиновое масло
FL / FR

скрученное

масло семян петрушки
FL / FR

4-

FR

3 FL

масло барк / FR

9000 FL / FR

9

масло перца СО2 экстракт
FL / FR

FL

9 0003

3

FR

FL / FR

9000 FL / FR

3

3

3 9000 FR4 9000 FR0003 9000 FR4 / 9000 FR0003 9000 FR4 олеорезин метилцедрилкетон
FL / FR

(PDF) Антимикробные свойства масла кедрового листа (Thuja plicata); Безопасное и эффективное средство для дезактивации зданий

Int. J. Environ. Res. Public Health 2011, 8

13. Carson, C.F .; Hammer, K.A .; Райли, Т.В. Масло Melaleuca alternifolia (Чайное дерево): обзор антимикробных и других лечебных свойств

. Clin. Microbiol. Ред. 2006, 19, 50-62.

14. Баккали, Ф .; Averbeck, S .; Averbeck, D .; Идаомар, М. Биологические эффекты эфирных масел — обзор.

Food Chem. Toxicol. 2008, 46, 446-475.

15. Sadlon, A.E .; Ламсон, Д. Иммуномодифицирующие и антимикробные эффекты эвкалиптового масла и простых ингаляционных устройств

.Альтерн. Med. Ред. 2010, 15, 33–47.

16. Lawrence, H.A .; Паломбо, Э.А. Активность эфирных масел против спор Bacillus subtilis.

J. Microbiol. Biotechnol. 2009, 19, 1590-1595.

17. Цир и д .; Graikou, K .; Поблока-Олечка, Л .; Краузе-Барановская, М .; Spyropoulos, C .; Chnou, I.

Хемозистная ценность основного масляного состава видов туи, возделываемых в Польше —

Антимикробная активность. Molecules 2009, 14, 4707-4715.

18.Шарма, М .; Vohra, S .; Arnason, J.T .; Hudson, J.B. Экстракты эхинацеи содержат значительную и

селективную активность против патогенных бактерий человека. Pharm. Биол. 2008, 46, 111-116.

19. Sorg, J.A .; Дайнин С.С. Лабораторное поддержание Clostridium difficile. Curr. Protoc. Microbiol.

2009, 12, 9A.1: 1-9A.1: 10.

20. Hammer, K.A .; Carson, C.F .; Dunstan, J.A .; Hale, J .; Lehmann, H .; Robinson, C.J .;

Prescott, S.L .; Райли, Т.В. Противомикробная и противовоспалительная активность пяти масел Taxandria

Fragrans in vitro.Microbiol. Иммунол. 2008, 52, 522-530.

21. Stark, H .; Ропонен, М .; Purokivi, M .; Randell, J .; Тукиайнен, H .; Hirvonen, M.R. Aspergillus

fumigatus Challenge увеличивает уровни цитокинов в жидкости для промывания носа. Вдыхать. Toxicol. 2006, 18,

1033-1039.

22. Hope, A.P .; Саймон, Р. Избыточная сырость и рост плесени в домах: основанный на фактах обзор

аэрораздражающего эффекта и его потенциальных причин. Allergy Asthma Proc. 2007, 28, 262-270.

23. Насер, Б .; Bodinet, C .; Tegtmeier, M .; Lindequist, U. Thuja occidentalis (Arbor vitae): обзор его фармацевтических, фармакологических и клинических свойств

. Evid. На основе дополнения. Альтернат.

Мед. 2005, 2, 69-78.

24. Тяги, А.К .; Малик А. Антимикробный потенциал и химический состав масла Eucalyptus globulus

в жидкой и паровой фазе против микроорганизмов, вызывающих порчу пищевых продуктов. Food Chem. 2011, 126,

228-235.

25. Wullt, M .; Odenholt, I .; Вальдер, М. Активность трех дезинфицирующих средств и подкисленного нитрита против

спор Clostridium difficile. Заразить. Control Hosp. Эпидемиол. 2003, 24, 765-768.

26. Герч, Дж. Ботанические препараты, синергия и сетевая фармакология: далее и обратно к интеллектуальным смесям

. Planta Med. 2011, 77, 1086-1098.

© 2011 авторы; лицензиат MDPI, Базель, Швейцария. Эта статья представляет собой статью в открытом доступе

, распространяемую в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution

(http: // creativecommons. org / licenses / by / 3.0 /).

Эфирное масло Arborvitae (Thuja plicata) значительно ингибировало критические, связанные с воспалением и ремоделированием ткани белки и гены в дермальных фибробластах человека

Система состоит из трех компонентов: тип клетки, стимулы к

, создающие среду болезни, и набор считывания показаний биомаркеров (pro-

tein), чтобы изучить, как лечение повлияло на среду болезни

[4].

2.1. Культура клеток

Первичные неонатальные фибробласты человека (HDF) получали

, как описано ранее [5], и высевали в условиях с низким содержанием сыворотки

в течение 24 часов перед стимуляцией смесью

интерлейкина (IL) -1b, некроз опухоли. фактор (TNF) -a, интерферон

(IFN) -Y, основной фактор роста фибробластов (bFGF), эпидермальный фактор роста

(EGF) и тромбоцитарный фактор роста

(PDGF).Условия культивирования клеток и стимуляции для анализов

HDF3CGF были подробно описаны в другом месте, а

были выполнены в 96-луночном планшете [5,6].

2.2. Показания на основе белков

Прямой иммуноферментный анализ (ELISA) был использован для измерения уровней биомаркеров клеточно-ассоциированных и

клеточных мембран-мишеней. Растворимые факторы в супернатантах

количественно оценивали с использованием либо гомогенного определения флуоресценции

с временным разрешением (HTRF), либо мультиплексного иммуноанализа

на гранулах, либо иммуноферментного анализа с захватом.Неблагоприятные эффекты тестируемых агентов

на пролиферацию и жизнеспособность клеток (цитотоксичность) были измерены с использованием анализа сульфородамина B (SRB). Для анализа жизненного цикла pro-

клетки культивировали и измеряли через

72 часа, что является оптимальным для системы HDF3CGF, а подробная процедура

была описана в предыдущем исследовании [5].

Измерения были выполнены в трех лунках, а глоссарий

биомаркеров, использованных в этом исследовании, представлен в

дополнительной таблице S1.

2.3. Выделение РНК

Общую РНК выделяли из клеточных лизатов с использованием набора Zymo

Quick-RNA MiniPrep (Zymo Research Corp., Irvine, CA,

USA) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию РНК

определяли с помощью системы NanoDrop ND-2000

(Thermo Fisher Scienti c). Качество РНК оценивали с помощью

Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния,

США) и набора Agilent RNA 6000 Nano.Все образцы имели соотношение

A260 / A280 от 1,9 до 2,1 и показатель RIN> 8,0.

2.4. Анализ микроматрицы полногеномной экспрессии гена

Влияние 0,011% AEO на экспрессию 21 224

генов оценивали в системе HDF3CGF после 24-часовой обработки

. Образцы для анализа микрочипов обрабатывались в

Asuragen, Inc. (Остин, Техас, США) в соответствии со стандартными рабочими процедурами компании

. Меченная биотином кРНК

была приготовлена ​​из 200 нг тотальной РНК с использованием набора для амплификации Prep РНК Illumina Total-

(Thermo Fisher Scienti c) и

за один цикл амплификации. Выходы кРНК были количественно определены

с использованием ультрафиолетовой (УФ) спектрофотометрии, и распределение

размеров транскриптов было оценено с помощью анализатора 2100 Agilent Bio-

. Меченая кРНК (750 нг) была использована для зондирования

Illumina Human HT -12 v4 экспрессирующие гранулы (Illumina,

Inc., Сан-Диего, Калифорния, США). Гибридизацию, отмывку, окрашивание

конъюгированным со стрептавидином цианином-3 и сканирование матриц

Illumina проводили в соответствии с инструкциями производителя turer.Программное обеспечение Illumina BeadScan

использовалось для создания файлов данных для каждого массива; необработанные данные были извлечены с использованием программного обеспечения Illumina BeadStudio

.

Необработанные данные были загружены в R [6] и проанализированы на предмет

показателей контроля качества с использованием пакета beadarray [7]. Данные

были нормализованы с использованием квантильной нормализации [8], а затем

повторно аннотированы и отфильтрованы для удаления зондов, которые не были

специфичны или отображены в интронных или внутригенных областях [9]. Оставшиеся

наборы зондов составили набор данных для остатка

анализа. Выражение кратного изменения для каждого набора составляло

, рассчитанное как логарифм

2

отношения AEO к управлению транспортным средством.

Эти значения кратности изменения были загружены в Ingenuity

Pathway Analysis (IPA, QIAGEN, Redwood City, CA, USA,

www.qiagen.com/ingenuity) для создания сетей и анализа путей

.

2.5. Реагенты

AEO (d

oTERRA Intl., UT, USA) разбавляли диметилсульфоксидом

(ДМСО) до 8 указанных концентраций (окончательная концентрация

ДМСО в питательной среде была не более 0,1%.

[об. / Об.]). Затем 25 мл каждого 8-го раствора добавляли к культуре клеток

, чтобы получить конечный объем 200 мл, и ДМСО (0,1%)

служил в качестве контроля носителя. Анализ AEO методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии

(GCeMS) показал, что он

в основном содержит метил туйат (53%) и меньшие количества

множества других ароматических молекул.

3. Результаты и обсуждение

3.1. Профиль биоактивности AEO в предварительно воспламененных HDF.

Мы проанализировали биологическую активность AEO с использованием клеточной системы

HDF3CGF, которая моделировала микросреду

воспаленных клеток кожи человека с уже усиленными иммунными ответами

и воспалительными уровнями. Ни одна из четырех изученных концентраций

(0,011, 0,0037, 0,0012 и 0,00041%, об. / Об.) Не была явно цитотоксичной, и, следовательно, активность 0.Концентрация 011% —

концентрация была включена в анализ. Ключевые активности маркеров био-

были определены, если значения биомаркеров значительно отличались (p <0,05) от контрольных значений носителя, за пределами диапазона значимости

, с величиной эффекта не менее 10%

(> 0,05 логарифмических единиц, рис. 1) и обсуждаются ниже.

Экспрессия нескольких биомаркеров воспаления, таких как

, молекула адгезии 1 сосудистых клеток (VCAM-1), внутриклеточная молекула 1 адгезии клеток

(ICAM-1), индуцированный интерфероном гамма-

белок 10 (IP-10) , индуцируемый интерфероном Т-клеточный хе-

моаттрактант (I-TAC) и монокин, индуцированный гамма-интерфероном

(MIG), значительно уменьшились в ответ на AEO

(рис. 1). В частности, уровни этих белковых биомаркеров

уже были сильно повышены в предварительно стимулированной среде

57X. Хан, Т. Parker / Biochimie Open 4 (2017) 56e60

Сравнительная антиоксидантная активность и состав летучих масел листьев и плодов Thuja orientalis, произрастающих в Египте

TH Kim, H Li, Q Wu, HJ Lee и JH Ryu. Новый дитерпеноид лабдана с противовоспалительной активностью из Thuja orientalis. J. Ethnopharmacol.2013; 146, 760-7.

N Zhang, DK Park и HJ Park. Горячий водный экстракт Thuja orientalis способствует росту волос. BMC Дополнение. Альтерн. Med. 2013; 13, 9.

EH Lee, DG Song, JY Lee, CH Pan, BH Um и SH Jung. Флавоноиды из листьев Thuja orientalis ингибируют альдозоредуктазу и образование конечных продуктов гликирования. J. Korean Soc. Appl. Биол. Chem. 2009; 52, 448-55.

С. Эмами, Дж. Асили, З. Мохагеги и М. К. Хасанзаде.Антиоксидантная активность листьев и плодов иранских хвойных пород. Evid. На основе дополнения. Альтернат. Med. 2007; 4, 313-9.

Сингх и В.К. Сингх. Моллюскоцидная активность Saraca asoca и Thuja orientalis против пресноводной улитки Lymnaea acuminata. Вет. Паразитол. 2009; 164, 206-10.

H Lei, Y Wang, F Liang, W Su, Y Feng и X Guo. Состав и изменчивость эфирных масел Platycladus orientalis, произрастающего в Китае. Biochem. Syst. Ecol.2010; 38, 1000-6.

YD Chen, SX Li, L Yang, ZY Jiang и NH Cui. Сравнительное исследование химических составляющих эфирных масел из нескольких частей Platycladus orientlais. Chem. Indust. Forest 1984; 4, 1-11.

TL Лю, Q Qiu, Y Zhao, YM Shen и J Wang. Исследование химических составляющих эфирного масла восточной биоты с помощью ГХ-МС. J. Chin. Med. Mater. 2000; 23, 460-1.

RH Hui, DY Hou, XY Liu, XC Li и HL Geng. Анализ летучих компонентов из веточек листьев Biota orientalis с различными методами экстракции методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии.J. Chin. Масс-спектрометрия. Soc. 2006; 27, 226-31.

H Lei, Y Wang, F Liang, W Su, Y Feng, X Guo и N Wang. Состав и изменчивость эфирных масел Platycladus orientalis, произрастающего в Китае. Biochem. Syst. Ecol. 2010; 3, 1000-6.

MK Hassanzadeh, M Rahimizadeh, BS Fazly Bazzaz, SA Emami и J Assili, Химические и антимикробные исследования эфирных масел Platycladus orientalis. Pharm. Биол. 2001; 39, 388-90.

B Nickavar, G Amin и S. Parhami.Летучие компоненты фруктовых и листовых масел Thuja orientalis L. выращен в Иране. Z. Naturforsch. 2003; 58, 171-2.

S Afsharypuor и B Nayebzadeh. Компоненты эфирного масла молодого стебля, листа и плода Platycladus orientalis (L.) Franco, выращенного в Исфахане (Иран). J. Essent. Oil Res. 2009; 21, 525-28.

DN Dai, TD Thang и IA Ogunwande. Терпеновый состав трех видов голосеменных из Вьетнама. Являюсь. J. Plant Sci. 2013; 4, 2031-8.

М. Риаз, М.К. Рашид и Ф.М. Чаудари. Летучие компоненты листьев пакистанского Cupressus sempervirens и Thuja orientalis. Пак. J. Sci. Indust. Res. 1999; 42, 98-101.

М. Риаз, С. Камар, М. К. Рашид и Ф. М. Чаудари. Химический состав плодов Thuja orientalis L. на разных стадиях созревания. Пак. J. Sci. Indust. Res. 1999; 42, 188-91.

R Chizzola, W Hochsteiner и S Hajek. ГХ-анализ эфирных масел в жидкости рубца после инкубации веточек Thuja orientalis в системе rusitec.Res. Вет. Sci. 2004; 76, 77-82.

IA Ogunwande, NO Olawore, KA Adeleke и O Ekundayo. Состав эфирного масла Thuja ori entalis L. из Нигерии. J. Trop. Лесной ресурс. 2003; 19, 41-7.

S Guleria, A Kumar и AK Tiku. Химический состав и фунгитоксическая активность эфирного масла Thuja orientalis L., выращенного в северо-западных Гималаях. Z. Naturforsch. 2008; 63, 211-4.

А Ан, М. Сунанда, Б. Шубханги, А. Джайн и М. Маниша.Фармакогностические, фитохимические и фармакологические исследования коры Thuja orientalis Linn (Cupressaceae). J. Pharmacogn. Фитохим. 2016; 5, 111-3.

Н. Д. Джасуджа1, С. К. Шарма, Р. Саксена, Дж. Чоудхари, Р. Шарма и С. К. Джоши. Антибактериальные, антиоксидантные и фитохимические исследования листьев Thuja orientalis. J. Med. Растения. Res. 2013; 7, 1886-93.

В.А. Шах и М. Кадир. Химический состав, антиоксидантная и антибактериальная активность эфирного масла туи восточной.World J. Pharm. Sci. 2014; 2, 56-61.

G Kayaa, R Karakaya, E Tilgel, M Sandikçı, E Yücel, G icek, Ö Kayır, H Akşit, İ Telci, A. Güzel, M Elmastas and R. Erenler. Эфирные масляные компоненты ягод туи восточной. J. Новые результаты Sci. 2014; 7, 1-6.

Я Амри, М. Ханана, Б. Джамусси и Л. Хамруни. Химический состав эфирных масел Thuja orientalis L. и изучение их аллелопатического потенциала на прорастание и рост проростков сорняков.Arch. Фитопат. Защита растений. 2014; 48, 18-27.

М.Дж. Хубейз, Г. Мансур и Б. Захра. Антибактериальные и фитохимические исследования эфирного масла листьев Thuja orientalis (L.) из Сирии. Int. J. Curr. Фармацевтика. Rev. Res. 2016; 7, 243-7.

М.Ф. Абу Бакар, М. Мохамед, А. Рахмат и Дж. Фрай. Фитохимические и антиоксидантные свойства различных частей бамбангана (Mangifera pajang) и тарапа (Artocarpus odoratissimus). Food Chem. 2009; 113, 479-83.

LM Magalhães, M Segundo, S Reis и JL Lima. Автоматический метод определения общей антиоксидантной способности с использованием анализа 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила. Анальный. Чим. Acta 2006; 558, 310-8.

ER Elsharkawy, H Aljohar и AM Donia. Сравнительное исследование антиоксидантной и противоопухолевой активности Thuja orientalis, произрастающей в Египте и Саудовской Аравии. Br. J. Pharmaceut. Res. 2017; 15, 1-9.

Xu GH, IJ Ryoo, YH Kim, SJ Choo и ID Yoo.Улавливание свободных радикалов и антиэластазная активность флавоноидов из плодов Thuja orientalis. Arch. Pharm. Res. 2009; 32, 275-82.

Эфирное масло предотвращает Covid-19 | Энциклопедия

1. Введение

Coronaviridae или коронавирусы — это большое семейство вирусов, которые могут вызывать заболевания у млекопитающих и птиц. У людей вирусы вызывают болезни, от простуды до тяжелых респираторных заболеваний. В 2002 г. возник тяжелый острый респираторный синдром (SARS), а в 2012 г. — ближневосточный респираторный синдром (MERS) — оба являются бета-короновирусами, передаваемыми от животного человеку, которые вызывают тяжелые респираторные заболевания у пораженных людей ^[1] .В декабре 2019 года новый коронавирус SARS (CoV) -2, также известный как новый коронавирус 2019 года (2019-nCoV) или коронавирусная болезнь-2019 (COVID-19), вызвал вспышку пневмонии в Китае и впоследствии распространился по всему миру, к пандемии. Недавно была выпущена первая геномная последовательность COVID-19, и, сравнивая с геномами SARS-CoV и MERS-CoV, исследователи обнаружили, что COVID-19 имеет лучшую гомологию геномной последовательности с SARS-CoV, чем у MERS-CoV ^{. [2] [3]} .

Во время первой вспышки SARS-CoV Li et al. ^[4] идентифицировал ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) в качестве человеческого фактора-хозяина или рецептора проникновения в клетки для SARS-CoV. Избыточная экспрессия ACE2 и инъекция спайкового белка SARS-CoV вызвали тяжелую острую легочную недостаточность у мышей, которую можно ослабить путем блокирования пути ренин-ангиотензин [5]. Недавние исследования показали, что спайковый белок COVID-19 имеет сильное сродство с ACE2 на клетках-хозяевах, которое значительно выше, чем у SARS-CoV ^{[1] [5]} .Эти исследования также показали, что лечение ингибитором трансмембранной протеазы серин 2 (TMPRSS2) значительно блокирует проникновение клеток SARS-CoV; следовательно, блокаторы ACE2 или TMPRSS2 могут быть потенциальными мишенями для противовирусного вмешательства. В другом исследовании сообщалось, что связывающий домен рецептора COVID-19 способен проникать в клетки, экспрессирующие человеческий ACE2, в то время как другие рецепторы неэффективны, подтверждая, что человеческий ACE2 является первичным рецептором для COVID-19 ^[6] . Поскольку рецептор клетки-хозяина играет решающую роль в проникновении вируса, нацеливание на точный рецептор ACE2 является многообещающей стратегией профилактики инфекции COVID-19.Недавние исследования показали, что сверхэкспрессия ACE2 часто наблюдалась в тканях желудочно-кишечного тракта и клеточных линиях толстой кишки ^[1] , что сравнительно выше, чем в других тканях, включая ткани легких. Поэтому в этом исследовании HT-29, клеточная линия аденокарциномы толстой кишки, была использована для исследования ингибирующего действия тестируемых образцов на ACE2 in vitro.

В настоящее время не существует определенного лечения или вакцины от коронавируса, вызывающего COVID-19. Тем не менее, многие возможные способы лечения COVID-19 привлекли внимание ученых и организаций здравоохранения.Например, была рекомендована комбинация противомалярийных препаратов хлорохина и гидроксихлорохина, а также препаратов против ВИЧ ритонавира и лопинавира ^{[7] [8]} . Поскольку лекарства напрямую нацелены на патоген, эффективность этих лекарств в значительной степени анекдотична. Кроме того, разработка новых препаратов для борьбы с ACE2 и лечения COVID-19 может занять много времени. Следовательно, безопасность и эффективность новых лекарств являются первоочередной задачей, которая требует длительного времени для тестирования, в то время как инфекция быстро растет.Системы народной медицины из многих географических регионов используют травы в качестве основного средства лечения вирусных инфекций, в том числе вызванных SARS-CoV. Например, экстракты листьев Toona sinensis подавляют репликацию SARS-CoV ^[9] . Солодка была предложена в качестве многообещающего средства лечения SARS-CoV ^[10] . Кроме того, было показано, что натуральные продукты, включая дитерпеноиды, сесквитерпеноиды, тритерпеноиды, лигноиды, куркумин и гинсеноссид-Rb1, ингибируют SARS-CoV ^{[11] [12]} .Недавнее исследование in silico показало, что байкалин, скутелларин, гесперетин, никотианамин и глицирризин способны ингибировать ACE2 ^[3] .

Существует широкий спектр эфирных масел, и клинически доказано, что их компоненты обладают противовирусными свойствами ^{[13] [14]} . Исследование Jackwood et al. ^[15] обнаружили, что обработка смесью олеорезинов и эфирных масел из растений снижает тяжесть клинических признаков и поражений у кур, которые являются переносчиками вируса птичьего инфекционного бронхита (IBV-CoV).Однако влияние растительных эфирных масел на коронавирусы человека еще предстоит изучить. В частности, их влияние на рецепторы клетки-хозяина практически не исследовано. Эфирное масло герани получают из листьев Pelargonium graveolens, , который широко используется в косметической промышленности, парфюмерии и ароматерапии ^[16] . Традиционно эфирное масло герани используется при физиологических и психологических осложнениях, включая тревогу, бессонницу, высокое кровяное давление, беспокойство, гнев, разочарование, беспокойство, нервозность, потерю веса, гиперхолестеринемию, желудочно-кишечные расстройства и инфекции дыхательных путей ^{[17] [18]} .Масло герани представляет собой мощный иммуномодулятор, стимулирует и очищает лимфатическую систему ^[19] . Масло клинически используется для лечения диареи, желтухи, диабета, гепатита, язвенного колита, холецистита и почечных камней ^[20] .

2. Обсуждение

Эфирные масла использовались в народной медицине на протяжении всей истории в качестве основных ингредиентов ароматерапии и психотерапии. Однако современные доклинические исследования показали, что эфирные масла обладают широким спектром фармакологической активности, включая антисептическое, мочегонное, желчегонное, спазмолитическое, гиперемическое, отхаркивающее, противотревожное, антиоксидантное, противовоспалительное и противораковое действие ^[21] .Фармакологические свойства эфирных масел обусловлены их уникальными основными составляющими, такими как монотерпеноиды, сесквитерпеноиды и фенилпропаноиды. Кроме того, в результате исследований in vitro и контролируемых исследований имеется значительное количество данных о потенциале эфирных масел в качестве противовирусных средств для лечения вирусных инфекций человека, включая коронавирусы SARS ^[22] . Эти противовирусные эфирные масла в основном тестировались против вирусов РНК или ДНК с оболочкой, таких как вирус простого герпеса типа 1, вирус Хунина, вирус гриппа, вирус денге 2 типа и коронавирусы SARS, а также вирусы без оболочки, такие как вирус Коксаки B1, полиовирус. и аденовирус типа 3 ^[21] .Большинство этих клинически полезных противовирусных агентов представляют собой вещества, которые действуют на определенных этапах биосинтеза вируса, в частности, ингибируя репликацию вируса. С другой стороны, вирулицидные агенты денатурируют структуру или гликопротеины вируса, таким образом снижая или полностью блокируя инфекционность вирусных частиц ^[23] .

Недавно ACE2 был идентифицирован как функциональный рецептор коронавируса SARS в эпителиальных клетках. В частности, белок-спайк SARS-CoV задействует ACE2 в качестве рецептора входа в клетку и использует клеточную сериновую протеазу TMPRSS2 для прайминга белка-спайка ^[1] .Таким образом, либо ингибирование рецепторов ACE2, либо TMPRSS2 может быть потенциальной мишенью для профилактики SARS-CoV, поскольку ACE2 демонстрирует различные режимы действия фермента и тканевого распределения. Обильная эндогенная экспрессия ACE2 наблюдалась в линиях клеток сердечно-сосудистой системы и толстой кишки, в то время как слабая экспрессия отмечена в клетках почек ^[24] . Недавние исследования также подтвердили, что эндогенная экспрессия ACE2 была выше в тканях желудочно-кишечного тракта ^[25] и клеточных линиях толстой кишки ^[1] , причем в этих сообщениях указывается, что экспрессия ACE2 сравнительно выше в тканях кишечника, чем в тканях легких.Поэтому в этом исследовании мы использовали HT-29, линию клеток аденокарциномы толстой кишки, которая эндогенно экспрессирует ACE2, чтобы изучить ингибирующее действие эфирных масел на ACE2. Первоначально мы исследовали цитотоксическое действие эфирных масел на клетки HT-29. Оценка цитотоксичности, несомненно, является важным аспектом оценки мощного противовирусного агента, поскольку потенциальный агент должен быть селективным в отношении вирусных или клеточно-специфических процессов, не влияя или не влияя на клеточный метаболизм ^[26] .Наши результаты показали, что каждое эфирное масло проявляет дифференциальную цитотоксичность, некоторые из них сильно цитотоксичны, а другие не проявляют цитотоксичности до концентрации 200 мкг / мл.

Недавние исследования in silico показали, что сероорганические соединения в эфирном масле чеснока и других природных продуктах, таких как байкалин, скутелларин, гесперетин, никотианамин, глицирризин, (E, E) -α-фарнезен, (E) -β-фарнезен и ( E, E) -фарнезол обладают потенциалом связываться с человеческим рецептором ACE2, тем самым, возможно, блокируя проникновение в клетки SARS-CoV-2 ^[3] .В одном исследовании оценивалось противовирусное действие семи эфирных масел ливанских видов, включая Laurus nobilis T., Juniperus oxycedrus spp., Против SARS-CoV in vitro. oxycedrus, Thuja orientalis, Cupressus sempervirens spp. pyramidalis, Pistacia palaestina, Salvia officinalis и Satureja tymbra. Среди них эфирные масла плодов L. nobilis, T. orientalis и J. oxycedrus spp. oxycedrus продемонстрировал ингибирование цитопатогенного эффекта, вызванного SARS-CoV, со значениями IC ₅₀ 120 мкг / мл, 130 мкг / мл и 270 мкг / мл соответственно ^[26] .Однако исследований, прямо демонстрирующих ингибирующее действие эфирных масел или их основных соединений на АПФ2 in vitro или in vivo, не проводилось. В этом исследовании мы проверили ингибирующее действие 10 эфирных масел на ACE2; среди них 8 эфирных масел продемонстрировали значительное ингибирование ACE2. Интересно, что эфирные масла герани и лимона сильно подавляли активность ACE2, не проявляя цитотоксичности. Насколько нам известно, это первый отчет, показывающий, что эфирные масла герани и лимона и их основные компоненты цитронеллол, гераниол, лимонен, линалоол и нерилацетат подавляют активность рецептора ACE2 в вирусных эпителиальных клетках хозяина.

3. Выводы

Недавняя пандемия пневмонии COVID-19 / SARS-CoV-2 представляет собой крупнейший глобальный кризис общественного здравоохранения и вызвала обеспокоенность во всем мире из-за ее относительно высокой заразности, быстрого прогрессирования, а также относительно высокого уровня смертности. Разработка лекарств для лечения COVID-19 в настоящее время важна из-за его быстрого прогрессирования. Разработка обычной противовирусной вакцины требует времени, и ее безопасность требует подтверждения. Дело в том, что общепринятой медицины, разработанной для лечения COVID-19, не существует.Однако есть данные, свидетельствующие о том, что эфирные масла и их основные компоненты проявляют мощную противовирусную активность по отношению к другим коронавирусам, таким как SARS-CoV-1, хотя механизм действия этих масел и их компонентов, как было установлено, в основном заключается в ингибировании вирусная репликация ^[26] . Недавно ACE2, рецептор в клетке-хозяине, способствующий проникновению в клетку вируса, был признан одной из основных мишеней для минимизации инфекции. В этом исследовании мы представили первые доказательства того, что эфирные масла герани и лимона и их основные соединения, цитронеллол, гераниол, лимонен, линалоол и нерилацетат, могут подавлять экспрессию ACE2 в эпителиальных клетках, тем самым блокируя проникновение вируса в клетки-хозяева. и, в конечном итоге, предотвращение вирусной инфекции.Тем не менее, необходимы дальнейшие исследования для раскрытия молекулярных механизмов, лежащих в основе этого ингибирующего эффекта.

Растения | Бесплатный полнотекстовый | Эфирные масла герани и лимона и их активные соединения подавляют регуляцию ангиотензинпревращающего фермента 2 (ACE2), домена связывания шипа SARS-CoV-2, в эпителиальных клетках

1. Введение

Coronaviridae или коронавирусы представляют собой большое семейство вирусов, которые может вызвать заболевание у млекопитающих и птиц. У людей вирусы вызывают болезни, от простуды до тяжелых респираторных заболеваний.В 2002 г. возник тяжелый острый респираторный синдром (SARS), а в 2012 г. — ближневосточный респираторный синдром (MERS) — оба являются бета-короновирусами, передаваемыми от животного человеку, что приводит к тяжелым респираторным заболеваниям у пораженных людей [1]. В декабре 2019 года новый коронавирус SARS (CoV) -2, также известный как новый коронавирус 2019 года (2019-nCoV) или коронавирусная болезнь-2019 (COVID-19), вызвал вспышку пневмонии в Китае и впоследствии распространился по всему миру, к пандемии. Недавно была опубликована первая геномная последовательность COVID-19, и, сравнивая с геномами SARS-CoV и MERS-CoV, исследователи обнаружили, что COVID-19 имеет лучшую гомологию геномной последовательности с SARS-CoV, чем с геномами MERS-CoV [ 2,3].Во время первой вспышки SARS-CoV Li et al. [4] идентифицировали ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) в качестве человеческого фактора-хозяина или рецептора входа в клетки для SARS-CoV. Избыточная экспрессия ACE2 и инъекция спайкового белка SARS-CoV вызвали тяжелую острую легочную недостаточность у мышей, которую можно ослабить путем блокирования пути ренин-ангиотензин [5]. Недавние исследования показали, что спайковый белок COVID-19 имеет сильное сродство с ACE2 на клетках-хозяевах, которое значительно выше, чем у SARS-CoV [1,6].Эти исследования также показали, что лечение ингибитором трансмембранной протеазы серин 2 (TMPRSS2) значительно блокирует проникновение клеток SARS-CoV; следовательно, блокаторы ACE2 или TMPRSS2 могут быть потенциальными мишенями для противовирусного вмешательства. В другом исследовании сообщалось, что связывающий домен рецептора COVID-19 способен проникать в клетки, экспрессирующие человеческий ACE2, в то время как другие рецепторы неэффективны, подтверждая, что человеческий ACE2 является первичным рецептором COVID-19 [7]. Поскольку рецептор клетки-хозяина играет решающую роль в проникновении вируса, нацеливание на точный рецептор ACE2 является многообещающей стратегией профилактики инфекции COVID-19.Недавние исследования показали, что избыточная экспрессия ACE2 часто наблюдается в тканях желудочно-кишечного тракта и клеточных линиях толстой кишки [1], что сравнительно выше, чем в других тканях, включая ткани легких. Таким образом, в этом исследовании для изучения ингибирующего действия тестируемых образцов in vitro была использована HT-29, линия клеток аденокарциномы толстой кишки. В настоящее время не существует определенного лечения или вакцины, разработанной для коронавируса, вызывающего COVID-19. Тем не менее, многие возможные способы лечения COVID-19 привлекли внимание ученых и организаций здравоохранения.Например, рекомендована комбинация противомалярийных препаратов хлорохина и гидроксихлорохина, а также препаратов против ВИЧ ритонавира и лопинавира [8,9]. Поскольку лекарства напрямую нацелены на патоген, эффективность этих лекарств в значительной степени анекдотична. Кроме того, разработка новых препаратов для борьбы с ACE2 и лечения COVID-19 может занять много времени. Следовательно, безопасность и эффективность новых лекарств являются первоочередной задачей, которая требует длительного времени для тестирования, в то время как инфекция быстро растет.Системы народной медицины из многих географических регионов используют травы в качестве основного средства лечения вирусных инфекций, в том числе вызванных SARS-CoV. Например, экстракты листьев Toona sinensis подавляют репликацию SARS-CoV [10]. Солодка была предложена как многообещающее средство от SARS-CoV [11]. Кроме того, было показано, что натуральные продукты, включая дитерпеноиды, сесквитерпеноиды, тритерпеноиды, лигноиды, куркумин и гинсеноссид-Rb1, ингибируют SARS-CoV [12,13]. Недавнее исследование in silico показало, что байкалин, скутелларин, гесперетин, никотианамин и глицирризин способны ингибировать ACE2 [3].Существует широкий спектр эфирных масел, и клинически доказано, что их компоненты обладают противовирусными свойствами [14,15]. Исследование Jackwood et al. [16] обнаружили, что обработка смесью олеорезинов и эфирных масел из растений снижает выраженность клинических признаков и поражений у кур, которые являются переносчиками вируса птичьего инфекционного бронхита (IBV-CoV). Однако влияние растительных эфирных масел на коронавирусы человека еще предстоит изучить. В частности, их влияние на рецепторы клетки-хозяина практически не исследовано.Эфирное масло герани получают из листьев Pelargonium graveolens, который широко используется в косметической промышленности, парфюмерии и ароматерапии [17]. Традиционно эфирное масло герани используется при физиологических и психологических осложнениях, включая тревогу, бессонницу, высокое кровяное давление, беспокойство, гнев, разочарование, беспокойство, нервозность, потерю веса, гиперхолестеринемию, желудочно-кишечные расстройства и инфекции дыхательных путей [18,19 ]. Масло герани представляет собой мощный иммуномодулятор, стимулирует и очищает лимфатическую систему [20].Масло клинически используется для лечения диареи, желтухи, диабета, гепатита, язвенного колита, холецистита и почечных камней [21]. Настоящее исследование было направлено на изучение ингибирующего действия растительных эфирных масел и их основных компонентов на АПФ2 in vitro.

3. Обсуждение

Эфирные масла использовались в народной медицине на протяжении всей истории в качестве основных ингредиентов ароматерапии и психотерапии. Однако современные доклинические исследования показали, что эфирные масла обладают широким спектром фармакологической активности, включая антисептическое, мочегонное, желчегонное, спазмолитическое, гиперемическое, отхаркивающее, успокаивающее, антиоксидантное, противовоспалительное и противоопухолевое действие [22].Фармакологические свойства эфирных масел обусловлены их уникальными основными составляющими, такими как монотерпеноиды, сесквитерпеноиды и фенилпропаноиды. Кроме того, в результате исследований in vitro и контролируемых исследований получены значительные данные о потенциале эфирных масел в качестве противовирусных агентов для лечения вирусных инфекций человека, включая коронавирусы SARS [23]. Эти противовирусные эфирные масла в основном тестировались против вирусов РНК или ДНК с оболочкой, таких как вирус простого герпеса типа 1, вирус Хунина, вирус гриппа, вирус денге типа 2 и коронавирусы SARS, а также вирусы без оболочки, такие как вирус Коксаки B1, полиовирус , и аденовирус типа 3 [22].Большинство этих клинически полезных противовирусных агентов представляют собой вещества, которые действуют на определенных этапах биосинтеза вируса, в частности, ингибируя репликацию вируса. С другой стороны, вирулицидные агенты денатурируют структуру или гликопротеины вируса, тем самым снижая или полностью блокируя инфекционность вирусных частиц [24]. Недавно ACE2 был идентифицирован как функциональный рецептор коронавируса SARS в эпителиальных клетках. В частности, спайковый белок SARS-CoV задействует ACE2 в качестве рецептора входа в клетку и использует клеточную сериновую протеазу TMPRSS2 для прайминга спайкового белка [1].Таким образом, либо ингибирование рецепторов ACE2, либо TMPRSS2 может быть потенциальной мишенью для профилактики SARS-CoV, поскольку ACE2 демонстрирует различные режимы действия фермента и тканевого распределения. Обильная эндогенная экспрессия ACE2 наблюдалась в линиях клеток сердечно-сосудистой системы и толстой кишки, в то время как слабая экспрессия была отмечена в клетках почек [25]. Недавние исследования также подтвердили, что эндогенная экспрессия ACE2 была выше в тканях желудочно-кишечного тракта [26] и клеточных линиях толстой кишки [1], причем в этих отчетах указывается, что экспрессия ACE2 сравнительно выше в тканях кишечника, чем в тканях легких.Поэтому в этом исследовании мы использовали HT-29, линию клеток аденокарциномы толстой кишки, которая эндогенно экспрессирует ACE2, чтобы изучить ингибирующее действие эфирных масел на ACE2. Первоначально мы исследовали цитотоксическое действие эфирных масел на клетки HT-29. Оценка цитотоксичности, несомненно, является важным аспектом оценки сильнодействующего противовирусного агента, поскольку потенциальный агент должен быть селективным в отношении вирусных или клеточно-специфических процессов без какого-либо или ограниченного воздействия на клеточный метаболизм [27].Наши результаты показали, что каждое эфирное масло проявляет дифференциальную цитотоксичность, некоторые из них сильно цитотоксичны, а другие не проявляют цитотоксичности до концентрации 200 мкг / мл. Недавние исследования in silico показали, что сероорганические соединения в эфирном масле чеснока и других природных продуктах, таких как байкалин, скутелларин, гесперетин, никотианамин, глицирризин, (E, E) -α-фарнезен, (E) -β-фарнезен и (E , E) -фарнезол, обладают потенциалом связываться с человеческим рецептором ACE2, тем самым, возможно, блокируя проникновение в клетки SARS-CoV-2 [3,28,29].В одном исследовании оценивалось противовирусное действие семи эфирных масел ливанских видов, включая Laurus nobilis T., Juniperus oxycedrus spp., Против SARS-CoV in vitro. oxycedrus, Thuja orientalis, Cupressus sempervirens spp. pyramidalis, Pistacia palaestina, Salvia officinalis и Satureja tymbra. Среди них эфирные масла плодов L. nobilis, T. orientalis и J. oxycedrus spp. oxycedrus продемонстрировал ингибирование цитопатогенного эффекта, вызванного SARS-CoV, со значениями IC ₅₀ 120 мкг / мл, 130 мкг / мл и 270 мкг / мл соответственно [27].Однако исследований, прямо демонстрирующих ингибирующее действие эфирных масел или их основных соединений на АПФ2 in vitro или in vivo, не проводилось. В этом исследовании мы проверили ингибирующее действие 10 эфирных масел на ACE2; среди них 8 эфирных масел продемонстрировали значительное ингибирование ACE2. Интересно, что эфирные масла герани и лимона сильно подавляли активность ACE2, не проявляя цитотоксичности. Насколько нам известно, это первый отчет, показывающий, что эфирные масла герани и лимона и их основные компоненты цитронеллол, гераниол, лимонен, линалоол и нерилацетат подавляют активность рецептора ACE2 в вирусных эпителиальных клетках хозяина.

4. Материалы и методы

4.1. Химические вещества и реагенты

Все эфирные масла были предоставлены компанией Bio-Jourdeness International Group Co. Ltd. (Тайчжун, Тайвань). Цитронеллол, гераниол, нерилацетат и лимонен были получены от Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. (Токия, Япония). Чистота этих соединений была выше 99%, согласно анализу ГХ и ^-1 H-ЯМР. Среда Маккой, фетальная бычья сыворотка (FBS), пируват натрия, пенициллин и стрептомицин были получены от Invitrogen (Карлсбад, Калифорния, США).3- (4,5-Диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолий бромид (МТТ) и диметилсульфоксид (ДМСО) были приобретены у Sigma-Aldrich. Антитело против ACE2 было получено от Arigo Biolaboratories (Синьчжу, Тайвань). Антитело против GAPDH было получено от Cell Signaling Technology Inc. Все другие химические вещества были реактивными или для ВЭЖХ и были поставлены либо Merck, либо Sigma-Aldrich.

4.2. Клеточная культура и анализ жизнеспособности клеток

Клеточную линию колоректальной аденокарциномы человека (HT-29) культивировали и поддерживали в среде МакКоя с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, 1% L-глутамина и 1% пенициллина / стрептомицина.Жизнеспособность клеток оценивали с помощью колориметрического анализа МТТ. Вкратце, клетки HT-29 высевали в 48-луночный культуральный планшет с плотностью 5 × 10 ⁴ клеток на лунку. После 24-часовой инкубации мы обрабатывали клетки возрастающими концентрациями эфирных масел в течение 48 часов. Супернатант культуры удаляли и добавляли 1 мг / мл МТТ в 0,1 мл свежей среды. Кристаллы формазона МТТ растворяли в 0,4 мл ДМСО и образцы измеряли при 570 нм (A ₅₇₀ ) с использованием устройства для считывания микропланшетов ELISA (Bio-Tek Instruments, Winooski, VT).Процент жизнеспособности клеток (%) рассчитывали как (A ₅₇₀ обработанных клеток / A ₅₇₀ необработанных клеток) × 100.

4.3. Определение активности ACE2

Активность ACE2 клеток измеряли с использованием коммерчески доступного набора для ELISA человеческого ACE2 (Elabscience Biotechnology Inc., Hubei, China). Вкратце, клетки HT-29 высевали в 10-сантиметровую чашку для культивирования клеток с плотностью 2 × 10 ⁶ клеток на лунку. Через 48 часов мы обрабатывали клетки селективной дозой (нецитотоксическая высокая концентрация) эфирных масел или производных соединений в течение следующих 48 часов.Затем клетки осторожно промывали предварительно охлажденным фосфатно-солевым буфером (PBS), и мы диссоциировали клетки, используя трипсин. Суспензию клеток центрифугировали 5 мин при 1000 × g. Затем клетки лизировали смесью буфера для анализа радиоиммунной преципитации (RIPA) (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и реагента для экстракции трансмембранного белка (Fivephoton Biochemical, Сан-Диего, Калифорния, США) в соотношении 1: 1, с последующим центрифугированием в течение 10 мин при 1500 × g при 4 ° C. Концентрацию белка определяли реагентом для анализа белков Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA).Равные количества образцов белка (100 мкг / лунку) анализировали в соответствии с протоколом производителя. Оптическую плотность (значение OD) каждого образца определяли при 450 нм (A ₄₅₀ ) с использованием считывающего устройства для микропланшетов ELISA (Bio-Tek Instruments). Процент активности ACE2 (%) рассчитывали как (A ₄₅₀ обработанных клеток / A ₄₅₀ необработанных клеток) × 100.

4.4. Определение белка ACE2.

Клетки HT-29 высевали в чашку 10 см при плотности 2 × 10 ⁶ клеток на чашку.Через 24 ч клетки подвергали воздействию тестовых образцов в течение 48 ч. Клеточные и мембраносвязанные белки выделяли с помощью смеси буфера для лизиса RIPA и реагента для экстракции трансмембранного белка. Концентрацию белка определяли с помощью реагента для анализа белка Bio-Rad. Равные количества образцов денатурированного белка (60 мкг) разделяли с помощью 10% SDS-PAGE, и разделенные белки переносили на мембрану из поливинилидендифторида (PVDF) в течение ночи. Затем мембраны блокировали 5% обезжиренным сухим молоком в течение 30 минут с последующей инкубацией с антителами ACE2 или GAPDH в течение ночи, а затем инкубировали либо с конъюгированными с пероксидазой хрена козьими анти-кроличьими или антимышиными антителами в течение 1 часа.Иммуноблоты были разработаны с использованием реагентов повышенной хемилюминесценции (ECL) (Advansta Inc., Сан-Хосе, Калифорния, США), изображения были получены с помощью стыковочной системы CheniDoc XRS ⁺ , а полосы белка были количественно определены с помощью программного обеспечения Imagelab (Bio-Rad лаборатории, Геркулес, Калифорния, США).

4.5. Количественная ПЦР в реальном времени.

Тотальную РНК экстрагировали с помощью набора для очистки тотальной РНК (GeneMark, New Taipei City, Тайвань). Концентрацию РНК количественно определяли с помощью спектрофотометра NanoVue Plus (GE Health Care Life Sciences, Чикаго, Иллинойс, США).Количественная ПЦР (qPCR) была проведена с использованием системы обнаружения ПЦР в реальном времени и программного обеспечения (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Комплементарная ДНК первой цепи (кДНК) была создана с помощью набора для обратной транскриптазы SuperScript III (Invitrogen). Количественную оценку экспрессии мРНК для представляющих интерес генов выполняли реакциями кПЦР с равным объемом кДНК, прямым и обратным праймерами (10 мкМ) и мощной смесью SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems, Foster city, CA, USA). Последовательность праймеров для ПЦР была следующей: ACE2: прямой 5′-GCTGCTCAGTCCACCATTGAG-3 ‘, обратный 5′-GCTTCGTGGTTAAACTTGTCCAA-3′; TMPRSS2: прямой 5’-AATCGGTGTGTTCGCCTCTAC-3 ‘, обратный 5′-GCGGCTGTCACGATCC-3′; GAPDH: прямой 5’-TCCTGGTATGACAACGAAT-3 ‘, обратный 5′-GGTCTCTCTCTTCCTCTTG-3’ [30].Количество копий каждого транскрипта рассчитывали как относительное количество копий, нормализованное по количеству копий GAPDH.

4.6. Анализ ГХ – МС

Для определения состава эфирного масла мы провели анализ с использованием масс-спектрометра ITQ 900, соединенного с колонкой DB-5MS. Температурная программа была следующей: 45 ° C в течение 3 минут, затем увеличивалась до 3 ° C / мин до 180 ° C, а затем увеличивалась до 10 ° C / мин до 280 ° C, выдерживалась в течение 5 минут. Другими параметрами были температура впрыска 240 ° C; температура ионного источника 200 ° C; EI, 70 эВ; газ-носитель He 1 мл / мин; диапазон сканирования массы 40–600 m / z.Летучие соединения были идентифицированы Реестром масс-спектральных баз данных Wiley / NBS (V. 8.0, Хобокен, Нью-Джерси, США), Национальным институтом стандартов и технологий (NIST) Ver. 2.0 ГХ / МС библиотеки и индексы Ковата были рассчитаны для всех летучих компонентов с использованием гомологического ряда н-алканов C ₉ -C ₂₄ . Основные компоненты были идентифицированы путем совместной инъекции со стандартами (где это возможно).

4,7. Статистический анализ

Данные выражены как среднее ± стандартное отклонение.Все данные анализировали с помощью статистической программы Graphpad Prism версии 6.0 для Windows (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США). Статистический анализ проводился с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Даннета для множественного сравнения. Значения p менее 0,05 *, 0,01 **, 0,001 *** и 0,0001 **** считались статистически значимыми для группы обработки образца по сравнению с контрольной группой.

Как приготовить масло туи от бородавок и кожных бирок

Взгляните на мое видео, где я покажу вам, как приготовить масло туи от бородавок и кожных меток.

Подпишитесь на мой видеоканал на YouTube здесь.

У вас есть бородавка или кожный налет, от которого вы пытались избавиться?

В гомеопатии существует множество гомеопатических средств от бородавок:

• Кровоточащие бородавки
• Это сложно
• Плоские

Существует гомеопатическое средство под названием Thuja, которое может покрыть ВСЕ эти различные характеристики бородавок.

Гомеопатические средства от бородавок обычно принимают перорально.

В течение последних 30 лет я рекомендовал своим клиентам наносить масло туи местно на бородавки и даже на кожные бирки.

Расходные материалы, необходимые для приготовления масла туи:

• Thuja 30c пеллеты
• Два бумажных стаканчика
• Небольшое количество воды (желательно родниковой или дистиллированной)
• Мерная ложка (лучше столовая)
• Емкость для хранения масла туи в
• Оливковое масло первого холодного отжима
• Ложка одноразовая
• Ручка
• Этикетка
• Лента

Сначала налейте пару капель воды в одну из одноразовых чашек.Затем добавьте одну или две гранулы туи в воду и оставьте гранулы.

Чем крупнее гранулы, тем больше времени потребуется на растворение.

Пока жду, смешаю оливковое масло. В другой бумажный стаканчик налейте 1 столовую ложку масла.

Масло туи имеет большое значение, поэтому вам не нужно много.

Налейте в масло небольшое количество воды и раствора туи. Возьмите одноразовую ложку и аккуратно перемешайте.

Тогда я вылью его в свой контейнер.

Последнее, что вам нужно сделать, это маркировать масло туи.

Чтобы нанести масло туи на бородавку или кожную метку, вам нужно нанести небольшое количество ее непосредственно на бородавку или кожную метку.

Небольшое количество масла имеет большое значение.

Мне также нравится использовать гель алоэ вера хорошего качества.

Сначала я нанесу масло туи, а затем одну или две капли алоэ вера поверх туи.

Чтобы перемешать, сделайте 36 кругов указательным пальцем вокруг бородавки или кожного пятна.

Если у вас несколько бородавок или кожных меток, вы можете взять два или три пальца и обработать всю область вместо того, чтобы делать по одному пятну за раз.

Вы хотите применять масло туи один раз в день.

Я предпочитаю делать это перед сном, чтобы масло не попало на кожу в течение дня.

Применяйте масло туи один раз в день перед сном в течение нескольких недель.

Вы хотите быть последовательными в этом.

Что произойдет, так это то, что масло туи и алоэ вера будут действовать, и бородавка будет становиться все меньше и меньше.

Вы перейдете к маленькому черному пятнышку. Что-то вроде маленького семечка черного кунжута. Это корень бородавки. Увидев это, продолжайте наносить масло туи и алоэ вера.

В конце концов, это маленькое пятнышко тут же рассыпется.

Теперь вы полностью вылечили бородавку и позаботились о ней!

Что касается скин-тега, вы будете постоянно его крутить, и он будет либо тереться, либо скручиваться сразу.