Интерферон капли назальные: Ингарон капли в нос – профилактика и лечение ОРВИ, гриппа, гриппа H5N1, гриппа H1N1

Ингарон капли в нос – профилактика и лечение ОРВИ, гриппа, гриппа H5N1, гриппа h2N1

Состав:
Активные вещества: интерферон гамма — 100000 МЕ (5,5±0,5). Вспомогательные вещества: маннит.

Отпускается
без рецепта

Хранить
в холодильнике

О препарате

ИНГАРОН® (интерферон гамма, 100 000 МЕ) интерферон гамма человеческий рекомбинантный (иммунный интерферон) обладает иммуностимулирующим и противовирусным действием: способствует формированию устойчивости клеток к воздействию вирусов. Ингарон — эффективно стимулирует иммунитет и обеспечивает надежную защиту от гриппа, в том числе гриппа H5N1 и h2N1.

Препарат вводиться интраназально (капли в нос)

• Единственный препарат интерферона гамма в РФ
• 
  Включен в перечень ЖНВЛП
• 
  Включен в стандарты специализированной медицинской помощи при гриппе средней и тяжёлой степени тяжести ОРВИ тяжёлой степени тяжести, клинические рекомендации по гриппу и ОРВИ
• 
  Активен в отношении широкого спектра вирусных инфекций
• 
  Потенцирует активность многих противовирусных препаратов, применяемых в комплексной терапии ОРВИ и гриппа
• 
  Лекарственная устойчивость к препарату ИНГАРОН® не развивается
• Единственный препарат интерферона гамма в РФ¹
• Включен в перечень ЖНВЛП ²
• Включен в стандарты специализированной медицинской помощи при гриппе средней³ и тяжёлой⁴ степени тяжести, ОРВИ тяжёлой степени тяжести⁵ , клинические рекомендации по гриппу и ОРВИ
• Активен в отношении широкого спектра вирусных инфекций ⁶
• Потенцирует активность многих противовирусных препаратов, применяемых в комплексной терапии ОРВИ и гриппа ⁷
• Лекарственная устойчивость к препарату ИНГАРОН® не развивается⁸

1 По данным http://grls. rosminzdrav.ru на 20.07.2015

2 Приложение №1 к распоряжению Правительства Российской Федерации от 30 декабря 2014 г. №2782-р

3 Приложение к приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации от 9 ноября 2012 г. №724

4 Приложение к приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации от 9 ноября 2012 г. №842н

5 Приложение к приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации от 7 ноября 2012 г. №657н

6 Кисилёв О.И., Ершов Ф.И., Деева Э.Г. Интерферон-гамма: новый цитокин в клинической практике. Ингарон®. Москва – Санкт-Петербург, 2007, с. 51-52.

7 Изучение in vitro вирусингибирующей активности противовирусных препаратов в отношении вируса гриппа А/Калифорния/07/09 (h2N1), НИИ гриппа СЗО РАМН, Санкт-Петербург, 2009.

8 Отчёт о результатах рандомизированного, плацебоконтролируемого исследования по оценке эффективности и переносимости препарата ИНГАРОН® (интерферон гамма человеческий рекомбинантный)

Форма выпуска, состав и упаковка

Лиофилизат для приготовления раствора для интраназального введения во флаконах по 100 000 МЕ на 1 флакон. По 1 флакону препарата в комплекте с 1 ампулой растворителя 5 мл и с 1 крышкой-капельницей из полиэтилена в полиэтиленовом пакете или пипеткой медицинской в контурную ячейковую упаковку или в кассетную контурную упаковку.

По 1 или 5 контурных упаковок с инструкцией по применению упаковывают в пачки из картона.

По 1 или 5 флаконов препарата в комплекте соответственно с 1 или 5 крышками-капельницами из полиэтилена в полиэтиленовом пакете или пипетками медицинскими и инструкцией по применению упаковывают в пачки из картона.

Показания к применению

Профилактика и лечение (в составе комплексной терапии) гриппа. Профилактика и лечение (в составе комплексной терапии) гриппа H5N1 и h2N1.

Противопоказания

Индивидуальная непереносимость интерферона гамма или любого другого компонента препарата. Беременность. Детский возраст (младше 7 лет).

Интерферон. Иммуномодулирующий препарат с противовирусным действием

Генферон Лайт спрей с интерфероном и таурином для лечения и профилактики гриппа и ОРВИ

Генферон® Лайт спрей — единственный противовирусный назальный спрей для лечения и профилактики ОРВИ и гриппа с максимальной* дозой активного вещества для взрослых и детей с 14 лет. Разрешено к применению у беременных женщин.

Генферон® Лайт спрей — максимум* в 1 дозе. Комфортно, современно, удобно.

Преимущества препарата:

• Активно борется с вирусами и бактериями в месте их вторжения — полости носа
• Обладает универсальным противовирусным действием
• Активирует защитный местный иммунитет
• Содержит глицерол**, известный своими увлажняющими свойствами^1,2
• Содержит масло мяты**

Награды и исследования:

• Генферон® Лайт — единственная в России комбинация интерферона и таурина*** для лечения и профилактики ОРВИ и гриппа
• Генферон® Лайт прошел испытания в 9 крупных клинических исследованиях на 1579 пациентах

Преимущества формы выпуска:

• Дозированная насадка-распылитель Генферон® Лайт в форме спрея обеспечивает комфортное использование и точность дозы: 1 нажатие — 1 доза 50 тыс. МЕ препарата
• Генферон® Лайт в форме спрея обеспечивает мелкодисперсное («туманообразное») распыление препарата для создания равномерного распределения по всей поверхности носоглотки, помогая блокировать вирусное вторжение
• Специальная конструкция флакона с насосом обеспечивает полное использование противовирусного средства без остатка
• Экономичность спрея Генферон® Лайт: в одном флаконе противовирусного спрея содержится 100 доз. Можно использовать в течение нескольких эпизодов простудных заболеваний или для профилактики в течение всего простудного сезона
• Использовать вскрытый флакон Генферон® Лайт можно до конца срока годности препарата
• Можно сочетать с другими лекарственными средствами (симптоматическими, этиотропными)
• Для формы спрея не характерны побочные эффекты со стороны желудка, свойственные пероральным лекарственным средствам

Другие формы выпуска

Гриппферон – ФИРН М

Гриппферон, капли в нос и спрей — эффективный и безопасный препарат для профилактики и лечения острых респираторных вирусных инфекций (ОРЗ, ОРВИ) и гриппа.

Он разрешен к применению даже детям до года (включая новорожденных) и беременным женщинам. Основным действующим началом Гриппферона является высокоактивный рекомбинантный (полученный генно-инженерным способом) интерферон альфа-2b.

Препарат абсолютно безопасен по вирус контаминации, что очень важно в век широкого распространения гепатитов В, С, D, ВИЧ, ЦМВ и других передающихся через кровь инфекций.

Гриппферон сократит длительность простуды или гриппа в 3—5 раз.

Механизм действия интерферона (Гриппферона) основан на предотвращении размножения любых вирусов, попадающих в организм через дыхательные пути. Уже на второй день применения Гриппферона у больного значительно сокращается количество выделяемых при дыхании вирусов, и, соответственно, уменьшается риск заражения контактировавших с ним людей. В отличие от других препаратов интерферона Гриппферон предотвращает размножение вирусов в слизистой носа, то есть там, где они проникают в организм.

Гриппферон не имеет аналогов на мировом рынке и превосходит все другие препараты по универсальности воздействия на острую респираторную вирусную инфекцию:

• Блокирует размножение всех видов человеческих респираторных вирусов;
• Обладает высокой лечебной эффективностью;
• Высокоэффективен как препарат экстренной профилактики;
• Отсутствует эффект привыкания к действию препарата;
• Вирусы неспособны приобрести устойчивость к действию Гриппферона (интерферон не взаимодействует с вирусами, он блокирует механизм их воспроизведения);
• Нетоксичен и безопасен;
• Разрешен к применению детям с рождения и беременным женщинам;
• На 60−70% снижает количество осложнений у больных с острой респираторной инфекцией;
• На 50−70% снижает количество принимаемых больным медикаментов;
• Не имеет противопоказаний по совместимости с другими лекарственными средствами, включая противовирусные препараты;
• Может использоваться совместно с вакцинопрофилактикой;
• В десятки раз уменьшает количество вирусов выделяемых из носа у больных острой респираторной инфекцией (аналог повязки), то есть значительно снижает заразность больного;
• Обладает выраженным противоэпидемическим эффектом.

Какие вирусы вызывают ОРВИ и грипп?

На сегодняшний день известно более 2000 серотипов вируса гриппа и более 200 видов других респираторных вирусов (каждый из них также может иметь сотни разновидностей). И любой из этих вирусов может стать причиной ОРВИ. Во время «эпидемии гриппа» собственно гриппом болеет от 10 до 25% инфицированных. Остальные 90−75% больных страдают от других респираторных заболеваний, против которых вакцинация и средства от гриппа не защищают. А последствия этих недугов, особенно для ослабленного организма, могут быть не менее губительными, чем при гриппе. Гриппферон воздействует не только на вирус гриппа, но и на другие респираторные вирусы.

Противовирусное действие Гриппферона

В экспериментальных исследованиях показано выраженное противовирусное действие Гриппферона на:

• Все штаммы человеческого вируса гриппа, в том числе на h2N1: исследования проводились на штаммах А/Красноярск/18/05 ^(h2N1), А/СПб/03/05 ^(h2N1), А/Красноярск/8/05 ^(h2N1), А/Новосибирск/5/05 ^(h2N1);
• Аденовирус человека AdV 6;
• Респираторно-синцитиальный вирус, штамм Rendall;
• Коронавирус человека HCoV/SPb/01/03 ^(229E). Один из штаммов этого вируса вызвал эпидемию атипичной пневмонии ^(SARS);
• Вирус краснухи, штамм «Орлов»;
• Вакцинный штамм вируса кори «Эдмонстон»;
• Вакцинный штамм вируса эпидемического паротита Л-3;
• Вирус парагриппа 2 типа, штамм ПГ2/СПб5/11/03;
• Вирус птичьего гриппа: A/Duck/Singapore/R/F119−3/97 ^(H5N2);
• Летальный штамм птичьего гриппа: A/курица/Курган/Россия/2/2005 ^(H5N1).

Гриппферон включен в России в список препаратов государственного резерва на случай эпидемии «птичьего гриппа».

Показания к применению

1. Профилактика и лечение ОРВИ, гриппа, простудных заболеваний:
   • у детей от рождения и взрослых, включая беременных женщин;
   • у пациентов, часто и длительно болеющих заболеваниями верхних дыхательных путей;
   • у людей, склонных к аллергическим реакциям; при контакте с больными ОРВИ и гриппом;
   • при переохлаждении.
2. Профилактика ОРВИ и гриппа в организованных коллективах (детских и взрослых), среди контингентов «риска» — мед. работников, учителей и т. п., особенно в период эпидемии.
3. Экстренная профилактика гриппа и ОРВИ. В отличие от вакцины, создающей долговременную резистентность к определенным штаммам вируса гриппа, Гриппферон применяется преимущественно в тех случаях, когда есть реальная угроза заболевания острой респираторной инфекцией (при тесном контакте с больным, во время эпидемии, при простуде и т. д.), то есть для экстренной профилактики. Однократный прием препарата для индивидуальной экстренной профилактики во много раз снижает опасность заболевания.
4. Профилактика и лечение «птичьего гриппа».

Способ применения

При первых признаках заболевания гриппом, ОРВИ Гриппферон закапывают в нос в течение 5 дней:

0−1

В возрасте от 0 до года по 1 капле в каждый носовой ход 5 раз в день

1−3

В возрасте от 1 до 3 лет по 2 капли в каждый носовой ход 3 раза в день

3−14

В возрасте от 3 до 14 лет по 2 капли в каждый носовой ход 4 раза в день

>14

Взрослым по 3 капли в каждый носовой ход через 3−4 часа

• Для профилактики препарат закапывают в возрастной дозировке 1−2 раза в день на протяжении контакта с больным. При необходимости профилактические курсы повторяют.
• После каждого закапывания рекомендуется помассировать пальцами крылья носа в течение нескольких минут для равномерного распределения препарата в носовой полости.

При применении Гриппферона нет необходимости в сосудосуживающей терапии, он сам снимает отек слизистой. Гриппферон разрешен к применению в течение всего периода беременности в соответствии с возрастной дозировкой.

Стоит один раз закапать Гриппферон — и опасность «подхватить» простуду или грипп снижается во много раз.

Лечение Гриппфероном при появлении самых первых признаков заболевания ведет к снятию или значительному ослаблению основных его симптомов (насморка, кашля, температуры, головной боли, гиперемии носоглотки и т. д.).

В среднем, продолжительность заболевания сокращается на 30−50%. Гриппферон в неосложненных случаях не требует дополнительного симптоматического лечения (аспирин, панадол, сульфаниламиды, сосудосуживающие капли в нос).

При повышенной температуре Гриппферон сочетается с жаропонижающими лекарственными средствами.

Применение Гриппферона в несколько раз снижает риск возникновения осложнений — бронхитов, синуситов, пневмоний и т. д. Использование препарата с профилактической целью в период эпидемии в организованных коллективах снижает уровень заболеваемости в 3 раза, а в группах риска до 5 раз.

Гриппферон (Grippferon): описание, рецепт, инструкция

Grippferon

Аналоги (дженерики, синонимы)

Интерферон, Лаферобион, Назоферон, Инферон, Локферон

Действующее вещество

Интерферон альфа-2b (Interferonum alpha-2b )

Фармакологическая группа

Интерфероны

Рецепт

Международный:

Rp.: Grippferoni 10 000 МЕ — 5 ml
D.t.d. № 1
S. по 1 капле в каждый носовой ход 5 раз в день (разовая доза 1000 ME , суточная доза 5000 ME )

Россия:

Отпускается без рецепта

Фармакологическое действие

Препарат обладает иммуномодулирующим, противовоспалительным и противовирусным действием.

Способ применения

Для взрослых:

При первых признаках заболевания применяют в течение 5 дней:
— в возрасте от 0 до 1 года — по 1 капле в каждый носовой ход 5 раз в день (разовая доза 1000 ME , суточная доза 5000 ME )
— в возрасте от 1 до 3 лет — по 2 капли в каждый носовой ход 3-4 раза в день (разовая доза 2000 ME , суточная доза 6000-8000 ME )
— в возрасте от 3 до 14 лет — по 2 капли в каждый носовой ход 4-5 раз в день (разовая доза 2000 ME , суточная доза 8000-10000 ME )
— взрослым -по 3 капли в каждый носовой ход 5-6 раз в день (разовая доза 3000 ME , суточная доза 15000-18000 ME ).
С целью профилактики ОРВИ и гриппа:
— при контакте с больным и/или при переохлаждении препарат закапывают в разовой возрастной дозе 2 раза в день. При необходимости профилактические курсы повторяют;
— при сезонном повышении заболеваемости препарат закапывают в возрастной дозе однократно утром с интервалом 24-48 часов.
После каждого закапывания рекомендуется помассировать пальцами крылья носа в течение нескольких минут для равномерного распределения препарата в носовой полости.

Показания

— Профилактика и лечение гриппа и ОРВИ у детей и взрослых.

Противопоказания

— индивидуальная непереносимость препаратов интерферона и компонентов, входящих в состав препарата;
— тяжелые формы аллергических заболеваний.

Побочные действия

— Аллергические реакции

Форма выпуска

Капли назальные 10 тыс. МЕ/1 мл: фл. 5 мл или 10 мл
Капли назальные в виде прозрачного, бесцветного или светло-желтого раствора.
1 мл:
интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный не менее 10 000 МЕ
Вспомогательные вещества: динатрия эдетата дигидрат — 0.5 мг, натрия хлорид — 4.1 мг, натрия гидрофосфата додекагидрат — 11.94 мг, калия дигидрофосфат — 4.54 мг, повидон 8000 — 10 мг, макрогол 4000 — 100 мг, вода очищенная — до 1 мл.

5 мл — флаконы пластиковые с капельницей (1) — пачки картонные.
10 мл — флаконы пластиковые с капельницей (1) — пачки картонные

Тамбовское областное государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Городская больница №2 города Мичуринска»

инструкция по применению. Официальный сайт

Состав:

действующее вещество: interferon alfa-2b;

1 мл препарата содержит интерферона альфа-2b рекомбинантного человека 100 000 МЕ
Вспомогательные вещества: трометамол, трометамола гидрохлорид, гипромеллоза, натрия эдетат, лизина гидрохлорид, калия хлорид, метилпарагидроксибензоат (Е 218), вода для инъекций.

Лекарственная форма. Капли назальные.

Основные физико-химические свойства: прозрачная бесцветная жидкость.

Фармакологическая группа. Интерфероны. Код АТХ L03A В05.

Фармакологические свойства. ЛАФЕРОБИОН — противовирусное, противомикробное, противовоспалительное и иммуномодулирующее средство. Биологическое действие интерферона характеризуется следующими эффектами: — подавляет репликацию вирусов (аденовирусов, вирусов гриппа и др.) За счет ингибирующего действия на процессы транскрипции и трансляции; антипролиферативным — угнетает размножение клеток (большинства ДНК и РНК-содержащих вирусов) иммуномодуляция — усиление фагоцитарной активности макрофагов и специфической цитотоксичности лимфоцитов относительно клеток-мишеней. Интерферон инициирует синтез специфического фермента — протеинкиназы, которая препятствует трансляции благодаря фосфорилированию одного из инициирующих факторов этого процесса; активизирует специфическую, рибонуклеаза, которая повреждает матричную РНК вируса. К эффектам интерферона относятся также: стимуляция продукции других цитокинов, индукция специфических ферментов.

Клинические характеристики.

Показания.

Профилактика и лечение острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ):

— у пациентов, часто и длительно страдающих заболеваниями верхних дыхательных путей;

— при контакте с больными ОРВИ;

— при переохлаждении;

— при сезонном повышении заболеваемости.

Противопоказания. Повышенная чувствительность к интерферону альфа-2b и другим компонентам, входящим в состав препарата, тяжелые формы аллергических заболеваний в анамнезе, применение во время беременности и в период кормления грудью.

Взаимодействие с другими лекарственными средствами и другие виды взаимодействий. Не рекомендуется одновременное применение интраназальных сосудосуживающих препаратов, поскольку они способствуют сухости слизистой оболочки носа.

Особенности применения. Препарат содержит метилпарагидроксибензоат, который может вызывать аллергические реакции, в том числе отсроченные, в исключительных случаях бронхоспазм.

Не следует применять препарат при нарушении целостности и маркировки упаковки, при изменении физических свойств (цвета или прозрачности жидкости) и после истечения срока годности.

Во избежание распространения инфекции, рекомендуется индивидуальное использование флакона. Избегать попадания препарата на слизистую оболочку глаз.

Применение в период беременности или кормления грудью. Применение противопоказано.

Способность влиять на скорость реакции при управлении автотранспортом или другими механизмами. Не влияет.

Способ применения и дозы.

Препарат вводят в каждый носовой ход.

Перед применением препарата необходимо принять положение лежа на спине или сидя, отклонить слегка голову назад и повернуть в сторону того носового хода, в который будет проводиться закапывание капель. Не затрагивая капельницей флакона внутренних стенок носа, закапать препарат. Сразу после закапывания для равномерного распределения препарата по слизистой оболочке носа рекомендуется извне помассировать пальцами крылья носа в течение нескольких минут.

При первых признаках заболевания ОРВИ (в течение 5 дней)

Взрослым — по 3 капли в каждый носовой ход 5-6 раз в день (разовая доза — 24 000 МЕ, суточная доза 120 000-144 000 МЕ).

Дети. Новорожденным и детям до 1 года — по 1 капле в каждый носовой ход 5 раз в день (разовая доза — 8000 МЕ, суточная доза — 40 000 МЕ).

Детям в возрасте от 1 до 3 лет — по 2 капли в каждый носовой ход 3-4 раза в день (разовая доза — 16 000 МЕ, суточная доза — 48 000 МЕ-64000 МЕ).

Детям в возрасте от 3 до 14 лет — по 2 капли в каждый носовой ход 4-5 раз в день (разовая доза — 16 000 МЕ, суточная доза — 64000-80000 МЕ).

Детям в возрасте от 14 до 18 лет — по 3 капли в каждый носовой ход 5-6 раз в день (разовая доза — 24000 МЕ, суточная доза — 120000-144000 МЕ).

Для профилактики респираторных вирусных инфекций взрослым.

При контакте с больным и при переохлаждении — по 3 капли 2 раза в день в течение 5-7 дней. При необходимости профилактические курсы повторяют. При однократном контакте достаточно однократного применения.

При сезонном повышении заболеваемости — однократно утром с интервалом 1-2 суток.

Дети. Препарат применяют детям с рождения при первых признаках заболевания ОРВИ.

Передозировки. Не исследовались.

Побочные реакции.

В единичных случаях — кожная сыпь.

В случае появления нежелательных реакций следует проконсультироваться с врачом.

Срок годности. 2 года. Срок годности после вскрытия флакона, при условии хранения при температуре от 2 до 8° С — 10 суток.

Условия хранения. Хранить в оригинальной упаковке для защиты от действия света при температуре от 2 до 8 ° С.

Хранить в недоступном для детей месте.

Упаковка. По 5 мл во флаконе, закупоренном микродозатором-капельницей; по 1 флакону в пачке из картона.

Категория отпуска. Без рецепта.

Производитель. ООО «ФЗ« БИОФАРМА », Украина.

Местонахождение производителя и его адрес места осуществления деятельности.
Украина, 09100, Киевская обл., г. Белая Церковь, ул. Киевская, 37.

Детальнее о производителе

Экспериментальное испытание назальных капель рекомбинантного человеческого интерферона альфа для предотвращения COVID-19 у медицинского персонала в зоне эпидемии

Резюме

Цель Изучить эффективность и безопасность назальных капель рекомбинантного человеческого интерферона альфа (rhIFN-α) в здоровый медицинский персонал для профилактики коронавирусной болезни 2019 (COVID-19).

Методы Проспективное открытое исследование было проведено 21 января 2020 г. в больнице Тайхэ в городе Шиянь, провинция Хубэй. Всего было набрано 2944 медицинских сотрудника и отнесено к группе низкого или высокого риска в зависимости от того, подвергались ли они непосредственному контакту с пациентами с COVID-19. Участники группы низкого риска получали назальные капли с rhIFN-α (2–3 капли / ноздрю / раз, 4 раза / сут) в течение 28 дней с защитой первого уровня; пациенты из группы высокого риска получали идентичные назальные капли с rhIFN-α в сочетании с тимозином-α1 (1,6 мг, подкожная инъекция, один раз в неделю) вместе с защитой вторичного или третьего уровня.Первичным исходом был новый COVID-19 в течение 28 дней. Вторичным исходом была новая лихорадка или респираторные симптомы, но с негативным изображением легких. Результаты сравнивались с впервые выявленным COVID-19 у медицинского персонала в провинции Хубэй (включая Ухань) за тот же период. Также наблюдались побочные реакции на назальные капли с интерфероном.

Результаты Среди 2944 участников нашего исследования 2415 были включены в группу низкого риска, в том числе 997 врачей и 1418 медсестер со средним возрастом 37 лет. 38 и 33,56 года соответственно; В группу высокого риска вошли 529 человек, в том числе 122 врача и 407 медсестер со средним возрастом 35,24 и 32,16 года соответственно. Заболеваемость COVID-19 через 28 дней была равна нулю как в группах высокого, так и в группе низкого риска. 28-дневная частота новых клинических симптомов с негативными изображениями пневмонии также была нулевой в группах высокого и низкого риска. В качестве контроля в период с 21 января по 23 февраля 2020 года наблюдались в общей сложности 2035 медицинских работников с подтвержденным COVID-19 из того же района (провинция Хубэй).В ходе нашего исследования серьезных побочных эффектов не наблюдалось.

Заключение В этом открытом исследовании, инициированном исследователем, мы обнаружили, что назальные капли с rhIFN-α могут эффективно предотвращать COVID-19 у медицинского персонала в качестве дополнительной защиты на основе стандартной физической изоляции. Наши результаты также показывают, что назальные капли с rhIFN-α потенциально могут защитить восприимчивых здоровых людей во время пандемии коронавируса.

Заявление о конкурирующем интересе

Авторы заявили об отсутствии конкурирующего интереса.

Клиническое испытание

NCT04320238

Отчет о финансировании

Эта работа была поддержана Национальным крупным проектом в области науки и технологий (грант № 2018ZX10723203 и 2018ZX10302206).

Заявления автора

Все соответствующие этические нормы были соблюдены; все необходимые разрешения IRB и / или комитета по этике были получены, а сведения об IRB / надзорном органе включены в рукопись.

Да

Получено все необходимое согласие пациента / участника и заархивированы соответствующие институциональные формы.

Да

Я понимаю, что все клинические испытания и любые другие проспективные интервенционные исследования должны быть зарегистрированы в одобренном ICMJE реестре, таком как ClinicalTrials.gov. Я подтверждаю, что любое такое исследование, указанное в рукописи, было зарегистрировано и предоставлен регистрационный идентификатор испытания (примечание: при публикации проспективного исследования, зарегистрированного ретроспективно, просьба предоставить заявление в поле идентификатора испытания, объясняющее, почему исследование не было зарегистрировано заранее) .

Да

Я выполнил все соответствующие инструкции по составлению отчетов об исследованиях и загрузил соответствующие контрольные списки отчетов по исследованиям сети EQUATOR и другие соответствующие материалы в качестве дополнительных файлов, если применимо.

Да

Сноски

• Грантовая поддержка: Эта работа была поддержана Национальным крупным проектом в области науки и технологий (гранты № 2018ZX10723203 и 2018ZX10302206).

• Раскрытие информации: Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

Доступность данных

В статью включены данные, использованные для подтверждения выводов этого исследования.

Интраназальное введение альфа-интерферона снижает заболеваемость хорьками сезонным вирусом гриппа A

РЕЗЮМЕ

Реакция интерферона типа I (IFN) представляет собой одну из первых линий защиты от инфекций, вызванных вирусом гриппа.В этом исследовании мы оценили защитный потенциал экзогенного IFN-α против сезонных и высокопатогенных вирусов гриппа у хорьков. Интраназальное лечение IFN-α за несколько часов до инфицирования штаммом вируса гриппа A h2N1 A / USSR / 90/77 снижало титры вируса при промывании носа по крайней мере в 100 раз по сравнению с контрольными препаратами, получавшими имитацию лечения. У животных, получавших IFN, развились только легкие и преходящие респираторные симптомы, а характерный пик лихорадки, наблюдаемый у хорьков, получавших имитацию, через 2 дня после заражения, не наблюдался.Повторное применение ИФН-α существенно усиливало защитный эффект лечения цитокинами. IFN-α не увеличивал выживаемость после инфицирования высокопатогенным штаммом вируса птичьего гриппа A H5N1 A / Vietnam / 1203/2004. Однако титры вирусов в смывах для носа были значительно снижены на 1 и 3 дни после инфицирования. Наше исследование показывает, что интраназальное введение IFN-α может защитить хорьков от сезонных вирусов гриппа, которые размножаются в основном в верхних дыхательных путях, но не от высокопатогенных вирусов гриппа, которые также распространяются в легкие. Основываясь на этих результатах, необходима более интенсивная оценка IFN-α как средства экстренной помощи против пандемического гриппа А.

Вирус гриппа А является основной причиной сезонных инфекций верхних дыхательных путей, приводящих к более чем 250 000 смертей ежегодно (28). Ожидается, что это число значительно возрастет в случае пандемии, вызванной вновь появившимся вирусом, против которого у населения нет ранее существовавшего иммунитета (5). Вирусы сезонного гриппа А поражают главным образом верхние дыхательные пути, где вирус в первую очередь реплицируется в эпителиальных клетках, несущих α-2,6-связанные сиаловые кислоты, которые служат вирусным рецептором (39).Заболевание характеризуется внезапным появлением лихорадки, усталости и недомогания, за которыми следуют классические признаки заболевания верхних дыхательных путей, включая заложенность носа, ринит и чихание (21). Неосложненные случаи разрешаются в течение 4–7 дней, тогда как осложнения, в основном связанные с вторичными бактериальными инфекциями, могут привести к тяжелой пневмонии и смерти (32, 37). Напротив, высокопатогенные штаммы вируса гриппа А также поражают нижние дыхательные пути. Возникающее в результате тяжелое воспаление легких является причиной повышенной летальности, связанной с этими инфекциями (52).

Иммунизация подобранными инактивированными или живыми вакцинами — лучший профилактический вариант для защиты от гриппа и борьбы с ним (29, 43). Однако для преодоления разрыва между появлением нового антигенного варианта вируса и производством подобранной вакцины решающее значение имеют эффективные противовирусные препараты (27). Доступные в настоящее время препараты, блокаторы ионных каналов амантадин и римантадин и ингибиторы нейраминидазы осельтамивир и занамивир, действуют непосредственно на вирусные белки (20), что приводит к быстрому возникновению резистентности из-за высокой частоты естественных мутаций вируса гриппа (23, 38).Напротив, препараты, нацеленные на факторы хозяина, могут избежать этой проблемы. Кроме того, ожидается, что такие препараты будут активными против большого количества патогенных реассортантов, которые могут возникнуть в будущем.

При вирусной инфекции большинство клеток начинают экспрессировать гены интерферона (IFN), что в конечном итоге приводит к общему противовирусному ответу за счет активации широкого спектра эффекторных молекул (12, 33, 42, 51). Одной из групп этих противовирусных молекул являются IFN-индуцированные Mx GTPases, которые обнаружены у многих видов, включая птиц, рыб и млекопитающих (8, 13).Белки Mx проявляют противовирусную активность против нескольких РНК-вирусов, таких как вирус гриппа A (13). У мышей наличие функционального гена Mx1 придает устойчивость к летальному заражению адаптированными к мышам или высокопатогенными неадаптированными штаммами вируса гриппа A (11, 45). Белок MxA человека также подавляет репликацию вирусов гриппа (30, 53). Несмотря на многообещающие начальные клинические исследования IFN-α для лечения респираторных заболеваний, побочные эффекты, такие как раздражение слизистой оболочки носа и периодические носовые кровотечения, не позволили провести углубленную оценку IFN-α как средства лечения этих заболеваний (6 , 15, 19, 25). Если бы интраназальный вводимый IFN был эффективен против вирусов гриппа A, польза во многих случаях перевесила бы сообщаемые легкие побочные эффекты лечения.

Хорьки традиционно использовались для исследования вирусов гриппа из-за их естественной чувствительности к штаммам вирусов, выделенным от людей, и из-за сходства между хорьками и людьми в отношении тяжести заболевания и клинических признаков (24). Модель регулярно используется для оценки эффективности новых вакцин и противовирусных препаратов (47).Недавние исследования дополнительно продемонстрировали ценность хорьков для характеристики противовирусных иммунных ответов хозяина (40). В этом отчете мы оценили осуществимость и эффективность IFN-α в качестве профилактики гриппа. IFN-α был высокоэффективен против сезонного штамма, который размножается в верхних дыхательных путях. Он был гораздо менее эффективен против высокопатогенного штамма H5N1, предположительно из-за того, что лекарство не было успешно доставлено в нижние дыхательные пути.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Клетки и вирусы.Клетки собачьей почки Мадина-Дарби (MDCK) (ATCC CCL-34), клетки 293T (ATCC CRL-1573) и клетки T98G (ATCC CRL-1690) поддерживали в модифицированной Дульбекко среде Эрла (DMEM) с добавлением солями Эрла (Invitrogen ) в присутствии 5% фетальной бычьей сыворотки (FBS; Invitrogen). Клетки Vero (ATCC CCL-81) и клетки L929 (ATCC CCL-1) культивировали в DMEM с 10% FBS. Первичные альвеолярные клетки хорька выделяли в соответствии с протоколом, описанным в ссылке 10. Вкратце, легкие взрослого хорька перфузировали 0.9% физиологический раствор и пять раз промыли стерильным 0,9% физиологическим раствором. Восемьдесят единиц эластазы (Worthington Biochemical Corporation) в концентрации 2 Ед / мл в буфере для разложения (133 мМ NaCl, 5,2 мМ KCl, 6 мМ Na ₂ HPO ₄ , 1 мМ NaH ₂ PO ₄ 10,3 мМ HEPES, 5,6 мМ глюкозы) затем закапывали в трахею. Обработанный орган суспендировали в буфере для переваривания и инкубировали при 37 ° C в течение 20 минут. После этого легкие были мелко измельчены, материал был профильтрован через марлю, фильтрат наслаивался на прерывистый градиент Percoll (Amersham) и центрифугировался при 250 × g в течение 20 мин.Полосу клеток собирали и обрабатывали в течение 20 минут при 4 ° C с 30 мл ДНКазы IV (Sigma) в концентрации 50 мкг / мл в буфере для переваривания с последующим центрифугированием при 250 × g в течение 10 минут и суспендированием в DMEM, содержащий 10% FBS. Полученные клетки высевали в шестилуночные планшеты. Через два дня после выделения клетки трансфицировали pRSV40T (36), кодирующей большой Т-антиген обезьяньего вируса 40, и регулярно пассировали для стимулирования пролиферации. Полученную линию альвеолярных эпителиальных клеток хорька (FtAEpC) поддерживали в среде DMEM, содержащей 10% FBS.

Штаммы вируса гриппа A h2N1 A / USSR / 90/77 (USSR / 77), h4N2 A / Port Chalmers / 1/73 (PC / 73) (40) и H5N1 A / Vietnam / 1203/2004 (Вьетнам / 04) выращивали в клетках MDCK в среде DMEM с 2 мкг / мл толилсульфонилфенилаланилхлорметилкетон-трипсина (Sigma). Штамм вируса везикулярного стоматита (VSV-GFP), экспрессирующий рекомбинантный усиленный зеленый флуоресцентный белок (EGFP) (4), амплифицировали в клетках Vero, и титр определяли на клетках Vero с помощью флуоресцентной микроскопии. Титры СССР / 77 и РС / 73 определяли методом ограниченного разведения и выражали как 50% инфекционные дозы культуры ткани (TCID ₅₀ ), в то время как титр Вьетнам / 04 определяли методом бляшек и выражали как БОЕ. за мл.

Продукция

IFN-α. Эукариотическая экспрессионная плазмида, кодирующая IFN-α хорька (ftIFN-α), была получена путем переноса ранее клонированной открытой рамки считывания (41) в pcDNA3.1 (Invitrogen). Плазмиду, экспрессирующую IFN-αB / D человека (26), получали путем объединения открытых рамок считывания IFN-αD (номер доступа в GenBank CQ847555) и IFN-αB (номер доступа в GenBank X03125) с помощью ПЦР с перекрывающимся расширением (16) и последующий перенос полученного продукта ПЦР в pCDNA3.1. Были проверены последовательности всех плазмид.

Рекомбинантный ftIFN-α и человеческий IFN-αB / D получали временной трансфекцией человеческих клеток 293T с использованием нанофектина (PAA Laboratories). Их противовирусная активность определялась на клетках FtAEpC или L929, соответственно, обработанных последовательными 10-кратными разведениями в течение 16 часов перед инфицированием рекомбинантным VSV-GFP при множественности инфицирования 1. Через 15 часов инкубации определяли титры вирусов в супернатантах. на клетках Vero серийными 10-кратными разведениями. Очищенный человеческий гибрид IFN-αB / D, продуцируемый в Escherichia coli , использовали в качестве положительного контроля (18, 45).

Эксперименты на животных. В экспериментах использовали самцов 16-недельных хорьков (Marshall Farms) без антител против циркулирующих штаммов h2N1 и h4N2. В первоначальном исследовании доза-ответ группы из двух животных были анестезированы изофлураном и интраназально инокулированы 300 мкл супернатанта 293T, содержащего ftIFN-α или ложный супернатант за 20 и 4 ч до умерщвления животных, а также легкие, носовые раковины и др. трахеи были собраны. Для всех экспериментов по заражению использовали группы по шесть животных.Хорьков предварительно обрабатывали 10 ⁷ ед. Очищенного продуцируемого E. coli человеческого IFN-αB / D или супернатантов клеток 293T, содержащих или не содержащих ftIFN-α, как указано выше, анестезировали кетамином (1 мг / кг массы тела. ) и мидазолам (10 мг / кг массы тела) и инфицировали интраназально 10 ⁵ TCID ₅₀ PC / 73 или СССР / 77 или 10 ⁴ PFU Вьетнама / 04 соответственно. Дополнительная группа животных получала 2,5 мг осельтамивира (Тамифлю; Roche), что соответствует 2.2–2,5 мг / кг массы тела перорально два раза в день в течение 5 дней, начиная за 4 часа до инфекции. Ранее было показано, что такая доза и схема лечения эффективны для предотвращения клинических признаков и смертности хорьков, инфицированных высокопатогенными вирусами (2). Для эксперимента с PC / 73 и второго эксперимента СССР / 77 животные получали дополнительные дозы IFN-αB / D или ftIFN-α, соответственно, через 24 часа, а для USSR / 77 также через 48 часов после заражения.

Клинические признаки, температуру тела и выносливость на беговой дорожке оценивали ежедневно, а животных взвешивали каждый второй день.Ректальную температуру тела животных, инфицированных PC / 73 или Vietnam / 04, измеряли вручную каждые 24 часа. Для экспериментов СССР / 77 температуру тела измеряли с помощью логгеров данных (SubCue), имплантированных в асептических условиях в брюшную полость. Температуру контролировали непрерывно и регистрировали с 15-минутными интервалами, начиная с 5 дней до заражения. Для ежедневной оценки респираторных признаков чихание, выделение из носа и заложенность носа оценивали по шкале 0-1-2. Ноль указывает на минимальные отклонения физиологического состояния, 1 указывает на умеренные выделения из носа, заложенность и / или периодическое чихание, а 2 указывает на сильные выделения из носа и / или затрудненное дыхание, одышку и частое чихание.Смывы для носа собирали каждый день в течение первых 4 дней и каждый второй день после этого. Вкратце, 500 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора (Invitrogen) закапывали в одну ноздрю, и отхаркивающие средства собирали в центрифужные пробирки на 50 мл. Эту процедуру повторяли дважды, чтобы получить минимальный объем 400 мкл. Подсчитывали клетки в жидкости для промывания носа и определяли титр вируса методом ограниченного разведения. В первом эксперименте рентгеновские снимки грудной клетки трех животных из каждой группы получали под анестезией кетамином / мидазоламом на 0, 2 и 4 дни постинфекции.

Исследование с участием Вьетнама / 04 было проведено в лаборатории с уровнем биобезопасности 4 Национальной микробиологической лаборатории в Виннипеге. Клинические признаки, температуру тела и вес оценивали ежедневно, а средства для промывания носа собирали на 1, 3, 6 или 7 дни после инфицирования. Титры смывов для носа определяли методом ограниченного разведения и выражали как TCID ₅₀ . Клинические признаки оценивали следующим образом. Для осанки 0 означает нормальное состояние, а 1 — сутулость. Что касается аппетита, 0 означает нормальный, а 1 — пониженный.Для активности 0 означает нормальное состояние, 1 означает спокойствие, а 2 означает депрессию. Что касается дыхания, 0 указывает на нормальное состояние, 1 означает выделение из носа и чихание, а 2 указывает на кашель и одышку. Для диареи 0 означает отсутствие, 1 указывает на мягкий стул или легкую диарею, а 2 указывает на сильную кровавую диарею. Для неврологических признаков 0 означает отсутствие, 1 указывает на паралич или агрессию, а 2 указывает на паралич и агрессию. Животных подвергали эвтаназии, когда были достигнуты следующие заранее определенные конечные точки: респираторный дистресс, потеря веса более 20%, кровотечение, диарея, приводящая к тяжелому обезвоживанию, судорогам, параличу или гибели животного.Все исследования на животных были одобрены соответствующими комитетами IACUC.

Вестерн-блот-анализ. Гомогенаты легких и носовых раковин получали измельчением ткани в ступке, и эпителиальные клетки трахеи соскабливали с трахеи с помощью скальпеля. Гомогенаты лизировали в буфере, содержащем 50 мМ HEPES (pH 7,4), 125 мМ NaCl, 1% Nonidet P-40, 1 мМ EDTA, 0,5% дезоксихолат натрия, 0,1% додецилсульфат натрия, 1 мМ дитиотреитол, 100 Ед / мл бензоназы и ингибиторы протеаз, рекомендованные производителем (Roche). Белки разделяли электрофорезом в геле додецилсульфата натрия в полиакриламидном геле на 10% геле и переносили на поливинилидендифторидные мембраны (Millipore). Мембраны зондировали моноклональным мышиным антителом M143, которое проявляет реактивность к белкам Mx из широкого круга млекопитающих (7), и моноклональным мышиным антителом против β-тубулина (Sigma). Вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена, и хемилюминесцентную систему обнаружения (Pierce) использовали для визуализации определенных полос.

Статистика. Для статистического анализа использовались тест Стьюдента Тьюки и парный тест Стьюдента t .

РЕЗУЛЬТАТЫ

Рекомбинантный ftIFN-α, продуцируемый в клетках 293T, активен in vitro и in vivo. Подтипы IFN-α проявляют высокую степень видовой специфичности (9, 46), что усложняет эксперименты с видами, для которых реактивы коммерчески недоступны . Чтобы оценить функциональность ftIFN-α, кодируемого недавно разработанной конструкцией экспрессии, была создана линия альвеолярных эпителиальных клеток хорька (FtAEpC). Супернатант клеток 293T, трансфицированных конструкцией экспрессии ftIFN-α, эффективно активировал ген Mx в FtAEpC до 10 ⁵ -кратного разведения, тогда как супернатант ложно-трансфицированных клеток 293T не имел никакого эффекта (рис. 1A, верхние панели). Неожиданно полученный аналогично человеческий гибрид IFN-αB / D, который, как известно, проявляет широкую специфичность к хозяину (18), был сравнительно плохим индуктором Mx в FtAEpC (фиг. 1A, нижние панели). Только при использовании очень высокой дозы (10 ⁴ Ед / мл) очищенного huIFN-αB / D, продуцируемого E. coli , ген FtAEpC Mx сильно индуцировался (положительный контроль).Интересно, что продуцируемый 293T huIFN-αB / D эффективно индуцировал экспрессию Mx в клетках T98G человека, тогда как ftIFN-α не влиял на эти клетки (данные не показаны). Чтобы подтвердить эффективность ftIFN-α во втором биоанализе, мы обрабатывали FtAEpC в различных разведениях в течение 16 часов до инфицирования GFP-экспрессирующим VSV и количественно определяли титры вируса в супернатантах FtAEpC через 15 часов. Обработка ftIFN-α в разведении до 10 ⁴ раз приводила к более чем 1000-кратному ингибированию, а 10 ⁵ -кратное разведение все еще способно снизить выход VSV-GFP примерно в 100 раз по сравнению с к супернатанту ложно-трансфицированных клеток 293Т (рис.1Б). Поскольку международного стандарта активности ftIFN не существует, активность нашего препарата ftIFN-α не может быть легко определена количественно. Если бы наш анализ снижения выхода вируса использовался в качестве эталона, расчетная активность препарата была бы выше 10 ⁶ Ед / мл; если бы использовался тест индукции Mx, это значение было бы немного ниже.

РИС. 1.

ftIFN-α активен в клетках альвеолярного эпителия и верхних дыхательных путях хорьков. (A) Супернатант трансфицированных клеток 293T, содержащих ftIFN-α или huIFN-αB / D, разводили, как указано, и инкубировали с FtAEpC в течение 16 часов перед тем, как клетки лизировали и подвергали Вестерн-блот-анализу с использованием Mx-специфического моноклонального антитела M143. Блоты повторно зондировали β-тубулин-специфическим антителом, чтобы проверить одинаковую загрузку всех дорожек. Показаны репрезентативные результаты трех независимых экспериментов. +, FtAEpC, обработанные 10 ⁴ ед. Продуцированного E. coli , очищенного huIFN-αB / D, служили в качестве положительного контроля; nc, FtAEpC, обработанные разведением 10 ^-2 супернатанта ложно-трансфицированных клеток 293T, служили в качестве отрицательного контроля. (B) FtAEpC обрабатывали различными разведениями ftIFN-α в течение 16 часов перед инфицированием VSV-GFP при MOI 1.FtAEpC, обработанные имитацией, служили контролем. Титры вирусов в супернатантах определяли через 15 ч после инфицирования. Показаны репрезентативные результаты двух независимых экспериментов. (C) Хорьков обрабатывали интраназально 300 мкл неразбавленного супернатанта трансфицированных клеток 293T, содержащих ftIFN-α, или супернатанта ложно-трансфицированных клеток 293T (имитация) через 20 и 4 ч перед сбором легких, носовых раковин и клеток из трахея. Вестерн-блот-анализ белковых экстрактов (~ 50 мкг / дорожка) проводили, как на панели А.LL — левая доля легкого; LR — правая доля легкого; Т — эпителиальные клетки трахеи; NT, носовая раковина.

Для определения активности ftIFN-α in vivo группы из двух хорьков обрабатывали либо 300 мкл ftIFN-α, либо ложным супернатантом за 20 и 4 ч до сбора носовых раковин, клеток трахеи и легких. Затем определяли содержание белка Mx в лизатах тканей Вестерн-блоттингом. Клетки трахеи животных, получавших IFN (животные III и IV), содержали легко определяемые уровни белка Mx, в то время как клетки животных, получавших имитацию (животные I и II), не содержали (рис.1С). Носовые раковины, полученные от животных III, получавших IFN, также были сильно положительными в этом анализе, тогда как экспрессия Mx не была обнаружена у животных, получавших имитацию (фиг. 1C). Интересно, что образцы легких от всех животных содержали очень низкие уровни белка Mx независимо от лечения (рис. 1С), предполагая, что интраназальное применение цитокинов эффективно достигает клеток верхних дыхательных путей, но не легких.

Человеческий IFN-αB / D лишь частично активен у хорьков. После обработки FtAEpC E.coli -продуцированный человеческий гибрид IFN-αB / D привел к сильной экспрессии Mx (рис. 1A, верхняя панель, положительный контроль), и этот продукт был легко доступен в высокой чистоте и концентрации, мы первоначально оценили его эффективность против сезонного вируса гриппа. штамм PC / 73 (h4N2) у хорьков. С этой целью группам из шести животных интраназально вводили 10 ⁷ ед. IFN-αB / D за 20 и 4 ч до заражения и через 24 ч после инфицирования, или они оставались без лечения. Мы не наблюдали значительных различий в титрах вирусов и количестве клеток при промывании носа, а также в температуре тела между группами, получавшими IFN, и контрольной группой (рис.2A-C). Однако у животных, получавших IFN, развились только легкие признаки респираторного заболевания по сравнению с контрольной группой (фиг. 2D).

РИС. 2.

HuIFN-αB / D снижает респираторные симптомы после заражения вирусом гриппа А. Группам из шести животных интраназально вводили 10 ⁷ Ед. продуцируемого E. coli IFN-αB / D в объеме 250 мкл супернатанта за 20 и 4 ч до инфицирования и через 24 ч после интраназального инфицирования. 10 ⁵ TCID ₅₀ штамма h4N2 PC / 73.Контрольные животные не получали лечения. (А) Титры вирусов в смывах для носа; (B) количество клеток в смыве из носа (NW); (C) температура тела. Показаны средние по группе в указанные моменты времени. Планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения. (D) Респираторные признаки. Чихание, экссудаты из носа и заложенность носа оценивались по шкале 0–1–2, где 0 означало минимальное отклонение физиологического состояния; 1 указывает на умеренные выделения из носа, заложенность носа и / или периодическое чихание; и 2 указывает на сильные выделения из носа и / или затрудненное дыхание, одышку и частое чихание.Показаны средние по группе.

Лечение ftIFN-α снижает клинические симптомы после инфицирования вирусом гриппа А. Чтобы точно оценить терапевтический потенциал IFN типа I против вируса гриппа, во всех дальнейших экспериментах использовали гомологичный ftIFN-α. Группы из шести хорьков обрабатывали 300 мкл ftIFN-α или ложного супернатанта за 20 и 4 ч до инфицирования 10 ⁵ TCID ₅₀ СССР / 77 (h2N1). Этот штамм вируса гриппа A вызывает более тяжелое заболевание, чем PC / 73, что позволяет лучше различать терапевтические эффекты.Дополнительная группа животных получала 2,5 мг озельтамивира перорально каждые 12 ч в течение 5 дней, начиная с 4 ч до заражения. Через 24 часа после инфицирования титры вируса в носовых смывах у животных, получавших IFN, были примерно в 10 раз ниже, чем в группе осельтамивира, и, по крайней мере, в 100 раз ниже, чем у контрольных животных, получавших имитацию (фиг. 3A). При оценке клеточного содержания жидкости для промывания носа мы наблюдали примерно 10-кратное увеличение количества клеток у хорьков, получавших имитацию, по сравнению с группами, получавшими IFN или озельтамивир, через 48 часов после инфицирования (рис. 3Б). У обработанных IFN хорьков было меньше симптомов со стороны верхних и нижних дыхательных путей, чем у контрольной группы (фиг. 3C и E), но не наблюдали значительных различий в изменении массы тела между группами (данные не показаны). Кроме того, в группах, получавших IFN и озельтамивир, развилось меньше общих клинических признаков, и не наблюдалось характерного пика лихорадки на 2-й день после инфицирования (рис. 3D). Снижение температуры тела, наблюдавшееся в день заражения и примерно через 55 часов после заражения, было связано с анестезией (рис.3D). Никаких убедительных патологических изменений не наблюдалось на рентгеновских снимках грудной клетки, полученных для трех животных из каждой группы на 2 и 4 дни после инфицирования (данные не показаны). Чтобы объективно оценить влияние инфекции на выносливость, мы обучили всех животных пользоваться беговой дорожкой перед началом эксперимента. Здоровые животные добровольно занимались физическими упражнениями в течение примерно 4 мин. На второй день постинфекции у всех контрольных животных время бега значительно сократилось, тогда как выносливость хорьков, получавших IFN, была затронута лишь незначительно (рис. 3F). Животные, получавшие осельтамивир, показали промежуточный фенотип. Таким образом, в целом эффективность IFN была подобна или лучше, чем у осельтамивира. Лечение IFN привело к значительному снижению титров смывки для носа, клинических признаков и потере активности по сравнению с контрольной группой.

РИС. 3.

ftIFN-α защищает от заражения штаммом вируса сезонного гриппа А. Группы из шести животных обрабатывали 300 мкл неразбавленного супернатанта трансфицированных клеток 293T, содержащих ftIFN-α, или 300 мкл супернатанта ложно трансфицированных клеток 293T за 20 и 4 ч до заражения вирусом гриппа h2N1 10 ⁵ TCID ₅₀ Штамм вируса СССР / 77.Дополнительная группа животных получала 2,5 мг осельтамивира, что соответствует 2,2–2,5 мг / кг, два раза в день в течение пяти дней, начиная с 4 ч до заражения. (A) Титры вирусов в промывках носа в разное время после инфицирования. Планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения. (Вставка) Результаты статистического анализа обведенных точек данных через 24 часа после заражения. (B) Подсчет клеток в смывах для носа (NW) в разное время после инфицирования. (Вставка) Результаты статистического анализа обведенных точек данных через 48 часов после заражения.(C) Частота дыхания оценивалась по шкале 0-1-2 (оценка 0, <28; оценка 1, от 28 до 36; оценка 2,> 36). (D) Температура тела, измеренная телеметрией. Показаны средние значения групп из трех животных. Выраженные перепады температуры были вызваны анестезией при вирусной инфекции и рентгенологическим исследованием животных соответственно. (E) Респираторные признаки. Чихание, экссудаты из носа и заложенность носа оценивались по шкале 0–1–2, где 0 означало минимальное отклонение физиологического состояния; 1 указывает на умеренные выделения из носа, заложенность носа и / или периодическое чихание; и 2 указывает на сильные выделения из носа и / или затрудненное дыхание, одышку и частое чихание.(F) Характеристики беговой дорожки. Планки погрешностей указывают стандартное отклонение.

Повторное интраназальное введение увеличивает защитный эффект ftIFN-α. Чтобы определить, может ли повторное введение увеличивать защитный эффект IFN-α, группы из шести животных получали интраназально 300 мкл ftIFN-α или ложный супернатант через 20 и 4 часа. ч до заражения и через 24 и 48 ч после заражения 10 ⁵ TCID ₅₀ СССР / 77. Как и в первом эксперименте (рис.3), у животных, получавших IFN, через 24 часа после инфицирования наблюдалось 150-кратное снижение титров смыва для носа по сравнению с неинфицированным контролем (рис.4А). Кроме того, в промывной жидкости для носа в группе, получавшей IFN, было в 100 раз меньше клеток (фиг. 4B). У животных, получавших IFN, также не было характерного пика лихорадки во время фазы острого заболевания (фиг. 4C), и у них не было ни клинических респираторных признаков (фиг. 4D), ни снижения активности беговой дорожки (данные не показаны) в течение инфекции. Кроме того, не наблюдали значительных различий в массе тела между двумя группами (данные не показаны). Таким образом, повторное интраназальное введение ftIFN-α усиливало защитный эффект.

РИС. 4.

Повторное интраназальное введение увеличивает защитный эффект ftIFN-α. Группы из шести животных обрабатывали 300 мкл неразбавленного супернатанта трансфицированных клеток 293T, содержащих ftIFN-α, или 300 мкл супернатанта ложно трансфицированных клеток 293T за 20 и 4 ч до заражения вирусом гриппа h2N1 10 ⁵ TCID ₅₀ Штамм вируса СССР / 77. Еще две процедуры были выполнены через 24 и 48 часов после заражения. (A) Титры вирусов в носовых промывках. (Вставка) Результаты статистического анализа обведенных точек данных.(B) Подсчет клеток в смывах для носа (NW). (Вставка) Результаты статистического анализа обведенных точек данных. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение. (C) Температура тела, измеренная телеметрией. Показаны средние значения групп из трех животных. (D) Респираторные признаки. Были использованы критерии оценки, указанные в легенде к рис. 2.

Предварительная обработка

ftIFN-α снижает выделение вируса, но не снижает смертность после инфицирования H5N1. Для оценки эффективности предварительной обработки IFN против высокопатогенного вируса птичьего гриппа A группы из шести хорьков обрабатывали, как описано ранее, ftIFN-α или ложным супернатантом через 20 минут. и за 4 ч до заражения 10 ⁴ БОЕ штамма H5N1 Vietnam / 04.В группе, не получавшей лечения, у большинства животных развилась лихорадка в течение 24-48 часов после заражения (фиг. 5A), и вирус легко обнаруживался в смывах для носа через 48 часов после заражения (фиг. 5B). Напротив, температура тела хорьков, обработанных IFN, начала повышаться только на 3-й день, и только у одного животного обнаруживались титры смыва из носа через 48 часов после инфицирования (фиг. 5A и B). Однако никаких существенных различий в смертности не наблюдалось (рис. 5C). У животных, получавших ИФН, и у нелеченных контрольных животных наблюдались сходные результаты в отношении общего клинического течения и индивидуальных клинических показателей, при этом животные, получавшие ИФН, в целом испытывали несколько более частое и тяжелое ректальное кровотечение (рис. 5D и E). Таким образом, одной предварительной обработки IFN недостаточно, чтобы повлиять на исход инфекции H5N1.

РИС. 5.

ftIFN снижает инфекцию верхних дыхательных путей вирусом гриппа A H5N1, но не предотвращает заболевание. Группы из шести животных обрабатывали 300 мкл неразбавленного супернатанта трансфицированных клеток 293T, содержащих ftIFN-α, или 300 мкл супернатанта ложно трансфицированных клеток 293T за 20 и 4 ч до инфицирования 10 ⁴ БОЕ штамма A H5N1 / Вьетнам. / 1203/2004 и наблюдалась в течение 12 дней.(А) Температура тела. (Вставка) Результаты статистического анализа обведенных точек данных. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение. ctr, контроль. (B) Титры вирусов в носовых смывах. Уровень обнаружения анализа обозначен пунктирной линией. (C) Выживание. (D) Клинические признаки. Каждое животное представлено одним квадратом. Тяжесть заболевания обозначается цветовым кодом (белый — слабый; серый — умеренный; черный — тяжелый). Клинические признаки оценивали ежедневно. Что касается респираторных признаков, серый цвет означает умеренные выделения из носа и / или случайное чихание, а черный цвет указывает на сильные выделения из носа и / или затрудненное дыхание и частое чихание.Снижение активности обозначается серым цветом, а потеря активности — черным. Неврологические признаки оценивались как умеренные, если наблюдались паралич или агрессивное поведение, и как тяжелые, если присутствовали оба признака. При диарее серый цвет означает мягкий стул или легкую диарею, а черный цвет указывает на сильную кровавую диарею. (E) Суммарная оценка клинических признаков в течение болезни. Осанка, аппетит, активность, дыхание, диарея и неврологические симптомы оценивались ежедневно и оценивались в баллах, как указано в материалах и методах.Совокупная оценка представляет собой среднее значение суммы всех индивидуальных оценок каждого животного в соответствующей группе. Планки погрешностей указывают на стандартную ошибку.

ОБСУЖДЕНИЕ

IFN играют ключевую роль в ранних ответах хозяина на вирусные инфекции. Изучение терапевтического потенциала IFN типа I началось вскоре после того, как была обнаружена его мощная противовирусная активность (3, 15, 34, 44). Сегодня IFN-α признан важным компонентом схем лечения гепатитов B и C (9, 17, 31).Несмотря на то, что клинические исследования продемонстрировали, что интраназальное лечение IFN-α может также предотвращать инфекцию и распространение риновируса (6, 14, 15), побочные эффекты, такие как раздражение слизистой оболочки носа и периодическое кровотечение из носа после длительного и многократного введения, предотвращали дальнейшее проникновение. углубленная оценка потенциального терапевтического использования IFN-α для борьбы с респираторными заболеваниями, такими как грипп. Текущий интерес к препаратам против гриппа подогревается угрозой того, что циркулирующие вирусы птичьего H5N1 или другого подтипа могут адаптироваться к людям и вызвать разрушительную пандемию.В контексте такой пандемии гриппа известные легкие побочные эффекты IFN могут быть приемлемыми, если лечение снижает распространение вируса или даже снижает заболеваемость и смертность. Таким образом, наше исследование было направлено на изучение противовирусного потенциала интраназально вводимого IFN-α в качестве профилактики гриппа на модели хорька.

Предыдущие исследования показали, что интраназальное или пероральное введение IFN-α защищает мышей от заражения вирусом летального гриппа (1, 11, 45). Мы сообщаем здесь, что интраназальный IFN-α у хорьков был не менее эффективен против вирусов гриппа, чем осельтамивир в дозе 2.5 мг / кг два раза в день. Мы демонстрируем, что лечение IFN-α снижает вирусные титры при смывании носа у хорьков и снижает клинические признаки различных подтипов вируса сезонного гриппа А. Мы также показываем, что повторная обработка животных IFN-α незадолго до и после вирусной инфекции усиливала защитный эффект. Поскольку резистентность к признанным противогриппозным препаратам возрастает во всем мире (22), IFN-α представляет собой привлекательный вариант окончательного лечения для лиц с высоким риском тяжелого заболевания и осложнений. Различные препараты человеческого IFN-α и IFN-β уже одобрены регулирующими органами для других применений (9), что значительно облегчит их использование не по назначению для лечения гриппа в экстренных случаях.

Кинетика секреции вируса в присутствии и в отсутствие IFN показала заметные различия (фиг. 3A и 4A). Как и ожидалось, если IFN был противовирусным средством против сезонных вирусов гриппа, вирусные титры в носовых смывах животных, получавших IFN, были значительно снижены через 24 часа после инфицирования.Однако эти различия исчезли через 48 часов после заражения. Мы предполагаем, что резкое падение секреции вируса в контрольной группе между 1 и 2 днями связано с эндогенным индуцированным вирусом IFN. Поскольку обработка IFN сильно снижает начальную репликацию вируса, его синтез de novo инфицированными вирусом клетками дыхательных путей, по-видимому, гораздо менее интенсивен и устойчив. Как следствие, врожденная иммунная защита в верхних дыхательных путях необработанных животных может фактически стимулироваться сильнее на 2-й день после инфицирования, чем у животных, получавших IFN. Хотя эта отсроченная активация врожденной иммунной системы у нелеченных животных эффективна в долгосрочной перспективе, она не может предотвратить начальную репликацию входящего вируса на высоком уровне.

Интересно, что интраназально введенный IFN-α не предотвращал заболевание, вызванное инфицированием высокопатогенным штаммом вируса гриппа H5N1, хотя он снижал титры вируса при смывании через нос так же эффективно, как и в случае вируса сезонного гриппа. Этот неожиданный результат можно объяснить тем фактом, что штаммы вируса сезонного гриппа в первую очередь поражают верхние дыхательные пути, тогда как высокопатогенные вирусы H5N1 реплицируются в основном в нижних дыхательных путях (35, 49).Эти различия, скорее всего, являются результатом разного распределения рецепторов: α2,6-связанные сиаловые кислоты, которые служат рецептором для сезонных штаммов вируса гриппа человека, в основном обнаруживаются в верхних дыхательных путях хорьков, тогда как α2,3-связанные сиаловые кислоты кислоты, которые преимущественно используются штаммами вируса птичьего гриппа, присутствуют только в клетках, выстилающих небольшие бронхи и альвеолы ​​(50). Используя экспрессию гена Mx в качестве маркера действия IFN, мы обнаружили, что вводимый интраназально IFN достигал верхних дыхательных путей, но не достигал нижних дыхательных путей (рис.1С). Скорее всего, объем, использованный для лечения (300 мкл), был слишком мал для эффективной доставки в нижние дыхательные пути. Интересно отметить, что IFN-α оказался высокоэффективным против высокопатогенного штамма вируса гриппа H5N1 у мышей (45). В этой модели мышей IFN применяли в объеме 50 мкл, что соответствует в восемь раз большему объему с поправкой на вес для хорьков, чем тот, который использовался в нашем исследовании. Следовательно, необходимы дополнительные исследования на хорьках, в которых ИФН более эффективно доставляется в нижние дыхательные пути.

Таким образом, наши результаты показывают, что лечение интерфероном через нос может защитить группы высокого риска от сезонного гриппа, и систематическая оценка эффективности этого подхода, безусловно, является оправданной. В сценарии пандемического гриппа IFN также может быть полезным, поскольку лечение снижает передачу вируса за счет снижения количества вируса, продуцируемого в верхних дыхательных путях больных. Однако этот положительный эффект необходимо будет оценивать с учетом возможного отрицательного воздействия лечения IFN на течение заболевания.Аналогичные выводы были сделаны из экспериментов, в которых модель морской свинки использовалась для оценки эффективности IFN-α в предотвращении вирусных инфекций гриппа A (48).

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим J. Schulte Mönting из Института медицинской биометрии Фрайбургского университета за помощь в статистическом анализе наших данных; Розите Франк за отличную техническую помощь; Майклу Грею, Джейсону Грену, Шейну Джонсу и Трейси Тейлор за техническую поддержку в проведении экспериментов по сдерживанию в Национальной микробиологической лаборатории.

Финансовая поддержка была предоставлена ​​Министерством образования и исследований Германии (программа FluResearchNet для GK, OH и PS), Канадскими институтами исследований в области здравоохранения (грант OPC-167324 для VVM, OH, GK и PS и грант NIP- 79931 для VVM), Канадского фонда инноваций (грант 9488 для VVM) и Агентства общественного здравоохранения Канады (финансовая поддержка GPK и DK).

СНОСКИ

• Получено 28 ноября 2008 г.
• Принято 23 января 2009 г.

• © Американское общество микробиологии, 2009 г.

СПРАВОЧНИКИ

1. 1.↵

   Бейлхарц, М. В., Дж. М. Камминс и А. Л. Беннет.
   2007. Защита от заражения летальным вирусом гриппа пероральным интерфероном 1 типа. Biochem. Биофиз. Res. Commun.355 : 740-744.

2. 2.↵

   Больц, Д. А., Дж. Э. Рег, Дж. Макларен, Р. Г. Вебстер и Э. А. Говоркова.
   2008. Профилактические схемы осельтамивира предотвращают заболеваемость и смертность от гриппа H5N1 на модели хорька.J. Infect. Dis.197 : 1315-1323.

3. 3.↵

   Borecky, L., and N. Fuchsberger.
   1983. Интерферон как терапевтическое средство. Acta Virol. 27 : 359-370.

4. 4.↵

   Boritz, E., J. Gerlach, J. E. Johnson и J. K. Rose.
   1999. Компетентные к репликации рабдовирусы с оболочкой вируса иммунодефицита человека типа 1 и зеленым флуоресцентным белком: проникновение по pH-независимому пути. J. Virol.73 : 6937-6945.

5. 5.↵

   Enserink, M.
   2004. Грипп. W.H.O. добавляет еще «1918 год» к предсказаниям пандемии. Science306 : 2025.

6. 6.↵

   Finter, NB, S. Chapman, P. Dowd, JM Johnston, V. Manna, N. Sarantis, N. Sheron, G. Scott, S. Phua , и П.Б. Татум.
   1991. Использование интерферона-альфа при вирусных инфекциях. Наркотики42 : 749-765.

7. 7.↵

   Flohr, F., S.Шнайдер-Шаулис, О. Галлер и Г. Кохс.
   1999. Центральная интерактивная область человеческой MxA GTPase участвует в активации GTPase и взаимодействии с вирусными структурами-мишенями. FEBS Lett. 463 : 24-28.

8. 8.↵

   Frese, M., G. Kochs, H. Feldmann, C. Hertkorn и O. Haller.
   1996. Ингибирование буньявирусов, флебовирусов и хантавирусов человеческим белком MxA. J. Virol.70 : 915-923.

9. 9.↵

   Фридман, Р.М.
   2008. Клиническое применение интерферонов. Br. J. Clin. Pharmacol.65 : 158-162.

10. 10.↵

    Fuchs, S., M. Gumbleton, U. F. Schaefer, and C.-M. Лер.
    2002. Модели альвеолярного эпителия, с. 189-210. В г. Лер (ред.), Модели биологических барьеров на клеточных культурах: тест-системы in vitro для абсорбции и доставки лекарств. CRC Press, Бока-Ратон, Флорида.

11. 11.↵

    Гримм, Д., П. Стахели, М.Hufbauer, I. Koerner, L. Martinez-Sobrido, A. Solorzano, A. Garcia-Sastre, O. Haller, and G. Kochs.
    2007. Пригодность к репликации определяет высокую вирулентность вируса гриппа А у мышей, несущих функциональный ген устойчивости к Mx1. Proc. Natl. Акад. Sci. USA104 : 6806-6811.

12. 12.↵

    Haller, O., G. Kochs, and F. Weber.
    2006. Схема ответа интерферона: индукция и подавление патогенными вирусами. Вирусология 344 : 119-130.

13. 13.↵

    Haller, O., P. Staeheli, and G. Kochs.
    2007. Интерферон-индуцированные белки Mx в противовирусной защите хозяина. Biochimie89 : 812-818.

14. 14.↵

    Hayden, F. G., D. J. Innes, Jr., S. E. Mills и P. A. Levine.
    1988. Интраназальная толерантность и гистопатологические эффекты нового синтетического интерферона, rIFN-альфа Con1. Антивирь. Res.10 : 225-234.

15. 15.↵

    Herzog, C., R. Berger, M. Fernex, K. Friesecke, L. Havas, M. Just и U. C. Dubach.
    1986. Интраназальный интерферон (rIFN-альфа A, Ro 22-8181) для контактной профилактики простуды: рандомизированное, двойное слепое и плацебо-контролируемое полевое исследование. Антивирь. Res.6 : 171-176.

16. 16.

    Хо, С. Н., Х. Д. Хант, Р. М. Хортон, Дж. К. Пуллен и Л. Р. Пиз.
    1989. Сайт-направленный мутагенез путем перекрывания удлинения с использованием полимеразной цепной реакции. Gene77 : 51-59.

17. 17.↵

    Hoofnagle, J. H., and L. B. Seeff.
    2006. Пегинтерферон и рибавирин при хроническом гепатите C. N. Engl. J. Med.355 : 2444-2451.

18. 18.↵

    Хорисбергер, М. А. и К. де Старицки.
    1987. Рекомбинантный гибрид человеческого интерферона-альфа B / D с широким спектром хозяев. J. Gen. Virol.68 : 945-948.

19. 19.↵

    Исомура, С., Т. Итикава, М. Миязу, Х.Нарусэ, М. Шибата, Дж. Иманиши, А. Мацуо, Т. Кишида и Т. Караки.
    1982. Профилактическое действие человеческого интерферона-альфа на гриппозную инфекцию: изменение клинических проявлений гриппа у детей в закрытом сообществе. Biken J.25 : 131-137.

20. 20.↵

    Джефферсон, Т., В. Демикели, Д. Риветти, М. Джонс, К. Ди Пьетрантонж и А. Риветти.
    2006. Противовирусные препараты от гриппа у здоровых взрослых: систематический обзор. Lancet367 : 303-313.

21. 21.↵

    Kaiser, L., R. S. Fritz, S. E. Straus, L. Gubareva и F. G. Hayden.
    2001. Патогенез симптомов при остром гриппе: ответы на интерлейкин-6 и другие цитокины. J. Med. Virol. 64 : 262-268.

22. 22.↵

    Lackenby, A., O. Hungnes, S. G. Dudman, A. Meijer, W. J. Paget, A. J. Hay и M. C. Zambon.
    2008. Появление устойчивости к осельтамивиру среди вирусов гриппа A (h2N1) в Европе.Euro Surveill.13 : 8026.

23. 23.↵

    Le, QM, M. Kiso, K. Someya, YT Sakai, TH Nguyen, KH Nguyen, ND Pham, HH Ngyen, S. Yamada, Ю. Мурамото, Т. Хоримото, А. Такада, Х. Гото, Т. Судзуки, Ю. Судзуки и Ю. Каваока.
    2005. Птичий грипп: выделение лекарственно-устойчивого вируса H5N1. Nature437 : 1108.

24. 24.↵

    Maher, J. A., and J. DeStefano.
    2004. Хорек: модель на животных для изучения вируса гриппа.Лаборатория. Anim.33 : 50-53.

25. 25.↵

    McKinlay, M.A.
    2001. Последние достижения в лечении риновирусных инфекций. Curr. Мнение. Pharmacol.1 : 477-481.

26. 26.↵

    Мейстер, А., Г. Узе, К. Э. Могенсен, И. Грессер, М. Г. Тови, М. Груттер и Ф. Мейер.
    1986. Биологическая активность и связывание рецепторов двух рекомбинантных интерферонов человека и их гибридов. J. Gen. Virol. 67, : , 1633–1643.

27. 27.↵

    Monto, A. S., and R. J. Whitley.
    2008. Сезонный и пандемический грипп: обновленная информация о проблемах и решениях за 2007 год. Clin. Заразить. Диск.46 : 1024-1031.

28. 28.↵

    Николсон, К. Г., Дж. М. Вуд и М. Замбон.
    2003. Грипп. Lancet362 : 1733-1745.

29. 29.↵

    Ohmit, S. E., J. C. Victor, E. R. Teich, R. K. Truscon, J. R. Rotthoff, D.В. Ньютон, С. А. Кэмпбелл, М. Л. Бултон и А. С. Монто.
    2008. Профилактика симптоматического сезонного гриппа в 2005-2006 гг. Инактивированными и живыми аттенуированными вакцинами. J. Infect. Dis.198 : 312-317.

30. 30.↵

    Павлович, Дж., Х. А. Арцет, Х. П. Хефти, М. Фрезе, Д. Рост, Б. Эрнст, Э. Колб, П. Стахели и О. Халлер.
    1995. Повышенная устойчивость к вирусам трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий белок MxA. J. Virol.69 : 4506-4510.

31. 31.↵

    Perrillo, R. P.
    2005. Современное лечение хронического гепатита B: преимущества и ограничения. Семин. Печень Dis.25 (Дополнение 1) : 20-28.

32. 32.↵

    Ротберг, М. Б., С. Д. Хесслер и Р. Б. Браун.
    2008. Осложнения вирусного гриппа. Am. J. Med.121 : 258-264.

33. 33.↵

    Сэдлер, А. Дж. И Б. Р. Уильямс.
    2008. Интерферон-индуцируемые противовирусные эффекторы.Nat. Rev. Immunol.8 : 559-568.

34. 34.↵

    Samuel, C. E., and G. S. Knutson.
    1982. Механизм действия интерферона. Кинетика снижения антивирусного состояния и фосфорилирования белков в фибробластах мыши, обработанных природными и клонированными интерферонами. J. Biol. Chem.257 : 11796-11801.

35. 35.↵

    Shinya, K., M. Ebina, S. Yamada, M. Ono, N. Kasai, and Y. Kawaoka.
    2006. Птичий грипп: рецепторы вируса гриппа в дыхательных путях человека.Nature440 : 435-436.

36. 36.↵

    Sock, E., M. Wegner, E.A. Fortunato, and F. Grummt.
    1993. Большой Т-антиген и последовательности в регуляторной области вируса JC вносят вклад в особенности репликации ДНК вируса JC. Virology197 : 537-548.

37. 37.↵

    Sun, K., and D. W. Metzger.
    2008. Ингибирование антибактериальной защиты легких интерфероном-гамма во время выздоровления от гриппозной инфекции.Nat. Med.14 : 558-564.

38. 38.↵

    Сузуки, Х., Р. Сайто, Х. Масуда, Х. Оситани, М. Сато и И. Сато.
    2003. Появление устойчивых к амантадину вирусов гриппа А: эпидемиологическое исследование. J. Infect. Chemother.9 : 195-200.

39. 39.↵

    Сузуки, Ю., Т. Ито, Т. Сузуки, Р. Э. Холланд, младший, Т. М. Чемберс, М. Кисо, Х. Исида и Ю. Каваока.
    2000. Виды сиаловой кислоты как детерминант диапазона хозяев вирусов гриппа А. J. Virol.74 : 11825-11831.

40. 40.↵

    Svitek, N., P.A. Rudd, K. Obojes, S. Pillet и V. von Messling.
    2008. Тяжелый сезонный грипп у хорьков коррелирует со снижением уровня интерферона и повышенной индукцией IL-6. Вирусология 376 : 53-59.

41. 41.↵

    Svitek, N., and V. von Messling.
    2007. Профили экспрессии мРНК ранних цитокинов позволяют прогнозировать исход болезни, вызванной морбилливирусом, у хорьков. Вирусология 362 : 404-410.

42. 42.↵

    Такаока, А., З. Ван, М. К. Чой, Х. Янаи, Х. Негиси, Т. Бан, Ю. Лу, М. Миягиши, Т. Кодама, К. Хонда, Ю. Охба, Т. Танигучи.
    2007. DAI (DLM-1 / ZBP1) — это цитозольный ДНК-сенсор и активатор врожденного иммунного ответа. Nature448 : 501-505.

43. 43.↵

    Tambyah, P.A.
    2008. Обновленная информация о вакцинах против гриппа. Respirology13 (Дополнение 1) : S41-S43.

44. 44.↵

    Томита Ю. и Т. Кувата.
    1981. Подавляющее действие интерферона на слияние клеток вирусом Сендай. J. Gen. Virol. 55 : 289-295.

45. 45.↵

    Tumpey, T. M., K. J. Szretter, N. Van Hoeven, J. M. Katz, G. Kochs, O. Haller, A. Garcia-Sastre, and P. Staeheli.
    2007. Ген Mx1 защищает мышей от пандемического вируса гриппа 1918 года и высоколетального вируса гриппа человека H5N1. J. Virol. 81 : 10818-10821.

46. 46.↵

    Tyrrell, D. A.
    1959. Интерферон, продуцируемый культурами клеток почек теленка. Nature 184 (Приложение 7) : 452-453.

47. 47.↵

    van der Laan, J. W., C. Herberts, R. Lambkin-Williams, A. Boyers, A. J. Mann и J. Oxford.
    2008. Животные модели в тестировании противогриппозной вакцины. Эксперт Rev. Vaccines7 : 783-793.

48. 48.↵

    van Hoeven, N., J. A. Belser, K. J. Szretter, H. Zeng, P.Стахели, Д. Э. Суэйн, Дж. М. Кац и Т. М. Тумпи. 14 января 2009 г. Патогенез пандемии 1918 г. и инфекции вируса гриппа H5N1 на модели морской свинки: противовирусный потенциал экзогенного альфа-интерферона в уменьшении выделения вируса. J. Virol. [Epub перед печатью.]

49. 49.↵

    ван Рил, Д., В. Дж. Мюнстер, Э. де Вит, Г. Ф. Риммельцваан, Р. А. Фушье, А. Д. Остерхаус и Т. Куикен.
    2006. Прикрепление вируса H5N1 к нижним дыхательным путям.Science312 : 399.

50. 50.↵

    van Riel, D., V. J. Munster, E. de Wit, G. F. Rimmelzwaan, R. A. Fouchier, A. D. Osterhaus и T. Kuiken.
    2007 г. Вирусы человеческого и птичьего гриппа поражают различные клетки нижних дыхательных путей человека и других млекопитающих. Am. Дж. Патол. 171 : 1215-1223.

51. 51.↵

    Yoneyama, M., and T. Fujita.
    2007. Функция RIG-I-подобных рецепторов в противовирусном врожденном иммунитете.J. Biol. Chem.282 : 15315-15318.

52. 52. ↵

    Yu, H., Z. Gao, Z. Feng, Y. Shu, N. Xiang, L. Zhou, Y. Huai, L. Feng, Z. Peng, Z. Li , Ч. Сюй, Дж. Ли, Ч. Ху, К. Ли, Х. Сю, Х. Лю, З. Лю, Л. Сюй, Ю. Чен, Х. Луо, Л. Вэй, Х. Чжан, Дж. . Xin, J. Guo, Q. Wang, Z. Yuan, L. Zhou, K. Zhang, W. Zhang, J. Yang, X. Zhong, S. Xia, L. Li, J. Cheng, E. Ma , P. He, SS Lee, Y. Wang, TM Uyeki и W. Yang.
    2008. Клиническая характеристика 26 случаев инфицирования людей высокопатогенным вирусом птичьего гриппа A (H5N1) в Китае.PLoS ONE3 : e2985.

53. 53.↵

    Zurcher, T., J. Pavlovic, and P. Staeheli.
    1992. Механизм действия белка MxA человека: варианты с измененными противовирусными свойствами. EMBO J.11 : 1657-1661.

% PDF-1.6
%
2626 0 объект
>
endobj

xref
2626 106
0000000016 00000 н.
0000003458 00000 н.
0000003633 00000 н.
0000003669 00000 н.
0000004984 00000 н.
0000005085 00000 н.
0000005242 00000 н.
0000005398 00000 н.
0000005554 00000 н.
0000005711 00000 н.
0000005867 00000 н.
0000006023 00000 н.
0000006180 00000 п.
0000006337 00000 н.
0000006490 00000 н.
0000006918 00000 п.
0000007663 00000 н.
0000007854 00000 п.
0000007969 00000 н.
0000008490 00000 н.
0000009098 00000 н.
0000010286 00000 п.
0000011373 00000 п.
0000012149 00000 п.
0000012579 00000 п.
0000012995 00000 п.
0000013108 00000 п.
0000013760 00000 п.
0000014362 00000 п.
0000014450 00000 п.
0000014784 00000 п.
0000016157 00000 п.
0000017538 00000 п.
0000018325 00000 п.
0000018700 00000 п.
0000018849 00000 п.
0000018937 00000 п.
0000019624 00000 п.
0000020233 00000 п.
0000020373 00000 п.
0000021415 00000 п.
0000023209 00000 п.
0000024855 00000 п.
0000026489 00000 п.
0000026573 00000 п.
0000034703 00000 п.
0000040909 00000 н.
0000040993 00000 п.
0000041077 00000 п.
0000044382 00000 п.
0000044466 00000 п.
0000044550 00000 п.
0000044634 00000 п.
0000044718 00000 п.
0000044802 00000 п.
0000052768 00000 п.
0000052857 00000 п.
0000052972 00000 п.
0000053043 00000 п.
0000053127 00000 п.
0000055751 00000 п.
0000056052 00000 п.
0000056265 00000 п.
0000056294 00000 п.
0000056662 00000 н.
0000056733 00000 п.
0000056818 00000 п.
0000058533 00000 п.
0000058819 00000 п.
0000059036 00000 п.
0000059065 00000 п.
0000059442 00000 п.
0000063567 00000 п.
0000063935 00000 п.
0000064378 00000 п.
0000082450 00000 п.
0000082710 00000 п.
0000083024 00000 п.
0000105118 00000 п.
0000105375 00000 п.
0000105738 00000 п.
0000108302 00000 н.
0000108343 00000 п.
0000110907 00000 н.
0000110948 00000 н.
0000112076 00000 н.
0000112117 00000 н.
0000114681 00000 н.
0000114722 00000 н.
0000117286 00000 н.
0000117327 00000 н.
0000119891 00000 н.
0000119932 00000 н.
0000122496 00000 н.
0000122537 00000 н.
0000125101 00000 п.
0000125142 00000 н.
0000127706 00000 н.
0000127747 00000 н.
0000128549 00000 н.
0000128590 00000 н.
0000129718 00000 н.
0000129759 00000 н.
0000130660 00000 н.
0000003233 00000 н.
0000002468 00000 н.
трейлер
] / Назад 436851 / XRefStm 3233 >>
startxref
0
%% EOF

2731 0 объект
> поток
h ތ KLagBBbFBbŠFRZ} (nK.xL! 7 / ITbL0Nxp /} / O @ n / yEq, AieYTpA} J7Mpc-TRl-, jvz΀mB7ka1
H 㭨 kdb = D> T (l̨ $ AIMg! F | .3ҝ3x? Ȁ8Ş) IJ9> m [gv / EyɾKp8 * 듚? Yr ٌ i̜b`˿9] .Wd7xɿVL
-Xc) IuTR> D + jO5 [z | &
% I ݮ7`} 2 Ѫ։dZƂ

Экспериментальное испытание назальных капель с rhIFNα для предотвращения 2019-nCOV у медицинского персонала

Обзор

Сводка

Исследователи планируют провести экспериментальное исследование профилактического действия
рекомбинантный человеческий интерферон альфа назальные капли при заражении новым коронавирусом 2019 года в
медицинский персонал.

Набор персонала в следующих местах…

Дизайн исследования

Первичные результаты

Вторичные результаты

Критерии приемлемости

Все участники от 18 до 65 лет.

Критерии включения:

— Официально обслуживающий медицинский персонал в больнице Тайхэ;

Критерий исключения:

— беременные женщины;

— тяжелые хронические заболевания, которые не могут участвовать в повседневной работе;

— лихорадка (температура ≥37.3 °) и / или респираторные симптомы.

Дополнительная информация

Информация предоставлена ​​ClinicalTrials.gov медицинской школой Шанхайского университета Цзяо Тонг.

(PDF) Экспериментальное испытание назальных капель рекомбинантного человеческого интерферона альфа для профилактики коронавирусной болезни 2019 на медицинском персонале в зоне эпидемии

В этом исследовании предварительно исследуется профилактический эффект использования назальных капель рекомбинантного человеческого интерферона

в медицинских целях. персонал по профилактике коронавирусных инфекций в течение

28 дней.Исследование показывает, что при строгом соблюдении стандартных средств защиты первого и второго уровня

использование назальных капель IFN-α, 2-3 капли в ноздрю, четыре раза

в день может эффективно предотвратить медицинский персонал с низкими уровнями воздействия. (т.е. те, кто не

непосредственно заразился COVID-19) от развития заболевания. Кроме того, исследование

также показывает, что назальные капли IFN в сочетании с еженедельными подкожными инъекциями тимозина альфа

могут помочь предотвратить высокий уровень воздействия на медицинский персонал (т.е.е.,

тех, кто находится в прямом контакте с пациентами с COVID-19) от развития заболевания.

COVID-19 очень заразен и представляет собой долгосрочную повторяющуюся эпидемическую тенденцию.

С R0 2,2–3,7 COVID-19 в настоящее время распространился на более чем 100 стран мира

. В некоторых странах эпидемическая ситуация быстро прогрессирует, и глобальная тенденция к пандемии

очевидна [7]. Кроме того, исследование предполагает, что по сравнению с

человек, которые были инфицированы SARS-CoV-2 до 23 января, недавно инфицированные

пациентов имели более тонкие симптомы, но инфекционность существенно не изменилась,

указывает на то, что SARS-CoV -2 имеет тенденцию постепенно развиваться в низковирулентный, высокоразвитый инфекционный вирус гриппа

[6].Поэтому эксперты прогнозируют, что эпидемии вируса

SARS-CoV-2 могут повторяться каждую осень и зиму, и вирус еще долго будет сосуществовать с

людьми. По этой причине клиницисты и исследователи общественного здравоохранения

в настоящее время считают, что противовирусный препарат широкого спектра действия, подавляющий коронавирус, необходим для предотвращения повторных эпидемий и мутаций как до, так и после того, как вакцина

станет доступной на рынке.

Ключом к профилактике и контролю COVID-19 являются контроль источника инфекции

, прекращение пути передачи и защита уязвимых групп населения

[8,9]. В соответствии с китайским «Протоколом диагностики и лечения коронавирусной пневмонии

(пятое издание)», медицинский персонал, работающий в амбулаторных отделениях

с подозреваемыми или подтвержденными пациентами в отделении, оснащен защитой второго уровня

для общего диагноза. и лечение пациентов.Медицинский персонал

Персонал, занимающийся лечением подозреваемых пациентов с использованием генерирующих аэрозоль

процедур (таких как интубация трахеи и связанные с ней операции, сердечно-легочная реанимация

, бронхоскопия, отсасывание мокроты, взятие мазка из горла и использование высокоскоростного оборудования

(например, сверление, пиление, центрифугирование и т. д.), следует использовать защиту третьего уровня

. Медицинский персонал в палатах общего профиля должен обеспечивать защиту первого уровня, а

строго соблюдать стандартные процедуры гигиены рук.Перед надеванием перчаток и после снятия перчаток необходимо провести гигиену рук

. Больница Тайхэ в городе Шиянь и

других больниц в провинции Хубэй следовали вышеописанному плану профилактики и контроля

на протяжении всей диагностики и лечения COVID-19. В дополнение к

, следуя этим стандартным мерам защиты, медицинскому персоналу больницы Тайхэ в городе Шиян

вводили назальные капли IFN-α с подкожным тимозином-α1 или без него в соответствии со степенью воздействия COVID-19

.Среди медицинского персонала, прошедшего лечение по этому протоколу

, случаев заболевания COVID-19 в течение 28-дневного периода наблюдения зарегистрировано не было. В отличие от

, за тот же период было подтверждено более 100 случаев COVID-19

среди медицинского персонала других больниц в провинции Хубэй. Результаты показывают, что назальные капли IFN-

α, особенно в комбинации с тимозином-α1, могут улучшить защиту

. CC-BY-NC-ND 4.0 Международная лицензия Предоставляется под номером

— автор / спонсор, предоставивший medRxiv лицензию на бессрочное отображение препринта.

(который не прошел рецензирование) Владелец авторских прав на этот препринт. Https://doi.org/10.1101/2020.04.11.20061473doi: medRxiv препринт

Назальные капли могут быть успешными там, где уколы не удались

Вирусы гриппа адаптируются и мутировать, делая вакцины против гриппа менее эффективными. Новое исследование, опубликованное в журнале Science , нашло способ сломать защитные механизмы вируса, что даст импульс будущим вакцинам против гриппа.

Исследователи из Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе под руководством Рена Сан, профессора молекулярной и медицинской фармакологии, работающего в университетской медицинской школе Дэвида Геффена, предложили совершенно новый подход к разработке вакцин против гриппа.

Как объясняют авторы исследования в своей новой статье, обычные вакцины снижают «иммуногенность» — то есть способность вещества вызывать иммунный ответ организма — за счет ослабления вируса.

Но новый подход, разработанный Саном и его командой, сохраняет устойчивые иммунные ответы и работает путем выявления и устранения так называемой функции иммунного уклонения вирусов.

Чтобы лучше понять это, нам нужно взглянуть на интерфероны, которые представляют собой сигнальные белки, которые координируют наш иммунный ответ и играют ключевую роль в борьбе с вирусами.

Функция интерферонов «первой линии защиты» заключается в том, чтобы как можно быстрее нейтрализовать вирусы, в то время как «вторая линия» защиты — в модулировании нашего иммунного ответа, тем самым предлагая нам долгосрочную защиту от вирусов.

Как объясняет Сун: «Если вирусы не индуцируют интерфероны, они не будут убиты при защите первой линии; а без интерферонов адаптивный иммунный ответ ограничен ».

«По этим причинам вирусы разработали стратегии, позволяющие избежать обнаружения и ограничить выработку интерферонов организмами-хозяевами», — добавляет он.

Это приводит к различным пандемиям и большому количеству людей, госпитализированных из-за осложнений, связанных с гриппом. Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) сообщают, что в течение сезона гриппа 2015–2016 годов 310 000 человек в США были «госпитализированы из-за заболевания, связанного с гриппом».

«Поскольку вариации вирусов сезонного гриппа могут быть непредсказуемыми, — говорит Сан, — существующие вакцины могут не обеспечивать эффективную защиту от них».

«Предыдущие пандемии и недавние вспышки птичьего гриппа подчеркивают необходимость разработки вакцин, обеспечивающих более широкую и эффективную защиту», — добавляет он.

Итак, Сан и команда исследовали геном вируса гриппа в попытке найти его защиту от интерферонов.

Они обнаружили и отключили геномную последовательность, отвечающую за так называемую индукцию интерферона. «Отключение этих функций уклонения от интерферона, — объясняет автор первого исследования Юшен Ду, — ослабляет созданный вирус у типичных хозяев».

«В то же время, — добавляет она, — из-за стимуляции интерфероном сконструированный вирус вызывает очень сильные иммунные ответы.”

В видео ниже ученые подробно рассказывают о своей вакцине, которая будет выпускаться в форме капли в нос:

Исследователи также протестировали новую вакцину на мышиной модели и не обнаружили значительных побочных эффектов.

«При таком подходе требования к безопасности и эффективности вакцин потенциально могут быть достигнуты одновременно. При разработке традиционных вакцин одним обычно жертвуют ради другого ».

Ren Sun

Du объясняет новый вклад своего исследования, говоря: «Другие исследователи выбили одну антиинтерфероновую последовательность, но мы выбили восемь участков, заменяя одну аминокислоту за раз.”

Следующим шагом, вытекающим из этого исследования, будет дальнейшее испытание новой вакцины на животных, у которых есть два штамма гриппа.

В конечном итоге, команда хочет представить свою вакцину Управлению по контролю за продуктами и лекарствами (FDA) для утверждения, но перед этим вакцину, очевидно, необходимо будет протестировать в клинических испытаниях на людях.

«Этот подход также широко применим к другим патогенам», — пишут авторы.

Могут ли назальные капли рекомбинантного человеческого интерферона альфа-1b защитить медицинский персонал от COVID-19?

Школа медицины Шанхайского университета Цзяо Тонг недавно завершила открытое, проспективное, нерандомизированное и интервенционное исследование фазы III, посвященное профилактическому эффекту назальных капель рекомбинантного человеческого интерферона альфа на частоту инфицирования COVID-19 среди медицинского персонала. линия фронта в эпидемической зоне Китая.Изучив в общей сложности 2944 медицинских сотрудника, работающих в больнице Тайхэ в городе Шиянь, провинция Хубэй, Китай, были разделены группы низкого и высокого риска: группа низкого риска, получавшая назальные капли рекомбинантного человеческого интерферона альфа-1b, а группа высокого риска — группа риска получала лечение, идентичное группе низкого риска (назальные капли с rhlFN-α), и в сочетании с тимозином α1 (1,6 мг, подкожная инъекция, один раз в неделю) вместе с защитой второго или третьего уровня. Невероятно, но среди двух исследовательских групп ни один медицинский персонал не заразился SARS-CoV-2 за 28-дневный период исследования.Более того, 28-дневная частота новых клинических симптомов с негативными изображениями пневмонии также была нулевой в обеих группах. Исследовательская группа использовала контрольную группу из 2035 медицинских работников, которые подтвердили случаи COVID-19 в том же районе, наблюдавшиеся в период с 21 января по 23 февраля 2020 года. В этом еще не прошедшем экспертную оценку исследовании исследователи пришли к выводу, что использование Назальные капли с rhIFN-α могут эффективно предотвращать COVID-19 у медицинского персонала, используемые в качестве усиленной защиты на основе стандартной физической изоляции.Возникают вопросы о дизайне исследования и контрольной группе. Учитывая, что по-прежнему нет способа предотвратить COVID-19 и мир находится в большой опасности, будет ли этот результат исследования подвергнут экспертной оценке и, следовательно, обсужден более широкой аудиторией?

Спонсор исследования и сайт

Это исследование спонсировалось Медицинской школой Шанхайского университета Цзяо Тонг. Крупный исследовательский университет в Шанхае, он был основан еще в 1896 году как государственная школа Наньян тогдашним императором Гуансю.С 1930-х годов именуемый «Массачусетским технологическим институтом Востока», он известен как один из старейших и самых престижных университетов Китая. Исследование проводилось в больнице Тайхэ Медицинского университета Хубэй под руководством главного исследователя Чжунцзи Мэн.

Исследование

Под названием « Клиническое испытание назальных капель рекомбинантного человеческого интерферона-альфа для профилактики коронавирусной болезни 2019 среди медицинского персонала в зоне эпидемии ». Исследование представляло собой экспериментальное и перспективное, нерандомизированное, открытое исследование с параллельным назначением, включающее набор 2 944 медицинских работников был проведен в больнице Тайхэ в городе Шиянь, провинция Хубэй, Китай.Участники были разделены на группу низкого риска и группу высокого риска в зависимости от того, подвергались ли они прямому контакту с пациентами, инфицированными SARS-CoV-2. Когорта низкого риска получала назальные капли рекомбинантного человеческого интерферона альфа-1b (2-3 капли / ноздрю / раз, 4 раза / день), а группа высокого риска получала профилактическое вмешательство с использованием назальных капель с интерфероном и тимозином-альфа. (тимозин вводили подкожно 1 раз в неделю), продолжительность вмешательства 28 дней. По истечении 28 дней ни один медицинский персонал не заразился COVID-19 согласно этому исследованию, в то время как многие в контрольной группе заразились.

Исследование началось 21 января 2020 года, как раз в начале пандемии, и только что достигло даты своего первичного завершения, отсюда и сводка на сервере препринтов.

Результаты

Опубликованные и загруженные на сервер препринтов medRxiv, группа авторов сообщает о некоторых довольно невероятных результатах, если A) исследование спроектировано правильно, и B) эти данные точны. Группа авторов на основе наблюдений этого открытого исследования, инициированного исследователем, пришла к выводу, что назальные капли с rhIFN-α демонстрируют перспективность не только для использования для защиты медицинского персонала на передовой от COVID-19, но также демонстрируют потенциал для «защиты восприимчивых людей». здоровые люди во время пандемии коронавируса.”

Финансирование

Это исследование финансировалось «Национальным крупным проектом в области науки и технологий» в Китае

Ведущий исследователь

Чжунцзи Мэн, Медицинский университет Хубэй

Призыв к действию : Обратите внимание, что это не рецензируемое исследование. Есть вопросы относительно дизайна исследования, контрольной группы и других методологий и основных предположений. Тем не менее, авторы действительно делают несколько поразительных заявлений, отсюда и разоблачение здесь.

.